CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de NÃvel Superior / Introduction: Visceral leishmaniasis is a serious public health problem in several parts of the developing world. In leishmaniasis, protection and healing correlate with the development of Th1 immune response, and IFN-γ is considered a key molecule in this response. In contrast, the Th2 response results in disease progression. It is noteworthy that after contact with Leishmania the production of IFN-γ differs between healthy individuals. Some of them are high IFN-γ producer (HIFN-γP), while others respond with low IFN-γ producer (LIFN-γP). This has been observed in the in vitro response to several species of Leishmania, as well as in the early phase of the disease in patients with leishmaniasis. The activation of T lymphocytes can be modulated by immunomodulatory receptors present on the surface of lymphocytes and antigen presenting cells (APCs). Signaling lymphocytic activation molecule (SLAM, CD150) is a transmembrane protein that promotes Th2 differentiation. Evidences support the involvement of this molecule in the immune response against parasites. Objective: To evaluate the role of SLAM signaling pathway in the modulation of immune response of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from individuals low IFN-γ producers (LP) against Leishmania chagasi. Methodology: Healthy individualsâ PBMC were stimulated in vitro with L. chagasi and monoclonal anti-SLAM (α-SLAM), in the presence or not of inflammatory cytokines (rIFN-γ or rIL-12). The supernatants of the cultures were analyzed by ELISA for the determination of IFN-γ and interleukin 10 (IL-10) concentrations. Results: Upon stimulation of PBMC with L. chagasi, the blocking of the SLAM signaling pathway with α-SLAM did not affect the synthesis of IFN-γ and IL-10, regardless of treatment with rIL-12. However, after rIFN-γ treatment of antigen stimulated cells it occurred a download of IL-10 synthesis and upload IFN-γ secretion, regardless of the blockade of SLAM signaling pathway. Conclusions: The blocking of SLAM signaling pathway with α-SLAM at the concentration of 10μg/mL does not interfere significantly in the IFN-γ and IL-10 production of PBMC from individuals LP stimulated with Leishmania chagasi promastigotes. Treatment of PBMC with rIFN-γ is able to induce a reduction of IL-10 and an increment of IFN-γ in the supernates cultures, whereas treatment with rIL-12 enhanced IFN-γ production, but does not interfered with IL-10. It is necessary to make further studies to better understand the role of the SLAM signaling pathway in the immune response of LP against Leishmania chagasi. / IntroduÃÃo: Nas leishmanioses, proteÃÃo e cura se correlacionam com o desenvolvimento de resposta imune tipo Th1, e IFN-γ à considerada uma molÃcula chave nesta resposta. Ao contrÃrio, a resposta Th2, resulta na progressÃo da doenÃa. Vale ressaltar que a produÃÃo de IFN-γ, apÃs o contato com a Leishmania, difere entre indivÃduos sadios, alguns apresentam alta produÃÃo de IFN-γ (AP), enquanto outros respondem com baixa produÃÃo (BP). Isto tem sido observado com diversas espÃcies de Leishmania, assim como na infecÃÃo natural, na fase inicial da doenÃa. A ativaÃÃo do linfÃcito T pode ser modulada por coestimuladores, presentes na superfÃcie de linfÃcitos e nas APCs, a exemplo da molÃcula sinalizadora na ativaÃÃo de linfÃcitos T (SLAM). EvidÃncias apontam para o envolvimento dessas molÃculas na regulaÃÃo da resposta imunolÃgica. Objetivo: Avaliar o papel da via de sinalizaÃÃo de SLAM na modulaÃÃo da resposta imune em cÃlulas mononucleares de sangue perifÃrico (CMSP) de indivÃduos BP, frente à estimulaÃÃo in vitro por Leishmania chagasi. Metodologia: CMSP de indivÃduos sadios BP foram estimuladas in vitro com L. chagasi na ausÃncia ou na presenÃa do anticorpo monoclonal anti-SLAM (α-SLAM), com ou sem tratamento por citocinas proinflamatÃrias (rIFN-γ ou rIL-12). Os sobrenadantes das culturas foram analisados por ELISA para IFN-γ e interleucina (IL)-10. Resultados: Sob estimulaÃÃo de L. chagasi, o bloqueio da via SLAM nÃo modificou a sÃntese de IFN-γ e IL-10, independente do tratamento com rIL-12. No entanto, o tratamento com rIFN-γ reduziu a sÃntese de IL-10 e elevou a secreÃÃo de IFN-γ endÃgeno, independente do bloqueio da via SLAM. ConclusÃes: O bloqueio da via SLAM, com adiÃÃo de α-SLAM (10Âg/mL), nÃo interfere significativamente na produÃÃo de IFN-γ e IL-10. O tratamento das CMSP com rIFN-γ à capaz de induzir a reduÃÃo da produÃÃo de IL-10 e o aumento de IFN-γ de forma significativa, enquanto que o tratamento com rIL-12 aumenta a produÃÃo de IFN-γ, mas nÃo interfere na produÃÃo de IL-10 dos indivÃduos baixos produtores. Faz-se necessÃrio ampliar o estudo da aÃÃo imunomoduladora da SLAM frente à Leishmania chagasi, para um melhor entendimento do papel desta via de sinalizaÃÃo na resposta imunolÃgica dos BP.

No description available.

No description available.

No description available.

No description available.

O estresse é uma realidade na produção avícola mundial. Sabe-se que ambientes estressores prejudicam o bem-estar, os parâmetros produtivos e a imunidade de frangos de corte. Sabe-se, também, que o estresse por calor diminui a atividade de macrófagos em frangos de corte e, que existem, inúmeros estressores ambientais que insidem sobre a produção animal e podem aumentar a susceptibilidade às doenças. A Salmonella spp. é uma das maiores zoonoses do mundo, causando mais de 1 bilhão de casos de infecção. Nesse sentido, o presente trabalho analisa os efeitos do estresse por calor (31±1°C) sobre os índices zootécnicos, a imunidade, a invasão bacteriana e a integridade intestinal em frangos de corte infectados com Salmonella enteritidis; os dados obtidos foram discutidos dentro de uma perspectiva neuroimune. Os frangos foram divididos em quatro grupos: 1) Controle (C); 2) Estresse por Calor a 31±1 °C (HS31°C); 3) Controle infectados com Salmonella enteritidis (Controle Positivo [PC]) e; 4) Estresse por calor a 31±1 °C e infectados com Salmonella (PHS31°C). Nossos resultados mostraram que o estresse por calor em uma situação de infecção experimental por Salmonella enteritidis (grupo PHS31°C) 1) diminuiu os índices zootécnicos; especificamente, diminuiu o ganho de peso, consumo de alimento e a conversão alimentar; 2) diminuiu os níveis plasmáticos de INF-γ e IgA; 3) diminuiu a expressão de, IL-6 e IL-12 em baço e diminui IL1- β, IL-10 e TGF-β em tonsila cecal; 4) diminuiu a expressão de AvBD-4 e AvBD-6 em tonsila cecal e; 5) diminuiu a expressão de TLR-2 em baço e tonsila cecal. Observamos, também, 6) aumento dos níveis séricos de corticosterona nos animais dos grupos HS31°C e PHS31°C e; 7) piora no quadro de enterite produzida pela Salmonella enteritidis, quando os animais foram estressados por calor, caracterizando-se uma enterite moderada ao longo de todo o intestino delgado. Finalmente, 8) observamos que o estresse por calor aumentou a migração de Salmonella enteritidis para baço das aves do grupo PHS31°C, porém esse aumento não foi observado no fígado; observamos, também, presença de Salmonella na medula osssea dos animais estressados e infectado com essa bactéria. Os dados obtidos sugerem que a somatória dos fatores estresse por calor e infecção por Samonella prejudicou os parâmetros produtivos, a integridade intestinal, a imunidade e, em especial a ativação e atividade de macrófagos, possibilitando um aumento da migração de Salmonella enteritidis para o baço e medula óssea dos frangos de corte. Neste sentido, o estresse por calor teria prejudicado a qualidade da barreira imune intestinal, via ativação do eixo HPA e aumento dos níveis de corticosterona, diminuindo a imunidade inata proporcionando a migração das bactérias patogênicas através da mucosa intestinal para o baço e a medula óssea das aves estressadas. / Stress is a reality in the world poultry production. Environmental stressors impair both welfare, performance parameters and immunity in broiler chickens. Heat stress decreases macrophage activity in broiler chickens and many environmental stressors that impact animal production increases animal\'s susceptibility to diseases. Samonella spp is one of the most endemic zoonotic diseases of the world, inducing more than 1 billion infection cases per year. In this way, we studied the effects of 31±1°C heat stress on performance parameters, immunity, bacteria invasion and intestinal integrity in broiler chickens experimentally infected with Salmonella enteritidis; the data were discussed under a neuroimmune perspective. The broiler chickens were divided into four different groups: 1) Control group (C); 2) 31±1 °C heat stressed group (HS31°C); 3) Control group infected with Salmonella enteritidis Positive control (PC) and; 4) 31±1 °C heat stressed and Salmonella enteritidis infected group (PHS31°C). We showed the heat stress applied in the course of Salmonella enteritidis infection (PHS31°C group) decreased poultry performance parameters; specifically, it decreased the body weight gain, the feed intake and the food conversion; 2) decresead INF-γ and IgA plasmatic levels; 3) decreased the mRNA expression of IL-6 and IL- 12 in spleen and the mRNA expression of IL1-β, IL-10 and TGF-β in cecal tonsil; 4) decreased the mRNA expression of AvBD-4 and AvBD-6 in cecal tonsil and; 5) decreased the mRNA expression of TLR-2 in spleen and cecal tonsil. We also observed 6) an increase in corticosterone serum levels in the animals of the HS31°C and the PHS31°C groups and, 7) more severe intestinal inflamation produced by Salmonella enteritidis in heat stressed chickens, characterized by a moderate enteritis throughout all the small intestine mucosa (PHS31°C group). Finally, 8) we showed that the heat stress increased splenic Salmonella enteritides invasion in PHS31°C broiler chickens; we also observed the presence of Salmonella in the bone marrow of stressed and infected broiler chickens. These data suggest that heat stress and Salmonella infection working together impair chicken\'s performance parameters, intestinal integrity and immunity (specially the macrophage activity), increasing ate the same time splenic and bone marrow Salmonella enteritidis invasion. Thus, heat stress could have impared the intestinal immunity barrier quality, via HPA axis activation and corticosterone serum levels release, decreasing the inate immunity and, providing pathogenic bacteria migration through the intestinal mucosa for spleen and bone marrow of the heat stressed chickens.

O estresse é uma realidade na produção avícola mundial. Sabe-se que ambientes estressores prejudicam o bem-estar, os parâmetros produtivos e a imunidade de frangos de corte. Sabe-se, também, que o estresse por calor diminui a atividade de macrófagos em frangos de corte e, que existem, inúmeros estressores ambientais que insidem sobre a produção animal e podem aumentar a susceptibilidade às doenças. A Salmonella spp. é uma das maiores zoonoses do mundo, causando mais de 1 bilhão de casos de infecção. Nesse sentido, o presente trabalho analisa os efeitos do estresse por calor (31±1°C) sobre os índices zootécnicos, a imunidade, a invasão bacteriana e a integridade intestinal em frangos de corte infectados com Salmonella enteritidis; os dados obtidos foram discutidos dentro de uma perspectiva neuroimune. Os frangos foram divididos em quatro grupos: 1) Controle (C); 2) Estresse por Calor a 31±1 °C (HS31°C); 3) Controle infectados com Salmonella enteritidis (Controle Positivo [PC]) e; 4) Estresse por calor a 31±1 °C e infectados com Salmonella (PHS31°C). Nossos resultados mostraram que o estresse por calor em uma situação de infecção experimental por Salmonella enteritidis (grupo PHS31°C) 1) diminuiu os índices zootécnicos; especificamente, diminuiu o ganho de peso, consumo de alimento e a conversão alimentar; 2) diminuiu os níveis plasmáticos de INF-γ e IgA; 3) diminuiu a expressão de, IL-6 e IL-12 em baço e diminui IL1- β, IL-10 e TGF-β em tonsila cecal; 4) diminuiu a expressão de AvBD-4 e AvBD-6 em tonsila cecal e; 5) diminuiu a expressão de TLR-2 em baço e tonsila cecal. Observamos, também, 6) aumento dos níveis séricos de corticosterona nos animais dos grupos HS31°C e PHS31°C e; 7) piora no quadro de enterite produzida pela Salmonella enteritidis, quando os animais foram estressados por calor, caracterizando-se uma enterite moderada ao longo de todo o intestino delgado. Finalmente, 8) observamos que o estresse por calor aumentou a migração de Salmonella enteritidis para baço das aves do grupo PHS31°C, porém esse aumento não foi observado no fígado; observamos, também, presença de Salmonella na medula osssea dos animais estressados e infectado com essa bactéria. Os dados obtidos sugerem que a somatória dos fatores estresse por calor e infecção por Samonella prejudicou os parâmetros produtivos, a integridade intestinal, a imunidade e, em especial a ativação e atividade de macrófagos, possibilitando um aumento da migração de Salmonella enteritidis para o baço e medula óssea dos frangos de corte. Neste sentido, o estresse por calor teria prejudicado a qualidade da barreira imune intestinal, via ativação do eixo HPA e aumento dos níveis de corticosterona, diminuindo a imunidade inata proporcionando a migração das bactérias patogênicas através da mucosa intestinal para o baço e a medula óssea das aves estressadas. / Stress is a reality in the world poultry production. Environmental stressors impair both welfare, performance parameters and immunity in broiler chickens. Heat stress decreases macrophage activity in broiler chickens and many environmental stressors that impact animal production increases animal\'s susceptibility to diseases. Samonella spp is one of the most endemic zoonotic diseases of the world, inducing more than 1 billion infection cases per year. In this way, we studied the effects of 31±1°C heat stress on performance parameters, immunity, bacteria invasion and intestinal integrity in broiler chickens experimentally infected with Salmonella enteritidis; the data were discussed under a neuroimmune perspective. The broiler chickens were divided into four different groups: 1) Control group (C); 2) 31±1 °C heat stressed group (HS31°C); 3) Control group infected with Salmonella enteritidis Positive control (PC) and; 4) 31±1 °C heat stressed and Salmonella enteritidis infected group (PHS31°C). We showed the heat stress applied in the course of Salmonella enteritidis infection (PHS31°C group) decreased poultry performance parameters; specifically, it decreased the body weight gain, the feed intake and the food conversion; 2) decresead INF-γ and IgA plasmatic levels; 3) decreased the mRNA expression of IL-6 and IL- 12 in spleen and the mRNA expression of IL1-β, IL-10 and TGF-β in cecal tonsil; 4) decreased the mRNA expression of AvBD-4 and AvBD-6 in cecal tonsil and; 5) decreased the mRNA expression of TLR-2 in spleen and cecal tonsil. We also observed 6) an increase in corticosterone serum levels in the animals of the HS31°C and the PHS31°C groups and, 7) more severe intestinal inflamation produced by Salmonella enteritidis in heat stressed chickens, characterized by a moderate enteritis throughout all the small intestine mucosa (PHS31°C group). Finally, 8) we showed that the heat stress increased splenic Salmonella enteritides invasion in PHS31°C broiler chickens; we also observed the presence of Salmonella in the bone marrow of stressed and infected broiler chickens. These data suggest that heat stress and Salmonella infection working together impair chicken\'s performance parameters, intestinal integrity and immunity (specially the macrophage activity), increasing ate the same time splenic and bone marrow Salmonella enteritidis invasion. Thus, heat stress could have impared the intestinal immunity barrier quality, via HPA axis activation and corticosterone serum levels release, decreasing the inate immunity and, providing pathogenic bacteria migration through the intestinal mucosa for spleen and bone marrow of the heat stressed chickens.

No description available.

Avec quatorze anticorps utilisés en oncologie, les anticorps monoclonaux ont enfin une place de choix dans l'arsenal thérapeutique anticancéreux. Cependant, l'un des modes d'action les plus importants de ces molécules, la cytotoxicité à médiation cellulaire dépendante des anticorps (ADCC), souffre de plusieurs limites en raison de la nécessité d'une interaction optimale avec le FcγRIIIA. L'équipe du Dr. Daniel Baty a conçu de nouveaux formats d'anticorps bispécifiques basés sur l'utilisation de domaine unique d'anticorps de lamas (sdAb) et capables de contourner la plupart de ces limites. Des banques de phages issus de lamas immunisés ont permis de sélectionner deux sdAbs (d'affinités différentes) dirigés contre le FcγRIIIA exprimé par des cellules NK et les macrophages, ainsi qu'un sdAb dirigé contre l'antigène tumoral carcino-embryonnaire (ACE). En utilisant les domaines CH1 et Ck d'IgG1 humaine comme motif d'hétérodimérisation et les sdabs anti-ACE et anti-FcγRIII précédemment sélectionnés, nous avons développé des formats innovants d'anticorps bispécifiques Fab-like nommés bsFabs. Ces molécules sont faciles à produire, très stables et peuvent déclencher la lyse des cellules tumorales par les cellules NK humaines à des concentrations de l'ordre du picomolaire. Elles ne se lient pas au récepteur inhibiteur FcγRIIB, n'entrent pas en compétition avec des IgG sériques pour la liaison aux récepteurs, et leur activité cytotoxique est indépendante de la glycosylation du Fc et du polymorphisme du FcγRIIIA. / With fourteen antibodies used in oncology, monoclonal antibodies finally have a place in the therapeutic arsenal against cancer. However one of the modes of action of the most important of these molecules, cell-mediated cytotoxicity antibody-dependent (ADCC), suffers from several limitations due to the need for optimal interaction with the FcγRIIIA. Daniel Baty's team has developed new formats of bispecific antibodies based on the use of single domain llama antibodies (SdAb) that are capable of circumventing most of the these limitations. Phage libraries from immunized llamas were used to select two sdAbs directed against the FcγRIIIA expressed by NK cells and macrophages (with different affinities for FcγRIII), as well as one SdAb directed against the tumor antigen carcinoembryonic (CEA). Using CH1 and Ck domains of human IgG1 as a motif for heterodimerization and sdabs previously selected, we have developed innovative anti-CEA and anti-FcγRIII formats of bispecific antibodies Fab-like named bsFabs. These molecules are easy to produce, very stable and can trigger tumor cell lysis by human NK cells at picomolar concentrations. They do not bind FcγRIIB inhibitory receptor, do not compete with serum IgG and their cytotoxic activity is independent of FcγRIIIA polymorphism. In addition, they slow tumor growth in mouse model. In terms of pharmacokinetics, although bsFabs have a reasonable tumor retention, one of the limitations of these formats is size, which leads to rapid renal elimination. Such findings led us to consider the creation of new antibody formats to both increase tumor retention and secondly the half-life of antibodies in the body.

A metilação do DNA é uma alteração epigenética que atua na regulação da expressão gênica. A deficiência de vitaminas (cobalamina, B6 e folato) pode interferir na taxa de metilação. O efeito da deficiência destas vitaminas foi determinado em estudos com cultura de células e em animais. No entanto, são raros os estudos realizados com seres humanos. Os objetivos deste trabalho foram: avaliar a taxa de metilação do DNA de leucócitos na região promotora dos genes Interferon gama (IFNγ), Serpin B5 e Stratifin; verificar se existe associação entre as concentrações das vitaminas e dos metabólitos com a taxa de metilação do DNA dos 3 genes; e analisar quais são os fatores de predição para a taxa de metilação do DNA (variável dependente) considerando como variáveis independentes os valores séricos das vitaminas e metabólitos, em mulheres com idades gestacionais de 16, 28 e 36 semanas. Cento e oitenta e três mulheres foram convidadas a participar desse estudo, porém apenas 96 completaram o estudo prospectivo. Foram determinadas as concentrações séricas da cobalamina (Cbl), folato, vitamina B6, S-adenosilmetionina (SAM), S-adenosilhomocisteína (SAH), ácido metilmalônico (MMA), homocisteína total (tHcy) e folato eritrocitário. A taxa de metilação nos 3 genes foi determinada por qMSP (Quantitative Methylation Specific - Polimerase Chain Reaction). Várias mulheres estavam fazendo uso de suplementação com ácido fólico e/ou polivitamínicos. Diante deste fato foram formados 4 subgrupos: Grupo 1 (constituído por mulheres que não usaram suplementação), Grupo 2 (mulheres que usaram suplementação em todas as idades gestacionais estudadas - 16, 28 e 36 semanas), Grupo 3 (mulheres que usaram suplementação no início da gestação até a 16ª semana) e Grupo 4 (mulheres que usaram suplementação na 16ª e 28ª semana gestacional). Não houve diferença entre as taxas de metilação do DNA dos genes IFNγ, Serpin B5 e Stratifin durante o período gestacional estudado. As taxas de metilação no gene IFNγ do grupo 1 foram maiores, quando comparadas as taxas dos demais grupos. Em modelos de regressão linear múltipla, considerando o período gestacional como um todo, apenas a vitamina B6 e a tHcy foram diretamente associadas aos valores da taxa de metilação do gene IFNγ. No entanto, a vitamina B6 foi inversamente associada, enquanto que tHcy esteve diretamente associada aos valores da taxa de metilação do gene Stratifin. A taxa de metilação não sofre alterações durante a gestação; a vitamina B6 e a tHcy foram os fatores de predição para as taxas de metilação do DNA na região promotora dos genes IFNγ e Stratifin. / DNA methylation is an epigenetic modification that regulates gene expression. Cobalamin, vitamin B6 and folate deficiencies can impair the DNA methylation index. Studies involving cultured cells and animals have evaluated the effect of vitamin deficiencies in DNA methylation. However, few studies were conducted in humans. The goals of this study were: to evaluate the leukocyte DNA methylation index in the promoter region of interferon gamma (IFNγ), Serpin B5 and Stratifin genes; to assess the association between vitamins and metabolites concentrations and DNA methylation index in three genes; and to examine the predictive factors for DNA methylation index using as independent variables: serum folate, serum cobalamin, serum vitamin B6, erythrocyte folate, methylmalonic acid (MMA), total homocysteine (tHcy) in three gestational ages (16th, 28th and 36,th weeks). A hundred eighty three women were included, but only 96 completed the prospective study. The serum concentrations of cobalamin, folate, vitamin B6, S-adenosylmethionine (SAM), Sadenosylhomocysteine (SAH), MMA, tHcy were determined. The erythrocyte folate concentration was also evaluated. The DNA methylation index was determined in three genes by qMSP (Quantitative Methylation Specific - Polymerase Chain Reaction). Several women were taking folic acid supplementation and/or multivitamins. Four groups were formed according to supplementation use: Group 1 (women who take no supplementation), Group 2 (women who took supplements at 16th, 28th and 36th weeks of pregnancy), Group 3 (women who took supplements in early pregnancy and up to 16 weeks) and Group 4 (women who took supplements in the 16th and 28th week of pregnancy). There was no difference between the DNA methylation index in the IFNγ, Serpin B5 and Stratifin genes during the gestational periods studied. The DNA methylation index in the IFNγ gene in group 1 was higher than those indexes from other groups. In multiple linear regression models considering the gestational periods as a whole, only vitamin B6 and tHcy were directly associated to DNA methylation index in IFNγ gene. However, vitamin B6 was inversely associated, whereas tHcy was directly associated with values of DNA methylation in Stratifin. The DNA methylation index does not change during pregnancy, vitamin B6 and tHcy were the predictors of DNA methylation in the promoter region of IFNγ and Stratifin genes.