Esse projeto visa a melhoria das propriedades mecânicas e de processabilidade do Poli(3-hidroxibutirato) (PHB) para futuras aplicações. Foram preparados filmes de blendas de PHB por dissolução em clorofórmio. Poli(etileno glicol), com massa molar de 300 (PEG) ou 4.000.000 g mol-1 (PEO), foi misturado em proporções de 5 a 30 % em massa e análises termogravimétricas (TG), de calorimetria diferencial exploratória (DSC) e ensaios dinâmico-mecânicos (DMTA) foram realizadas para avaliar a miscibilidade da blenda. Foram também analisados filmes recém-preparados e filmes envelhecidos, para avaliar o avanço da cristalização e consequente alteração das propriedades dos filmes com o passar do tempo. Para isso foram feitas comparações visuais de imagens microscópicas da morfologia das blendas, obtidas através de microscopia eletrônica de varredura (MEV). As blendas foram analisadas quanto ao grau de cristalinidade através de análise calorimétrica (DSC) e de difratometria de raio-X. As curvas de DSC mostram uma redução da Tm do PHB com a adição de PEG e PEO, o que indica uma forte interação entre os polímeros. As análises de TG mostram uma etapa principal de degradação, evidenciando a miscibilidade entre os polímeros. A TG também mostra uma sensível redução na temperatura de degradação do PHB para concentrações acima de 10 % em PEG, o que é indesejável. Através do MEV nota-se que existe também uma segregação de fases que aumenta com o tempo de estocagem do material, levando à recristalização do PHB e sua consequente fragilização. A difração de raios-X nos mostra que a adição de PEG e PEO ao PHB traz uma redução considerável para a cristalinidade do sistema, e que o aumento de 5 % para 30 % no teor de PEG é responsável por apenas uma pequena redução na cristalinidade, mas uma considerável redução na recristalização sofrida pela blenda com o tempo de estocagem. As análises de DMTA mostram que as blendas possuem módulo de armazenamento similar ao de polímeros flexíveis, evidenciando uma efetiva tenacificação do PHB. Amostras utilizando PEO apresentam maior rigidez do que as amostras contendo PEG. / This project aims the enhancement of both processability and mechanical properties of poly(3-hydroxybutyrate) (PHB) for future applications. Films of blends of PHB and poly(ethylene oxide) were prepared by chloroform solution casting and evaporation. Poly(ethylene oxide) having molar mass of 4,000,000 (PEO) or 300 g.mol-1 (PEG) was blended in proportion of 5 to 30 wt %, Thermogravimetric Analysis (TG), Differential Scanning Calorimetry (DSC) and Dynamic-Mechanic Analysis (DMTA) were performed in order to evaluate the miscibility of the blends. As-cast and aged films were also compared in order to analyze the crystallization progress and the consequent changes in the blends properties due to the aging process. For this, visual comparison was drawn between microscopy pictures obtained through scanning electron microscopy (SEM). The blends have their crystallinity degree determined by analyzing their X-ray diffraction curves. The DSC curves show a reduction at the PHBs Tm as the mass percentage of PEG increases, indicating a strong interaction in between the polymers. The TG and DTG analyses reveal a single main degradation step, what denotes miscibility in between the polymers. The TG also shows a considerable reduction of the PHBs degrading temperature for PEG concentrations over 10 %, which is undesirable. Through SEM one can note a phase segregation that increases with storaging time, leading to further crystallization of PHB and its subsequent enbrittlement. The X-ray diffraction curves show that the PEG and PEO bring a considerable crystallinity reduction to the system, and that the increasing of PEG content from 5 to 30% has only a minor effect per se, though also a considerable reduction of the perfection undergone by the system with storage time. The DMTA shows that the blends have a storage modulus similar to the one of flexible polimers, hence showing an effective PHB toughening. Samples containing PEO are more rigid than those containing PEG.

RESUMO Alfonso Castro, H. L. Caracterização molecular de dengue tipo 3 isolados no Brasil e no Paraguai. 2010. 105f. Dissertação (Mestrado). Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2010. O vírus da dengue (DENV), pertencente ao gênero Flavivirus da família Flaviviridae, é a arbovirose de maior impacto em saúde pública na atualidade. A infecção com qualquer do quatro sorotipos de dengue (DENV-1, -2, -3 e -4) pode ser assintomática ou causar doença febril (DF) que pode evoluir para uma forma mais grave, e algumas vezes fatais, caracterizada por derrame capilar, trombocitopenia. A introdução do DENV-3, genótipo III, nas Américas coincidiu com um aumento no número de casos graves da doença. Este vírus causou uma grande epidemia em 2002 no Rio de Janeiro e posteriormente se espalho em todas as regiões do pais, chegando inclusiva ao Paraguai. Diversos estudos filogenéticos e evolutivos foram realizados com o DENV-3 nas Américas, mas utilizando sequências genômicas parciais. Neste trabalho temos por objetivo analisar o relacionamento filogenético e evolutivo de DENV-3 isolados no Brasil e no Paraguai analisando a sequência genômica completa. A sequência de vírus isolados no Brasil (n=9) e no Paraguai (n=3) foram comparadas com 527 sequências depositadas no GenBank. As 12 cepas virais isoladas no Brasil e no Paraguai pertencem ao grupo americano do genótipo III. Analisando a árvore filogenética dos DENV-3 observamos três genótipos e diversas linhagens, sub-linhagens e clados dentro de cada genótipo. A distância genética entre os genótipos foi de 7,3 a 7,5%, entre as linhagens de 3,2 a 5,3%, entre as sub-linhagens 2,5 a 3,2% e entre os clados de 1,0 a 1,9%. A taxa evolutiva dos vírus variou entre 1,2x10-4 a 8,2x10-4 subs/sitio/ano. O ancestral comum do genótipo I teria surgido entre 1849-1945, do genótipo II entre 1916-1960, e do genótipo III entre 1876-1923. Os diferentes grupos genéticos apresentam motif de aminoácidos característicos. Estes dados serão de grande utilidade para uma melhor caracterização dos DENV-3 em futuras epidemias e, inclusive, poderão ser utilizados para seleção de candidatos a vacina. / ALFONSO CASTRO, H. L. Molecular characterization of dengue type 3 isolated in Brazilian and Paraguay. 2010. 105f. Dissertation (Master). Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2010. Infections of humans with dengue viruses (DENV), which belong to the genus Flavivirus(family, Flaviviridae), can be subclinical or cause illnesses ranging from a mild, flu-like syndrome with rash (dengue fever [DF]) to a severe and some times fatal disease, characterized by capillary leakage, thrombocytopenia, and sometimes hypovolemic shock (hemorrhagic dengue fever [DHF/DSS]). DENV are classified in four immunological distinct serotypes: DENV-1 to 4. Recently, a dramatically increase of DHF/DSS cases in the Americas have bee see, and this increase coincided with the introduction of the dengue virus type 3, genotype III. This virus causes a great epidemic in 2002 in the city of Rio de Janeiro and later, the virus spread in Paraguay. Phylogenetics and evolutionary studies have bee carried out with DENV-3 isolated worldwide, but using sequences partial genomic. In this work, we have analyzed the genetic diversity of DENV-3 of Brazilian and Paraguayan isolated, analyzing the complete sequences genomic. The Brazilian (n=9) and Paraguayan (n=3) isolated, were compared with 527 sequences deposited in the GeneBank. Theses isolated, belong to the American group of the genotype III. The phylogenetic analysis of complete genome of the DENV-3, confirmed the existence of three known genotypes and suggested the presence of other groups within each genotype named of the lineages, sub-lineages and clades. The genetic distance among the genotypes were of 7,3 to 7,5%, among the lineages of 3,2 to 5,3%, among the sub-lineages of 2,5 to 3,2% and among clades of 1,0 to 1,9%. The evolutionary rates of the viruses varied among 1,2x10-4 to 8,2x10-4 s/s/y. The age of the ancestral common more recent of the genotype I, possibly are among 1849-1945, the ancestral common of the genotype II, among 1916-1960 and the ancestral common more recent of the genotype III, among 1876-1923. The different genetic groups present motif of amino acids. These data could provide information for a better understanding of the evolution of theses viruses, and even for selection of candidate vaccine

Galectina-3 é uma lectina animal que apresenta afinidade por b- galactosídeos e que tem sido associada à progressão tumoral e metástase. A expressão de galectina-3 encontra-se alterada durante a progressão tumoral de diferentes neoplasias. Em tumores como carcinoma de tiróide e bexiga a expressão de galectina-3 encontra-se aumentada, enquanto que em tumores como carcinoma de mama e ovário a expressão desta lectina encontra-se diminuída. Neste trabalho nós utilizamos um modelo de progressão tumoral de melanoma murino para investigar os mecanismos envolvidos na perda de expressão de galectina-3. Este modelo é composto por uma linhagem de melanócitos imortalizados (melan-a) e duas linhagens de melanoma de crescimento vertical (Tm1 e Tm5) estabelecidas após submeter a linhagem melan-a a inúmeros ciclos de de-adesão. Enquanto melan-a acumula grandes quantidades de galectina-3, as linhagens Tm1 e Tm5 deixaram de expressar o gene de galectina-3. Análise da região 5\' do gene de galectina-3 demonstrou que esta região apresentava grande conteúdo de dinucleotídeos CpG e vários sítios SP1. O seqüenciamento desta região após tratamento do DNA com bissulfito de sódio mostrou que esta região estava totalmente metilada nas linhagens Tm1 e Tm5 e desmetilada na linhagem melan-a. O tratamento da linhagem Tm1 com 5-Aza-2\'-deoxicitidina (5-Aza-CdR), um inibidor da DNA metiltransferase, provocou um decréscimo significativo nos níveis de metilação da região 5\' do gene de galectina-3 que por sua vez levou a re-expressão do RNAm e da proteína. O tratamento de Tm1 com os inibidores de histono deacetilases tricostatina A e 4-ácido-fenilbutírico em combinação com 5-Aza-CdR não aumentou os níveis de expressão do gene de galectina-3 e curiosamente, reverteu o efeito induzido por 5-Aza-CdR. Em adição, a expressão da enzima DNMT1 apresentou um discreto aumento nas linhagens Tm1 e Tm5 em relação a melan-a. Em conjunto esses resultados sugerem que mecanismos epigenéticos como a metilação estão envolvidos no controle de expressão do gene de galectina- 3 ao longo da progressão tumoral de melanoma murino. / Galectin-3 is a b-galactoside-binding animal lectin, shown to be involved in tumor progression and metastasis. Galectin-3 expression has been found altered along tumor progression of different tumors. In some types of cancers such as thyroid carcinoma and bladder carcinoma, galectin-3 expression has been found increased, whereas in tumors such as breast carcinoma and ovary carcinoma the expression of this lectin has been found decreased along tumor progression. In this study, we have used a murine melanoma model to investigate the mechanisms responsible for the loss of galectin-3 gene expression. This model consists of a cell line of immortalized melanocytes (melan-a) and two cell lines of vertical growth phase melanoma (Tm1 and Tm5) established after submitting melan-a cells to several deadhesion cycles. While melan-a expressed high amounts of galectin-3, both Tm1 and Tm5 cells lost galectin-3 gene expression. Analysis of the 5\' upstream region of the galectin-3 gene demonstrated the presence of a high CpG content and several SP1 binding sites. Bisulfite sequencing of this region showed that it was fully methylated in Tm1 and Tm5 cells and unmethylated in melan-a cells. Treatment of Tm1 cells with 5-aza-2\'-deoxycytidine (5-Aza-CdR), a DNA methyltransferase inhibitor, led to a marked decrease in the methylation levels of the 5\' upstream region of the galectin-3 gene, which led to transcription of the galectin-3 gene. Treatment of Tm1 cells with the histone-deacetylase inhibitors trichostatin A and 4- acid-phenilbutyrate in combination with 5-Aza-CdR did not increase the levels of galectin-3 gene expression and intriguingly, reverted the effect of 5-Aza-CdR alone. In addition, the expression of DNMT1 showed a modest, but significant increase in Tm1 and Tm5 cells as compared with melan-a cells. Altogether these results indicate that epigenetic mechanisms such as methylation play a role in the regulation of the galectin-3 gene expression along murine melanoma progression.

Os melanomas correspondem a 7% de todas as neoplasias malignas em cães e são principalmente encontrados em cavidade oral e lábios, correspondendo a 33% dos tumores de boca, possuem um prognóstico ruim devido ao fato de serem diagnosticados tardiamente, por sua grande capacidade de invasão local e formação de metástases, além de altas taxas de recidiva após o tratamento cirúrgico. A Galectina-3 (Gal-3) é uma proteína responsável por diversas funções fisiológicas como adesão, apoptose, angiogênese, proliferação e diferenciação. Em medicina veterinária existem poucos estudos relacionando à expressão da Gal-3 com prognóstico e a progressão da neoplasia. Realizamos imuno-histoquímica para Gal-3 em 27 melanomas orais caninos que foram avaliados de maneira semiquantitativa e quantitativa, e comparamos os resultados obtidos com a sobrevida, outros marcadores prognósticos (Ki67, índice mitótico e atipia nuclear), expressão de proteínas relacionadas à apoptose (BCL2 e CASP3) e parâmetros histopatológicos (grau de pigmentação e tipo histológico). Detectamos alta expressão de Gal-3 em melanomas com maior sobrevida pós-cirúrgica e uma alta expressão nuclear de Gal-3 em melanomas com menor sobrevida pós-cirúrgica. Além disso, houve correlação entre as expressões de Gal-3 e BCL2, assim como entre atipia nuclear e sobrevida pós-cirúrgica. É sabido que a Gal-3 é capaz de formar heterodímeros com a BCL2 no citoplasma para atuar na evasão da morte por apoptose, impedindo a liberação da citocromo C. Já no núcleo, a Gal-3 induz à parada do ciclo celular, reduzindo a taxa da proliferação. Apesar do reduzido número amostral devido à dificuldade nos acompanhamentos clínicos nossos dados permitem sugerir que a Gal-3 é possui potencial para ser um marcador prognóstico de sobrevida em casos de melanomas orais caninos. Novos estudos devem ser realizados afim de confirmar nossas observações e elucidar o papel da Gal-3 nesta neoplasia. / Melanomas are almost 7% of all malignant neoplasms in dogs. They are mainly found in the oral cavity and lips, corresponding to 33% of tumors of the oral cavity. They carry a poor prognosis because of late diagnoses, local invasiveness, high metastatic and recurrence rates after surgical treatment. Galectin-3 (Gal-3) is a protein with a variety of biological roles such as in adhesion, apoptosis, angiogenesis, proliferation and differentiation. In veterinary medicine, there are few studies comparing the expression of Gal-3 with prognosis and tumor progression. We performed immunohistochemistry for Gal-3 in 27 canine oral melanomas and evaluated the immunolabelling both semi-quantitatively and quantitatively. The results were compared with survival, other prognostic markers (Ki67, mitotic index and nuclear atypia), expression of proteins related to apoptosis (BCL2 and CASP3) and histopathological parameters (degree of pigmentation and histological type). We detected higher expression of Gal-3 in cases of melanoma that presented longer post-surgical survival and a higher nuclear expression of Gal-3 in dogs with melanoma that had shorter post-surgical survival. In addition, there was correlation between the Gal-3 and BCL2 expressions, as well as between nuclear atypia and post-surgical survival. It is known that Gal-3 is able to form heterodimers with BCL2 in the cytoplasm leading to evasion of apoptosis, through preventing mitochondrial cytochrome C release. Nuclear Gal-3 induces the cell cycle arrest, reducing the proliferation rate. Despite the small sample size due to the difficulty in clinical follow-up, our data suggest that Gal-3 has the potential to be a prognostic marker for survival in cases of canine oral melanomas. Further studies should be performed to confirm our observations and elucidate the role of Gal-3 in this neoplasm.

Algumas doenças associadas à piscicultura de tilápias trazem enormes prejuízos aos criadores, resultando em expressivos coeficientes de morbidade e mortalidade entre animais de todas as idades. Nesse sentido, exigências para o aprimoramento do diagnóstico laboratorial de doenças de natureza infecto-contagiosa tornaram-se constantes, face às perdas vinculadas. Os Ranavirus são vírus que infectam vertebrados ectotérmicos causando necrose generalizada, hemorragias focais e apoptose celular nos animais infectados. O presente estudo objetivou a realização de infecções experimentais em larvas e alevinos de tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus), através de 3 diferentes modelos de infecção, utilizando estirpe de Ranavirus Frog vírus 3-like; recentemente detectada e isolada no Brasil, para avaliação das patologias associadas, incluindo o sequenciamento e análise do genoma da cepa viral. Vários sinais clínicos macroscópicos e microscópicos foram observados, hemólise, hemácias com anisocitose e policromasia, alterações relacionadas a média dos volumes das hemácias e hemoglobina, índices hepato-somáticos e espleno-somáticos com interações estatisticamente significantes, linfócitos reativos, alterações nos níveis das enzimas alanina aminotransferase e corpúsculos de inclusão basofílicos em diferentes tecidos dos animais experimentados com Ranavirus FV3-like foram observados dentro do período de 60 dias pós-infecção. Além disso, animais experimentalmente infectados foram positivos ao Ranavirus através de qPCR. O genoma de cepa brasileira de Ranavirus FV3-like apresentou 105 kilobases, contendo 54,98% de guanina + citosina, sendo 94 potenciais ORFs anotadas. A reconstrução filogenética, baseada em sequencias nucleotídicas, agrupou a amostra brasileira de Ranavirus no clado dos Frog vírus 3-like e as maiores identidades do genoma se deram com cepas norte-americanas de FV3-like. Doze potenciais eventos de recombinação, estatisticamente significantes (p < 0,05), foram identificados entre a cepa brasileira e amostras de referência de Ranavirus FV3-like. Nesse sentido, o presente trabalho contribui para o melhor entendimento da infecção causada por estirpe brasileira de Ranavirus FV3-like em tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus). Além disso, adiciona e reforça a potencial recombinação entre diferentes estirpes de Ranavirus, colaborando para uma melhor compreensão das características de agentes virais associados a graves surtos em vertebrados ectotérmicos no país. / Some diseases associated with tilapia fish farming cause enormous losses to breeders, resulting in significant morbidity and mortality rates among animals of all ages. In this sense, requirements for the improvement of the laboratory diagnosis of diseases of infectious-contagious nature, became constant, in view of the related losses. Ranaviruses are viruses that infect ectothermal vertebrates causing widespread necrosis, focal haemorrhages and cell apoptosis in infected animals. The present study aimed to perform experimental infections in Nile tilapia (Oreochromis niloticus) fry and larvae through 3 different infection models, using Ranavirus Frog virus 3-like strain recently detected and isolated in Brazil, to evaluate the associated pathologies, including sequencing and genome analysis of the viral strain. Several macroscopic and microscopic clinical signs were observed, hemolysis, red blood cells presenting anisocytosis and polychromasia, alterations related to the mean red blood cell volumes and hemoglobin present in the red blood cells, hepato-somatic and spleno-somatic indexes showing statistically significant interactions, reactive lymphocytes, alterations in the levels of the enzymes alanine aminotransferase and basophilic inclusion corpuscles in different tissues of animals tested with Ranavirus FV3-like were observed within the 60-day post-infection period. In addition, experimentally infected animals were positive to Ranavirus through qPCR. The genome of the Ranavirus FV3-like Brazilian strain presented 105 kilobases, containing 54.98% of guanine + cytosine, with 94 potential ORFs annotated. The phylogenetic reconstruction, based on nucleotide sequences, grouped the Brazilian sample of Ranavirus in the clade of Frog virus 3-like, the greater identities of the genome were with North American strains of FV3-like. Twelve potential recombination events, statistically significant (p <0.05), were identified between the Brazilian strain and reference samples of Ranavirus FV3-like. The present work contributes to a better understanding of the infection caused by the Brazilian strain of Ranavirus FV3-like in Nile tilapia (Oreochromis niloticus). In addition, it adds and reinforces the potential recombination between different strains of Ranavirus, contributing to a better understanding of the characteristics of viral agents associated with severe outbreaks in ectothermic vertebrates.

O estresse causa modificações no epitélio intestinal, tais como o aumento de células caliciformes e da taxa de apoptose. O uso de alimentos nutracêuticos tem sido uma alternativa para amenizar essas modificações sobre o tecido epitelial. Desta forma, este trabalho teve como objetivo avaliar se a inclusão de colostro bovino, o qual é constituído de fatores antioxidantes, imunes e de crescimento, seria capaz de amenizar as consequências do estresse crônico sob o intestino. Para isso, juvenis de pacu (Piaractus mesopotamicus) adensados a 50 kg/m3 foram alimentados duas vezes ao dia até a saciedade com ração peletizada e semi-purificada sem (0%CBL) e com a inclusão de colostro bovino liofilizado em concentrações crescentes (10, 20 e 30%CBL), (n=4). Após 28 dias, foram coletados segmentos do intestino médio, S1 e S2, e reto. Os tecidos foram marcados com corantes histológicos para a quantificação de células caliciformes contendo mucinas neutras, ácidas (incluindo sialo e sulfomucinas) e ácidas-neutras. Também foram mensurados o volume (Vv) e a densidade da superfície (Sv) da mucosa, por análise estereológica, e a espessura da camada muscular. A razão do número de cada tipo e subtipo de célula caliciforme sobre o Vv e Sv foi calculada para estimar a densidade de células caliciformes, Dv e Ds, respectivamente. A taxa apoptótica foi analisada qualitativamente através da intensidade (alta, média e baixa) da imunomarcação da caspase-3 nas células epiteliais. As dietas não influenciaram os parâmetros zootécnicos analisados (P>0,05). No reto, os grupos que receberam 20 e 30%CBL apresentaram menor número de células caliciformes contendo sulfomucinas e menor Ds em relação a 0 e 10% (P=0,0148 e 0,0198, respectivamente). No RT, Dv total e Dv de células caliciformes contendo mucinas ácidas foi maior em 0 e 30%CBL em relação a 20%CBL (P=0,0155 e 0,225, respectivamente). No S1, 10 e 30%CBL apresentaram maior Dv em relação a 20%CBL (P=0,0540). A espessura da camada muscular, o Vv e a Sv não diferiram entre os tratamentos (P>0,05). No S2 e RT, a taxa de apoptose teve relação inversa à concentração de colostro bovino liofilizado adicionado na ração. Nos três segmentos, houve maior proporção de células caliciformes contendo mucinas ácidas do que neutras, sendo a maioria representada por sulfomucinas. Assim, a inclusão de colostro bovino liofilizado nas rações de juvenis de pacu adensados diminuiu a apoptose nos segmentos intestinais S2 e RT e também diminuiu o número de células caliciformes contendo sulfomucinas no RT, indicando que o colostro bovino liofilizado pode ser utilizado como alimento nutracêutico para pacus (Piaractus mesopotamicus) adensados, a fim de diminuir a taxa apoptótica e proteger o intestino contra enzimas bacterianas, uma das principais funções das sulfomucinas. / The stress causes changes in the intestinal epithelium, such as the increase in the number of goblet cells and on the rate of apoptosis. The use of nutraceutical foods has been an alternative to soften these modifications on the epithelial tissue. Thus, this study aimed to evaluate if the inclusion of bovine colostrum, which is composed of antioxidant, immune and growth factors, would be able to attenuate the consequences of chronic stress on the intestine. For this, pacu juveniles (Piaractus mesopotamicus), stocked at density of 50 kg/m3, were fed twice daily until satiety with pelleted and semi-purified diet without (0% LBC) and with the inclusion of lyophilized bovine colostrum in increasing concentrations (10, 20 and 30% LBC), (n = 4). After 28 days, segments of the middle gut, S1 and S2, and rectum (RT) were collected. The tissues were stained with histological dyes for the quantification of goblet cells containing neutral, acidic (including sialo and sulphomucins) and acid-neutral mucins. The volume (Vv) and surface density (Sv) of the mucosa were also measured by stereological analysis and the thickness of the muscular layer. The ratio between the number of each goblet cell type and subtype and the Vv or Sv was calculated to estimate the density of goblet cells, Dv and Ds, respectively. The apoptotic rate was analyzed qualitatively according to the intensity (high, medium and low) of caspase-3 immunostaining in epithelial cells. The diets did not influence the zootechnical parameters analyzed (P> 0.05). In the rectum, the groups that received 20 and 30% LBC presented lower number of goblet cells containing sulphomucins and lower Ds in relation to 0 and 10% (P = 0.0148 and 0.0198, respectively). In RT, total Dv and Dv of goblet cells containing acid mucins were higher in 0 and 30% LBC in relation to 20% LBC (P = 0.0155 and 0.225, respectively). In S1, 10 and 30% LBC presented higher Dv in relation to 20% LBC (P = 0.0540). Muscle layer thickness, Vv and Sv did not differ between treatments (P> 0.05). In S2 and RT, the rate of apoptosis was inversely related to the concentration of lyophilized bovine colostrum added in the diet. In the three segments, there was higher proportion of goblet cells containing acidic than neutral mucins, most of them being sulphomucins. Thus, the inclusion of lyophilized bovine colostrum in diets of pacu juveniles reduced apoptosis in the intestinal segments S2 and RT and also decreased the number of goblet-containing sulphomucins in the RT, indicating that lyophilized bovine colostrum can be used as a nutraceutical feed for pacus (Piaractus mesopotamicus) under high stocking density to decrease the apoptotic rate and protect the intestine against bacterial enzymes, one of the main functions of sulphomucins.

Introdução - O câncer de mama é dos tipos de câncer mais frequente no mundo e o mais comum entre as mulheres. Sabe-se que durante o desenvolvimento do câncer de mama diversos mecanismos regulatórios estão em desequilíbrio, enquanto processos como a inflamação crônica e as reações pró-oxidativas se encontram estimuladas. Nessa perspectiva, alguns estudos propõem que alguns fatores de risco ambientais possam ser modificados. Desses, grande destaque tem sido direcionado à dieta e, particularmente, ao perfil de gorduras consumidas. Objetivo - Avaliar a associação do índice -3, estresse oxidativo e composição corporal em mulheres com câncer de mama. Métodos - Foram selecionadas 101 mulheres com recém-diagnóstico de câncer de mama, com estadiamento tumoral I a IV. Essas pacientes foram selecionadas do serviço de Mastologia do Hospital Geral de Fortaleza, Ceará. Foram avaliados parâmetros antropométricos (peso, altura, IMC e circunferência da cintura) e de composição corporal por impedância bioelétrica. Após jejum de 12h foram obtidas amostras de sangue e a partir plasma foram analisados os marcadores do estresse oxidativo [LDL eletronegativa LDL(-) e seus auto anticorpos, 8-Oxo-2\'-deoxiguanosina - 8OHdG por meio de imunoensaios, vitaminas lipossolúveis por HPLC e substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico -TBARS por teste colorimétrico]. O perfil de ácidos graxos nos eritrócitos foi determinado por cromatografia a gás e a partir do percentual de ácidos graxos eiocosapentaenoico (EPA) e docosahexaenoico (DHA) calculou-se o índice -3. Os resultados obtidos foram analisados por meio de testes comparação de médias, correlações e modelos de regressão linear (SPSS 20.0). Resultados Não houve relação significativa entre ácidos graxos EPA, DHA e índice -3 e biomarcadores de estresse oxidativo, antropométricos e de composição corporal (p>0,05). Entretanto, os antioxidantes lipossolúveis foram maiores em mulheres na pós-menopausa, com tumor em estágio inicial e linfonodos negativos. O conteúdo de TBARS associou-se com o estadiamento clínico. A adiposidade foi associada com concentrações de retinol e 8-OHdG, enquanto LDL(-), 8-OHdG e TBARS foram correlacionadas com antioxidantes lipossolúveis após o ajuste para fatores de confusão. Conclusão - O índice -3 não está 5 correlacionado com estresse oxidativo e composição corporal. Entretanto, marcadores do estresse oxidativo estiveram associados ao perfil clínico e a composição corporal nestas pacientes. / Introduction - Breast cancer is the most frequent types of cancer worldwide and the most common among women. It is known that during the development of breast cancer several regulatory mechanisms are in imbalance, while processes such as chronic inflammation and pro-oxidative reactions are stimulated. In this perspective, some studies suggest that some environmental risk factors can be modified. These, great emphasis has been directed to the diet and particularly to the profile of the fats consumed. Aim - Assess the association between -3 index, oxidative stress and body composition in women with breast cancer. Methods - 101 women with newly diagnosed breast cancer with tumor stages I to IV were selected. These patients were selected of the Service of Mastology of General Hospital of Fortaleza, Ceará. Anthropometric parameters (weight, height, BMI and waist circumference) and body composition by bioelectrical impedance were evaluated. After 12h fasting blood samples were obtained and, from the plasma, markers of oxidative stress were analyzed [electronegative LDL LDL(-) and their autoantibodies, 8-oxo-2\'-deoxyguanosine - 8OHdG by immunoassays, liposoluble vitamins by HPLC and thiobarbituric acid reactive substances - TBARS by colorimetric test]. The profile of fatty acids in erythrocytes was determined by gas chromatography and, from the percentage of eiocosapentaenoico (EPA) and docosahexaenoic (DHA) fatty acids, the -3 index was calculated. The results were analyzed by comparison of means tests, correlations and linear regression models (SPSS 20.0). Results - There was no significant relation between EPA, DHA and -3 index and biomarkers of oxidative stress, anthropometric and body composition (p>0.05). However, the liposoluble antioxidants were higher in postmenopausal women with early-stage tumors and negative lymph nodes. The content of TBARS was associated with clinical staging. Body fat was associated with retinol concentrations and 8-OHdG, while LDL(-), 8-OHdG and TBARS were correlated with liposoluble antioxidants after adjustment for confounding factors. Conclusion - The -3 7 index is not correlated with oxidative stress and body composition. However, markers of oxidative stress were associated with the clinical profile and body composition in these patients.

Introdução: Os benefícios dos ácidos graxos poli-insaturados ômega 3 (w-3) no metabolismo lipídico e na saúde cardiovascular são amplamente aceitos. Entretanto, o impacto do w-3 na composição corpórea, na homeostase da glicose e consequente modificação do risco cardiovascular não tem sido foco dos desfechos primários da maioria dos estudos clínicos. Objetivo: Avaliar o impacto da suplementação de w-3 sobre a composição corporal, o controle glicêmico e o nível de risco cardiovascular em indivíduos adultos. Métodos: A partir de uma sub-amostra do estudo CARDIONUTRI (estudo clínico, randomizado, controlado e duplo cego com seguimento de 2 meses) foram selecionados 86 indivíduos (grupo w-6, 3g de óleo de girassol/d) e 88 indivíduos (grupo w-3, 3g de óleo de peixe/d 60 por cento EPA/DHA). O efeito das intervenções foi monitorado nos tempos basal e T=8 (oito semanas). Nestes períodos foram coletadas informações demográficas, clínicas, atividade física, dieta, antropométricas e de composição corporal. Amostras de sangue foram coletadas após jejum de 12h e a partir do plasma/soro foram avaliados glicemia, insulina, colesterol total e associado a LDL e HDL, triacilgliceróis e as apolipoproteína AI e B utilizando métodos comerciais. O nível de risco cardiovascular dos indivíduos foi estimado pelo Escore de Risco de Framingham (ERF). Os resultados do efeito do tempo, da intervenção e das interações entre parâmetros monitorados e os desfechos foram analisados por meio do programa SPSS 20.0, sendo o nível de significância adotado de p<0,05. Resultados: A maioria dos indivíduos inclusos era do sexo feminino e da raça branca, sem diferença entre os grupos. As doenças mais prevalentes em ambos os grupos foram a hipertensão arterial, o diabetes mellitus e as dislipidemias. Não foram observadas mudanças de glicemia e insulina de jejum, HOMA-IR e HOMA 2- por cento S, com a suplementação de w-3, exceto nos indivíduos com risco cardiovascular intermediário, segundo o ERF. Em relação aos parâmetros antropométricos e de composição corporal, a população feminina do grupo w-3 apresentou redução do percentual de massa gorda ao longo do tempo e intervenção, assim como, foi também observada tal redução entre os indivíduos com alto risco cardiovascular. Não foi contatada variação na distribuição do ERF, apesar da melhora de seus componentes (colesterol total e HDL-C). Conclusões: A suplementação com w-3 promoveu redução de insulina e HOMA-IR nos indivíduos com ERF intermediário. Observou ainda efeito benéfico na redução do percentual de gordura corporal entre as mulheres e indivíduos com ERF alto, assim como na diminuição do colesterol total e aumento da HDL-C. / Introduction: The benefits of polyunsaturated omega 3 (n-3) on lipid metabolism and cardiovascular health fatty acids are widely accepted. However, the impact of n-3 in body composition, glucose homeostasis and consequent modification of cardiovascular risk has not been the focus of the primary outcomes of most clinical trials. Aim: To evaluate the impact of n-3 supplementation on body composition, glycemic control and the level of cardiovascular risk in adults. Methods: From a subsample of CARDIONUTRI study were selected (clinical, randomized, controlled, double blind study with follow-up of 2 months) 86 patients (group n-6, 3g of sunflower oil/d) and 88 individuals (n-3 group, 3g fish oil/d - 60 per cent EPA/DHA ). The effect of the interventions was monitored at baseline and T = 8 (eight weeks). In these periods were collected demographic information, clinical, physical activity, diet, anthropometric and body composition. After 12h fasting, blood samples were collected and, from plasma/serum, were evaluated glucose, insulin, total cholesterol, cholesterol associated with LDL and HDL, triacylglycerol, apolipoprotein AI and B using standard methods. The level of cardiovascular risk of individuals was estimated by the Framingham Risk Score (FRS). The results of the effect of the time of the intervention and the interactions between monitored parameters and outcomes were analyzed using the SPSS 20.0 program and the level of significance of p < 0.05. Results: The majority of individuals included were female and white, with no difference between groups. The most prevalent diseases in both groups were hypertension, diabetes mellitus and dyslipidemia. No change was observed in glucose and fasting insulin, HOMA-IR and HOMA 2- per cent S, with supplementation with n-3, except in patients with intermediate cardiovascular risk, according to the FRS. Regarding the anthropometric and body composition parameters, the n-3 group showed a reduction in the percentage of fat mass among females over time and intervention, as was also observed that reduction among individuals at high cardiovascular risk. There was no variation in the distribution of the ERF, despite the improvement of its components (total cholesterol and HDL-C). Conclusions: Supplementation with n-3 promoted reduction of insulin and HOMA-IR in subjects with intermediate FRS. It noted beneficial effect in reducing the percentage of body fat among women and individuals with high FRS, as well as decreased total cholesterol and increased HDL-C.

Por constatar-se uma severa dificuldade na produção textual por parte de futuros alfabetizadores, graduandos em Pedagogia, buscou-se balizas na psicanálise, sobretudo nos estudos da Angústia empreendidos por Freud e Lacan, que permitissem desenvolver uma pesquisa a respeito do que gera tal dificuldade e que guiassem uma análise teórica sobre o envolvimento subjetivo que resulta na marca diferencial entre determinados tipos de escrita. Sustenta-se a hipótese de que há um receio por parte do sujeito em desvelar-se através do suporte (escrita textual) e que a inibição decorra disto. Questionou-se também se determinados textos, que sugerem ausência do sujeito, são resultado de uma leitura assídua que, ao invés de gerar escrita sublimatória, funciona apenas para importar discurso alheio, poupando as próprias formas de o sujeito ver o mundo e as diferenças sexuais. Discutiu-se o formato operacional vigente no trabalho com a literatura, dentro das instituições escolares, e a possibilidade de uma aproximação com as obras consagradas que trafegue por uma via diversa daquela cognitiva. Propôs-se que uma abordagem que autorize o subjetivo, resulta numa particular transferência e sublimação de forma que a leitura se configura em autoria podendo fazer, por acréscimo, efeito de relançamento na escritura. / For evidencing a severe difficulty in the literal production by the future teacher of children, graduated in Pedagogy, searched beacons in the psychoanalysis, over all in the studies of the Anguish undertaken by Freud and Lacan, that allowed to develop a research regarding what it generates such difficulty and that they guided a theoretical analysis on the subjective envolvement that results in the distinguishing mark between determined types of writing. It is supported hypothesis of that has a distrust on the part of the subject in reveal itself through the support (written literal) and that the inhibition elapses of this. It was also questioned if definitive texts, that suggest absence of the subject, are resulted of a frequent reading that, instead of generating sublimation written, it only functions to import other people\'s speech, saving the proper forms of the subject to see the world and the sexual differences. The effective operational format in the work with literature was discussed, inside of the school institutions, and the possibility of an approach with the consecrated workmanships that passes through a diverse way of that cognitive. It was considered that a boarding that authorizes the subjective, results in a particular transference and subliming so that the reading configures itself in authorship being able to make, for addition, effect of relaunching in the writing.

A apoptose é um processo fisiológico que desempenha papel crucial no desenvolvimento, remodelagem e senescência teciduais, inclusive placentários. A placenta, enquanto órgão temporário, atravessa todas estas fases em aproximadamente 10 meses, na espécie bubalina. O crescimento da placenta e a nutrição fetal requerem altas taxas de renovação e diferenciação celulares, e a maturação placentária está relacionada à redução das células epiteliais das criptas carunculares maternas. As modificações morfológicas celulares decorrentes do processo de apoptose são fruto de eventos bioquímicos complexos promovidos por uma família de cisteína-proteases, as caspases, especialmente as caspases executoras, dentre as quais se destaca a caspase-3, capaz de degradar várias proteínas citoplasmáticas e nucleares. Durante a apoptose, ocorre a clivagem caspase-mediada da citoqueratina 18, proteína dos filamentos intermediários do citoesqueleto, e com isso a formação de um neoepítopo específico. Por meio de métodos imunoistoquímicos pode-se detectar a presença tanto deste neoepítopo, quanto da forma ativa da caspase-3, o que demonstra que a célula entrou em estágio irreversível de morte celular. Morfologicamente, algumas das principais alterações celulares observadas são condensação da cromatina, a degradação e fragmentação do DNA, a formação de ?blebs? (pregas/bolhas) na membrana plasmática, além da fragmentação celular em corpúsculos apoptóticos, os quais podem ser identificados em cortes corados pelo método de rotina hematoxilina e eosina, utilizando-se microscópio de imunofluorescência, devido à eosinofluorescência das células em apoptose. Assim como a apoptose, a proliferação celular participa no equilíbrio homeostático tissular. Neste estudo, pretende-se avaliar a ocorrência de apoptose e proliferação celular em 42 placentônios de diferentes animais em diversas fases gestacionais (2-10 meses de gestação), em tecidos fixados em 4% paraformoldeído, incluídos em paraplast e submetidos à imunoistoquímica (anticorpo monoclonal M30 CytoDeath; Caspase-3 Clivada; PCNA - antígeno de marcação nuclear), sendo também avaliada a presença de corpúsculos apoptóticos eosinofluorescentes nas amostras. Utilizando-se M30 e caspase-3 clivada pudemos constatar a ocorrência de apoptose nos epitélios uterino e trofoblástico, em células gigantes placentárias e, ocasionalmente, em células mesenquimais fetais, do estroma uterino e endoteliais. Não houve diferenças significativas (p<0.05) entre os métodos adotados, mas sim entre os estágios gestacionais. Para o M30, houve um aumento significante da apoptose do primeiro grupo (2-4.5 meses) em relação ao quarto grupo (9-10 meses); no caso da Caspase-3 Clivada houve um aumento estatísticamente significante (p<0.05) entre os três primeiros grupos (2-4.5; 5-6.5; e 7-8.5 meses de gestação, respectivamente) de animais em relação ao quarto grupo. Para o PCNA, ocorreu uma diminuição no número de células em proliferação dos dois primeiros grupos de animais em relação ao quarto grupo (p<0.05). A presença de corpúsculos apoptóticos eosinofluorescentes pôde ser observada em todas as amostras. Nossos resultados sugerem haver uma relação entre a ocorrência de apoptose e a maturação, senescência e liberação placentárias em ruminantes. / Apoptosis is a physiological process that plays a crucial role in the development, remodeling and aging of the placenta. The placenta is a temporary organ that undergoes growth and development, followed by senescence and death in 10 months in the buffalo species. Placental growth and fetal nutrition require high rates of cellular turnover and differentiation, and placental maturation is correlated to the reduction of the number of epithelial cells of the maternal crypts. The morphological changes of the apoptotic cells are product of complex variety of biochemical events promoted by a family of cystein-proteases, the caspases, mainly the effectors caspases, and among them the caspase-3, which is able to degrade cytoplasmic and nuclear proteins. During apoptosis, the caspase-mediated cleavage of cytokeratin 18, which is one of the first intermediate filament proteins of the cytoskeleton, leads to the formation of a specific neo-epitope. It is possible to detect the presence of this neo-epitope by immunohistochemistry, as well as the active form of caspase-3, showing that the cell has entered an irreversible stage of cell death. Morphologically, some of the main observed cellular alterations are condensation of the chromatin, degradation and spalling of the DNA, blebbing of the cell membrane and the formation of apoptotic bodies. These bodies can be identified in slides stained by hematoxilin and eosin with a fluorescent microscope, due to the eosinofluorescent property of the apoptotic cells. Like apoptosis, cellular proliferation also contributes to the tissue homeostasis. In the present study, we intend to evaluate the occurrence of apoptosis and cellular proliferation in 42 placentomes, collected from different animals in several gestacional phases (2-10 months of gestation), fixed in 4% paraformaldehyde, processed for embedding in paraplast and cut in sections, through immunohistochemistry (monoclonal antibody M30 CytoDeath; Cleaved Caspase-3; PCNA - antigen of nuclear proliferation). The presence of eosinofluorescent apoptotic bodies were also studied in the samples. M30 and Cleaved Caspase-3 allowed to show the occurrence of apoptosis in the uterine and trophoblastic ephitelium, in placental giant cells and, occasionally, in the fetal mesenquimal cells, in the uterine stroma and endothelium cells. There were no significant differences (p<0.05) between the adopted methods, although there were differences between the gestational phases studied. For M30, there was an increase of the number of apoptotic cells (p<0.05) from the first group (2-4.5 months) in relation to the fourth group of animals (9-10 months); for the Cleaved Caspase-3 there was a statistical significant increase (p<0.05) between the first three groups of animals (2-4.5; 5-6.5; and 7-8.5 months of gestation, respectively) and the last one. In relation to the PCNA, a decrease in the number of proliferative cells occurred from the first two groups of animals to the fourth group (p<0.05). The occurrence of eosinofluorescent apoptotic bodies was observed in all the samples studied . Our data suggest a relationship between apoptosis and the maturation, senescence and release of the ruminant placenta.