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Orientador: Fábio Ramôa Pires / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-19T10:43:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Romanach_MarioJose_D.pdf: 5231704 bytes, checksum: 202539e51f52c9c5972d8aedecc9f4c9 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Cistos gengival do adulto (CGA), periodontal lateral (CPL) e odontogênico glandular (COG) são cistos odontogênicos raros que apresentam características microscópicas similares e comportamento clínico distinto. O objetivo deste trabalho foi comparar o perfil clínico-patológico e imunoistoquímico de 45 casos destes três tipos de cistos odontogênicos (CGA = 14, CPL = 15, COG = 16) oriundos de 4 diferentes laboratórios de Patologia Oral. Os CGAs acometeram principalmente na gengiva da região de pré-molares inferiores de mulheres com média de idade de 56 anos. Os CPLs acometeram principalmente as regiões anterior e de pré-molares da mandíbula de mulheres com média de idade de 54 anos. Os COGs acometeram principalmente a região de molares mandibulares de mulheres com média de idade de 50 anos. Microscopicamente, epitélio com espessura maior que 5 camadas contendo estruturas intra-epiteliais pseudo-ductais, células colunares e mucosas foram observadas predominantemente nos COGs quando comparados aos CGAs e CPLs. A positividade para CK 5 e CD138 foi encontrada principalmente nas camadas basal e intermediária enquanto que CKs 8 e 19 marcaram as camadas intermediária e superficial dos três tipos de cistos. COGs apresentaram índice de positividade para p63 aumentado (59%) em relação aos encontrados em CGAs (26%) e CPLs (48%). A cápsula de COGs mostrou maior positividade para actina de músculo liso-alfa e CD138 quando comparada aos CPLs e CGAs. Concluimos que CGA, CPL e COG possuem características histopatológicas e imunoistoquímicas similares que podem justificar uma provável origem comum / Abstract: Gingival cyst of adult (GCA), lateral periodontal cyst (LPC) and glandular odontogenic cyst (GOC) are rare odontogenic cysts that present similar microscopic features and distinct clinical behavior. The aim of the present study was to compare the clinicopathological and immunohistochemical profile of 45 cases of these 3 types of odontogenic cysts (GCA = 14, LPC = 15, GOC = 16) from 4 different Oral Pathology laboratories. GCA mainly affected the gingiva of the lower pre-molars region of women with median age of 56 years-old. LPC mainly affected the anterior and pre-molars regions of the mandible of women with median age of 54 years-old. GOC mainly affected the mandibular molars region of women with median age of 50 years-old. Microscopically, epithelium with more than 5 layers containing duct-like intraepithelial structures and colunar and mucous cells were predominantly observed in GOC when compared to GCA and LPC. The positivity for CK 5 and CD138 was mainly observed in the basal and intermediate layers while CK 8 and CK 19 staining was seen in the intermediate and superficial layers of the cystic epithelium in all cysts. GOC presented higher p63 positivity index (59%) comparing with those found in GCA (26%) and LPC (48%). The connective tissue capsule of GOC exhibited higher positivity for smooth muscle actin and CD138 when comparing with GCA and LPC. We conclude the GCA, LPC and GOC share similar microscopic and immunohistochemical features that could justify a likely common origin / Doutorado / Patologia / Doutor em Estomatopatologia

Epidermodisplasia verruciforme (EV) é uma genodermatose rara, com susceptibilidade para infecção pelo vírus do papiloma humano, considerada modelo de oncogênese viral. Comparou-se a expressão epidérmica das citoqueratinas (K) 1, 10, 14, 4, 16, involucrina, filagrina e e-caderina, em lesões de verrugas planas e nas verrugas planas da EV através de método imunohistoquímico. Na EV houve ausência ou retardo de expressão (queratinócitos mais superficias) de K1/10, com substituição pela K14. Houve expressão basal e suprabasal de K14 em ambos os grupos, bem como positividade para K4 e 16, e expressão de involucrina nas camadas mais inferiores da epiderme. A expressão de filagrina não foi alterada, e a de e-caderina apresentou-se diminuída nas células coilocitóticas superficiais na EV / Epidermodisplasia verruciforme (EV) is a rare genodermatosis with susceptibility to human papillomavirus infection, considered a model of viral oncogenesis. We compared epidermal expression of cytokeratins (K) 1, 10, 14, 4, 16, involucrin, filaggrin and e-cadherin in plane warts and plane wart-type lesions in EV by immunohistochemical technique. In EV there was absent or retarded expression (more superficial keratinocytes) of K1/10, being substituted by K14. There was basal and suprabasal expression of K14 in both groups, as well as positivity for K4 and K16, and involucrin expression in more inferior layers of epidermis. Filaggrin expression was not altered, and e-cadherin was diminished in superficial koilocytotic cells in EV

Orientador: Ewerton Garcia de Oliveira Mima / Resumo: Este estudo avaliou os efeitos fotodinâmicos da curcumina (CUR) encapsulada em nanopartículas poliméricas (NP) em um modelo murino com infecção prolongada de candidose bucal. NP de CUR foram sintetizadas utilizando o polímero poli-ácido lático (PLA) e sulfato de dextrana (DEX). Brometo de cetiltrimetil-amônio foi também utilizado para NP catiônicas. Para caracterização dessas formulações, foram determinadas as propriedades fisicoquímicas (tamanho, polidispersão e potencial zeta), testes de eficiência de encapsulamento, espectro de absorção, fotoestabilidade e liberação. Um total de 140 camundongos fêmeas com 6 semanas de vida foram imunossuprimidos e inoculados com uma cepa padrão de Candida albicans (Ca) em uma concentração de 1x107 unidades formadores de colônias por mililitro (UFC/mL) na região dorsal da língua. Para a Terapia Fotodinâmica antimicrobiana (aPDT), uma das formulações sintetizadas ou CUR livre foi aplicada no dorso lingual dos animais que, após 20 min, foram irradiados com uma fonte de luz LED azul a 37,5 J/cm2 (grupo F+L+). Animais adicionais foram tratados somente com uma das formulações ou CUR livre sem luz (F+L-), Nistatina 1 vez ao dia (NIS1x), Nistatina 4 vezes ao dia (NIS4x) ou não receberam nenhum tratamento (controle). Em todos os grupos, os procedimentos foram realizados em 5 dias consecutivos. Após a última aplicação do tratamento, coletas da língua dos animais foram plaqueadas em meio de cultura específico (CFU/mL). Os animais foram eutanasiados 2... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aims of this study were to synthetize and evaluate the antimicrobial photodynamic effects of curcumin (CUR) encapsulated in polymeric nanoparticles (NP) on a murine model with prolonged infection of oral candidosis. CUR-NP was synthesized using poly-lactic acid (PLA), and dextran sulfate (DEX). Cetyltrimethylammonium bromide was used for cationic NP. To characterize the formulations, the physicochemical properties (size, polydispersity and zeta potential) were determined and tests of encapsulation efficiency, absorption spectrum, photostability (photodegradation of CUR) and release were also performed. The effectiveness of CUR-NPmediated aPDT was evaluated in a murine model of oral candidiasis. Female mice (N = 140) were immunosuppressed and inoculated with C. albicans (Ca) to induce oral candidosis. For aPDT, formulations or free CUR was applied on the dorsum of tongue and, after 20 min, illumination at 37.5 J/cm2 was performed (F+L+ group). Additional animals were treated only with formulations or free CUR without light (F+L-), nystatin once a day (NYS1x), nystatin four times a day (NYS4x) or received no treatment (control). In each group, procedures were performed for 5 consecutive days. After the last treatment application, microbial samples were plated in specific agar media (CFU/mL). The animals were euthanatized 24 hours and 7 days after the treatments for histological evaluation and expression of cytokeratins (CK) 13 and 14 by immunohistochemistry (IHC). Data [log10(CFU/mL)] were analyzed by ANOVA/Welch and Games-Howell (α = 5%). After synthesis CUR-NP had appropriate pharmacotechnical nanometric properties, mean values of size, polydispersity, and zeta potential were 225.38; 0.15 and -30.96 mV; 248.12; 0.21 and +35.84 mV, respectively for anionic and cationic CUR-NP. Encapsulation efficiency of 60.84% and 73.81% ...[Complete abstract electronic access below) / Mestre

Introdução: O molusco contagioso (MC) é um vírus da família Poxviridae que infecta os queratinócitos epidérmicos levando a hiperplasia e formação de inclusões eosinofílicas intracitoplasmáticas os corpos de molluscum. Poucos estudos analisam as alterações induzidas por este Mollucipox vírus nas estruturas que compõem o citoesqueleto e a adesão celular dos queratinócitos. Objetivos: Verificar o padrão de expressão de citoqueratinas, filagrina, involucrina, E-caderina e p63 pela técnica de imuno-histoquímica em lesões de MC e compará-las com a epiderme adjacente aparentemente normal (EAAN). Método: Através de técnica de imuno-histoquímica, estudou-se a expressão de K1, K10, K14, K16, filagrina, involucrina, E-caderina e p63 em lesões de MC de 41 pacientes imunocompetentes. Os padrões de expressão nas lesões de MC foram comparados com a EAAN. Resultados: A expressão de K1/K10 ocorreu como o habitual nas camadas suprabasais da epiderme. A marcação de K14 foi observada nas camadas epidérmicas basal e suprabasal nas lesões de MC e EAAN. A K16, que é expressa somente em processos hiperproliferativos, foi demonstrada na camada espinhosa tanto nos focos de MC como na EAAN. Filagrina e involucrina expressaram-se nas camadas granulosa, espinhosa e em alguns casos até mesmo na camada basal na epiderme infectada e EAAN. A E-caderina esteve presente até a porção inferior dos corpos de molusco enquanto na EAAN apresentou-se nas camadas basal e espinhosa. A expressão nuclear do p63 ocorreu nas camadas basal e espinhosa tanto no MC como EAAN. Conclusão: A infecção pelo Molluscipox vírus parece interferir no processo de diferenciação terminal dos queratinócitos. A expressão tardia de K14 e p63 na camada espinhosa, assim como a expressão precoce de filagrina e involucrina, associada ao estado hiperproliferativo demonstrado pela presença aberrante de K16, refletem um distúrbio no processo de maturação dos queratinócitos infectados. As alterações observadas na EAAN podem representar evento precoce no distúrbio de queratinização induzido pelo vírus na pele infectada. / Background: Molluscum contagiosum (MC) is a Molluscipox virus infection of the epidermal keratinocytes with hyperplasia and intracytoplasmic inclusions the molluscum bodies (MB). Few studies address cytokeratins (K) profile in MC, mainly focusing the terminal epidermal keratinization process. Methods: In order to verify K1, K10, K14, K16, involucrin, filaggrin, E-cadherin and p63 expression in MC, 41 lesions were subjected to immunohistochemical technique. The immunolabeling pattern of MC was compared to adjacent normal appearing epidermis (ANAE). Results: K1 and K10 were expressed in supra basal layers of MC and ANAE. K14 was expressed in basal and suprabasal layers in MC and also in ANAE. K16 was expressed in MC and ANAE, through all spinous layers. Involucrin and filaggrin were observed in granular, spinous and even in basal layer of ANAE and MC. E-cadherin was present up to the first layers of epidermis with MB while ANAE exhibited E-cadherin labeling at basal and spinous layers. Basal and spinous layers keratinocytes nuclei, in both MC and ANAE, express p63. Conclusion: Infection by Molluscipox virus may noticeably alter keratinocyte differentiation status and cell adhesion. The presence of K14 and p63 in spinous layer, as well as early expression of involucrin and filaggrin, associated to a hyperproliferative state disclosed by the presence of K16, may be a result of a disruption in keratinocytes maturation process. The changes observed at ANAE may represent early events in keratinization disturbance.

Introdução: O molusco contagioso (MC) é um vírus da família Poxviridae que infecta os queratinócitos epidérmicos levando a hiperplasia e formação de inclusões eosinofílicas intracitoplasmáticas os corpos de molluscum. Poucos estudos analisam as alterações induzidas por este Mollucipox vírus nas estruturas que compõem o citoesqueleto e a adesão celular dos queratinócitos. Objetivos: Verificar o padrão de expressão de citoqueratinas, filagrina, involucrina, E-caderina e p63 pela técnica de imuno-histoquímica em lesões de MC e compará-las com a epiderme adjacente aparentemente normal (EAAN). Método: Através de técnica de imuno-histoquímica, estudou-se a expressão de K1, K10, K14, K16, filagrina, involucrina, E-caderina e p63 em lesões de MC de 41 pacientes imunocompetentes. Os padrões de expressão nas lesões de MC foram comparados com a EAAN. Resultados: A expressão de K1/K10 ocorreu como o habitual nas camadas suprabasais da epiderme. A marcação de K14 foi observada nas camadas epidérmicas basal e suprabasal nas lesões de MC e EAAN. A K16, que é expressa somente em processos hiperproliferativos, foi demonstrada na camada espinhosa tanto nos focos de MC como na EAAN. Filagrina e involucrina expressaram-se nas camadas granulosa, espinhosa e em alguns casos até mesmo na camada basal na epiderme infectada e EAAN. A E-caderina esteve presente até a porção inferior dos corpos de molusco enquanto na EAAN apresentou-se nas camadas basal e espinhosa. A expressão nuclear do p63 ocorreu nas camadas basal e espinhosa tanto no MC como EAAN. Conclusão: A infecção pelo Molluscipox vírus parece interferir no processo de diferenciação terminal dos queratinócitos. A expressão tardia de K14 e p63 na camada espinhosa, assim como a expressão precoce de filagrina e involucrina, associada ao estado hiperproliferativo demonstrado pela presença aberrante de K16, refletem um distúrbio no processo de maturação dos queratinócitos infectados. As alterações observadas na EAAN podem representar evento precoce no distúrbio de queratinização induzido pelo vírus na pele infectada. / Background: Molluscum contagiosum (MC) is a Molluscipox virus infection of the epidermal keratinocytes with hyperplasia and intracytoplasmic inclusions the molluscum bodies (MB). Few studies address cytokeratins (K) profile in MC, mainly focusing the terminal epidermal keratinization process. Methods: In order to verify K1, K10, K14, K16, involucrin, filaggrin, E-cadherin and p63 expression in MC, 41 lesions were subjected to immunohistochemical technique. The immunolabeling pattern of MC was compared to adjacent normal appearing epidermis (ANAE). Results: K1 and K10 were expressed in supra basal layers of MC and ANAE. K14 was expressed in basal and suprabasal layers in MC and also in ANAE. K16 was expressed in MC and ANAE, through all spinous layers. Involucrin and filaggrin were observed in granular, spinous and even in basal layer of ANAE and MC. E-cadherin was present up to the first layers of epidermis with MB while ANAE exhibited E-cadherin labeling at basal and spinous layers. Basal and spinous layers keratinocytes nuclei, in both MC and ANAE, express p63. Conclusion: Infection by Molluscipox virus may noticeably alter keratinocyte differentiation status and cell adhesion. The presence of K14 and p63 in spinous layer, as well as early expression of involucrin and filaggrin, associated to a hyperproliferative state disclosed by the presence of K16, may be a result of a disruption in keratinocytes maturation process. The changes observed at ANAE may represent early events in keratinization disturbance.

Epidermodisplasia verruciforme (EV) é uma genodermatose rara, com susceptibilidade para infecção pelo vírus do papiloma humano, considerada modelo de oncogênese viral. Comparou-se a expressão epidérmica das citoqueratinas (K) 1, 10, 14, 4, 16, involucrina, filagrina e e-caderina, em lesões de verrugas planas e nas verrugas planas da EV através de método imunohistoquímico. Na EV houve ausência ou retardo de expressão (queratinócitos mais superficias) de K1/10, com substituição pela K14. Houve expressão basal e suprabasal de K14 em ambos os grupos, bem como positividade para K4 e 16, e expressão de involucrina nas camadas mais inferiores da epiderme. A expressão de filagrina não foi alterada, e a de e-caderina apresentou-se diminuída nas células coilocitóticas superficiais na EV / Epidermodisplasia verruciforme (EV) is a rare genodermatosis with susceptibility to human papillomavirus infection, considered a model of viral oncogenesis. We compared epidermal expression of cytokeratins (K) 1, 10, 14, 4, 16, involucrin, filaggrin and e-cadherin in plane warts and plane wart-type lesions in EV by immunohistochemical technique. In EV there was absent or retarded expression (more superficial keratinocytes) of K1/10, being substituted by K14. There was basal and suprabasal expression of K14 in both groups, as well as positivity for K4 and K16, and involucrin expression in more inferior layers of epidermis. Filaggrin expression was not altered, and e-cadherin was diminished in superficial koilocytotic cells in EV

O projeto tem como objetivo a detecção e caracterização das células epiteliais circulantes de pacientes com carcinoma de mama no estádio III. Analisou-se a presença ou ausência destas células antes da realização de quimioterapia neoadjuvante. Para tanto, utilizou-se o sistema de enriquecimento de amostras de sangue periférico por meio da marcação intracelular imunomagnética direta, empregando-se microbeads conjugados com citoqueratina e posterior separação imunomagnética. A amostra final, com as células alvo detectadas, foi então quantificada por imunocitoquímica ou citometria de fluxo. Resultados: A reação de imunocitoquímica no sangue periférico foi negativa em todos os casos enquanto que na citometria de fluxo foi positiva em 22/23 casos analisados. Conclusão: A detecção e caracterização de células tumorais circulantes em pacientes com câncer de mama podem vir a se constituir em um novo fator prognóstico, porém, são ainda necessárias novas estratégias para melhor detectá-las. / The aim of this study was to detect and characterize carcinoma cells of patients with breast cancer with clinical stage III analyzing the presence or absence before chemotherapy by enrichment of peripheral blood with super paramagnetic microbeads, using direct Immunomagnetic labeling of intracellular 7/8 cytokeratin. For enrichment, magnetically labeled tumor cells are passed over a high-gradient magnetic positive selection column. Cytospin preparations are made after immunomagnetic enrichment and are examined immunocytochemically (ICC) using an anti-cytokeratin and quantified by flow cytometry (CMF). Results: No cytokeratin positive cells were detected in the 32 peripheral blood of patients of breast carcinoma by ICC and cytokeratin positive cells were detected in the 22 of 23 patients by CMF. Conclusion: These methods of detection and characterization breast carcinoma cells will become useful in the diagnosis and prognosis but is necessary optimization of existing methods.

O projeto tem como objetivo a detecção e caracterização das células epiteliais circulantes de pacientes com carcinoma de mama no estádio III. Analisou-se a presença ou ausência destas células antes da realização de quimioterapia neoadjuvante. Para tanto, utilizou-se o sistema de enriquecimento de amostras de sangue periférico por meio da marcação intracelular imunomagnética direta, empregando-se microbeads conjugados com citoqueratina e posterior separação imunomagnética. A amostra final, com as células alvo detectadas, foi então quantificada por imunocitoquímica ou citometria de fluxo. Resultados: A reação de imunocitoquímica no sangue periférico foi negativa em todos os casos enquanto que na citometria de fluxo foi positiva em 22/23 casos analisados. Conclusão: A detecção e caracterização de células tumorais circulantes em pacientes com câncer de mama podem vir a se constituir em um novo fator prognóstico, porém, são ainda necessárias novas estratégias para melhor detectá-las. / The aim of this study was to detect and characterize carcinoma cells of patients with breast cancer with clinical stage III analyzing the presence or absence before chemotherapy by enrichment of peripheral blood with super paramagnetic microbeads, using direct Immunomagnetic labeling of intracellular 7/8 cytokeratin. For enrichment, magnetically labeled tumor cells are passed over a high-gradient magnetic positive selection column. Cytospin preparations are made after immunomagnetic enrichment and are examined immunocytochemically (ICC) using an anti-cytokeratin and quantified by flow cytometry (CMF). Results: No cytokeratin positive cells were detected in the 32 peripheral blood of patients of breast carcinoma by ICC and cytokeratin positive cells were detected in the 22 of 23 patients by CMF. Conclusion: These methods of detection and characterization breast carcinoma cells will become useful in the diagnosis and prognosis but is necessary optimization of existing methods.

The surface and structural change of human hair fibre have been analysed to determine the oxidation effects for bleached hairs. Three types of bleached hairs (6% H2O2 bleach, 9% H2O2 commercial bleach and commercial persulphate bleach (contains 9% H2O2)) as well as virgin hair were evaluated with the increasing treatment time using Scanning Electron Microscopy (SEM), Reflective Spectrophotometry, Differential Scanning Calorimetry (DSC) and Fourier Transform Infrared (FTIR) Spectroscopy. It is obvious that longer treatment times result in the greater surface and structural damage. However, commercial persulphate bleach causes less surface damage for the cuticle. 6% H202 bleach has overall moderate damage effects on both cuticle and cortex over the treatment time. 9% H2O2 commercial bleach indicates two different damage stages. The first 1.5h bleached hairs show mild oxidation to the surface, whereas the damage becomes heavy after 2h. This phenomenon results in that 9% H2O2 commercial bleach has a more intensive oxidation damage in the cortex than the commercial persulphate bleach. This is in line with DSC investigation which shows that the intermediate filament of 9% H2O2 commercial bleach is heavily damaged after the extensive oxidation time (greater than or equal to2h). Although commercial persulphate bleach contains the stronger oxidising agent, it has a less surface damage than 9% H2O2 commercial bleached hair in FTIR-ATR measurement, and a similar oxidation effect on the matrix as 6% H202 bleached hair in FTIR transmission investigation. In addition, it has been verified by colour measurements that bleached hairs have an overall lighter, yellowish and reddish colour. Consequently, commercial persulphate bleached hair is much lighter and more yellow than 9% H2O2 commercial bleached hair and 6% H202 bleached hair. DSC investigations reveal that the three bleaches have a homogenous oxidation effect on IFs and IFAPs. The deconvolution results using three Gaussian distributions confirm this observation. The stronger bleach results in a homogenous structural damage on both para- and ortho-cortex with increasing bleaching time. Commercial persulphate bleach and 9% H2O2 commercial bleach have a progressive damage effect on the ortho- and para- cortex than 6% H202 bleach. Kinetics analysis is conducted for the virgin and bleached hairs by using various heating rates according to ASTM-E698. The activation energies of 260 kJ/mol for the virgin hair and 295 kJ/mol for the commercial persulphate bleached hair (2h) are determined from the slope of the regression line of peak temperature, TD (as 1/TD) and heating rate, β (as lnβ) on the basis of the Arrhenius-equation. The predominant structural damage for various heating rates only occurs in the IF. It is shown that a linear increase in DeltaHD occurs for lower heating rates, while it is constant for higher heating rates. This can be ascribed to the hypothesis that a lower heating rate favours a crystal transformation change (alpha-β transformation), while a higher rate favours a crystalline-amorphous transformation. SEM examines the morphological changes of hair samples after DSC. The cortex has been dissolved at the lower heating rate. The commercial persulphate bleached hairs (2h) show an overall shrunk cuticle surface and fewer and smaller hydrolysed protein granules, due to the previous damage of the alpha-helix in the cortical cell.