Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-12-14Bitstream added on 2014-06-13T18:45:09Z : No. of bitstreams: 1 gomezmanrique_w_dr_jabo.pdf: 1753834 bytes, checksum: 1a43467a4c0ad7c86178c2ffff0064b3 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A piscicultura está caracterizada pela alta densidade de estocagem, transporte e altos níveis de arraçoamento, alterando a qualidade de água e a homeostase dos peixes. Uma das principais características frente a estas alterações é a resposta geral de adaptação, aumentando a susceptibilidade dos peixes às doenças infecciosas e parasitárias ao mesmo tempo em que a má qualidade da água particularmente quando rica em matéria orgânica, favorece a proliferação de agentes com potencial. Um dos processos fisiopatológicos de grande importância para manter a saúde do hospedeiro é a resposta inflamatória aguda que se cronifica com a persistência do agente. O implante de lamínulas de vidro no tecido subcutâneo de peixes induz a resposta inflamatória crônica, apresentando acúmulo de macrófagos e formação de células gigantes multinucleadas. O inóculo do BCG induz intenso infiltrado mononuclear com desorganização do tecido causado por edema com dissociação das fibras musculares e necrose. O surgimento de células gigantes ocorre de forma progressiva e com o tempo estas aumentam de tamanho e número de núcleos formando células gigantes tipo corpo estranho. Com o avanço do processo a disposição dos macrófagos ao redor do inóculo é maior e surgem fibroblastos, linfócitos e na maioria dos casos presença de melanomacrófagos formando o granuloma. Neste trabalho objetivou-se caracterizar morfologicamente o processo inflamatório crônico por corpo estranho induzido pelo implante de lamínulas de vidro no tecido subcutâneo e o epitelióide induzido pelo inóculo de BCG em Piaractus mesopotamicus e Oreochromis niloticus. 180 peixes de cada gênero foram utilizados no estudo, divididos em quatro grupos de 45 cada. Os tratamentos foram: Inoculados, Implantados, Inoculado e Implantados e grupo controle. Nos grupos... / Fish farming is characterized by high stocking density, transport and high levels of feeding, changing water quality and fish homeostasis. A major characteristic of these changes is opposite the overall response adjustment, increasing the susceptibility of fish to infectious and parasitic diseases at the same time that poor water quality particularly when rich in organic matter, favors the proliferation of agents with potential. One of the pathophysiological processes of major importance for maintaining the health of the host is the acute inflammatory response that chronic the persistence of the agent. The implantation of glass coverslips in the subcutaneous tissue of fish induces chronic inflammatory response, with accumulation of macrophages and multinucleated giant cell formation. The inoculum of BCG induces intense mononuclear infiltrate with disruption caused by tissue dissociation with edema and necrosis of muscle fibers. The emergence of giant cells occurs gradually and over time they increase in size and number of cores forming giant cells of foreign body type. With the progress of the process layout of macrophages around the inoculum is larger and appear fibroblasts, lymphocytes and in most cases the presence of melanomacrophages forming the granuloma. This study aimed to characterize morphologically the chronic inflammatory process induced by foreign body implant glass slides in the subcutaneous tissue and epithelioid induced by inoculation of BCG in Piaractus mesopotamicus and Oreochromis niloticus. 180 fish in each sex were used in the study were divided into four groups of 45 each. The treatments were: inoculated, deployed, deployed and Inoculated and control group). In inoculated groups were given 20 μl of BCG vaccine (40 mg/mL) (n° bacilli than 2.0 x 106 CFU / mg of BCG strain Mureau Rio de Janeiro) in skeletal striated... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-01-14Bitstream added on 2014-06-13T19:57:03Z : No. of bitstreams: 1 000749034.pdf: 5348079 bytes, checksum: 102b0eda80cf87dbf991e962c48f519c (MD5) / Na avaliação da participação da insulina e dos efeitos da dexametasona sobre a resposta de tilápias do Nilo, Oreochromis niloticus, durante aerocistite induzida por Aeromonas hydrophila, foram utilizadas 189 tilápias com peso médio 532g (± 74g), constituindo nove tratamentos: Não tratado e Não inoculado (controle); Não tratado e inoculado; Tratado com insulina (INS) e inoculado; Tratado com INS + Aloxano (ALOX) e inoculado; Tratado com insulina (INS)+ dexametasona (DEXA) e inoculado; Tratado com ALOX e inoculado; Tratado com ALOX + DEXA e inoculado; Tratado DEXA e inoculado; Tratados com INS + ALOX + DEXA e inoculado. Após, seis, 24 e 48 horas após inóculo (HPI), as tilápias foram submetidas à anestesia profunda para colheita de sangue para determinação do hemograma completo e bioquímico sérico, assim como, obtenção de exsudato. Da mesma forma, foram realizados estudos dos índices somáticos hepáticos, esplênicos e renais, além do histopatológico destes mesmos órgãos. Contudo, as avaliações na aerocistite infecciosa revelaram o predomínio de neutrófilos no local inflamado, sendo esta alteração mais significativa 24 HPI, apresentando um padrão de inflamação aguda fibrinossupurativa na histopatologia. A neutrofilia apresentou correspondência com as alterações renais na porção cranial, sendo este resultado fortemente influenciado pela tratamento com insulina. O tratamento com dexametasona suprimiu a resposta imune inata das tilápias, resultando em linfopenia e monocitopenia, seguida pela ausência de macrófagos no exsudato durante a evolução da reação inflamatória infecciosa. Hiperglicemia e hipercolesterolemia em tilápias tratadas com dexametasona confirmaram o efeito glicocorticoide sobre o metabolismo intermediário dos peixes. A administração de aloxano resultou em alterações clínico-patológicos no globo ocular, tecido hepático e tecido... / For assessing the contribution of insulin and the dexamethasone effects on the response of Nile tilapia, Oreochromis niloticus, during Aeromonas hydrophila induced aerocistite, were used 189 tilapia mean weight 532g (± 74g) distributed in nine treatments: Untreated and not inoculated (control); Untreated and inoculated; Treated with insulin (INS) and inoculated; Treated with INS + alloxan (ALOX) and inoculated; Treated with insulin (INS) + dexamethasone (DEXA) and inoculated; Inoculated and treated with ALOX; Treated with ALOX + DEXA and inoculated; DEXA Treated and inoculated; Treated with INS + ALOX + DEXA and inoculated. After six, 24 and 48 hours post inoculation (HPI), tilapia were subjected to deep anesthesia for blood samples collection to determinate of complete blood count and serum biochemistry, as well as for obtaining exudate. Studies of liver, spleen and kidney somatic index were performed, and histopathology study was realized with the same organs. However, the infectious aerocistite revealed a predominance of neutrophils in the inflamed site, which was most significant at 24 HPI, with a pattern of fibrinossuppurative exudate, showing correspondence with renal changes in the cranial portion, principally in fish treated with insulin. The immunosuppressive effect of dexamethasone resulted in lymphopenia and monocytopenia, followed by the absence of macrophages in the exudate during the evolution of infectious inflammatory reaction. Hyperglycemia and hypercholesterolemia in dexamethasone treated tilapia confirmed the glucocorticoid effect on the intermediary metabolism. The administration of alloxan resulted in clinical and pathological changes in eyeball, liver tissue, skeletal muscle tissue, accompanied by increase in the amounts of glucose, triglycerides, cholesterol and serum alkaline phosphatase. The histopathology of cutaneous tissue and skeletal muscle in ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-08-29Bitstream added on 2014-06-13T20:17:34Z : No. of bitstreams: 1 petrillo_tr_me_jabo.pdf: 492481 bytes, checksum: e395c785498380ae608d079eac2b53f0 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este ensaio teve por objetivos avaliar o efeito da administração parenteral de dexametasona e fosfato de levamisol sobre a cinética de acúmulo de macrófagos e formação de gigantócitos em lamínulas de vidro, implantadas no tecido subcutâneo de pacus (Piaractus mesopotamicus), na tentativa de simular um estímulo estressante com imunossupressão e a possibilidade de compensa-la usando um imuoestimulante. Foram utilizados 147 peixes juvenis, distribuídos aleatoriamente em vinte e uma caixas de água plásticas de 250 L, contendo sete animais cada, constituindo os tratamentos: NV = não tratado; CL = controle; L 25 = levamisol (25 mg/kg), L 50 = levamisol (50 mg/kg) , D2 = dexametasona (2 mg/kg), D2+L25 = dexametasona (2 mg/kg + levamisol 25 mg/kg), D2+L50 = dexametasona (2 mg/kg + levamisol 50 mg/kg). Os pacus foram anestesiados em solução alcoólica de benzocaína (1:10000 v/v) e submetidos ao implante de lamínulas de vidro esterilizadas no tecido subcutâneo, quando administrou-se, por via intra-muscular, os fármacos de acordo com cada tratamento. Decorridos dois, sete e 15 dias pós-implante (DPI) os peixes foram novamente anestesiados para coleta de sangue e eutanasiados (solução alcoólica de benzocaína, 1:500 v/v) para a retirada das lamínulas. O sangue destinou-se aos exames hematológicos e as lamínulas à avaliação da cinética do acúmulo de macrófagos e formação de gigantócitos. Os resultados foram analisados pelo teste de Tukey, a 5% de probabilidade e demonstraram que ao longo do período experimental observou-se redução do número de eritrócitos e taxa de hemoglobina associadas ao aumento do volume corpuscular médio, quadro que sugere ligeira anemia macrocítica. Na avaliação da cinética de acúmulo celular sobre a lamínula, as maiores contagens de macrófagos isolados ocorreram sete dias após... / The aim of this study was to investigate the effect of parenteral administration of dexamethasone and levamisole phosphate on the kinetics of accumulation of macrophages and formation of giant cells in glass cover slips implanted in subcutaneous tissue of pacu (Piaractus mesopotamicus) to simulate a stressful stimulus with immunosuppression and the possibility to compensate for it using an immunostimulant. We used 147 juvenile fish, randomly divided in twenty-one plastic water tanks of 250 L, containing seven animals each: NV = not treated, and CL = control, L25 = levamisole (25 mg / kg), L 50 = levamisole (50 mg / kg), D2 = dexamethasone (2 mg / kg), D2 + L25 = dexamethasone (2 mg / kg + levamisole 25 mg / kg), D2 + L50 = dexamethasone (2 mg / kg + levamisole 50 mg / kg). Fish were anesthetized with an alcoholic solution of benzocaine (1:10,000 v / v), implanted with sterile glass cover slips at subcutaneous tissue and were administered intra-muscular drugs, according of each treatment. After two, seven and 15 days post-implantation (DPI) fish were anesthetized for blood collection and euthanized (alcoholic solution of benzocaine, 1:500 v / v) to remove the glass cover slips. The blood was used for hematological tests and the glass cover slips to assess the kinetics of accumulation of macrophages and formation of giant cells. Statistical analyses were performed using 5% Tukey test and was observed reduction in the number of erythrocytes and hemoglobin associated with increase of mean corpuscular volume, suggesting slight macrocytic anemia. Kinetic evaluation of cell accumulation on glass cover slip, the highest number of isolated macrophages occurred at seven days after implantation in all groups, associated with increased formation of policariontes cells regardless of the number of cores. The dexamethasone... (Complete abstract click electronic access below)

O presente trabalho teve como objetivo estudar a morfologia e fisiologia reprodutiva de Lobotes surinamensis em ambiente natural, reunindo informações que permitam trabalhos aplicados na produção e conservação desta espécie. Machos e fêmeas adultos foram coletados na Baía da Ilha Grande, Rio de Janeiro durante a primavera (outubro-novembro-dezembro), verão (janeiro-fevereiro-março), outono (abril-maio-junho) e inverno (julho-agosto-setembro). Os perfis plasmáticos dos esteroides gonadais, 17β-estradiol (E2), 17-hidroxiprogesterona (17-OHP) e 11-cetotestosterona (11-KT) foram analisados em fêmeas, e a concentração de testosterona (T) e 11-KT nos machos. Análises histológicas das gônadas foram realizadas como uma ferramenta para avaliação morfológica, que foi corroborada com os dados fisiológicos, durante o ciclo reprodutivo. Foram analisadas ainda a expressão gênica hipofisária do fshβ e lhβ e a fecundidade relativa pelo número de oócitos desenvolvidos. Durante a primavera e verão, as fêmeas estavam com os ovários desenvolvidos e capazes de desovar, com oócitos vitelogênicos e desenvolvidos, e membrana radiata bem evidente. No outono e inverno, as fêmeas estavam se preparando para o período reprodutivo, com predomínio de ninhos de oogônias e oócitos perinucleolares de uma forma geral. A concentração plasmática de E2 se manteve elevada nas fêmeas durante a primavera em relação ao verão e outono/inverno. O perfil anual deste esteroide nas fêmeas de L. surinamensis pode ser relacionado com o grau de desenvolvimento do folículo ovariano, observado na histologia. Já a concentração plasmática de 11-KT foi inversa ao observado para o E2, com baixa concentração na primavera e tendência à elevação no inverno, corroborando com o papel da 11-KT no crescimento primário dos oócitos. A concentração plasmática de 17-OHP nas fêmeas não apresentou diferenças significativas entre as estações, o que sugere que este não seja o progestágeno ativo em teleósteos, mas sim o precursor do esteroide indutor da maturação final (MIS). Na primavera e no verão, o lhβ apresentou expressão maior do que no período outono/inverno em fêmeas, enquanto o fshβ se manteve com níveis de expressão constante durante todas as estações. Nos machos, a análise histológica dos testículos, mostrou que na primavera e no verão, os ductos espermáticos estavam preenchidos com espermatozoides, evidenciando o período de espermiação, já no período outono/inverno houve predominância de cistos de espermatogônias e as células em diferentes estágios de desenvolvimento, o que corresponde a uma fase de maturação inicial, ou seja, preparação para o período reprodutivo. A concentração plasmática de T nos machos se manteve estável ao longo das estações, já a concentração plasmática de 11-KT foi mais elevada na primavera quando comparada ao período outono/inverno. Na primavera e verão, a expressão de lhβ foi mais elevada que no período outono/inverno, enquanto de forma similar às fêmeas, os níveis de expressão de fshβ não se alteraram ao longo das estações. As análises de expressão destas gonadotropinas, associadas à concentração dos esteroides gonadais e à morfologia gonadal deixou evidente que o pico do período reprodutivo de L. surinamensis ocorre na primavera, estendendo-se até o verão / The present study aimed to study the morphology and reproductive physiology of Lobotes surinamensis in a natural environment, gathering information that allows applied works in the production and conservation of this species. Adult males and females were collected in the Baía da Ilha Grande, Rio de Janeiro during the spring (October-November-December), summer (January-February-March), autumn (April- May-June) and winter (July-August-September). Plasma profiles of gonadal steroids, 17β-estradiol (E2), 17-hydroxyprogesterone (17-OHP) and 11-ketotestosterone (11-KT) were analyzed in females, and the concentration of testosterone (T) and 11-KT in males. Histological analyzes of the gonads were performed as a tool for morphological evaluation, which was corroborated with the physiological data, during the reproductive cycle. The genetic expression of fshβ and lhβ and the relative fecundity by the number of developed oocytes were also analyzed. During spring and summer, the females had the ovaries developed and capable of spawning, with vitellogenic and developed oocytes, and a well evident radiata zone. In autumn and winter, females were preparing for the reproductive period, with a predominance of nest of oogonia and perinucleolar oocytes in general. The plasma concentration of E2 remained higher in females during the spring in relation to summer and autumn/winter. The annual profile of this steroid in L. surinamensis females may be related to the degree of development of the ovarian follicle observed in histology. The plasma concentration of 11-KT was inversely of that observed for E2, with a low concentration in the spring and a tendency to increase in winter/autumn, corroborating the role of 11-KT in the primary oocyte growth. The plasma concentration of 17-OHP in the females did not present significant differences between the seasons, suggesting that this is not the active progestogen in teleosts, but the precursor of the final maturation inducing steroid (MIS). In spring and summer, lhβ presented higher gene expression than in the autumn/winter period in females, while fshβ remained with constant expression levels during all seasons. In males, the histological analysis of the testicles showed that in the spring and summer, the sperm ducts were filled with spermatozoa, evidencing the period of spermiation, whereas in the autumn/winter period there was a predominance of cysts of spermatogonia and cells in different stages of. development, which corresponds to an initial maturation stage, that is, the preparation for the reproductive period. The plasma concentration of T in males remained stable throughout the seasons, whereas the plasma concentration of 11-KT was higher in the spring when compared to the autumn/winter period. In spring and summer, the expression of lhβ was higher than in the autumn/winter period, while similarly to females, fshβ expression levels did not change over the seasons. The analysis of the expression of these gonadotropin genes, associated with the concentration of gonadal steroids and gonadal morphology, made it evident that the peak of the reproductive period of L. surinamensis occurs in the spring, extending until the summer

O estresse causa modificações no epitélio intestinal, tais como o aumento de células caliciformes e da taxa de apoptose. O uso de alimentos nutracêuticos tem sido uma alternativa para amenizar essas modificações sobre o tecido epitelial. Desta forma, este trabalho teve como objetivo avaliar se a inclusão de colostro bovino, o qual é constituído de fatores antioxidantes, imunes e de crescimento, seria capaz de amenizar as consequências do estresse crônico sob o intestino. Para isso, juvenis de pacu (Piaractus mesopotamicus) adensados a 50 kg/m3 foram alimentados duas vezes ao dia até a saciedade com ração peletizada e semi-purificada sem (0%CBL) e com a inclusão de colostro bovino liofilizado em concentrações crescentes (10, 20 e 30%CBL), (n=4). Após 28 dias, foram coletados segmentos do intestino médio, S1 e S2, e reto. Os tecidos foram marcados com corantes histológicos para a quantificação de células caliciformes contendo mucinas neutras, ácidas (incluindo sialo e sulfomucinas) e ácidas-neutras. Também foram mensurados o volume (Vv) e a densidade da superfície (Sv) da mucosa, por análise estereológica, e a espessura da camada muscular. A razão do número de cada tipo e subtipo de célula caliciforme sobre o Vv e Sv foi calculada para estimar a densidade de células caliciformes, Dv e Ds, respectivamente. A taxa apoptótica foi analisada qualitativamente através da intensidade (alta, média e baixa) da imunomarcação da caspase-3 nas células epiteliais. As dietas não influenciaram os parâmetros zootécnicos analisados (P>0,05). No reto, os grupos que receberam 20 e 30%CBL apresentaram menor número de células caliciformes contendo sulfomucinas e menor Ds em relação a 0 e 10% (P=0,0148 e 0,0198, respectivamente). No RT, Dv total e Dv de células caliciformes contendo mucinas ácidas foi maior em 0 e 30%CBL em relação a 20%CBL (P=0,0155 e 0,225, respectivamente). No S1, 10 e 30%CBL apresentaram maior Dv em relação a 20%CBL (P=0,0540). A espessura da camada muscular, o Vv e a Sv não diferiram entre os tratamentos (P>0,05). No S2 e RT, a taxa de apoptose teve relação inversa à concentração de colostro bovino liofilizado adicionado na ração. Nos três segmentos, houve maior proporção de células caliciformes contendo mucinas ácidas do que neutras, sendo a maioria representada por sulfomucinas. Assim, a inclusão de colostro bovino liofilizado nas rações de juvenis de pacu adensados diminuiu a apoptose nos segmentos intestinais S2 e RT e também diminuiu o número de células caliciformes contendo sulfomucinas no RT, indicando que o colostro bovino liofilizado pode ser utilizado como alimento nutracêutico para pacus (Piaractus mesopotamicus) adensados, a fim de diminuir a taxa apoptótica e proteger o intestino contra enzimas bacterianas, uma das principais funções das sulfomucinas. / The stress causes changes in the intestinal epithelium, such as the increase in the number of goblet cells and on the rate of apoptosis. The use of nutraceutical foods has been an alternative to soften these modifications on the epithelial tissue. Thus, this study aimed to evaluate if the inclusion of bovine colostrum, which is composed of antioxidant, immune and growth factors, would be able to attenuate the consequences of chronic stress on the intestine. For this, pacu juveniles (Piaractus mesopotamicus), stocked at density of 50 kg/m3, were fed twice daily until satiety with pelleted and semi-purified diet without (0% LBC) and with the inclusion of lyophilized bovine colostrum in increasing concentrations (10, 20 and 30% LBC), (n = 4). After 28 days, segments of the middle gut, S1 and S2, and rectum (RT) were collected. The tissues were stained with histological dyes for the quantification of goblet cells containing neutral, acidic (including sialo and sulphomucins) and acid-neutral mucins. The volume (Vv) and surface density (Sv) of the mucosa were also measured by stereological analysis and the thickness of the muscular layer. The ratio between the number of each goblet cell type and subtype and the Vv or Sv was calculated to estimate the density of goblet cells, Dv and Ds, respectively. The apoptotic rate was analyzed qualitatively according to the intensity (high, medium and low) of caspase-3 immunostaining in epithelial cells. The diets did not influence the zootechnical parameters analyzed (P> 0.05). In the rectum, the groups that received 20 and 30% LBC presented lower number of goblet cells containing sulphomucins and lower Ds in relation to 0 and 10% (P = 0.0148 and 0.0198, respectively). In RT, total Dv and Dv of goblet cells containing acid mucins were higher in 0 and 30% LBC in relation to 20% LBC (P = 0.0155 and 0.225, respectively). In S1, 10 and 30% LBC presented higher Dv in relation to 20% LBC (P = 0.0540). Muscle layer thickness, Vv and Sv did not differ between treatments (P> 0.05). In S2 and RT, the rate of apoptosis was inversely related to the concentration of lyophilized bovine colostrum added in the diet. In the three segments, there was higher proportion of goblet cells containing acidic than neutral mucins, most of them being sulphomucins. Thus, the inclusion of lyophilized bovine colostrum in diets of pacu juveniles reduced apoptosis in the intestinal segments S2 and RT and also decreased the number of goblet-containing sulphomucins in the RT, indicating that lyophilized bovine colostrum can be used as a nutraceutical feed for pacus (Piaractus mesopotamicus) under high stocking density to decrease the apoptotic rate and protect the intestine against bacterial enzymes, one of the main functions of sulphomucins.

O estresse causa modificações no epitélio intestinal, tais como o aumento de células caliciformes e da taxa de apoptose. O uso de alimentos nutracêuticos tem sido uma alternativa para amenizar essas modificações sobre o tecido epitelial. Desta forma, este trabalho teve como objetivo avaliar se a inclusão de colostro bovino, o qual é constituído de fatores antioxidantes, imunes e de crescimento, seria capaz de amenizar as consequências do estresse crônico sob o intestino. Para isso, juvenis de pacu (Piaractus mesopotamicus) adensados a 50 kg/m3 foram alimentados duas vezes ao dia até a saciedade com ração peletizada e semi-purificada sem (0%CBL) e com a inclusão de colostro bovino liofilizado em concentrações crescentes (10, 20 e 30%CBL), (n=4). Após 28 dias, foram coletados segmentos do intestino médio, S1 e S2, e reto. Os tecidos foram marcados com corantes histológicos para a quantificação de células caliciformes contendo mucinas neutras, ácidas (incluindo sialo e sulfomucinas) e ácidas-neutras. Também foram mensurados o volume (Vv) e a densidade da superfície (Sv) da mucosa, por análise estereológica, e a espessura da camada muscular. A razão do número de cada tipo e subtipo de célula caliciforme sobre o Vv e Sv foi calculada para estimar a densidade de células caliciformes, Dv e Ds, respectivamente. A taxa apoptótica foi analisada qualitativamente através da intensidade (alta, média e baixa) da imunomarcação da caspase-3 nas células epiteliais. As dietas não influenciaram os parâmetros zootécnicos analisados (P>0,05). No reto, os grupos que receberam 20 e 30%CBL apresentaram menor número de células caliciformes contendo sulfomucinas e menor Ds em relação a 0 e 10% (P=0,0148 e 0,0198, respectivamente). No RT, Dv total e Dv de células caliciformes contendo mucinas ácidas foi maior em 0 e 30%CBL em relação a 20%CBL (P=0,0155 e 0,225, respectivamente). No S1, 10 e 30%CBL apresentaram maior Dv em relação a 20%CBL (P=0,0540). A espessura da camada muscular, o Vv e a Sv não diferiram entre os tratamentos (P>0,05). No S2 e RT, a taxa de apoptose teve relação inversa à concentração de colostro bovino liofilizado adicionado na ração. Nos três segmentos, houve maior proporção de células caliciformes contendo mucinas ácidas do que neutras, sendo a maioria representada por sulfomucinas. Assim, a inclusão de colostro bovino liofilizado nas rações de juvenis de pacu adensados diminuiu a apoptose nos segmentos intestinais S2 e RT e também diminuiu o número de células caliciformes contendo sulfomucinas no RT, indicando que o colostro bovino liofilizado pode ser utilizado como alimento nutracêutico para pacus (Piaractus mesopotamicus) adensados, a fim de diminuir a taxa apoptótica e proteger o intestino contra enzimas bacterianas, uma das principais funções das sulfomucinas. / The stress causes changes in the intestinal epithelium, such as the increase in the number of goblet cells and on the rate of apoptosis. The use of nutraceutical foods has been an alternative to soften these modifications on the epithelial tissue. Thus, this study aimed to evaluate if the inclusion of bovine colostrum, which is composed of antioxidant, immune and growth factors, would be able to attenuate the consequences of chronic stress on the intestine. For this, pacu juveniles (Piaractus mesopotamicus), stocked at density of 50 kg/m3, were fed twice daily until satiety with pelleted and semi-purified diet without (0% LBC) and with the inclusion of lyophilized bovine colostrum in increasing concentrations (10, 20 and 30% LBC), (n = 4). After 28 days, segments of the middle gut, S1 and S2, and rectum (RT) were collected. The tissues were stained with histological dyes for the quantification of goblet cells containing neutral, acidic (including sialo and sulphomucins) and acid-neutral mucins. The volume (Vv) and surface density (Sv) of the mucosa were also measured by stereological analysis and the thickness of the muscular layer. The ratio between the number of each goblet cell type and subtype and the Vv or Sv was calculated to estimate the density of goblet cells, Dv and Ds, respectively. The apoptotic rate was analyzed qualitatively according to the intensity (high, medium and low) of caspase-3 immunostaining in epithelial cells. The diets did not influence the zootechnical parameters analyzed (P> 0.05). In the rectum, the groups that received 20 and 30% LBC presented lower number of goblet cells containing sulphomucins and lower Ds in relation to 0 and 10% (P = 0.0148 and 0.0198, respectively). In RT, total Dv and Dv of goblet cells containing acid mucins were higher in 0 and 30% LBC in relation to 20% LBC (P = 0.0155 and 0.225, respectively). In S1, 10 and 30% LBC presented higher Dv in relation to 20% LBC (P = 0.0540). Muscle layer thickness, Vv and Sv did not differ between treatments (P> 0.05). In S2 and RT, the rate of apoptosis was inversely related to the concentration of lyophilized bovine colostrum added in the diet. In the three segments, there was higher proportion of goblet cells containing acidic than neutral mucins, most of them being sulphomucins. Thus, the inclusion of lyophilized bovine colostrum in diets of pacu juveniles reduced apoptosis in the intestinal segments S2 and RT and also decreased the number of goblet-containing sulphomucins in the RT, indicating that lyophilized bovine colostrum can be used as a nutraceutical feed for pacus (Piaractus mesopotamicus) under high stocking density to decrease the apoptotic rate and protect the intestine against bacterial enzymes, one of the main functions of sulphomucins.

In general, fish spermatozoa are immotile in the testis. Movement is activated due to the osmotic shock (hypo- or hyperosmotic, depending on fish origin: freshwater or sea water species) experienced when they are released into the external medium. However, there is no consensus regarding the mechanisms that occur after activation. The aim of this project was to study the importance of the environmental ions and proteins on the activation of European eel sperm, and to apply this knowledge to the improvement of sperm quality preservation. Our results demonstrated that there was a notable reduction in sperm motility when either Na+ or K+ was removed from the seminal plasma, but not when they were removed from the activation media. Therefore, our results demonstrated that the presence of Na+ or K+ in the seminal plasma is necessary for the preservationof sperm motility in European eel. However, the presence of Na+ or K+ in the activation media is not essential for the initiation of sperm activation. In contrast, the presence of the ion Ca2+ in the seminal plasma (or the activation media) was not essential for sperm motility activation in this fish species. Moreover, several authors have hypothesised that the hyperosmotic aquatic environment causes an efflux of water through the spermatozoa membrane, and this efflux causes an increase in the intracellular ion concentration (due to the decrease in cellular volume). However, this hypothesis has never been proven. In this study, sperm size (sperm head area) was studied pre- and post-activation in sea water, and in different conditions. For the first time in a marine fish, a significant decrease in sperm head area post activation in sea water was demonstrated. Also the results of this thesis show a notable reduction in sperm head area when either Na+ or K+ was removed from the seminal plasma, as well as a marked reduction in motilityed. Thus, our results demonstrate that the presence of K+ and Na+ in the seminal plasma is important for the preservation of sperm motility in the European eel, at least in part by maintaining the right sperm cell volume in the quiescent stage. In the this study, a method for the quantitative analysis of the intracellular [Na+ ] ([Na+ ]i) and pH (pHi) levels of eel sperm was created, and used to study the variations in [Na+ ]i (for first time in a marine fish) and pHi during motility activation. The pHi in the quiescent stage was 1.3 units lower than the pH of the seminal plasma, indicating that a H+ gradient exists in the quiescent stage, with higher [H+ ]i levels than those found in the seminal plasma; an important difference for sperm motility. In contrast, the results show that Na+ levels are the same both outside and inside the spermatozoa in the quiescent stage. Our results demonstrate that for sperm motility activation to be successful, the pHi should be lower than the seminal plasma pH and lower or equal to the activation media pH. The absolute [Na+ ]i concentration of marine fish spermatozoa was 1.5 times higher after motility activation than in the quiescent stage, and this increase in intracellular Na+ after activation could be caused both by a cell volume decrease and by the influx of external Na+ . Regarding the ion Ca2+, our results strongly suggest that an increase in intracellular [Ca2+ ] SUMMARY 2 ([Ca2+]i) is not a pre-requisite for the initiation of sperm motility in European eel sperm. Nevertheless several sperm velocity parameters (VCL, VSL, VAP) decreased in the absence of Ca2+ , thus supporting the theory that Ca2+ has a modulatory effect on sperm motility. In addition, it appears that th / En general, los espermatozoides de los peces se encuentran inactivos en los testículos. La activación de los espermatozoides se produce mediante choque osmótico (hipo o hiperosmótico, según se trate de especies de peces de agua dulce o marinos), cuando son liberados en el medio externo. Sin embargo, no existe un consenso sobre el mecanismo fisiológico que ocurre tras la activación espermática. El objetivo de este trabajo es estudiar la importancia de iones y proteínas presentes en el medio, en la activación del esperma de la anguila europea, y aplicar éste conocimiento a la mejora de la preservación de esperma. Así pues, este trabajo se centra en estudiar la importancia que tienen los iones Ca2+, K+, Na+, H+ tanto en el plasma seminal como en el medio activador, y su función en la activación de la motilidad espermática. Así pues, nuestros resultados demostraron que la presencia de Na+ o K + en el plasma seminal (diluyente) fue necesaria para preservar la motilidad espermática en la anguila europea. Sin embargo, la presencia de Na+ o K + en el medio activador no es esencial para la activación espermática. En contra, la presencia del ion Ca2+ tanto en el plasma seminal como en el medio activador no es esencial para la activación espermática en la anguila europea. Además, algunos autores han sugerido que el medio acuático hiperosmótico causa una salida de agua a través de la membrana del espermatozoide, y ésta salida causa un incremento en la concentración de iones intracelulares (provocada por un descenso del volumen celular). Sin embrago, dicha hipótesis no ha sido demostrada. En este trabajo, se ha estudiado los cambios que se producen en el tamaño del espermatozoide (área de la cabeza) durante la pre- y post- activación tanto en agua de mar, como en diferentes condiciones. Por primera vez en una especie de agua marina, se ha demostrado un descenso significativo en el área de la cabeza tras la activación con agua de mar. Además, los resultados de esta tesis también mostraron una importante reducción en el área de la cabeza del espermatozoide cuando Na+ o K+ fueron eliminados del plasma seminal, al igual que una importante reducción de la motilidad espermática. Por lo tanto, nuestros resultados demostraron que la presencia de Na+ y K + en el plasma seminal es importante para la preservación de la motilidad espermática en la anguila europea, en parte debido al mantenimiento de un volumen celular adecuado en estado quiescente. En el presente trabajo, se ha desarrollado un método cuantitativo de análisis de [Na+ ] ([Na+ ]i) y pH (pHi) intracelulares para el esperma de la anguila europea, y mediante el uso de esta metodología se han estudiado las variaciones de [Na+ ]i (por primera vez en un pez marino) y pHi durante la activación espermática en la anguila europea. El pHi en estado quiescente fue 1.3 unidades menor que el pH del plasma seminal, demostrando la existencia de un gradiente de H+ en estado quiescente mayor que la [H+ ]i en el plasma seminal, siendo dicha diferencia importante para la motilidad espermática. En cambio, se observó un equilibrio de Na+ dentro y fuera del espermatozoide en estado quiescente. Nuestros resultados mostraron que para una correcta activación de la motilidad, el pHi debería de ser menor que el pH del plasma seminal y menor o igual que el pH del medio RESUMEN 4 activador. Después de la activación espermática, la concentración de [Na+ ]i en términos absolutos del espermatozoide de un pez marino fue 1.5 veces mayor que en estado quiescente. Este incremento en Na+ intracelular después de la activación podría ser causado tanto por / En general, els espermatozoides dels peixos es troben inactius als testicles. L'activació dels espermatozoides es produeix per mitjà d'un xoc osmòtic (hipo o hiperosmòtic, segons es tracte d'espècies de peixos d'aigua dolça o marins) quan són alliberats a l'exterior. No obstant això, no hi ha un consens sobre el mecanisme fisiològic que ocorre després de l'activació espermàtica. L'objectiu d'aquest treball fou estudiar la importància dels ions i proteïnes presents en el mig en l'activació de l'esperma d'anguila europea, i aplicar aquest coneixement a la millora de la preservació de l'esperma. . Així doncs, els nostres resultats van demostrar que la presència de Na+ o K+ en el plasma seminal va ser necessària per a preservar la motilitat espermàtica en anguila europea. No obstant això, la presència de Na+ o K+ en el mig activador no fou essencial per a l'activació espermàtica. En contra, la presència de l'ió Ca2+ tant en el plasma seminal com en el mig activador no fou essencial per a l'activació espermàtica en anguila europea. A més, alguns autors han suggerit que el medi aquàtic hiperosmòtic causa una eixida d'aigua a través de la membrana de l'espermatozoide, i aquesta eixida causa un increment en la concentració d'ions intracel¿lulars (provocada per un descens del volum cel¿lular). No obstant, aquesta hipòtesi encara no ha sigut demostrada. En aquest treball, s'han estudiat els canvis que es produeixen en la grandària de l'espermatozoide (àrea del cap) durant la pre- i post- activació tant en aigua de mar, com en diferents condicions. Per primera vegada en una espècie d'aigua marina, s'ha demostrat un descens significatiu en l'àrea del cap després de l'activació amb aigua de mar. A més, els resultats d'aquesta tesi també van mostrar una important reducció en l'àrea del cap de l'espermatozoide quan Na+ o K+ van ser eliminats del plasma seminal, igual que una important reducció de la motilitat espermàtica. Per tant, els nostres resultats van demostrar que la presència de Na+ i K+ en el plasma seminal és important per a la preservació de la motilitat espermàtica en anguila europea, en part a causa del manteniment d'un volum cel¿lular adequat en estat quiescent. En el present treball, s'ha desenvolupat un mètode quantitatiu d'anàlisi de [Na+ ] ([Na+ ]i) i pH (pHi) intracel¿lulars per a l'esperma d'anguila europea, i per mitjà de l'ús d'aquesta metodologia s'han estudiat les variacions de [Na+ ]i (per primera vegada en un peix marí) i pHi durant l'activació espermàtica en anguila europea. El fi en estat quiescent va ser 1.3 unitats menor que el pH del plasma seminal, demostrant l'existència d'un gradient de H+ en estat quiescent major que la [H+ ]i en el plasma seminal, sent aquesta diferència important per a la motilitat espermàtica. En canvi, es va observar un equilibri de Na+ dins i fora de l'espermatozoide en estat quiescent. Els nostres resultats van mostrar que per a una correcta activació de la motilitat, el pHi deuria ser menor que el pH del plasma seminal i menor o igual que el pH del mig activador. Després de l'activació espermàtica, la concentració de [Na+ ]i en termes absoluts de l'espermatozoide d'un peix marí va ser 1.5 vegades major que en estat quiescent. Aquest RESUM 6 increment en Na+ intracel¿lular després de l'activació podria ser causat tant per un descens en el volum cel¿lular com per un flux d'entrada de Na+ de l'exterior. Respecte a l'ió Ca2+ , / Vílchez Olivencia, MDC. (2017). Influence of the ionic and protein environment on sperm motility activation in the European eel [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/90408 / TESIS

Após a reprodução de Astyanax altiparanae, foram obtidas larvas e juvenis da espécie, os quais foram coletados desde a eclosão até 120 dias após a eclosão (dpe). Por meio de métodos histoquímicos e imuno-histoquímica foram detectadas a neuro (NH) e adeno-hipófise (AH). Nas 3 regiões da AH, rostral (RPD) e proximal (PPD) pars distalis, e pars intermedia (PI), foram encontrados 8 tipos celulares produtores de hormônios, sendo, na RPD, as células produtoras de ACTH e PRL; na PPD, GTH (FSH e LH), GH e TSH; e na PI, MSH e SL. As prolactínicas foram as primeiras células identificadas com 1 dpe no início da formação da glândula. A NH foi diferenciada com 3 dpe junto com as células produtoras de ACTH, MSH, TSH e FSH. A identificação das células produtoras de LH, SL e GH ocorreu com 5 dpe. Com 20 dpe houve um grande aumento da hipófise e o aparecimento do pedúnculo. Com 60 dpe a hipófise apresentou-se semelhante à observada nos adultos. Os resultados desta pesquisa colaboram para o conhecimento do eixo hipotálamo-hipófise-gônada em teleósteos sul-americanos. / After reproduction of A. altiparanae, was made larvae and juveniles of this specie, were collected from zero to 120 days post hatching (dph). By histochemical and immunohistochemical techniques were detected neuro (NH) and adenohypophysis (AH). In 3 regions of AH, rostral (RPD), proximal (PPD) pars distalis and in pars intermedia (PI), eight producing hormones cell types are distinguished, being, in the RPD, ACTH and PRL producing cells; in PPD, GTH (FSH and LH), GH and TSH; and in the PI, MSH and SL. The first cells identified were prolactins at 1dph, in the beginning of the formation of the gland. NH differentiated at 3dph along with identification of ACTH, MSH, TSH and FSH producing cells. The identification of LH, SL and GH producing cells was possible at 5dph. At 20dph, there was a large increase in the pituitary, and it was observed the presence of the pituitary stalk. At 60 dph the pituitary showed a similar morphology to that observed in adults. The results of this research collaborate to knowledge of the hypothalamic-pituitary-gonadal axis in South American teleosts.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-07-20Bitstream added on 2014-06-13T18:56:54Z : No. of bitstreams: 1 claudiano_gs_me_jabo.pdf: 778732 bytes, checksum: c2e3587b8838e9676707fe996742c881 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Neste trabalho, investigou-se a cinética das alterações vasculares e celulares na aerocistite, induzida pela inoculação da Aeromonas hydrophila inativada em Piaractus mesopotamicus e inibição da atividade enzimática da fosfolipase A2 e ciclooxigenase na inflamação aguda. Para tanto, foram utilizadas a indometacina, meloxicam e a dexametasona, aplicados por via parenteral, 30 minutos antes do estímulo lesivo. As alterações de permeabilidade vascular foram avaliadas nos tempos de 30, 90, 120, 180 e 240 minutos pós-estímulo, observando-se que o máximo da exsudação plasmática ocorre com 180 MPE. O pré-tratamento com indometacina ou meloxicam, neste tempo, inibiu significativamente o aumento de permeabilidade vascular e a dexametasona apresentou um bloqueio mais precoce e efetivo do que os outros AINES, inibindo nos tempos de 120 e 180 MPE. O exsudato celular inflamatório foi avaliado seis, 24 e 48 horas após estímulo, verificando-se que a inoculação da bactéria causou aumento progressivo do acúmulo de células, atingindo o máximo após 24 HPE, sendo maior que nos outros grupos estudados. Neste tempo, verificou-se que todas as drogas testadas foram efetivas para a redução significativa do acúmulo celular. A contagem diferencial das células presentes no foco inflamado demonstrou predomínio de linfócitos e trombócitos, seguida de macrófagos e granulócitos, com acúmulo mais tardio destas últimas. O pré-tratamento com indometacina e dexametasona causou bloqueio no acúmulo de todas as células identificadas. Os resultados demonstraram que, entre as diferentes doses de cada droga testada, não foram observadas diferenças significativas. As avaliações sugeriram que os eicosanoides, assim como acontece em mamíferos, participam ativamente dos fenômenos vasculares e têm papel relevante na quimiotaxia de leucócitos / In this teaching we investigated the kinetics of vascular and cellular changes in aerocistite induced by inoculation of inactivated Aeromonas hydrophila in Piaractus mesopotamicus and pharmacological effect of the enzymatic activity of phospholipase A2 and cyclooxygenase in acute inflammation. To this end, we used indomethacin, meloxicam and dexamethasone, applied intraparenteral 30 minutes before stimulation harmful. Changes in vascular permeability were evaluated in 30, 90, 120, 180 and 240 minutes post-stimulation, we observed that the maximum plasma exudation occurs with 180 MPE and pretreatment with indomethacin or meloxicam at this time significantly inhibited the increase vascular permeability and dexamethasone had a lock early and effective than other NSAIDs inhibited at 120 and 180MPE. The cellular inflammatory exudate was assessed with six, 24 and 48 hours after stimulation, verifying that the bacteria caused a progressive increase in accumulation of cells, peaking at 24 HPE, higher than the other groups analyzed, and this time all tested drugs were effective in significantly reducing the buildup. The differential count of cells present in the exudate showed a predominance of lymphocytes and thrombocytes, and granulocyte macrophage followed with a later accumulation of the latter. Pretreatment with indomethacin and dexamethasone caused a blockage in the migration of all cells evaluated. The results showed that among the different doses of each drug tested was not observed any significant difference. Analysis of those exposed, suggest that eicosanoids, with in mammals, participate actively in the vascular phenomena and has important role in chemotaxis of leukocytes in acute inflammatory process induced by A. hydrophila in pacu

Resumo: Neste trabalho, investigou-se a cinética das alterações vasculares e celulares na aerocistite, induzida pela inoculação da Aeromonas hydrophila inativada em Piaractus mesopotamicus e inibição da atividade enzimática da fosfolipase A2 e ciclooxigenase na inflamação aguda. Para tanto, foram utilizadas a indometacina, meloxicam e a dexametasona, aplicados por via parenteral, 30 minutos antes do estímulo lesivo. As alterações de permeabilidade vascular foram avaliadas nos tempos de 30, 90, 120, 180 e 240 minutos pós-estímulo, observando-se que o máximo da exsudação plasmática ocorre com 180 MPE. O pré-tratamento com indometacina ou meloxicam, neste tempo, inibiu significativamente o aumento de permeabilidade vascular e a dexametasona apresentou um bloqueio mais precoce e efetivo do que os outros AINES, inibindo nos tempos de 120 e 180 MPE. O exsudato celular inflamatório foi avaliado seis, 24 e 48 horas após estímulo, verificando-se que a inoculação da bactéria causou aumento progressivo do acúmulo de células, atingindo o máximo após 24 HPE, sendo maior que nos outros grupos estudados. Neste tempo, verificou-se que todas as drogas testadas foram efetivas para a redução significativa do acúmulo celular. A contagem diferencial das células presentes no foco inflamado demonstrou predomínio de linfócitos e trombócitos, seguida de macrófagos e granulócitos, com acúmulo mais tardio destas últimas. O pré-tratamento com indometacina e dexametasona causou bloqueio no acúmulo de todas as células identificadas. Os resultados demonstraram que, entre as diferentes doses de cada droga testada, não foram observadas diferenças significativas. As avaliações sugeriram que os eicosanoides, assim como acontece em mamíferos, participam ativamente dos fenômenos vasculares e têm papel relevante na quimiotaxia de leucócitos / Abstract: In this teaching we investigated the kinetics of vascular and cellular changes in aerocistite induced by inoculation of inactivated Aeromonas hydrophila in Piaractus mesopotamicus and pharmacological effect of the enzymatic activity of phospholipase A2 and cyclooxygenase in acute inflammation. To this end, we used indomethacin, meloxicam and dexamethasone, applied intraparenteral 30 minutes before stimulation harmful. Changes in vascular permeability were evaluated in 30, 90, 120, 180 and 240 minutes post-stimulation, we observed that the maximum plasma exudation occurs with 180 MPE and pretreatment with indomethacin or meloxicam at this time significantly inhibited the increase vascular permeability and dexamethasone had a lock early and effective than other NSAIDs inhibited at 120 and 180MPE. The cellular inflammatory exudate was assessed with six, 24 and 48 hours after stimulation, verifying that the bacteria caused a progressive increase in accumulation of cells, peaking at 24 HPE, higher than the other groups analyzed, and this time all tested drugs were effective in significantly reducing the buildup. The differential count of cells present in the exudate showed a predominance of lymphocytes and thrombocytes, and granulocyte macrophage followed with a later accumulation of the latter. Pretreatment with indomethacin and dexamethasone caused a blockage in the migration of all cells evaluated. The results showed that among the different doses of each drug tested was not observed any significant difference. Analysis of those exposed, suggest that eicosanoids, with in mammals, participate actively in the vascular phenomena and has important role in chemotaxis of leukocytes in acute inflammatory process induced by A. hydrophila in pacu / Orientador: Flávio Ruas de Moraes / Coorientador: Marco Antonio de Andrade Belo / Banca: Rogério Salvador / Banca: Marileda Bonafim Carvalho / Mestre