A indução de proteínas de choque térmico (HSP) é fundamental nos processos de reparo que seguem diferentes tipos de dano celular. O exercício físico é capaz de induzir a síntese de HSP, o que parece estar relacionado com a prevenção de desnaturação protéica por radicais livres, provável causa dos efeitos duradouros da fadiga de baixa freqüência. Por sua vez, a formação de óxido nítrico (NO) também aumenta nas células musculares em contração, podendo determinar estresse oxidativo, ativação do fator nuclear κB (NF-κB) e injúria tecidual. No entanto, o NO também induz a síntese de HSP, o que deve causar citoproteção pela inibição da ativação do NF-κB. Portanto, a geração de NO durante o exercício pode desempenhar um duplo papel, a saber: induzir injúria tecidual ligada à ativação do NF-κB e; proteger contra a mesma pela indução de HSP que bloqueiam a ativação do primeiro. Neste trabalho investigamos o papel do NO na indução de HSP70 em resposta ao exercício agudo. Com base nos nossos resultados e nas informações disponíveis a partir de outros estudos, podemos concluir que o exercício de natação com uma sobrecarga de 5 % do peso corporal preso ao animal é capaz de aumentar o conteúdo de HSP70 (em até 33%, p < 0,05) no músculo esquelético e que este aumento está associado a estresse oxidativo (aumento de 2,4 vezes no índice de estado redox), depleção de reservas energéticas (redução de 47% no conteúdo de glicogênio, p <0,05) e maior produção de NO pelos músculos (em até 1,7 vezes, p<0,05). A administração de L-NAME foi capaz de impedir o aumento no conteúdo de HSP70 induzido pelo exercício, sugerindo que o NO seja um importante mecanismo de indução destas proteínas em resposta ao exercício. No entanto, estudos adicionais são necessários para validar a hipótese de que o NO seja responsável pela indução da síntese de HSP70 em resposta ao exercício de resistência.

Resumo não disponível

Neste trabalho foram sintetizados e caracterizados catalisadores de paládio a diferentes teores em massa (0,2%, 0,4% e 0,6%) suportado na zeólita mordenita na sua forma sódica e a 0,4% Pd na mordenita na forma protônica e em alumina. Os catalisadores foram utilizados na reação de decomposição catalítica do óxido nítrico. O paládio foi incorporado por troca iônica a partir de solução de Pd(NO)3 nas zeólitas, e por impregnação na alumina. Os catalisadores foram caracterizados por difração de raios X, análise química elementar, área específica por adsorção de N2 e Redução a Temperatura Programada. Todos os catalisadores mostraram-se ativos na reação de decomposição do NO. Os catalisadores sintetizados foram comparados com os catalisadores de paládio a 0,8% e 1,9% em massa suportado em mordenita estudados por da Silveira et al. Os melhores resultados de atividade e seletividade foram obtidos com o catalisador com 0,4% de paládio em massa suportado na forma sódica da mordenita, que apresentou conversão máxima de NO por aproximadamente 165 minutos e formação de menos de 10 ppm de N2O. / In this work palladium catalysts with 0.2%, 0.4% and 0.6% mass content supported on sodium-form mordenite and 0.4% on alumina and proton-form mordenite were synthesized and characterized aiming to their application on the nitric oxide decomposition reaction. Palladium was incorporated by ionic exchange from a Pd(NO)3 solution on zeolite, and impregnation on alumina. The catalysts were characterized by X Ray diffraction, elementary chemical analysis, specific area from N2 adsorption and Temperature Programmed Reduction. All synthesized catalysts exhibited activity on the NO decomposition reaction. The synthesized catalysts were compared to Pd 0.8% and 1.9% mass content catalysts on mordenite synthesized by da Silveira et al. The best activity and selectivity results were achieved with the 0.4% (w/w) palladium catalyst supported on sodium mordenite, who presented NO maximum conversion for 165 minutes and generated less than 10 ppm of N2O.

À medida em que avançamos no entendimento da anemia falciforme, percebemos que esta hemoglobinopatia se apresenta como uma doença complexa, na qual o defeito genético e suas conseqüências diretas não são suficientes para explicar a ampla heterogeneidade clínica observada nos pacientes portadores do alelo HBB*S. Um número crescente de fatores (ambientais e genéticos) vêm sendo relacionados a diferentes aspectos da expressão clínica da anemia falciforme. Uma abordagem mais ampla desta doença permitiu formular a hipótese que a anemia falciforme seria uma condição inflamatória crônica, conceito apoiado por diversos trabalhos realizados nas últimas décadas. Neste contexto, e com a intenção de contribuir na busca de características genéticas envolvidas na modulação do quadro clínico heterogêneo da anemia falciforme, estudamos os polimorfismos de receptores de quimiocinas CCR2-64I e CCR5delta32, bem como três polimorfismos estabelecidos no gene NOS3, todos estes genes envolvidos em processo inflamatório. Nossos resultados indicam que os polimorfismos analisados não estão diretamente associados ao desenvolvimento de um quadro clínico severo nos pacientes estudados. No entanto, observamos uma tendência para o desenvolvimento de um quadro clínico severo em indivíduos portadores de determinadas variantes alélicas. O aumento no número amostral, bem como a análise de outros marcadores de severidade do quadro clínico da anemia falciforme, poderão auxiliar no estabelececimento do papel destas variantes na modulação do quadro clínico desta doença. / Sickle cell disease (SCD) is an inherited disorder that presents extremely variable clinical manifestations. It has been approached as an inflammatory disorder within the past decades and several works have tried to determine which factors are involved in such characteristic. In order to contribute to the characterization of the genetic differences underlying this phenotypic diversity in SCD, we proposed to study the distribution of polymorphic variants of the genes encoding the chemokine receptors CCR2 (CCR2-64I) and CCR5 (CCR5delta32), as well as three well-characterized polymorphisms in the NOS3 gene. Our results indicate that the polymorphisms studied here are not directly associated to the development of a severe clinical course in this group of patients. Nevertheless, we observed a tendency to the development of a severe clinical course in carriers of some of the variant alleles studied here. Further studies including a larger sample of patients and other severity markers of SCD should be carried out in order to determine the role of such variants in the modulation of the clinical picture in this disorder.

SOUSA, C. T. Sildenafil diminui a hiperreatividade de aneis isolados de traqueia de ratos e altera a expressão genica de proteínas Canonical transient receptor potential após desafio antigênico. 2014. 121 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Faculdade Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2015-10-28T13:32:52Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_ctsousa.pdf: 1438670 bytes, checksum: f1868e956123594817f3f143a9c687bb (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2015-10-28T13:33:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_ctsousa.pdf: 1438670 bytes, checksum: f1868e956123594817f3f143a9c687bb (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-28T13:33:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_ctsousa.pdf: 1438670 bytes, checksum: f1868e956123594817f3f143a9c687bb (MD5) Previous issue date: 2014-02-21 / Sildenafil (Viagra ®) is a selective inhibitor of cyclic guanosinamonofosfato (cGMP) a specific phosphodiesterase-5 (PDE5) useful in the treatment of erectile dysfunction and pulmonary arterial hypertension. The increase in intracellular cGMP levels caused by inhibition of PDE5 causes several cellular events such as airway smooth muscle relaxation and inhibition of cellular inflammation. The aim of this study was to evaluate the mechanism of action of sildenafil in tracheas of naive animals and challenged to ovalbumin, evaluate the effect of sildenafil on the expression and function of calcium channels operated by stock in tracheas of naive animals, sensitized and challenged with ovalbumin. In this work male rats of Wistar species were used, animals were actively sensitized by intraperitoneal injections of ovalbumin (three application on alternate days - 1, 3 and 5), the antigenic challenge (bronchoprovocation) occurred during the period between the 21 and 50 days post-sensitization, exactly 24 hours before the experiments in vitro. After removing the tracheal rings form chambers mounted on isolated bath and performed the concentration effect curves. When comparing the relaxing effect of sildenafil IC50 in animals with intact epithelium 27.2 [17.5 to 42.1] microM (n = 12), whereas the IC50 for the preparations without epithelium (n = 7) was of 232.25 [129.58 to 416.23] microM, (p <0.05 Kruskal-Wallis). In preparations not treated with L-NAME IC50 was 27.2 [17.5 to 42.1] microM (n = 12), while in preparations treated with L-NAME (n = 7) was 348.1 [248 to 488.5] microM (p <0.05 Kruskal-Wallis). We observed in naive animals an increase in the EC50 for carbachol contraction produced by 0.22 [0.17 to 0.30] microM (n = 8) in the absence of sildenafil for 2.01 [1.21 to 3.33 ] microM (n = 7) in the presence of 30 microM of sildenafil for 2.85 [2.09 to 3.87] microM in the presence of 100 mM of sildenafil, and 2.45 [1.67 to 3.6 ] microM (n = 10) in the presence of 300 mM of sildenafil. In animals sensitized and challenged with ovalbumin, sildenafil 30μM inhibited bronchial hyperactivity. Concerning the entrance of capacitative calcium, the sildenafi decreased the contraction produced by the replacement of calcium by 42.9 ± 7.3% in naive animals to 10.8 ± 3.7% in presence of 30 mM of sildenafil (p <0, 05). In the animals challenged sildenafi decreased the contraction produced by the replacement of calcium (98.0 ± 11.8%, n = 6) without the presence of sildenafil in 22.7 ± 5.4% in the presence of sildenafil 30 microM (p <0.05). Correlating gene expression with animals sensitized and challenged with ovalbumin treated with sildenafil a significant increase in gene expression TRPC1 TRPC6 (p <0.05, test HolmSidak) occurred. In contrast TRPC5 expression, expressed no changes after antigenic challenge, but decreased significantly after the treatment with sildenafil (p <0.05, test HolmSidak). In this study, we found that the myorelaxant effect of sildenafil involves NO, cGMP, potassium channels and calcium channels operated by stock. The presence of sildenafil was also able to significantly reduce the response to antigen in tissues from mice sensitized and challenged, and to alter the expression of genes belonging to the subfamily of TRPC, linking the involvement of phosphodiesterase 5 via the cellular expression of genes in TRPC tracheal smooth muscle. / O sildenafil (Viagra ®) é um inibidor seletivo da guanosina monofosfato cíclico (cGMP), um tipo específico de fosfodiesterase-5 (PDE5) útil no tratamento da disfunção erétil e hipertensão arterial pulmonar. O aumento do nível de GMPc intracelular causado pela inibição da PDE5 provoca vários eventos celulares, como relaxamento da musculatura lisa das vias aéreas e inibição da inflamação celular. O objetivo deste estudo foi avaliar o mecanismo de ação do sildenafil em traqueias de animais naive e desafiados a ovoalbumina; avaliar a interferência do sildenafil na expressão e no funcionamentode dos canais de cálcio operados por estoque em traqueias de animais naive, sensibilizados e desafiados a ovoalbumina. No presente trabalho foram utilizados ratos machos, da espécie Wistar, os animais foram sensibilizados ativamente por meio de injeções intraperitoneais de ovalbumina (3 aplicações em dias alternados - nos dias 1, 3 e 5), o desafio antigênico (broncoprovocação) ocorreu no período entre os dias 21 e 50 pós-sensibilização, exatamente 24 horas antes da realização dos experimentos in vitro. Apos a remoção os anéis de traqueia foram montados nas camaras de banho isolado e realizadas as curvas concentração efeito. Quando comparamos o efeito relaxante do sildenafil a IC50 nos animais com epitélio integro 27,2 [17,5 – 42,1] µM (n = 12), enquanto que a IC50 para o para as preparações sem epitélio (n = 7) foi de 232,25 [129,58 – 416,23] µM, (p<0,05 Teste de Kruskal-Wallis). Nas preparações não tratadas com L-NAME a IC50 foi de 27,2 [17,5 – 42,1] µM (n = 12), enquanto que nas preparações tratadas com L-NAME (n = 7) foi de 348,1 [248 – 488,5] µM (p<0,05 Teste de Kruskal-Wallis). Verificamos nos animais naive um aumento na EC50 para a contração produzida pelo carbacol de 0,22 [0,17 - 0,30] µM (n = 8) na ausência de sildenafil, para 2,01 [1,21 – 3,33] µM (n = 7) na presença de 30 µM de sildenafil, para 2,85 [2,09 – 3,87] µM na presença de 100 µM de sildenafil, e para 2,45 [1,67 – 3,6] µM (n = 10) na presença de 300 µM de sildenafil. Nos animais sensibilizados e desafiados a ovoalbumina o sildenafil 30µM inibiu a hiperreatividade brônquica. Com relação a entrada de cálcio capacitativo, o sildenafi diminuiu a contração produzida pela reposição de cálcio de 42,9 ± 7,3% nos animais naïve para 10,8 ± 3,7% na presence de 30 µM de sildenafil (p<0,05). Nos animais desafiados o sildenafi diminuiu a contração produzida pela reposição de cálcio de (98,0 ± 11,8%, n = 6) sem a presença de sildenafil para 22,7 ± 5,4% na presença de sildenafil 30 µM (p <0,05). Relacionando com a expressão genica os animais sensibilizados e desafiados a ovoalbumina, tratados com sildenafil ocorreu um aumento significativo na expressão dos genes TRPC1 TRPC6 (p<0,05, Teste de HolmSidak), Em contraste a expressão de TRPC5, não expressou mudanças após o desafio antigênico, entretanto diminuiu de forma significativa após o tratamento com sildenafil (p<0,05, Teste de HolmSidak). Nesse estudo, verificamos que o efeito miorrelaxante do sildenafil envolve o NO, GMPc, canais de potássio e canais de cálcio operados por estoque. A presença do sildenafil também foi capaz de reduzir significativamente a resposta ao antígeno nos tecidos provenientes de ratos sensibilizados e desafiados, e de alterar a expressão de genes pertencentes à subfamília dos TRPC, relacionando o envolvimento da via fosfodiesterase 5 na expressão celular de genes TRPC no musculo liso traqueal.

SOUSA, Auridéia Possidônio de. Síntese, caracterização e estudo de reatividade dos complexos cis-[Ru(bpy)2(4-bzpy)NO](PF6)3 e cis-[Ru(bpy)2(4-bzpy)CO](PF6)2 (onde bpy = 2,2’-bipiridina e 4-bzpy = 4-benzoilpiridina). 2015. 95 f. Dissertação (Mestrado em Química)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by Celia Sena (celiasena@dqoi.ufc.br) on 2017-09-12T19:06:04Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_apsousa.pdf: 2998037 bytes, checksum: fc4da604595d8a3a9ea76815a364ee13 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-10-17T15:44:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_apsousa.pdf: 2998037 bytes, checksum: fc4da604595d8a3a9ea76815a364ee13 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-17T15:44:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_apsousa.pdf: 2998037 bytes, checksum: fc4da604595d8a3a9ea76815a364ee13 (MD5) Previous issue date: 2015 / For a long time NO (nitric oxide) was known only as a toxic gas that in large concentrations caused damage to health. However, in the 1980s, studies have shown their participation in various physiological processes, including its activity as a mediation of the central nervous system, smooth muscle relaxation, participation in the ability of the immune system to destroy tumor cells and intracellular parasites, platelet adhesion and aggregation. Apparently, NO is not alone in many of these biological processes. Recently CO (carbon monoxide) is emerging as an important signaling molecule in these processes. Despite the beneficial effects, it is important to warn the danger of direct treatment with NO or CO gas, since it is difficult to determine the extent to which these gases are therapeutic, without causing toxic effects. This fact led recently the study of some metal complexes capable of releasing NO or CO in a controlled manner. This work was carried out the synthesis, characterization and evaluation of compounds of type cis-[Ru(bpy)2(4-bzpy)NO](PF6)3 and cis-[Ru(bpy)2(4-bzpy)CO](PF6)2 (where bpy = 2,2’-Bipyridina and 4-bzpy = 4-Benzoylpyridina). The characterization of the compounds was performed using electrochemical techniques (cyclic voltammetry), spectroscopic (vibrational spectroscopy in the IR region and electron spectroscopy), H and C nuclear magnetic resonance, X-ray diffraction monocrystals. The nitrosyl complex underwent reactivity testing as the release of NO0, showing good results as the electrochemical reduction, photochemical and biological front of a reducer. Once characterized, the carbonyl compound reactivity was also subjected to tests where the CO release was assessed by testing with myoglobin, using for this the spectrophotometric method. / Durante muito tempo o NO (óxido nítrico) foi conhecido apenas como um gás tóxico que em grandes concentrações causava danos à saúde. Entretanto, na década de 1980, estudos demonstraram sua participação em diversos processos fisiológicos, incluindo sua atividade como mediação do sistema nervoso central, relaxação da musculatura lisa, participação na capacidade do sistema imunológico de destruir células tumorais e parasitas intracelulares, adesão e agregação plaquetária. Ao que tudo indica, o NO não está sozinho nesses processos biológicos. Recentemente o CO (monóxido de carbono) vem surgindo como uma importante molécula sinalizadora em vários destes processos. Apesar dos efeitos benéficos, é importante alertar para o perigo do tratamento direto com NO ou CO gasosos, uma vez que é difícil determinar até que ponto estes gases são terapêuticos, sem provocar efeitos tóxicos. Esse fato estimulou, recentemente, o estudo de alguns complexos metálicos capazes de liberar NO ou CO de forma controlada. Assim, neste trabalho realizou-se a síntese, caracterização e avaliação de compostos do tipo cis-[Ru(bpy)2(4-bzpy)NO](PF6)3 e cis-[Ru(bpy)2(4-bzpy)CO](PF6)2 (onde bpy = 2,2’-Bipiridina e 4-bzpy = 4-Benzoilpiridina). A caracterização dos compostos foi realizada utilizando-se técnicas eletroquímicas (voltametria cíclica), espectroscópicas (espectroscopia vibracional na região do IV e espectroscopia eletrônica), ressonância magnética nuclear de 1H e 13C e difração de raios-X de monocristais. O nitrosilo complexo foi submetido a testes de reatividade quanto a liberação de NO0, apresentando bons resultados quanto a redução eletroquímica, fotoquímica e frente ao redutor biológico cisteína. Após caracterizado, o complexo carbonílico também foi submetido à testes de reatividade onde a liberação de CO foi avaliada através de ensaios com mioglobina, utilizando-se para isso o método espectrofotométrico.

OLIVEIRA,V. O. Disfunção endotelial precoce em pacientes com lipodistrofia generalizada congênita (síndrome de berardinelli-seip) avaliada por dilatação fluxo-mediada da artéria braquial e tonomeria arterial periférica. 2015. 172 f. Tese (Doutorado em Ciências Medicas) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, 2015 / Submitted by Ivone Sousa (ppgcm.ufc@gmail.com) on 2017-10-25T15:59:23Z No. of bitstreams: 1 2015_tese_vofernandes.pdf: 1883526 bytes, checksum: 6db4f5678a6428868d0a576ee48ba932 (MD5) / Approved for entry into archive by Maria Carvalho (lolitaprado@ufc.br) on 2017-10-25T16:58:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_tese_vofernandes.pdf: 1883526 bytes, checksum: 6db4f5678a6428868d0a576ee48ba932 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-25T16:58:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_tese_vofernandes.pdf: 1883526 bytes, checksum: 6db4f5678a6428868d0a576ee48ba932 (MD5) Previous issue date: 2015-08-31 / Congenital generalized lipodystrophy (CGL) is a rare, autosomal recessive disease, characterized by total or almost total absence of adipose tissue since birth. Mutations in the BSCL1/AGPAT2 and BSCL2/Seipin genes account for 95% of cases. CGL courses with severe insulin resistance (IR), diabetes mellitus (DM) and dyslipidemia, which may culminate in atherosclerosis and premature cardiovascular mortality. However, there is a lack of studies evaluating early vascular damage in this condition. This study aimed to determine the prevalence of endothelial dysfunction (ED), through assessment of flow-mediated dilation (FMD) of the brachial artery and peripheral arterial tonometry (PAT), and its association with genotypic and phenotypic characteristics in population with CGL. We evaluated 11 patients with CGL, 11 with metabolic syndrome (MS) and 22 healthy controls, matched for sex and age. We performed clinical and laboratory evaluation, abdominal ultrasonography, echocardiography, molecular study of AGPAT2 and BSCL2 genes and evaluation of endothelial function by FMD (by the % of the brachial artery dilation -%FMD) and PAT (by reactive hyperemia index - RHI). In the CGL, MS and control groups, age (years) was, respectively, 10 (5-30), 13 (11-19) and 12 (10-19) and were female, 63.5%, 68.2% and 54.1%. There was a higher prevalence of hypertriglyceridemia, hypercholesterolemia, DM, BP above the 95 percentile (p<0.001) and low HDL-c (p=0.013). The MS group differed from the CGL group by the absence of DM and higher BMI (p=0.001). Among the CGL, 45.5% were BSCL2 mutants and 18.2% AGPAT2 (36.3% without genetic study). Of these, all had hypoleptinemia (1.1ng/ml, 0.8-1.7), hypertriglyceridemia and low HDL-c; 63.6% had DM, 54.5% hypercholesterolemia, 45.5% hepatic steatosis, 45.5% nephropathy and 36.4% hypertrophy of the left ventricle. In the CGL group, 81.9% had FMD<10% and 63.6% RHI<1.67, featuring ED. The % FMD in this group was lower compared with the MS, 8.0% (2.9-10.3) vs. 13.0% (6.9-28.1; p=0.003) and controls, 16.0% (10.0-30.0, p=<0.001). The basal brachial artery diameter (BBD) was higher in the CGL group compared to the MS (p=0.041) and control (p=0.015) (suggesting more severe ED). The %FMD was also lower among individuals with CGL and DM (7.1%; 8.9% vs. 2.9-10.3; 5.2-10.3) and BSCL2 mutants vs. AGPAT2 (5.3%; 2.9-10.3 vs. 7.9%; 7.1-8.7). CGL and control groups assessed PAT. The CGL group showed less reactive hyperemia index (RHI), 1.7 (0.8-2.3) vs. control group, 2.1 (1.7-3.0; p <0.001) and greater PAT- AIx than the control (p=0.023) (suggesting increased arterial stiffness). The ED was more prevalent among BSCL2 mutants and those with DM. There was a negative correlation between %FMD and BBD; %FMD and triglycerides; RHI and triglycerides and positive between %FMD and RHI with HDL-c. The concordance of the results of FMD and PAT was 63.6%. In conclusion, ED, evaluated by both FMD, and PAT was condition of very high prevalence in the CGL, observed in most subjects from this significant Brazilian series. In this condition, ED is presented earlier and with more severe characteristics,. The hyperglycemia, dyslipidemia (low HDL-c and hypertriglyceridemia) were strongly associated with ED. These factors, as well as severe IR and hipoleptinemia, quite prevalent in this syndrome and that typically affect early on individuals with CGL, could justify the greater impairment of endothelial function in this disease. It is noteworthy that ED was more prevalent in patients BSCL2 mutants, which typically have more severe forms of the disease. The agreement between diagnosis in ED by FMD and PAT suggests that both methods are valid in the investigation of endothelial dysfunction, but possibly complementary. / A lipodistrofia generalizada congênita (LGC) é uma doença rara, autossômica recessiva, caracterizada por ausência total ou quase total de tecido adiposo desde o nascimento. Mutações nos genes BSCL1/AGPAT2 e BSCL2/Seipin são responsáveis por 95% dos casos. A LGC cursa com grave resistência à insulina (RI), diabetes mellitus (DM) e dislipidemia, que podem evoluir com aterosclerose e mortalidade cardiovascular prematura. Contudo, faltam estudos avaliando dano vascular precoce nessa condição. Este trabalho objetivou determinar a prevalência de disfunção endotelial (DE), por avaliação da dilatação fluxo-mediada (FMD) da artéria braquial e por tonometria arterial periférica (PAT), e sua associação com características genotípicas e fenotípicas em população com LGC. Participaram do estudo 11 indivíduos com LGC, 11 com síndrome metabólica (SM) e 22 controles saudáveis, pareados para sexo e idade. Foram realizadas avaliação clínico-laboratorial, ultrassonografia abdominal, ecocardiograma, estudo molecular dos genes AGPAT2 e BSCL2 e avaliação da função endotelial pela DMF (pela da obtenção da % de dilatação da artéria braquial - %DMF) e PAT (pela obtenção do índice de hiperemia reativa – RHI). Nos grupos LGC, SM e controle, a idade (anos) foi 10 (5-30), 13 (11-17) e 12 (10-19), sendo do sexo feminino, 63,5%, 54,5% e 68,2%. Houve maior prevalência de hipertrigliceridemia, hipercolesterolemia, DM, PA>percentil 95 (p<0,001) e HDL-c baixo (p=0,013) no grupo LGC. O grupo SM diferia do grupo LGC pela ausência de DM e maior IMC (p=0,001). No grupo LGC, 45,5% eram BSCL2 mutantes e 18,2% AGPAT2 mutantes e 36,3% não tinham estudo genético. Todos tinham hipoleptinemia (1,1ng/mL; 0,8-1,7), hipertrigliceridemia e HDL-c baixo; 63,6% tinham DM, 54,5% hipercolesterolemia, 45,5% esteatose hepática, 45,5% nefropatia e 36,4% hipertrofia de ventrículo esquerdo. No grupo LGC, 81,9% apresentaram FMD<10% e 63,6% RHI<1,67, caracterizando DE. Foi observada menor %DMF entre os indivíduos com LGC, 8,0% (2,9-10,3) vs. grupo SM, 13,0% (6,9-28,1; p=0,003) e vs. controle, 16,0% (10,0-30,0; p=<0,001). Observou-se menor %FMD entre indivíduos com DM (7,1%; 2,9-10,3 vs. 8,9%; 5,2-10,3) e nos BSCL2 mutantes vs. AGPAT2 mutantes (5,3%; 2,9-10,3 vs. 7,9%; 7,1-8,7). O diâmetro basal da artéria braquial (DBB) foi maior no grupo LGC em relação ao SM (p=0,041) e controle (p=0,015) (sugerindo DE mais grave). Foram avaliados por PAT os grupos LGC e controle. Os portadores de LGC apresentaram menores valores de RHI, 1,7 (0,8-2,3) vs. controle, 2,1 (1,7-3,0; p<0,001) e maiores valores do índice de aumento derivado da onda de pulso da PAT (PAT-Aix), p=0,0023(sugerindo maior rigidez da parede arterial). Observou-se correlação negativa entre %FMD e DBB; %FMD e triglicerídeos; RHI e triglicerídeos e correlação positiva entre %DMF e HDL-c e entre RHI e HDL-c. A concordância dos resultados da FMD e PAT foi 63.6%. Conclui-se que a DE, avaliada tanto por FMD, quanto por PAT, é condição de elevada prevalência nessa significativa casuística brasileira de LGC, apresentando-se precocemente e com maior gravidade. A hiperglicemia e a dislipidemia (HDL-c baixo e a hipertrigliceridemia) estiveram associadas à DE e, especula-se que a grave RI e a hipoleptinemia características dessa condição poderiam justificar o maior comprometimento da função endotelial desses pacientes. Ressalta-se ainda que a DE foi mais prevalente nos pacientes BSCL2 mutantes, que tipicamente apresentam formas mais graves da doença. A concordância diagnóstica para DE por FMD e PAT sugere que ambos os métodos são válidos e possivelmente complementares na investigação da DE.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-12-31 / Recentemente observou-se que a mitocôndria produz óxido nítrico (NO), que além de radical livre, participa de vários processos fisiológicos. O NO, por si só, é relativamente não-reativo, e na mitocôndria possui uma ação inibitória sobre a citocromo c oxidase (COX). Entretanto, o NO pode ser convertido em um grande número de derivados mais reativos, que podem levar a lesões oxidativas em vários componentes mitocondriais, como o DNA mitocondrial (DNAmt), proteínas e membranas mitocondriais. A síntese do NO na mitocôndria sugere que o NO tenha um papel regulador importante na função mitocondrial. O objetivo deste estudo foi avaliar a síntese de NO em linhagens celulares com diferentes defeitos na cadeia respiratória e verificar se existe nitração de proteínas, o que indicaria a presença de lesão oxidativa por radicais de nitrogênio. A síntese de NO foi verificada através da quantificação de nitritos e do uso de um marcador fluorescente para NO, o DAF-FM diacetato. Foram avaliadas linhagens celulares derivadas de osteosarcoma cíbridas para as mutações 3243 A>G, 8344 A>G e deleção do DNAmt, além de fibroblastos de pacientes com suspeita de doença mitocondrial e com doença mitocondrial confirmada. Os controles utilizados foram: a linhagem derivada de osteosarcoma 143B e fibroblastos de um indivíduo normal. Observamos um aumento na produção de nitritos em todas as linhagens cíbridas e uma diminuição nos fibroblastos. A avaliação com o marcador DAF-FM diacetato mostrou marcação intracelular em todas as linhagens, com um aumento da marcação na linhagem com a mutação 8344 A>G e diminuição nos fibroblastos. A análise quantitativa mostrou um aumento significante da fluorescência obtida nas linhagens 8344 A>G e diminuição, também significante, nos fibroblastos. A nitração de proteínas foi verificada através do método de Western blotting utilizando o anticorpo anti-nitrotirosina, e amostras de células cíbridas, fibroblastos e de músculo esquelético. Não foram detectadas proteínas contendo nitrotirosinas, sugerindo que não houve nitração de proteínas nestas amostras. Nossos resultados sugerem que existe uma variação na síntese de NO em determinados defeitos da cadeia respiratória, sem indicações de lesão oxidativa decorrente de radicais de nitrogênio. Esta alteração pode sugerir a participação do NO no processo regulatório da mitocôndria frente ao defeito da cadeia respiratória. O conhecimento dos mecanismos deste processo regulatório pode ter implicações no tratamento das doenças mitocondriais e neurodegenerativas com envolvimento mitocondrial. / A mitochondrial production of nitric oxide (NO) hás been recently identified. Besides being a free radical, NO also participates in several physiological processes. NO itself is relatively non-reactive and exhibits an inhibitory effect on the respiratory chain, specially, cytochrome c oxidase (COX). NO can also be converted into a number of more reactive derivatives, which can lead to oxidative damage of several mitochondrial components, such as mitochondrial DNA (mtDNA), mitochondrial proteins and membranes. The existence of a mitochondrial nitric oxide synthase suggests that NO has an important regulatory role on mitochondrial function. The aim of this study was to evaluate nitric oxide synthesis in cell lines carrying different respiratory chain defects and to verify if there was protein nitration, which would indicate the presence of oxidative damage by nitrogen radicals. NO synthesis was verified through nitrite quantitation and using a fluorescent NO indicator, DAF-FM diacetate. We analyzed cybrid cell lines carrying mtDNA mutations 3243 A>G, 8344 A>G and mtDNA deletion, and fibroblasts from patients with confirmed and suspected mitochondrial disease. Control samples were: the cell line originated from osteosarcoma 143B and fibroblasts from a normal individual. We observed increased nitrite production in all cybrid cell lines and a decrement in all fibroblasts from patients. All cell lines showed intracellular fluorescence with DAF-FM diacetate. The quantitative analysis showed a significantly increase of the fluorescence obtained for the 8344 A>G cell line and a decrease in most of the fibroblasts. Protein nitration was verified through Western blotting method using the anti-nitrotyrosine antibody, in cybrid cells, fibroblasts and skeletal muscle. There was no detection of proteins containing nitrotyrosines, suggesting that these samples were not nitrated. Our results suggest a variation of nitric oxide synthesis in certain respiratory chain defects, without indication of oxidative damage as a consequence of nitrogen radicals. This variation can suggest NO involvement on mitochondrial regulatory process of respiratory chain defects. The knowledge of this regulatory process may have implications on treatment strategies of mitochondrial diseases and neurodegenerative diseases with mitochondrial involvement. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

PALHETA, Michel Santos. Participação da via nitrérgica na elevação da taxa de relaxamento transitório do esfíncter esofágico inferior decorrente da distensão retal em cães. 2011. 54 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-03-12T11:00:31Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_mspalheta.pdf: 767824 bytes, checksum: 9552c7eb4b3092ef9a606c2b10a91c5f (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-03-12T11:01:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_mspalheta.pdf: 767824 bytes, checksum: 9552c7eb4b3092ef9a606c2b10a91c5f (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-12T11:01:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_mspalheta.pdf: 767824 bytes, checksum: 9552c7eb4b3092ef9a606c2b10a91c5f (MD5) Previous issue date: 2011 / The rectal distension (RD) induces transitory relaxation of lower esophageal sphincter (TLERs) in dogs, this relaxation generates a drop in pressure of lower esophageal sphincter (LES) similar a intragastric pressure values event even considered the main factor for the occurrence of gastroesophageal reflux. The aim of this study was evaluate the participation of the nitrergic pathway in the increased rate of TLERs induced by rectal distension in dogs. Mongrel male dogs (n = 21) weighing 10-15 kg. The animals were fasted for 12 hours with water ad libitum. The next day, the dogs were anesthetized (ketamine 10 mg.Kg-1 + xylazine 20 mg.Kg-1). The animals were subjected to the evaluation protocol of esophageal motility during 120 min. Considering the first 30 minutes as basal period, the animals were randomly intravenous treated whit: Saline 0.15M (1ml.Kg-1, i.v.), L-NAME (3 mg.Kg-1, i.v.), L-NAME (3 mg.Kg-1, i.v.) + L-Arginine (200 mg.Kg-1, i.v.), glibenclamide (1 mg.Kg-1, i.v.) or methylene blue (3 mg.Kg-1, i.v.). After 45 min, the rectum was distended (5 ml.Kg-1, i.v.) with a latex balloon and changes in esophageal motility were recorded last 45 min. Data were analyzed using ANOVA followed by Student Newman-Keuls test. In comparison to their control animals (5,8 ± 0,34 TLESRs/h), pre-treatment with L-NAME (2,3±0,52 TLESRs/h) decreased (p <0.05) rate the TRLES induced by DR, this phenomena was reversed by L-NAME plus L-Arginine (6,5 ± 0,6 TLESRs/h, p<0,05). Moreover, the pre-treatment with methylene blue (1,56 ± 0,5 TLESRs/h) also prevent increase rate the TLESRs induced by RD. However, in animals pretreated with glibenclamide (5,3 ± 0,3 TLESRs/h) RD the showed no change in the number of TLESRs in comparison the control. Nitric oxide participates in the rising rate of TLESRs resulting from rectal distension in dogs through the cGMP second messenger / A distensão retal induz o relaxamento transitório do esfíncter esofágico inferior (RTEEI) em cães, tal relaxamento gera uma queda na pressão do esfíncter esofágico inferior (EEI) no nível da pressão intragástrica, evento inclusive considerado o principal fator para ocorrência do refluxo gastroesofágico. O objetivo deste estudo foi avaliar a participação da via nitrérgica na elevação da taxa de RTEEI decorrente da distensão retal em cães. Foram utilizados cães (n=21), sem raça definida, machos, pesando entre 10-15 Kg. Os animais foram submetidos ao jejum de 12h com água ad libitum. No dia seguinte, os cães foram anestesiados com (cetamina 10 mg.Kg-1 + xilazina 20 mg.Kg-1). Posteriormente, foi iniciado o protocolo de avaliação da motilidade esofágica. Em seguida, os animais foram aleatoriamente pré-tratados com solução salina 0.15 M (1 ml.Kg-1, i.v.), L-NAME (3 mg.Kg-1), L-NAME (3 mg.Kg-1, i.v.) + L-Arginina (200 mg.Kg-1, i.v.), glibenclamida (1 mg.Kg-1, i.v.) ou azul de metileno (3 mg.Kg-1, i.v.). Decorridos 45 min, o reto foi distendido (5 ml.Kg-1) com um balão de látex e as variações da motilidade esofágica foram registradas ao longo dos 45 min seguintes. Os dados foram analisados utilizando-se ANOVA seguida do teste Student-Newman-Keuls. Em relação aos respectivos animais controles (5,8 ± 0,34 RTEEI/h) o pré-tratamento com L-NAME (2,3±0,52 RTEEI/h) reduziu (p<0.05) a taxa de RTEEI provenientes da distensão retal, evento que foi revertido no grupo que recebeu a adição de L-Arginina (6,5 ± 0,6 RTEEI/h, p<0,05). Além disso, o pré-tratamento com azul de metileno (1,56 ± 0,5 RTEEI/h) também preveniu o aumento da taxa de RTEEI decorrente da distensão retal. Entretanto, nos animais pré-tratados com glibenclamida (5,3 ± 0,3 RTEEI/h) a distensão retal não demonstrou alteração no número de RTEEI em relação ao grupo controle. O óxido nítrico participa da elevação da taxa de RTEEI decorrente da distensão retal em cães através do segundo mensageiro GMPc.

SOUSA FILHO, Marcus Vinícius Ponte de. Inibição da migração de neutrófilos e da hipernocicepção pelo pré-condicionamento isquêmico remoto : participação da via L- arginina-NO-GMPc-Canais K+ATP. 2011. 128 f. Tese (Doutorado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-03-21T14:33:50Z No. of bitstreams: 1 2011_tese_mvpsousafilho.pdf: 2936273 bytes, checksum: 80dd27073338a77c31509e26608741aa (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-03-21T14:34:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_tese_mvpsousafilho.pdf: 2936273 bytes, checksum: 80dd27073338a77c31509e26608741aa (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-21T14:34:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_tese_mvpsousafilho.pdf: 2936273 bytes, checksum: 80dd27073338a77c31509e26608741aa (MD5) Previous issue date: 2011 / The reperfusion injury (RI) occurs when there is de lay in restoring blood flow to organs and tissues. Among the strategies proposed to attenuate the RI i s the ischemic preconditioning (IPC), which consists of induction of brief ischemic periods fol lowed by reperfusion performed before the sustained ischemic insult. In the first part, this study aim ed to evaluate the role of nitric oxide (NO), cycli c guanosine monophosphate (cGMP) and ATP-sensitive po tassium channels (K + ATP ) in the inhibitory effect of hind limb IPC on the mice peritoneal cavi ty neutrophil migration (NM). In the second part, t he objective was to evaluate the potential systemic an tinociceptive effect of IPC in mechanical plantar hypernociception test (MPH; Von Frey) in rats and t o evaluate the involvement of NO, cGMP and K + ATP channels in this event. In the first part, the IPC was induced by hind limb ischemia for 10 min followed by 30 min of reperfusion in wild and knock out mice to inducible NO synthase (iNOS -/-). The leukocyte rolling (LR), leukocyte adhesion (LA) and NM were induced by ip administration of Carrageenan (Cg, 500 μ g/cavity) and results expressed in number of leukoc ytes/min, number of adherent leukocytes/100 μ m 2 cells and number of neutrophils x 10 6 /cavity, respectively. Different groups of animals were treated with saline (SAL), A minoguanidine (AG, sc, 100mg/kg), ODQ (ip, 8 μ mol/kg) or Glibenclamide (GBC, sc, 20 mg/kg) 30 min before IPC induction. Controls received the same treatment, but without IPC. In the second part , the IPC was induced by hind limb ischemia for 10 min followed by 30 min of reperfusion in male Wista r rats (180-200g). Cg (300 μ g, intraplantar) or Prostaglandin E 2 (PGE 2 - 400 ng, intraplantar) were used as hypernocicept ive stimulus on left paw immediately after induction of IPC in contralateral paw. Different groups of animals were treated 30 min before induction of IPC with AG (100 μ g/kg, intraplantar), LNMMA (50 μ g, intraplantar), ODQ (8 μ g, intraplantar) or GBC (160 μ g, intraplantar). Controls received the same treatm ents, but without IPC. The quantification of MPH was performed throug h subtraction strength/pressure (g) required to cause withdrawal of paw in contact with an apparatu s of eletronic von Frey mensuread before hypernociceptive stimulus, by measure obtained 3h a fter administration of Cg or PGE2. The LR, LA and NM induced by Cg in the peritoneal cavity were significantly (p <0,01) inhibited by hind limb IPC of wild animals (LR= 75.94%, LA= 56.51%, NM= 79.01 %), but these effects were not observed in animals iNOS -/-. The treatment of wild animals wit h AG and ODQ, but not with GBC, abrogated the inhibitory effect of IPC on NM induced by Cg. Treat ment of animals with AG, GBC or ODQ did not significantly alter the NM induced by Cg in the per itoneal cavity. We also observed that IPC did not alter the TNF- α , IL1- β and CXCL1 chemokine levels induced by Cg in the pe ritoneal cavity. The mechanical hypernociception induced by Cg or PGE2 i n left hind paw was significantly reduced (p <0,01) when IPC was performed in the right paw (55% and 68%). The treatment of animals with AG, LNMMA, ODQ or GBC, before IPC, abrogated the antino ciceptive effect of IPC. Treatment of animals with AG, LNMMA, ODQ or GBC did not significantly al ter the hypernociception induced by noxious stimulation. Our results show that IPC has an inhib itory effect on remote NM, with NO an important mediator involved in this process, probably through the cGMP pathway. This inhibitory effect of IPC does not depend on the opening of K + ATP channels, or inhibition of synthesis and/or releas e of pro- inflammatory cytokines. The elucidation of the mech anism by which IPC inhibits the NM may make important contributions to clinical situations wher e neutrophil infiltration is a complicating factor. The IPC also has a potent inhibitory effect on inflamma tory pain, with NO seems to be one important mediator involved in this protective effect of IPC, acting through the cGMP/K + ATP channel pathway. This is the first demonstration described in the li terature of systemic antinociceptive effect of IPC, and the elucidation of the mechanisms involved in this process is fundamental for pain management induced by several inflammatory stimuli. / A lesão de reperfusão (LR) ocorre quando há retardo do restabelecimento do fluxo sanguíneo para órgãos e tecidos. Dentre as estratégias propostas p ara atenuar a LR está o pré-condicionamento isquêmico (PCI), que consiste na indução de curtos períodos de isquemia seguidos de reperfusão realizados antes da isquemia prolongada. Na primeir a parte deste trabalho, o objetivo do estudo foi avaliar a participação do Óxido Nítrico (NO), guano sina monofosfato cíclico (GMPc) e canais de potássio sensíveis a ATP (K + ATP ) no efeito inibitório do PCI da pata posterior na migração de neutrófilos (MN) para cavidade peritoneal de camund ongos. Na segunda parte, o objetivo foi avaliar o potencial antinociceptivo sistêmico do PCI no teste de hipernocicepção plantar mecânico (HPM; Von Frey) em ratos, bem como avaliar o envolvimento do NO, GMPc e canais K + ATP neste evento. Na primeira parte, o PCI foi induzido através da isque mia da pata posterior direita por 10 min seguidos d e 30 min de reperfusão em camundongos selvagens e com deleção gênica da NO sintase induzível (NOSi -/-). O rolamento de leucócitos (RL), adesão de leucócitos (AL), bem como a MN foram induzidos através da administração ip de Carragenin a (Cg, 500 μ g/cavidade), sendo os resultados expressos em número de leucócitos/min, número de cé lulas aderidas/100 μ m 2 , e número de neutrófilos x 10 6 /cavidade, respectivamente. Diferentes grupos de an imais foram tratados com salina, Aminoguanidina (AG, sc, 100mg/kg), ODQ (ip, 8 μ mol/kg) ou Glibenclamida (GBC, sc, 20mg/kg) 30 min antes da indução do PCI. Os controles receberam o mesmo tratamento, porém sem PCI. Na segunda parte, o PCI foi induzido através da isquem ia da pata posterior direita de ratos machos Wistar (180-200g) por 10 min seguidos de 30 min de reperfusão. Cg (300 μ g, intraplantar) ou Prostaglandina E 2 (PGE 2 – 400 ng, intraplantar) foram utilizadas como estí mulo hipernociceptivo na pata esquerda imediatamente após a indução do PCI n a pata contralateral. Diferentes grupos de animais foram tratados 30 min antes da indução do P CI com AG (100mg/kg, sc), LNMMA (50 μ g, intraplantar), ODQ (8 μ g, intraplantar) ou GBC (160 μ g, intraplantar). Os controles receberam os mesmos tratamentos, porém sem PCI. A quantificação da HPM foi realizada através da subtração da força /pressão (g) necessária para provocar a retir ada da pata em contato com o aparelho de von Frey eletrõnico mensurada antes do estímulo hiperno ciceptivo, pela medida obtida 3h após a administração do estímulo. O RL, AL e MN induzidos por Cg na cavidade peritoneal foram significativamente (p<0,01) inibidos pelo PCI da pa ta posterior dos animais selvagens (RL= 75,94%, AL= 56,51%, MN= 79,01%), o mesmo não sendo observad o nos animais NOSi -/-. O tratamento dos animais selvagens com AG e ODQ, mas não com GBC, an ularam o efeito inibitório do PCI sobre a MN induzida por Cg. O tratamento dos animais com AG , ODQ ou GBC não alterou significativamente a MN induzida por Cg na cavidade peritoneal. Observ ou-se ainda que o PCI não alterou os níveis de TNF- α , IL1- β e quimiocina CXCL1 induzidos por Cg na cavidade pe ritoneal. A hipernocicepção mecânica induzida por Cg ou PGE 2 na pata posterior esquerda foi reduzida significat ivamente (p<0,01) quando se realizou o PCI na pata direita ( 55% e 68%), sendo o efeito antinociceptivo do PCI anulado quando os animais foram tratados com AG, LN MMA, ODQ ou GBC antes do PCI. O tratamento dos animais com AG, LNMMA, ODQ ou GBC nã o alterou significativamente a hipernocicepção induzida pelos estímulos nociceptiv os. Nossos resultados demonstram que o PCI apresenta um efeito inibitório na MN a distância, s endo o NO um importante mediador envolvido neste processo, provavelmente através da via GMPc. Este e feito inibitório do PCI parece não depender da abertura de canais K + ATP , nem da inibição da síntese e/ou liberação de cito cinas pro-inflamatórias. O esclarecimento do mecanismo através do qual o PCI i nibe a MN poderá trazer importantes contribuições em situações clínicas onde a infiltra ção neutrofílica constitui um fator complicador. O PCI apresenta ainda um potente efeito inibidor na d or inflamatória, parecendo ser o NO um importante mediador envolvido neste efeito protetor do PCI, atuando através da via GMPc / canais K + ATP . Esta é a primeira demonstração descrita na litera tura do efeito antinociceptivo sistêmico do PCI, sendo o esclarecimento dos mecanismos envolvid os neste processo fundamental para manuseio da dor induzida pelos mais diversos estímulos.