Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004-10-27Bitstream added on 2014-06-13T18:44:32Z : No. of bitstreams: 1 silva_a_dr_rcla.pdf: 948973 bytes, checksum: 45e7e3c537159b8c3bf440ce414f0985 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Neste trabalho foi proposto o estudo de ¿-amilase e maltase do fungo Leucoagaricus gongylophorus e do intestino de operarias da formiga cortadeira de folhas Atta sexdens, organismos que vivem numa simbiose obrigatoria, na qual um dos fatores relevantes e o provavel fornecimento de enzimas fungicas aos insetos. Para tanto, as amilases do fungo foram induzidas em diferentes fontes de carbono, sendo estas mais secretadas em amido e/ou maltose e reprimidas parcial (¿-amilase) ou totalmente (maltase) por glicose. Apos a purificacao das enzimas, atraves de cromatografia liquida (troca ionica, interacao hidrofobica e exclusao molecular), a determinacao das caracteristicas fisico-quimicas (temperatura de atividade otima e de inativacao; pH de melhor atividade e estabilidade; Km; peso molecular; influencia do cloreto e Q10) permitiu a comparacao das mesmas e os resultados mostraram que maltases de ambas as origens sao enzimas distintas, enquanto que a (¿-amilase) presente no intestino dos insetos tem as mesmas caracteristicas da ¿-amilase do fungo simbionte, indicando a sua provavel origem fungica.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004-07Bitstream added on 2014-06-13T20:35:54Z : No. of bitstreams: 1 cortezi_m_me_rcla.pdf: 1518114 bytes, checksum: e094ed383a63910c8cfd742b0e61829f (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A enzima Dextranasacarase (EC 2.4. 1. 5) catalisa a sintese de dextrana a partir da sacarose. Varias especies do genero Leuconostoc, Lactobacillus e Streptococcus sao conhecidas por sintetizar dextranasacarase extracelular sob condicoes apropriadas. O polimero dextrana apresenta varias aplicacoes comerciais nas industrias farmaceuticas, mais comumente utilizada como expansor do plasma sanguineo e no tratamento de anemias, quimicas e de alimentos. O objetivo deste trabalho foi o estudo da producao da enzima dextranasacarase por uma nova cepa de Leuconostoc mesenteroides (FT 045 B) isolada de Usina de Producao de Alcool e Acucar. Diferentes composicoes de meio de cultura foram estudados para a producao de dextranasacarase, mostrando que o meio M5, contendo 2% m/v de K2HPO4, produziu maior atividade enzimatica (5,67 UDS/mL), quando comparado aos outros meios estudados. As melhores temperaturas para a producao da enzima foram 23 e 25C, obtendo uma atividade de 3,2 UDS/mL. Fermentacoes utilizando melaco como fonte de carbono, Resumo 2 mostraram que a concentracao de 97,3 g/L resultou em 11,6 UDS/mL. Quando sacarose foi usada como fonte de carbono, as concentracoes de 3 e 4% m/v resultaram em atividades enzimatica proximas, 10,8 e 10,7 respectivamente. A adicao de tween 80 na concentracao de 5% aumentou em 6% a producao da enzima. A producao de dextrana gin vitroh pela enzima livre de celulas (11,5 UDS/mL) adicionada a sacarose (600g/L) mostrou um aumento da viscosidade apos 24 horas de reacao em (10.397,38 poise). A caracterizacao da dextrana atraves de FTIR possibilitou observar que o polimero sintetizado pela enzima de Leuconostoc mesenteroides FT 045 B apresenta os mesmos grupos quando comparada com as dextranas padroes de massas molares 515.000 e 9.300 Da. A massa molar media do polimero sintetizado foi determinada utilizando um viscosimetro de Ostwald, permitindo obter um valor de aproximadamente de 647000 Da. / Dextransucrase (sucrose: 1,6-¿-D-glucan 6-¿glucosyltransferase EC 2.4.1.5) is the enzyme that catalyzes the synthesis of dextran from sucrose. Several species of the genera Leuconostoc, Lactobacillus and Streptococcus are known to synthesis an extracellular dextransucrase under appropriate conditions. The polymer dextran has various commercial applications in the pharmaceutical area, most commonly as a blood volume expander and in the treatment of anaemia, chemistry and foods. The goal of this work was to study a newly isolated strain of Leuconostoc mesenteroides (FT 045 B) from a Brazilian Alcohol and Sugar Plant Industry with relation a dextransucrase enzyme production. Different media compositions used for dextransucrase production showed that media M5 containing 2% of K2HPO4 produced higher enzymatic activity (5.67 U/mL) when compared to the other media. The best temperatures for enzyme production in batch fermentation were 23 and 25C showing enzymatic activity of 3.2 U/mL. Fermentation runned with molasses as a carbon source at concentration of 97.3 g/L for L. mesenteroides FT045B resulted in Introducao 4 11.6 U/mL enzymatic activity. When sucrose was used as a carbon source, concentration of 3 and 4% showed respectively 10.8 and 10.7 U/mL of dextransucrase activity. The use of Tween 80 in concentration of 5% increased the enzyme production in 6%. The dextran production gin vitroh by crude enzyme cell free (11.5 U/mL) in sucrose 600 g/L showed an increase in viscosity after 24 hours of reaction (10,394.38 poise). Dextran characterization by FTIR showed that the polymer synthesized by Leuconostoc mesenteroides FT045B enzyme has the same groups when compared with the standard dextrans (515.000Da and 9.300Da). Mw determination of synthesized dextran by production enzyme through Ostwald viscometer showed a value of 647000 Da.

Orientador: Jonas Contiero / Resumo: A enzima Dextranasacarase (EC 2.4. 1. 5) catalisa a sintese de dextrana a partir da sacarose. Varias especies do genero Leuconostoc, Lactobacillus e Streptococcus sao conhecidas por sintetizar dextranasacarase extracelular sob condicoes apropriadas. O polimero dextrana apresenta varias aplicacoes comerciais nas industrias farmaceuticas, mais comumente utilizada como expansor do plasma sanguineo e no tratamento de anemias, quimicas e de alimentos. O objetivo deste trabalho foi o estudo da producao da enzima dextranasacarase por uma nova cepa de Leuconostoc mesenteroides (FT 045 B) isolada de Usina de Producao de Alcool e Acucar. Diferentes composicoes de meio de cultura foram estudados para a producao de dextranasacarase, mostrando que o meio M5, contendo 2% m/v de K2HPO4, produziu maior atividade enzimatica (5,67 UDS/mL), quando comparado aos outros meios estudados. As melhores temperaturas para a producao da enzima foram 23 e 25C, obtendo uma atividade de 3,2 UDS/mL. Fermentacoes utilizando melaco como fonte de carbono, Resumo 2 mostraram que a concentracao de 97,3 g/L resultou em 11,6 UDS/mL. Quando sacarose foi usada como fonte de carbono, as concentracoes de 3 e 4% m/v resultaram em atividades enzimatica proximas, 10,8 e 10,7 respectivamente. A adicao de tween 80 na concentracao de 5% aumentou em 6% a producao da enzima. A producao de dextrana gin vitroh pela enzima livre de celulas (11,5 UDS/mL) adicionada a sacarose (600g/L) mostrou um aumento da viscosidade apos 24 horas de reacao em (10.397,38 poise). A caracterizacao da dextrana atraves de FTIR possibilitou observar que o polimero sintetizado pela enzima de Leuconostoc mesenteroides FT 045 B apresenta os mesmos grupos quando comparada com as dextranas padroes de massas molares 515.000 e 9.300 Da. A massa molar media do polimero sintetizado foi determinada utilizando um viscosimetro de Ostwald, permitindo obter um valor de aproximadamente de 647000 Da. / Abstract: Dextransucrase (sucrose: 1,6-¿-D-glucan 6-¿glucosyltransferase EC 2.4.1.5) is the enzyme that catalyzes the synthesis of dextran from sucrose. Several species of the genera Leuconostoc, Lactobacillus and Streptococcus are known to synthesis an extracellular dextransucrase under appropriate conditions. The polymer dextran has various commercial applications in the pharmaceutical area, most commonly as a blood volume expander and in the treatment of anaemia, chemistry and foods. The goal of this work was to study a newly isolated strain of Leuconostoc mesenteroides (FT 045 B) from a Brazilian Alcohol and Sugar Plant Industry with relation a dextransucrase enzyme production. Different media compositions used for dextransucrase production showed that media M5 containing 2% of K2HPO4 produced higher enzymatic activity (5.67 U/mL) when compared to the other media. The best temperatures for enzyme production in batch fermentation were 23 and 25C showing enzymatic activity of 3.2 U/mL. Fermentation runned with molasses as a carbon source at concentration of 97.3 g/L for L. mesenteroides FT045B resulted in Introducao 4 11.6 U/mL enzymatic activity. When sucrose was used as a carbon source, concentration of 3 and 4% showed respectively 10.8 and 10.7 U/mL of dextransucrase activity. The use of Tween 80 in concentration of 5% increased the enzyme production in 6%. The dextran production gin vitroh by crude enzyme cell free (11.5 U/mL) in sucrose 600 g/L showed an increase in viscosity after 24 hours of reaction (10,394.38 poise). Dextran characterization by FTIR showed that the polymer synthesized by Leuconostoc mesenteroides FT045B enzyme has the same groups when compared with the standard dextrans (515.000Da and 9.300Da). Mw determination of synthesized dextran by production enzyme through Ostwald viscometer showed a value of 647000 Da. / Mestre

Orientador: Maurício Bacci Júnior / Banca: Glaucius Oliva / Banca: Carlos Peres Silva / Banca: Luiz Carlos Forti / Banca: Fernando Carlos Pagnocca / Neste trabalho foi proposto o estudo de ¿-amilase e maltase do fungo Leucoagaricus gongylophorus e do intestino de operarias da formiga cortadeira de folhas Atta sexdens, organismos que vivem numa simbiose obrigatoria, na qual um dos fatores relevantes e o provavel fornecimento de enzimas fungicas aos insetos. Para tanto, as amilases do fungo foram induzidas em diferentes fontes de carbono, sendo estas mais secretadas em amido e/ou maltose e reprimidas parcial (¿-amilase) ou totalmente (maltase) por glicose. Apos a purificacao das enzimas, atraves de cromatografia liquida (troca ionica, interacao hidrofobica e exclusao molecular), a determinacao das caracteristicas fisico-quimicas (temperatura de atividade otima e de inativacao; pH de melhor atividade e estabilidade; Km; peso molecular; influencia do cloreto e Q10) permitiu a comparacao das mesmas e os resultados mostraram que maltases de ambas as origens sao enzimas distintas, enquanto que a (¿-amilase) presente no intestino dos insetos tem as mesmas caracteristicas da ¿-amilase do fungo simbionte, indicando a sua provavel origem fungica. / Doutor

Orientador: Valdir Augusto Neves / Banca: Celia Maria de Sylos / Banca: Eduardo Purgatto / Resumo: Este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito do tratamento hidrotérmico associado ou não ao uso de embalagem de PVC na conservação de frutos de atemóia cv. "Thompson" armazenados sob diferentes temperaturas. A atemóia é um fruto climatérico que apresenta curta vida pós-colheita quando armazenada sob temperatura ambiente e susceptível a desordens fisiológicas quando da exposição a determinadas temperaturas de refrigeração. Tratamentos térmicos têm sido utilizados como adjuvantes ao armazenamento refrigerado fazendo com que o fruto suporte a ação do armazenamento a baixas temperaturas por um maior período de tempo. Os frutos de atemóia foram tratados hidrotermicamente a 40°C por 20 minutos, seguido de armazenamento a 15°C e 8°C, com e sem embalagem de PVC. Frutos controle, sem tratamento e embalagem, foram armazenados a 15°C, 8°C e à temperatura ambiente. No início do armazenamento e a cada três dias avaliou-se a aparência externa e interna dos frutos, as características físico-químicas e alterações de atividade das enzimas polifenoloxidase (PPO), peroxidase (POD) solúvel e ligada e pectinametilesterase (PME). O tratamento hidrotérmico apresentou efeito negativo sobre a aparência externa dos frutos armazenados a 8°C sem embalagem, porém, quando associado à embalagem de PVC contribuiu para a manutenção da aparência externa durante o período total do armazenamento dos frutos a 15 e 8°C. A temperatura de 8°C inibiu a atividade de PPO durante o armazenamento. A atividade da peroxidase ligada manteve-se superior nos frutos armazenados a 8°C, independente do tratamento hidrotérmico e embalagem. O tratamento hidrotérmico não teve influência sobre o tempo de armazenamento dos frutos, ao contrário da embalagem, que o prolongou. / Abstract: The aim of this work was to investigate the effect of hydrothermal treatment associated or not with PVC film in the conservation of atemoya cv. "Thompson" fruits stored at different temperatures. Atemoya is a climacteric fruit that presents a short postharvest shelf life when stored under room temperatures and susceptible a physiological disorders when exposed to certain refrigeration temperatures. Thermal treatments have been used as adjuvants to low temperatures storage doing fruits support the action of low temperatures for a longer period of time. Atemoya fruits were dipped at 40°C for 20 minutes, followed by storage at 15°C and 8°C, with and without PVC packaging. Control fruits, without any treatment and packaging, were stored at 15°C, 8°C and room temperature. Fruits were analyzed on the initial storage point and evaluated every three days to the external and internal appearance, physico-chemical changes and activity of the enzymes: polyphenol oxidase (PPO), membrane bound and soluble peroxidase (POD) and pectin methyl esterase (PME). Hydrothermal treatment presented negative effect on fruits external appearance, when stored at 8°C without packaging, but associated with PVC packaging contributed for the maintenance of external appearance during the total period of storage at 15 and 8°C. Temperature of 8°C inhibited PPO activity during storage. Membrane bound peroxidase activity remained higher in fruits stored at 8°C, regardless hydrothermal treatment and packaging. The hydrothermal treatment had no influence on fruits storage period, while PVC packaging prolonged it. / Mestre

Orientador: Ines Joekes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-20T15:32:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Comerlato_MariaHelena_D.pdf: 1964433 bytes, checksum: 6d81d54ee5ff4c1c23c725bd9df9dacd (MD5) Previous issue date: 1995 / Doutorado

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-09-30T16:18:28Z No. of bitstreams: 1 2016_CatarinaBernardesPereira.pdf: 3123751 bytes, checksum: dccc1336b1d5fde33388bec89c588d2c (MD5) / Approved for entry into archive by Ruthléa Nascimento(ruthleanascimento@bce.unb.br) on 2016-09-30T19:21:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_CatarinaBernardesPereira.pdf: 3123751 bytes, checksum: dccc1336b1d5fde33388bec89c588d2c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-30T19:21:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_CatarinaBernardesPereira.pdf: 3123751 bytes, checksum: dccc1336b1d5fde33388bec89c588d2c (MD5) / Em razão do Brasil exercer grande atividade agrícola, são gerados enormes volumes de resíduos que são rotineiramente acumulados no meio ambiente, com destaque para a soja. O reaproveitamento desses recursos naturais disponíveis abundantemente, possibilita a produção de diversos metabólitos de interesse industrial obtendo produtos de maior valor agregado, através de tecnologias de baixo impacto ambiental, baixo custo, consumindo menos recursos e simplificando o processo. Relatam-se diversas produções enzimáticas através de processos biotecnológicos de fungos filamentosos em meios contendo resíduos da agroindústria. Dentro dessa visão, o trabalho objetivou avaliar a produção de enzimas celulolíticas e hemicelulolíticas de fungos isolados do cerrado, costa marinha brasileira e da Antártica, utilizando casca de soja como substrato. Em sua primeira etapa, foi realizando o isolamento de 58 fungos endofíticos de 13 espécies de plantas nativas do Cerrado. Posteriormente foi realizado o processo de fermentação submersa (SF) de 104 fungos avaliando-se suas capacidades de produção enzimática. Uma triagem foi feita e 3 produtores de cada bioma (9 fungos) passaram também por fermentação em estado sólido (SSF). Os 18 extratos enzimáticos tiveram suas características físico-químicas analisadas quanto ao melhor pH e temperatura. Os resultados obtidos indicam que a casca de soja é um ótimo substrato na produção de xilanase, mananase, carboximetilcelulase (CMCase) e β-glicosidase. Os cultivos apresentaram enzimas com melhor atividade em pH 5,4 para xilabase, mananase e CMCase, e pH 4,8 para β-glicosidase. A faixa de temperatura ótima se manteve entre 40 ºC e 60 ºC para todos as enzimas em ambos os tipos de fermentações. As atividades mensuradas mostraram-se mais expressivas para xilanase atingindo cerca de 14 UI/mL. Foi possível observar um aumento de atividade enzimática nos cultivos de fungos do cerrado quando cultivados em SSF. Dessa forma, os resultados permitem concluir que os fungos estudados apresentam potencial para a produção das enzimas celulolíticas e hemicelulolíticas através de SF e SSF em um meio de baixo valor agregado apresentando assim interesse biotecnológico. _______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Due to the fact Brazil practices a great agricultural activity, huge volumes of waste are generated and are commonly accumulated in the environment, specially soybeans. The reuse of these highly available natural resources, allows for the production of several metabolites of industrial interest, obtaining products with higher added value, through technologies with low environmental impact and low cost, consuming less resources and simplifying the process. There are reports of several enzymatic productions through biotechnological processes of filamentous fungi in means containing agriculture industry residues. Within this view, the aim of the present work was to evaluate the production of cullulolytic and hemicellulolytic enzymes from isolated fungi in the Brazilian Cerrado and marine coast and in Antarctica, using soy husk as substrate. In its first stage, it performed the isolation of 58 endophytic fungi of 13 species of native plants of the Cerrado. Later it was realized the process of submerged fermentation (SF) of 104 fungi, evaluating their capability of enzymatic production. A selection was made and 3 producers of each biome (9 fungi) additionally went through solid state fermentation (SSF). The 18 enzymatic extracts had its physical-chemical characteristics analyzed as to find the optimum pH and temperature. The results obtained indicate that the soy husk is an great substrate in the production of xylanase, mananase, carboximetilcelulase (CMCase) and β-glicosidase. The enzymes had presented their best activity in pH 5.4 for xylanase, mannanase and CMCase and pH 4.8 for β-glicosidase. The optimum temperature range was kept between 40ºC and 60ºC for all enzymes in both fermentations. The activities measured have been revealed as expressive for xylanase reaching around 14 UI/mL. It was possible to observe an increase of enzymatic activity for the Cerrado fungi when cultivated in SSF. Therefore, the results allow to conclude that the fungi used present potential for the production of cellulolytic and hemicellulolytic enzymes through SF and SSF in a low added value mean, thus presenting biotechnological interest.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-08-18Bitstream added on 2014-06-13T19:35:25Z : No. of bitstreams: 1 goncalves_azl_me_rcla.pdf: 769741 bytes, checksum: c5c358af6163fd0d9c647117e5e757c8 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / As amilases, envolvidas na degradação do amido, constituem um grupo de enzimas com diferentes pontos de atuação na molécula de amido, hidrolisando ligações glicosídicas a-1,4 e/ou a-1,6, como as a-amilases e glucoamilases. A característica de termoestabilidade para essas enzimas é bastante desejável visto que, além de serem mais estáveis sob várias condições, ainda permitem a condução de processos de hidrólise do amido em temperaturas elevadas. O presente trabalho visou o estudo da produção de a- amilase e glucoamilase termofílica por Thermomyces lanuginosus TO-03, por fermentação submersa (FSm) e em estado sólido (FES), avaliando-se os efeitos do tempo de cultivo e da fonte de carbono. Foram estudadas também, as propriedades bioquímicas das enzimas produzidas e o efeito das mesmas na hidrólise dos diferentes tipos de amido na produção de xarope. Os resultados mostraram que as produções máximas de atividade de amilase dextrinizante, sacarificante e da glucoamilase por FES foram 3973,6; 95,2 e 235,2 U/g, em 144, 120 e 168h, respectivamente. Em FSm foram obtidos 181,6; 5,0 e 27,1 U/mL para amilase dextrinizante e amilase sacarificante e para Glucoamilase em 168 h fermentação. A glucoamilase obtida por FSm apresentou as seguintes propriedades: temperatura e pH ótimos de 70ºC e 5,5 quando o amido solúvel foi o substrato e de 65ºC e 4,5 quando o substrato foi a maltose. A a-amilase apresentou temperatura ótima de 60°C e pH ótimo 5,5. Quando obtida por FES, a glucoamilase apresentou temperatura ótima de 65ºC, para hidrólise de ambos os substratos e pH ótimo 5,5 para hidrólise do amido solúvel e pH 4,5 para a hidrólise da maltose. A a-amilase de FES apresentou temperatura E pH ótimos de 60°C e pH 5,5. / Amylases, involved in starch degradation, constitute a group of enzymes with different action sites on the starch molecule, hydrolysing glycosidic bonds á-1.4 and/or á-1.6, such as á-amylases and glucoamylases. Thermostability for these enzymes is a very desirable characteristic since it makes them more stable under many conditions and it allows hydrolytic processes of starch to take place at high temperatures. This work had the purpose of studying the production of thermophilic á-amylase and glucoamylase by Thermomyces lanuginosus TO-03, in submerged fermentation (SmF) and solid state fermentation (SSF), evaluating the effect of cultivation time and carbon source. Biochemical properties of the enzymes were also studied along with the effect they had on hydrolysis of different types of starch for syrup production. The results show that maximum production of dextrinogenic and saccharogenic amylase and glucoamylase activities by SSF were 3973.6, 95.2 and 235.2 U/g in 144, 120 and 168 h, respectively. In SmF the results were 181.6, 5.0 and 27.1 U/mL for dextrinogenic and saccharogenic amylase and glucoamylase activities in 168 h of fermentation. Glucoamylase from SmF exhibited the following properties: temperature and pH optimum at 70°C and 5,5 when soluble starch was used as substrate and 65°C and 4.5 when maltose was used as substrate. á-amylase from SmF exhibited optimum temperature at 60°C and pH optimum at 5.5. Glucoamylase from SSF exhibited optimum temperature at 65°C, for the hydrolysis of both substrates and pH optimum at 5.5 when hydrolysing soluble starch and 4.5 when hydrolysing maltose. á-amylase from SSF exhibited optimum temperature and pH at 60°C and 5.5.

Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-04-13T18:05:15Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Layla Carvalho Mahnke.pdf: 1183243 bytes, checksum: 43cec3c6cd1904bf476f6f95cfd6ff1f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-13T18:05:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Layla Carvalho Mahnke.pdf: 1183243 bytes, checksum: 43cec3c6cd1904bf476f6f95cfd6ff1f (MD5) Previous issue date: 2015-03-30 / CAPES / Queratinases (EC: 3.4.99) são amplamente utilizadas na indústria durante o processamento do couro, na produção de detergentes, assim como aplicadas na medicina e cosmética para remoção de calosidades. Elas são produzidas por diversos microrganismos, entre eles, o gênero Cunninghamellatem se mostrado promissor entre os fungos filamentosos. Desta forma, este trabalho teve como objetivo produzir, quantificar, caracterizar e purificar as queratinases obtidas pelos fungos Cunninghamella echinulata UCP 1299 e Cunninghamella phaeosphora UCP 1303 isolados do solo da Caatinga. Os microrganismos foram mantidos em meio sólido mineral específico contendo queratina extraída de penas de ave como única fonte de Carbono e Nitrogênio por 15 dias e usado posteriormente na fermentação submersa para a determinação quantitativa da produção enzimática. O cultivo foi realizado durante 15 dias, a 28°C em agitador orbital a 150 rpm. A cada três dias foram retiradas alíquotas para avaliar a concentração proteica, atividade queratinolítica e variação do pH durante a produção. Os isolados apresentaram uma elevada atividade específica de 84,1 U/mg para C. echinulata UCP 1299 no 9º dia de cultivo e de 96,2 U/mg para C. phaeosphoraUCP 1303 no 6º dia de cultivo, onde ambos extratos brutosforam utilizados para a caracterização parcial da enzima. As queratinases da C. echinulata UCP 1299e C. phaeosphora UCP 1303apresentaram valores com maior atividade no pH e temperatura de 8,0 e 28ºC – 45ºC; 9,0 e 35ºC – 55ºC, respectivamente. As queratinases, com massa molecular de aproximadamente 35 KDa foram purificadas por cromatografia de afinidade empregando partículas do compósito magnetita-queratina obtendo um fator de purificação de 37,4% e 44,1% para C. echinulata UCP 1299e C. phaeosphora UCP 1303 respectivamente. Deste modo, ambos os microrganismos podem ser utilizadospara produzir queratinase que pode ser purificada por afinidade utilizando a queratina magnetizada. / Keratinases (EC: 3.4.99) is widely used in the industry for leather processing, detergent production, so as applied in medicine and cosmetics for removing calluses. Various microorganisms, including the genus Cunninghamella, have shown to produce these enzymes. Thus, this study aimed to produce, quantify, characterize and purify keratinases obtained by fungi Cunninghamella echinulata UCP 1299 and Cunninghamella phaeosphora UCP 1303 isolated from soil of Caatinga (Pernambuco, Brazil). The microorganisms were maintain on solid medium, containing keratin bird feathers as the sole source of carbon and nitrogen, for 15 days and subsequently used in submerged fermentation for the enzyme production. Cultures it grown for 15 days at 28°C in an orbital shaker at 150 rpm. Every three days aliquots it collected to assess the protein concentration, keratinase activity and pH variation during production. The isolates showed a high specific activity of 84.1 U / mg for C. echinulata UCP in 1299 on the 9th day of cultivation and 96.2 U / mg for C. phaeosphora UCP 1303 on the 6th day of cultivation, where both crude extracts were used for partial characterization of the enzyme.Keratinases from C. echinulata UCP 1299and C. phaeosphora UCP 1303showed best activity in pH and temperature values of 8.0 and 28°C-45°C; 9.0 and 35°C-55°C, respectively. The keratinases, with a molecular mass of approximately 35 kDa were purify by affinity chromatography using particles of a composite magnetite-keratin obtaining a purification factor of 37.4% and 44.1% for C. echinulataUCP 1299 and C. phaeosphoraUCP 1303 respectively. Thus, both microorganisms can be used to produce keratinase can be affinity purified using magnetized keratin.

Orientador: Hiroshi Aoyama / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-23T11:54:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Granjeiro_PauloAfonso_M.pdf: 8647747 bytes, checksum: 47be6cdbf5a900e8e754d15d8476beeb (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: A fração AP1 da Fosfatase Ácida (E.C. 3.1.3.2.) foi detectada e parcialmente purificada de sementes de mamona (Ricinus communis ) através de colunas cromatográficas como SP-Sephadex, DEAE-Sephadex, Sephacryl S-200 e Concanavalina A Sepharose 4B. A enzima foi purificada até a homogeneidade 2.100 vezes, com atividade específica de 230 mmol min-1. A massa molecular relativa, determinada através de coluna Shim pack diol150 (Shimadzu HPLC), foi de 60 KDa. A fração AP1 apresenta uma porção de carboidrato na estrutura proteica e se liga a resina de Concanavalina A Sepharose 4B. A fração revela apenas uma banda difusa de atividade por eletroforese em condições não desnaturantes pH 8,3. As propriedades cinéticas da fosfatase ácida de sementes de mamona foram estudadas e a enzima apresentou alta atividade em pH 5,5. O valor da Km de 0,52 mM foi determinado utilizando p-nitrofenilfosfato como substrato em pH 5,5 a 37°C. Usando o pNPP como substrato, nenhum efeito na atividade fosfatásica foi observado na presença de EDTA, DTT b3-mercaptoetanol. Porém a atividade enzimática foi inibida por fosfato inorgânico, fluoreto, molibdato, vanadato, CU2+ e Zn2+. A fosfatase ácida de sementes de mamona não catalisou reações de transfosforilação devido não se ter observado nenhuma estimulação da atividade enzimática utilizando aceptores de fosfato, como glicerol, metanol e etanol / Abstract: The acid phosphatase (E.C. 3.1.3.2) AP1 form has been detected and partially purified from castor bean (Ricinus communis) seeds through SP-Sephadex, DEAE-Sephadex, Sephacry1 S-200 and Concanavalin. A chromatographies. The enzyme was purified to homogenity 2,100-fold, with a specific activity of 230 mmol min-1 . Relative molecular mass, determined by Shim pack diol150 column (Shimadzu HPLC), was found to be 60 KDa. AP1 presented a carbohydrate moiety in its proteic structure and binds to concanavalin A Sepharose. The fraction revealed a single phosphatase activity diffuse band on nondenaturing polyacrylamide gel electrophoresis, at pH 8.3. The acid phosphatase purified from castor bean seeds studied here presented a high activity at pH 5.5. An apparent Km of 0.52 mM was found for p nitrophenylphosphate, at pH 5.5 and 37°C. Using pNPP as substrate, no effect was observed on the acid phosphatase activity in the presence of EDT A, dithiothreitol, and b-mercaptoethanol. The enzyme was inhibited by inorganic phosphate, fluoride, vanadate, molybdate, CU2+ and Zn2+. The castor bean seeds acid phosphatase did not catalyze the transphosphorylation reaction since no stimulation was observed with inorganic phosphate acceptors, such as glycerol, methanol and ethanol / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Ciências Biológicas