Made available in DSpace on 2014-06-12T15:54:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4940_1.pdf: 3622148 bytes, checksum: a3ab3d29d4f99b92ea360300354d8beb (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 1996 / Na primeira etapa do nosso trabalho, a suspensão de vírus O1 campos (subtipo de vírus causador de febre aftosa) preparada pela VALLÉE S/A foi proposta como ligante para ser acoplada ao amido através de ligações covalentes ou utilizando carbodiimida para produzir ligações cruzadas. O amido é oxidado pelo metaperiodato de sódio 0,4 N em pH 4,5, que converte grupos hidroxílicos vicinais em aldeídicos, permitindo que a suspensão de vírus O1 campos seja imobilizada nesse suporte. O diciclohexilcarbodiimida em pH levemente alcalino, promove ligações cruzadas entre as proteínas dessa suspensão de vírus. As vacinas antiaftosa livre e imobilizada foram submetidas aos ensaios cromatográficos e espectrofotométricos. Nestes ensaios foram aplicados 7,5 mg de proteínas em coluna empacotada com sephadex G-100 possibilitando verificar a imobilização das proteínas dos vírus O1 campos através do aumento dos picos de absorção a 280 nm e diminuição do volume de eluição. A vacina adsorvida em hidróxido de alumínio (controle) e a imobilizada foram aplicadas em doses de 5 ml por via intramuscular em bovinos, com o objetivo de realizar os testes de índice de soro proteção (ISP) para verificar a liberação do vírus O1 campos no organismo animal. Os resultados dos ISP mostraram que o sistema amido + suspensão de vírus á adequado para liberação controlada do antígeno, principalmente nos 60 últimos dias de experiência. Na segunda etapa, foi proposta a complexação do cobalto II com carboidratos e/ou proteínas como sistemas de liberação controlada deste metal para uso na alimentação animal. Foram realizados estudos espectrofotométricos e cromatográficos comparativos entre o produto comercial (Cobalto-Dextrose-Lactose) de estrutura desconhecida e um produto produzido em nosso laboratório. Na análise cromatográfica foram utilizados padrões, amostras, sistemas de solventes e revelador apropriado com composição conhecida. Os resultados obtidos evidenciaram a complexação do cobalto II com glicose. Na análise espectrofotométrica foram utilizadas soluções de sais de cobalto II puro ou em presença de glicose e lactose variando-se as concentrações dos carboidratos e o pH das preparações. Foram também analisadas preparações de cloreto de cobalto II com proteínas e amido ativado com metaperiodato de sódio 0,4 N em várias concentrações, porém mantendo-se o pH das preparações. Os resultados dos estudos espectrofotométricos mostraram as relações molares entre ligantes e cobalto II necessárias para complexação, no produto comercial (Cobalto-Dextrose- Lactose) e no produto produzido no nosso laboratório. No produto comercial (Cobalto-Dextrose-Lactose) as condições para formação do complexo Cobalto- Dextrose-Lactose são desfavoráveis, devido a relação molar entre [carboidratos] / [cobalto II] ser aproximadamente 1,73. No nosso produto, a glicose a ser usada como ligante para a complexação de cobalto II, necessita de uma relação molar [glicose] / [cobalto II] maior que 10. A glicose misturada com proteína em uma relação molar de apenas 2,5 x 10-2 apresenta um elevado poder de complexação. A proteína e o amido ativado com metaperiodato, favorecem a complexação com o cobalto II mesmo possuindo uma relação molar milhões de vezes inferior quando comparado com o cobalto II complexado com a glicose

Este trabalho teve por objetivo propor uma racionalização da síntese, da análise e da purificação do radiofármaco 177Lu3+-DOTATATO para uso diagnóstico e terapêutico em tumores neuroendócrinos, bem como avaliar a biodistribuição deste radiofármaco em modelo animal. A reação de complexação para a síntese do radiofármaco foi realizada em tampão acetato de amônio 0,5 M, pH 7,0, à 95 oC, com tempo de reação de 30 minutos. Obteve-se pureza radioquímica > 95%, de acordo com a análise por cromatografia em ITLC-SG, utilizando-se como fase móvel, tampão citrato de sódio 0,1 M, pH 5,0. A razão molar-limite 177Lu3+: DOTATATO utilizada na síntese do radiofármaco 177Lu3+-DOTATATO foi dependente da atividade específica e da procedência do radioisótopo, sendo de 1:3,5 (370 MBq : 2,6 mg) para radioisótopo oriundo do Oak Ridge National Laboratory/EUA e de 1:16 (370 MBq : 11,8 mg) para o radioisótopo oriundo do Nuclear Analytical and Medical Services/Holanda, considerando para ambos, um decaimento de cinco dias a partir da data de produção do radioisótopo. Esta racionalização da síntese do radiofármaco 177Lu3+-DOTATATO permite uma grande economia nos custos de produção. O estudo químico da síntese do radiofármaco também evidenciou a interferência do 177Hf4+, produto de decaimento do 177Lu3+, como competidor do 177Lu3+ pelo DOTATATO. A preparação radiofarmacêutica mostrou-se estável durante 24 horas, a uma atividade de 2775 MBq, com adição de 0,6 mg/mL de ácido gentísico, mantida em gelo seco. Nos estudos de biodistribuição em camundongos Swiss e Nude demonstrou-se a especificidade do radiofármaco pelos tecidos receptor-específicos para somatostatina como pâncreas, estômago, pulmão, adrenais, rins e de células tumorais AR42J. Palavras chave: síntese, complexação, radiofármaco, 177Lu-DOTATATO, tumor neuroendócrino. / The aim of this work was to propose rationalization in the synthesis, analysis and purification of radiopharmaceutical 177Lu3+-DOTATATO for diagnostic and therapeutic use in neuroendocrine tumors, as well as for evaluating biodistribution of this radiopharmaceutical in an animal-model. The complexation reaction for the synthesis of radiopharmaceutical was carried out in ammonium acetate buffer 0.5 M, pH 7.0, for 30 minutes at 95 oC. The radiochemical purity was > 95%, according to analysis by chromatography in ITLC-SG, when using the sodium citrate buffer 0,1 M, pH 5.0, as the mobile phase. The molar-limit ratio 177Lu3+: DOTATATO, used in the synthesis of radiopharmaceutical 177Lu3+-DOTATATO, in ammonium acetate buffer 0.5 M, pH 7.0, for 30 minutes at 95 oC, was dependent on the specific activity and origin of the radioisotope, this being 1:3.5 (370 MBq : 2.6 mg) for that from the Oak Ridge National Laboratory/U.S.A., and 1:16 (370 MBq : 11.8 mg) for that from Nuclear Analytical and Medical Services/Holland, when considering a decay of five days from the production date of the radioisotopes. This rationalization in the synthesis of radiopharmaceutical 177Lu3+-DOTATATO permits high economy in production costs. Chemical studies on the synthesis of radiopharmaceuticals also placed in evidence the interference of 177Hf4+, the decay product of 177Lu3+, as the 177Lu3+ competitor for DOTATATO. Radiopharmaceutical preparation proved to be stable during 24 hours, at an activity rate of 2775 MBq, with the addition of 0.6 mg/mL of gentisic acid and when kept in dry ice. In biodistribution studies on Swiss and Nude mice, the specificity of radiopharmaceutical for somatostatin positive-receptor tissues, such as the pancreas, stomach, lungs, adrenal glands, kidneys and the cell tumor AR42J was demonstrated. Key words: synthesis, complexation, radiopharmaceutical, 177Lu3+-DOTATATO, neuroendocrine tumors

Neste trabalho estudou-se a complexação do poli(acrilato de sódio), PAS, com aminpentacianoferrato de sódio,APCF. As reações de complexação ocorreram imediatamente com a formação de uma coloração amarela com total solubilização do polímero na solução 0,032 M molar do complexo. As soluções mostraram-se estáveis por 48 h e após esse período observou-se alterações na natureza do complexo polimérico com a formação de precipitado. O UV foi usado como ferramenta de caracterização do complexo. O máximo de absorção obtido após dissolução imediata foi de 405 nm com desvio para o azul (398 nm) e um pequeno efeito hipercrômico. As amostras mantidas à temperatura ambiente por mais de 48 h deram origem a precipitados, que como a solução, absorveram com máximo de 364, 389 e 398 nm. O Complexo PAS-APCF foi também caracterizado através de FTIR por ATR e apresentou pequenas variações no espectro do material de partida (PAS). Um incremento na intensidade da deformação axial assimétrica do grupo carboxilato (1651 cm-1) e a presença do estiramento em 2055 cm-1 do grupo cianeto, diferentemente do APCF (2048 cm-1), confirmaram a formação do complexo PAS-APCF. As freqüências de absorção observadas para o complexo foram compatíveis com a presença de estruturas mono e bidentadas de complexação. As análises de TGA e DSC também foram utilizadas para a caracterização das estruturas. O estudo modelo envolvendo a complexação de sais sódicos de diácidos orgânicos de diferentes tamanhos de cadeia (oxalato, malonato, succinato, glutarato e adipato), diferentemente do PAS, promoveu um desvio para o vermelho na frequência máxima de absorção junto de um pequeno efeito hipercrômico (421 nm). Esta variação pode também ser observada quando do emprego de acetato de sódio, indicando, provavelmente, apenas a formação de estruturas monodentadas / In this work we studied the complexation of poly (sodium acrylate), PAS, with sodium amminepentacyanoferrate, APCF. The complexation reactions occurred immediately with the formation of a yellow color with complete solubility of the polymer solution in 0.032 M molar complex. The solutions were stable for 48 h and after this period saw changes in the nature of the polymeric complex with the formation of precipitate. The spectrophotometry was used as a tool for characterization of the complex. The maximum absorption was obtained immediately after dissolution of 405 nm with a shift to the blue (398 nm) and a small hyperchromic effect. The samples kept at room temperature for more than 48 h resulted in precipitates that as the solution, absorbed with a maximum of 364, 389 and 398 nm. Complex PAS-APCF was also characterized by using FTIR and ATR spectra showed small variations in the starting material (PAS). An increase in the intensity of the asymmetric axial deformation of the carboxylate group (1651 cm-1) and the stretch at 2055 cm-1 group cyanide, unlike APCF (2048 cm-1), confirmed the formation of the PAS-APCF. The absorption frequencies observed for the complex were consistent with the presence of mono and bidentate complexation. The TGA and DSC were also used to characterize the structures. The study model involving the complexation of sodium salts of organic diacids of different chain sizes (oxalate, malonate, succinate, glutarate and adipate), unlike PAS, held a red shift in the frequency of maximum absorption with a small effect hyperchromic (421 nm). This variation may also be observed when employing sodium acetate, indicating probably the formation of only monodentate structures

Este trabalho teve por objetivo propor uma racionalização da síntese, da análise e da purificação do radiofármaco 177Lu3+-DOTATATO para uso diagnóstico e terapêutico em tumores neuroendócrinos, bem como avaliar a biodistribuição deste radiofármaco em modelo animal. A reação de complexação para a síntese do radiofármaco foi realizada em tampão acetato de amônio 0,5 M, pH 7,0, à 95 oC, com tempo de reação de 30 minutos. Obteve-se pureza radioquímica > 95%, de acordo com a análise por cromatografia em ITLC-SG, utilizando-se como fase móvel, tampão citrato de sódio 0,1 M, pH 5,0. A razão molar-limite 177Lu3+: DOTATATO utilizada na síntese do radiofármaco 177Lu3+-DOTATATO foi dependente da atividade específica e da procedência do radioisótopo, sendo de 1:3,5 (370 MBq : 2,6 mg) para radioisótopo oriundo do Oak Ridge National Laboratory/EUA e de 1:16 (370 MBq : 11,8 mg) para o radioisótopo oriundo do Nuclear Analytical and Medical Services/Holanda, considerando para ambos, um decaimento de cinco dias a partir da data de produção do radioisótopo. Esta racionalização da síntese do radiofármaco 177Lu3+-DOTATATO permite uma grande economia nos custos de produção. O estudo químico da síntese do radiofármaco também evidenciou a interferência do 177Hf4+, produto de decaimento do 177Lu3+, como competidor do 177Lu3+ pelo DOTATATO. A preparação radiofarmacêutica mostrou-se estável durante 24 horas, a uma atividade de 2775 MBq, com adição de 0,6 mg/mL de ácido gentísico, mantida em gelo seco. Nos estudos de biodistribuição em camundongos Swiss e Nude demonstrou-se a especificidade do radiofármaco pelos tecidos receptor-específicos para somatostatina como pâncreas, estômago, pulmão, adrenais, rins e de células tumorais AR42J. Palavras chave: síntese, complexação, radiofármaco, 177Lu-DOTATATO, tumor neuroendócrino. / The aim of this work was to propose rationalization in the synthesis, analysis and purification of radiopharmaceutical 177Lu3+-DOTATATO for diagnostic and therapeutic use in neuroendocrine tumors, as well as for evaluating biodistribution of this radiopharmaceutical in an animal-model. The complexation reaction for the synthesis of radiopharmaceutical was carried out in ammonium acetate buffer 0.5 M, pH 7.0, for 30 minutes at 95 oC. The radiochemical purity was > 95%, according to analysis by chromatography in ITLC-SG, when using the sodium citrate buffer 0,1 M, pH 5.0, as the mobile phase. The molar-limit ratio 177Lu3+: DOTATATO, used in the synthesis of radiopharmaceutical 177Lu3+-DOTATATO, in ammonium acetate buffer 0.5 M, pH 7.0, for 30 minutes at 95 oC, was dependent on the specific activity and origin of the radioisotope, this being 1:3.5 (370 MBq : 2.6 mg) for that from the Oak Ridge National Laboratory/U.S.A., and 1:16 (370 MBq : 11.8 mg) for that from Nuclear Analytical and Medical Services/Holland, when considering a decay of five days from the production date of the radioisotopes. This rationalization in the synthesis of radiopharmaceutical 177Lu3+-DOTATATO permits high economy in production costs. Chemical studies on the synthesis of radiopharmaceuticals also placed in evidence the interference of 177Hf4+, the decay product of 177Lu3+, as the 177Lu3+ competitor for DOTATATO. Radiopharmaceutical preparation proved to be stable during 24 hours, at an activity rate of 2775 MBq, with the addition of 0.6 mg/mL of gentisic acid and when kept in dry ice. In biodistribution studies on Swiss and Nude mice, the specificity of radiopharmaceutical for somatostatin positive-receptor tissues, such as the pancreas, stomach, lungs, adrenal glands, kidneys and the cell tumor AR42J was demonstrated. Key words: synthesis, complexation, radiopharmaceutical, 177Lu3+-DOTATATO, neuroendocrine tumors

Neste trabalho estudou-se a complexação do poli(acrilato de sódio), PAS, com aminpentacianoferrato de sódio,APCF. As reações de complexação ocorreram imediatamente com a formação de uma coloração amarela com total solubilização do polímero na solução 0,032 M molar do complexo. As soluções mostraram-se estáveis por 48 h e após esse período observou-se alterações na natureza do complexo polimérico com a formação de precipitado. O UV foi usado como ferramenta de caracterização do complexo. O máximo de absorção obtido após dissolução imediata foi de 405 nm com desvio para o azul (398 nm) e um pequeno efeito hipercrômico. As amostras mantidas à temperatura ambiente por mais de 48 h deram origem a precipitados, que como a solução, absorveram com máximo de 364, 389 e 398 nm. O Complexo PAS-APCF foi também caracterizado através de FTIR por ATR e apresentou pequenas variações no espectro do material de partida (PAS). Um incremento na intensidade da deformação axial assimétrica do grupo carboxilato (1651 cm-1) e a presença do estiramento em 2055 cm-1 do grupo cianeto, diferentemente do APCF (2048 cm-1), confirmaram a formação do complexo PAS-APCF. As freqüências de absorção observadas para o complexo foram compatíveis com a presença de estruturas mono e bidentadas de complexação. As análises de TGA e DSC também foram utilizadas para a caracterização das estruturas. O estudo modelo envolvendo a complexação de sais sódicos de diácidos orgânicos de diferentes tamanhos de cadeia (oxalato, malonato, succinato, glutarato e adipato), diferentemente do PAS, promoveu um desvio para o vermelho na frequência máxima de absorção junto de um pequeno efeito hipercrômico (421 nm). Esta variação pode também ser observada quando do emprego de acetato de sódio, indicando, provavelmente, apenas a formação de estruturas monodentadas / In this work we studied the complexation of poly (sodium acrylate), PAS, with sodium amminepentacyanoferrate, APCF. The complexation reactions occurred immediately with the formation of a yellow color with complete solubility of the polymer solution in 0.032 M molar complex. The solutions were stable for 48 h and after this period saw changes in the nature of the polymeric complex with the formation of precipitate. The spectrophotometry was used as a tool for characterization of the complex. The maximum absorption was obtained immediately after dissolution of 405 nm with a shift to the blue (398 nm) and a small hyperchromic effect. The samples kept at room temperature for more than 48 h resulted in precipitates that as the solution, absorbed with a maximum of 364, 389 and 398 nm. Complex PAS-APCF was also characterized by using FTIR and ATR spectra showed small variations in the starting material (PAS). An increase in the intensity of the asymmetric axial deformation of the carboxylate group (1651 cm-1) and the stretch at 2055 cm-1 group cyanide, unlike APCF (2048 cm-1), confirmed the formation of the PAS-APCF. The absorption frequencies observed for the complex were consistent with the presence of mono and bidentate complexation. The TGA and DSC were also used to characterize the structures. The study model involving the complexation of sodium salts of organic diacids of different chain sizes (oxalate, malonate, succinate, glutarate and adipate), unlike PAS, held a red shift in the frequency of maximum absorption with a small effect hyperchromic (421 nm). This variation may also be observed when employing sodium acetate, indicating probably the formation of only monodentate structures

Introdução: A Galectina-1 (Gal-1) é uma proteína multifuncional capaz de reconhecer, de modo específico, glicanas compostas por resíduos de -galactosídeos, por meio de domínios de reconhecimento de carboidrato (CRD). A Gal-1 é um homodímero de 14.900 daltons, pI = 5.6, apresenta uma topologia molecular do tipo jelly-roll composto por duas folhas- anti-paralelas. Além disso, esta proteína não apresenta peptídeo sinal e possui 6 cisteínas, 7 ácidos glutâmicos, 9 ácidos aspárticos e 4 histinas por monômero. A Gal-1 liga-se a diferentes moléculas biológicas contidas nas superfícies celulares, núcleo e componentes da matriz extracelular. O zinco é um importante metal em sistemas biológicos. Aproximadamente 10% do proteoma humano é potencialmente capaz de complexar zinco. Este íon exibe propriedades adequadas tanto para funções catalíticas, quanto estruturais em proteínas. Os sítios de ligação a zinco, nas proteínas, podem ser divididos em catalíticos, estruturais, co-catalíticos e sítios na interface protéica. Geralmente, os resíduos de cisteína, histidina, ácido glutâmico e ácido aspártico são alvos preferênciais de interação com Zn. Há na literatura dados que mostram a interação da Gal-1 humana com íons orgânicos, porém não há relatos sobre a interação Gal-1/Zn . Objetivos: O presente trabalho teve como objetivo avaliar a existência e as implicações da interação entre o íon Zn2+ e a proteína Gal-1. Materiais e Métodos: Foi efetuada a produção, purificação e padronização do uso das formas dimérica e monomérica da Gal-1 recombinante humana. A interação Gal-1/Zn foi avaliada através de ensaios biofísicos e biológicos. A análise in vitro e in silico dos paramêtros biofísicos, foi feita através de espectrofluorimetria, de dicroísmo circular, de ensaio de precipitação, do método GRID e por dinâmica molecular. A análise in vitro dos parâmetros biológicos, foi realizada por meio de ensaio de hemaglutinação e interação com laminina por ELISA. Resultados e Discussão: A adição de ZnCl2 numa solução de Gal-1 causa aumento da emissão por fluorescência do triptofano e uma alteração para o vermelho, altera o espectro de dicroísmo circular e causa precipitação protéica da Gal-1. Estes eventos ocorreram de forma seletiva e dependente da concentração desse íon. As análises in silico indicam que o provável sítio de complexação Zn/Gal-1 é distinto do CRD e é formado pelos aminoácidos Glu-15, Asp-92 e Asp-134, assumindo a conformação trigonal bipiramidal e tendo número de coordenação igual a 5. Conclusão: As análises biofísicas in vitro e in silico, nos indicam que a Galectina-1 tem a capacidade de se complexar com o íon Zn2+. / Introduction: Galectin-1 (Gal-1) is a multifunctional protein that specifically recognizes glycans with -galactosides through carbohydrate recognition domains (CRD). Gal-1 is a homodimeric protein of 14.900daltons, pI=5.6, shows a jelly-roll molecular topology composed of two anti-parallels - sheet, has no signal peptide and contains 6 cysteines, 7 glutamic acids, 9 aspartic acids and 4 histidines per monomer. This lectin binds to different biological molecules contained in the cell surface, nucleus and extracellular matrix components. Zinc is an important metal in biological systems because can participate in the maintenance of protein structure and biological activity. Usually, cysteine , histidine, glutamic acid and aspartic acid residues are preferential targets for interaction with Zn. Approximately 10% of the human proteome is potentially capable to forming complexes with Zn. The Zn2+ ion exhibits properties suitable for both catalytic and structural protein functions. Proteins zinc binding sites can be divided into catalytic, structural, co-catalytic and protein interface sites.There are reports in the literature that shows the interaction between galectin-1 and organic ions. However, were not found reports about Zn-Gal-1 complexes. Objective: The aim of this study was to evaluate the existence and implications of the interaction between galectin-1 and Zn2+ ion. Materials and Methods: Human recombinant Gal-1 (monomer and dimmer) was obtained and purified. Also, the conditions for the use of Gal-1 were standardized. The interaction Zn/Gal-1 was assessed by biophysical an biological procedures. The analysis in vitro and in silico was made by spectrofluorimetry, circular dichroism, precipitation test, method of GRID, and molecular dynamics. The in vitro analysis of biological parameters were performed by hemmaglutination and laminin binding (ELISA) tests. Results and Discussion: The addition of ZnCl2 in Gal-1 solution causes increased fluorescence emission of tryptophan-70 and a red shift, alters the circular dichroism spectrum and causes precipitation of Gal-1 protein. These events occurred in a selective manner dependent of Zinc concentration. The in silico analysis indicates that the probable site of Zn/Gal-1 complexation is distinct from the CRD and is formed by the amino acids Glu-15, Asp-92 and Asp-134, assuming trigonal bipyramidal conformation and with coordination number equal to 5 . Conclusion: The biophysical in vitro and in silico findings suggests that Galectin-1 has the ability to complex with the Zn2+ ion.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-09-27T11:25:15Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1689408 bytes, checksum: d46f80cd3e622e631ff37099e4b101ce (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-27T11:25:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1689408 bytes, checksum: d46f80cd3e622e631ff37099e4b101ce (MD5) Previous issue date: 2001-06-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O interesse pela natureza dos complexos entre metais e matéria orgânica dissolvida em águas naturais incitou o uso de numerosos métodos de especiação de metais pesados e o cálculo da estabilidade quantitativa dos complexos formados. Neste trabalho, foi determinada a capacidade de complexação de águas naturais, em decorrência da presença de matéria orgânica dissolvida; este é um importante parâmetro que mede a habilidade do sistema para complexar metais pesados, tornando estas espécies químicas menos tóxicas que as não complexadas. As amostras foram coletadas em sete pontos diferentes ao longo do Ribeirão São Bartolomeu e foram, posteriormente, filtradas e submetidas a determinação da DQO, determinação de cobre por absorção atômica, pH, temperatura, condutividade, teor de oxigênio dissolvido e titulações voltamétricas. As titulações foram feitas através de sucessivas adições de uma solução de Cu+2, este íon foi utilizado por apresentar complexos mais estáveis com substâncias húmicas. O ponto final dessa titulação foi interpretado como uma medida da capacidade de complexação da matéria orgânica dissolvida existente nas amostras. Desenvolveu-se um programa em linguagem VisualBasic 5.0 para aquisição e gerenciamento de dados do instrumento polarográfico EG&G Princeton Applied Research PAR, modelo 384B. Os dados das titulações voltamétricas foram obtidos através de uma interface serial padrão RS232C para um microcomputador PC586, 133MHz. A técnica utilizada foi a Voltametria de Redissolução Anódica com Pulso Diferencial (DPASV), o qual é um método eletroquímico capaz de determinar a natureza química de constituintes traço com precisão, além de ser simples, rápida e seletiva. Durante o desenvolvimento do trabalho verificou-se que o processo total de obtenção dos voltamogramas via microcomputador é mais rápido, oferecendo condições de se obter o máximo de informação possível de um voltamograma para uma análise. A utilização do programa desenvolvido em linguagem VisualBasic 5.0 facilitou o manuseio do instrumento polarográfico mostrando excelente desempenho. O procedimento de titulação complexométrica mostrou ser uma técnica simples, por outro lado, problemas surgiram devido à dissociação cinética de complexos lábeis no eletrodo de mercúrio e da sorção de compostos orgânicos sobre o eletrodo durante titulações utilizando a técnica DPASV. A capacidade de complexação apresentou valores entre 22,75 a 52,81 μg L-1 e log das constantes de estabilidade condicional na faixa de 5,40 a 6,14. / The interest for the nature of complexes metal-organic matter dissolved in natural waters, incited the use of numerous heavy metals speciation methods and calculation of the formed complexes quantitative stability. In this work the capacity of complexation of natural waters was determined, due to the presence of dissolved organic matter; this is an important parameter that measure the system ability to complex heavy metals, turning them into chemical forms less toxic than the uncomplexed ones. The samples were collected in seven different points along São Bartolomeu River, and they were later filtered and submitted to a COD determination, copper determination by atomic absorption, pH, temperature, conductivity, dissolved oxygen tenor and voltammetric titration. The titration were made through successive additions of a Cu(II) solution, this ion was used by presenting more stable compounds with humic substances. The final point of that titration was interpreted as a measure of the complexation capacity of the dissolved organic matter existent in the samples. A program in language VisualBasic 5.0 for acquisition and administration of data of the instrument polarecord EG&G Princeton Applied Research PAR, model 384B was developed. The voltammetric titration data were obtained through a RS232C serial standard interface for a PC586, 133MHz microcomputer. The technique used was Differential Pulse Anodic Stripping Voltammetry (DPASV), that is a electrochemical method capable to determine accurately the chemical nature of constituent trace, besides being simple, fast and selective. During the development of the work it was verified that the total process for acquisition of voltammograms through microcomputer is faster, offering conditions to obtain the maximum possible information of a voltammogram for an analysis. The use of the program developed in language VisualBasic 5.0, facilitated the handling of the polarecord instrument showing excellent acting. The procedure of complexation titration showed to be a simple technique, on the other hand, problems appeared due to the kinetic dissociation of labile complexes in the mercury electrode and the sortion of organic compositions on the eletrode during titrations using the DPASV technique. The complexation capacity presented values among 22,75 to 52,81 mg L-1 and the conditional stability constants log in the strip from 5,40 to 6,14. / Não foi encontrado o cpf do autor.

Introdução: A Galectina-1 (Gal-1) é uma proteína multifuncional capaz de reconhecer, de modo específico, glicanas compostas por resíduos de -galactosídeos, por meio de domínios de reconhecimento de carboidrato (CRD). A Gal-1 é um homodímero de 14.900 daltons, pI = 5.6, apresenta uma topologia molecular do tipo jelly-roll composto por duas folhas- anti-paralelas. Além disso, esta proteína não apresenta peptídeo sinal e possui 6 cisteínas, 7 ácidos glutâmicos, 9 ácidos aspárticos e 4 histinas por monômero. A Gal-1 liga-se a diferentes moléculas biológicas contidas nas superfícies celulares, núcleo e componentes da matriz extracelular. O zinco é um importante metal em sistemas biológicos. Aproximadamente 10% do proteoma humano é potencialmente capaz de complexar zinco. Este íon exibe propriedades adequadas tanto para funções catalíticas, quanto estruturais em proteínas. Os sítios de ligação a zinco, nas proteínas, podem ser divididos em catalíticos, estruturais, co-catalíticos e sítios na interface protéica. Geralmente, os resíduos de cisteína, histidina, ácido glutâmico e ácido aspártico são alvos preferênciais de interação com Zn. Há na literatura dados que mostram a interação da Gal-1 humana com íons orgânicos, porém não há relatos sobre a interação Gal-1/Zn . Objetivos: O presente trabalho teve como objetivo avaliar a existência e as implicações da interação entre o íon Zn2+ e a proteína Gal-1. Materiais e Métodos: Foi efetuada a produção, purificação e padronização do uso das formas dimérica e monomérica da Gal-1 recombinante humana. A interação Gal-1/Zn foi avaliada através de ensaios biofísicos e biológicos. A análise in vitro e in silico dos paramêtros biofísicos, foi feita através de espectrofluorimetria, de dicroísmo circular, de ensaio de precipitação, do método GRID e por dinâmica molecular. A análise in vitro dos parâmetros biológicos, foi realizada por meio de ensaio de hemaglutinação e interação com laminina por ELISA. Resultados e Discussão: A adição de ZnCl2 numa solução de Gal-1 causa aumento da emissão por fluorescência do triptofano e uma alteração para o vermelho, altera o espectro de dicroísmo circular e causa precipitação protéica da Gal-1. Estes eventos ocorreram de forma seletiva e dependente da concentração desse íon. As análises in silico indicam que o provável sítio de complexação Zn/Gal-1 é distinto do CRD e é formado pelos aminoácidos Glu-15, Asp-92 e Asp-134, assumindo a conformação trigonal bipiramidal e tendo número de coordenação igual a 5. Conclusão: As análises biofísicas in vitro e in silico, nos indicam que a Galectina-1 tem a capacidade de se complexar com o íon Zn2+. / Introduction: Galectin-1 (Gal-1) is a multifunctional protein that specifically recognizes glycans with -galactosides through carbohydrate recognition domains (CRD). Gal-1 is a homodimeric protein of 14.900daltons, pI=5.6, shows a jelly-roll molecular topology composed of two anti-parallels - sheet, has no signal peptide and contains 6 cysteines, 7 glutamic acids, 9 aspartic acids and 4 histidines per monomer. This lectin binds to different biological molecules contained in the cell surface, nucleus and extracellular matrix components. Zinc is an important metal in biological systems because can participate in the maintenance of protein structure and biological activity. Usually, cysteine , histidine, glutamic acid and aspartic acid residues are preferential targets for interaction with Zn. Approximately 10% of the human proteome is potentially capable to forming complexes with Zn. The Zn2+ ion exhibits properties suitable for both catalytic and structural protein functions. Proteins zinc binding sites can be divided into catalytic, structural, co-catalytic and protein interface sites.There are reports in the literature that shows the interaction between galectin-1 and organic ions. However, were not found reports about Zn-Gal-1 complexes. Objective: The aim of this study was to evaluate the existence and implications of the interaction between galectin-1 and Zn2+ ion. Materials and Methods: Human recombinant Gal-1 (monomer and dimmer) was obtained and purified. Also, the conditions for the use of Gal-1 were standardized. The interaction Zn/Gal-1 was assessed by biophysical an biological procedures. The analysis in vitro and in silico was made by spectrofluorimetry, circular dichroism, precipitation test, method of GRID, and molecular dynamics. The in vitro analysis of biological parameters were performed by hemmaglutination and laminin binding (ELISA) tests. Results and Discussion: The addition of ZnCl2 in Gal-1 solution causes increased fluorescence emission of tryptophan-70 and a red shift, alters the circular dichroism spectrum and causes precipitation of Gal-1 protein. These events occurred in a selective manner dependent of Zinc concentration. The in silico analysis indicates that the probable site of Zn/Gal-1 complexation is distinct from the CRD and is formed by the amino acids Glu-15, Asp-92 and Asp-134, assuming trigonal bipyramidal conformation and with coordination number equal to 5 . Conclusion: The biophysical in vitro and in silico findings suggests that Galectin-1 has the ability to complex with the Zn2+ ion.

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:32:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6464_1.pdf: 1145875 bytes, checksum: b7c1f3cf01c88de1f3680636ebeb0127 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / Faculdade de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / A β-lapachona (C15H14O3, MM 242,3), de nome químico 3,4-dihidro-2,2-dimetil-2H-naftol[1,2-b]pirano-5,6-diona, é uma ortonaftoquinona de ocorrência natural proveniente do ipê roxo, ou pau d arco roxo (Tabebuia avellandae Lor), da família Bigoneaceae. A β-lapachona tem sido alvo de diversas pesquisas, muitas delas visando explorar seu elevado potencial antineoplásico. Atuando contra diversos tipos de câncer humano, especialmente em neoplasias de ciclo celular muito lento, como determinadas linhagens de câncer de próstata que são refratárias aos tratamentos convencionais, especula-se que sua ação se dê por um mecanismo particular de apoptose. A principal barreira no desenvolvimento de uma forma farmacêutica aceitável tem sido sua baixa solubilidade aquosa, o que possivelmente acarretaria numa baixa biodisponibilidade. O presente estudo teve como objetivo executar estudos de solubilidade da β-lapachona em diferentes solventes farmacêuticos, bem como promover sua complexação com ciclodextrinas, para alcançar uma série de formulações que pudessem ser utilizadas em ensaios pré-clínicos. Embora o processo de complexação tenha sido bastante demorado, a utilização de ciclodextrinas mostrou-se como uma opção farmacotecnicamente viável, uma vez que resolvido o problema de baixa solubilidade aquosa, há um possível aumento na biodisponibilidade da β-lapachona. As formulações alcançadas foram doseadas através de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), por uma metodologia analítica previamente validada, e duas delas foram eleitas para serem utilizadas nos ensaios in vivo: β-lapachona complexada com cilcodextrina em água e β-lapachona livre incorporada em óleo de gergelim, ambas com 2% do ativo e administradas por duas vias distintas: oral e intramuscular. Os resultados demonstraram que a resposta farmacológica à β-lapachona complexada é significativa, porém, as formulações ainda necessitam ser otimizadas

Arthrospira platensis ou Spirulina é uma microalga com alto valor nutricional. Foram preparados extratos de Spirulina, caracterizados e aplicados como estabilizadores de emulsão de óleo de girassol comercial em água (O/A) (10% v/v) na ausência e na presença de quatro tipos de hidroxipropil metilcelulose (HPMC). Os extratos brutos de Spirulina foram preparados em tampões a pH 6 (EB6) e pH 8 (EB8) por sonicação para promover a lise celular e a libertação de proteínas e fosfolípides; Parte dos extratos foi centrifugada (EC6 ou EC8). Independentemente das condições de extração, todos os extratos apresentados apresentaram valores de potencial-&#950 médio variando de - (16 ± 2) mV a - (20 ± 2) mV, tamanho médio variando de (108 ± 52) nm a (306 ± 68) nm e atividade interfacial. As emulsões O/A preparadas com extratos de Spirulina (10 g / L) exibiram partículas com potencial- médio variando de - (16 ± 2) mV a - (27 ± 4) mV, tamanho médio variando de ~ 70 nm (EB6 ou EB8) a ~ 700 nm (EC6 ou EC8). No entanto, o EB6 levou a emulsões ligeiramente mais estáveis do que as outras. A combinação de EB6 (10 g / L) e HPMC (1,0 % m/m) levou a um aumento substancial na estabilidade da emulsão, embora os valores de potencial- diminuíram uma ordem de grandeza. Em particular, a HPMC com a maior massa molar e o maior grau de substituição de grupos metila conduziu a i) camada interfacial mais robusta resultante da formação de complexos entre cadeias HPMC e proteínas EB6 e (ii) meio contínuo mais viscoso. / Arthrospira platensis or Spirulina is a microalga with a high nutritional value. Extracts of Spirulina were prepared, characterized and applied as oil in water (O/W) (10 % v/v) emulsion stabilizers in the absence and presence of four types of hydroxypropyl methylcellulose (HPMC). The emulsions were prepared with edible sunflower oil. Crude extracts of Spirulina were prepared in buffers at pH 6 (CE6-Crude extract pH6) and pH 8 (CE8-Crude extract pH8) by sonication to promote cell lysis and protein and phospholipids release; part of the extracts was centrifuged (CCE6 or CCE8). Regardless of the extraction conditions, all extracts presented mean -potential ranging from (16 ± 2) mV to (20 ± 2) mV, mean diameter ranging from (108 ± 52) nm to (306 ± 68) nm and interfacial activity. The emulsions prepared with Spirulina extracts (10 g/L) displayed particles with mean -potential ranging from (16 ± 2) mV to (27 ± 4) mV, mean diameter ranging from ~ 70 nm (CCE6 or CCE8) to ~ 700 nm (CE6 or CE8). However, CE6 led to emulsions slightly more stable than the others did. The combination of CE6 (10 g/L) HPMC (1.0 wt %) led to substantial increase in the emulsion stability, although the -potential values decreased one order of magnitude. Particularly, the HPMC with the highest molecular weight and highest methyl substitution degree led to the most (i) robust interfacial layer resulting from the complex formation between HPMC chains and CE6 proteins and (ii) viscous continuous medium.