Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-05-30T14:31:07Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1542527 bytes, checksum: 970e39065a0989ebde54c41af393f84a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-30T14:31:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1542527 bytes, checksum: 970e39065a0989ebde54c41af393f84a (MD5) Previous issue date: 2015-03-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O Parque Estadual do Itacolomi (PEI-MG), situado entre os municípios de Ouro Preto e Mariana, MG, recebe imissões de poluentes, dentre eles o Flúor (F), de uma fábrica de alumínio próxima ao PEI. O flúor, dentre os poluentes atmosféricos, é o que apresenta maior fitotoxicidade. Assim, é de extrema importância que se desenvolvam estudos no PEI visando a preservação das espécies vegetais, visto que estudos anteriores evidenciaram sinais de contaminação por F na flora local. Diante desta problemática, o presente trabalho teve como objetivo monitorar três espécies de plantas presentes no PEI: Byrsonima variabilis (Malpighiaceae), Myrceugenia alpigena (Myrtaceae) e Eremanthus erythropappus (Asteraceae), a fim de avaliar as alterações causadas pelas emissões da usina nessas espécies, especilamente o F, por meio de um biomonitoramento passivo. As excursões ao PEI foram realizadas mensalmente por um período de nove meses para coleta de dados em quatro locais no PEI: Ponto 1 (“capela”); Ponto 2 (“trilha para o pico”); Ponto 3 (“antenas”); Ponto 4 (“próximo à portaria”). Em cada excursão foram avaliadas, em cada ponto, as variáveis ambientais: velocidade do vento (m s-¹) , temperatura (ºc), umidade relativa (%), e altitude (m). O surgimento de sintomas visuais nas folhas foi monitorado e foram coletadas folhas sem sintomas visuais (cloroses e necroses) para estudos anatômicos em microscopia de luz, e microscopia eletrônica de varredura (MEV). Foi realizada a quantificação de flúor na matéria seca das folhas nos meses de julho e novembro, e a detecção de morte celular, com o uso do Azul de Evans. Foi realizada também a quantificação do teor de nutrientes no solo e nas folhas das plantas. As três espécies monitoradas apresentam teor de F em todos os pontos monitorados no PEI, sendo que M. alpigena foi a espécie que apresentou maior acúmulo deste elemento. Os pontos 3 e4 foram os mais representativos dentre os pontos monitorados em julho e novembro, sendo também os pontos mais próximos da fonte emissora, além de estarem mais expostos à incidência de ventos. Ressalta-se, ainda, que o ponto 3 é o ponto de maior altitude. Nos pontos 3 e 4, as espécies apresentam danos mais severos, como células com paredes danificadas, retração de protoplasto, e alterações nos tricomas. Em microscopia eletrônica de varredura pode-se também observar danos na estrutura de tricomas e estômatos, além de erosão de cera epicuticular. O teste para morte celular com Azul de Evans foi positivo para as três espécies estudadas. As folhas das espécies estudadas e os solos analisados dos diferentes pontos apresentaram quantidades excessivas dos elementos ferro (Fe) e manganês (Mn). A anatomia de B. variabilis e E. erythropappus conferiu em uma maior proteção a absorção de F, o que não foi registrado para M. alpigena, que apresentou maior acúmulo de F. As três espécies monitoradas no presente estudo, não apresentaram sintomas visuais, mas mostraram ser importantes organismos biosensores de poluição por F. / The ltacolomi State Park (ISP), located between the municipalities of Ouro Preto and Mariana, Minas Gerais state, Brazil, receives imissions of pollutants such as fluoride from an aluminum smelter located near the park. Among atmospheric pollutants, fluoride is the most phytotoxic one. Thus, it is of great importance to conduct studies on the ISP aiming at preserving plant species therein, since previous studies have shown signs of fluoride contamination in the local flora. In view of this environmental problem, the present work aimed to monitor three plant species in ISP: Byrsonima variabilis (Malpighiaceae), Myrceugenia alpigena (Myrtaceae) and Eremanthus erythropappus (Asteraceae), in order to assess the alterations caused on these species by the smelter emissions, especially fluoride, by means of a passive biomonitoring. Field trips to ISP were made on a monthly-basis throughout a nine-month period for data collection on four sites within the park: points 1 (”capela”), 2 (”trilha para o Pico”), 3 (”antenas”) and 4 (”proximo a portaria”). In each field trip the following environmental variables were evaluated in each site: wind speed (m 5'1), temperature (°C), relative humidity (%) and altitude (m). The appearance of visual symptoms on leaves was monitored, and leaves without visual symptoms (i.e. chloroses and necroses) were collected for anatomical studies under light microscopy and scanning electron microscopy (SEM). Fluoride was quantified in leaf dry matter of samples from July through November, and cell death events were detected using Evans Blue. Nutrient quantification was performed in soil and leaf samples. The three monitored species showed fluoride contents in all monitored sites, M. alpigena having presented the highest accumulation. Points 3 and 4 were the most representative ones among all monitored sites in July and November; they were also the nearest sites to the emission source and were more exposed to the incidence of winds. It should also be noted that point 3 is the highest one. On points 3 and 4, the species showed more severe damage, such as cells with damaged cell walls, protoplast retraction, and alterations in trichomes. Under SEM, damage to trichome and stomata structure could be observed, as well as epicuticular wax erosion. The Evans Blue test for cell death was positive for all three species. Leaves of all three studied species and the analyzed soil samples from the studied sites showed excessive amounts of iron and manganese. The anatomy of B. variabilis and E. erythropappus conferred them a higher protection against fluoride absorption; this was not reported for M. alpigena, which showed higher fluoride accumulation. The three species that were monitored in the present studied did not show visual symptoms, but proved to be important biosensor organisms of fluoride pollution. / Sem Termo de Autorização. Termo solicitado por e-mail em 27-04-2016

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-07-20Bitstream added on 2014-06-13T18:56:54Z : No. of bitstreams: 1 claudiano_gs_me_jabo.pdf: 778732 bytes, checksum: c2e3587b8838e9676707fe996742c881 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Neste trabalho, investigou-se a cinética das alterações vasculares e celulares na aerocistite, induzida pela inoculação da Aeromonas hydrophila inativada em Piaractus mesopotamicus e inibição da atividade enzimática da fosfolipase A2 e ciclooxigenase na inflamação aguda. Para tanto, foram utilizadas a indometacina, meloxicam e a dexametasona, aplicados por via parenteral, 30 minutos antes do estímulo lesivo. As alterações de permeabilidade vascular foram avaliadas nos tempos de 30, 90, 120, 180 e 240 minutos pós-estímulo, observando-se que o máximo da exsudação plasmática ocorre com 180 MPE. O pré-tratamento com indometacina ou meloxicam, neste tempo, inibiu significativamente o aumento de permeabilidade vascular e a dexametasona apresentou um bloqueio mais precoce e efetivo do que os outros AINES, inibindo nos tempos de 120 e 180 MPE. O exsudato celular inflamatório foi avaliado seis, 24 e 48 horas após estímulo, verificando-se que a inoculação da bactéria causou aumento progressivo do acúmulo de células, atingindo o máximo após 24 HPE, sendo maior que nos outros grupos estudados. Neste tempo, verificou-se que todas as drogas testadas foram efetivas para a redução significativa do acúmulo celular. A contagem diferencial das células presentes no foco inflamado demonstrou predomínio de linfócitos e trombócitos, seguida de macrófagos e granulócitos, com acúmulo mais tardio destas últimas. O pré-tratamento com indometacina e dexametasona causou bloqueio no acúmulo de todas as células identificadas. Os resultados demonstraram que, entre as diferentes doses de cada droga testada, não foram observadas diferenças significativas. As avaliações sugeriram que os eicosanoides, assim como acontece em mamíferos, participam ativamente dos fenômenos vasculares e têm papel relevante na quimiotaxia de leucócitos / In this teaching we investigated the kinetics of vascular and cellular changes in aerocistite induced by inoculation of inactivated Aeromonas hydrophila in Piaractus mesopotamicus and pharmacological effect of the enzymatic activity of phospholipase A2 and cyclooxygenase in acute inflammation. To this end, we used indomethacin, meloxicam and dexamethasone, applied intraparenteral 30 minutes before stimulation harmful. Changes in vascular permeability were evaluated in 30, 90, 120, 180 and 240 minutes post-stimulation, we observed that the maximum plasma exudation occurs with 180 MPE and pretreatment with indomethacin or meloxicam at this time significantly inhibited the increase vascular permeability and dexamethasone had a lock early and effective than other NSAIDs inhibited at 120 and 180MPE. The cellular inflammatory exudate was assessed with six, 24 and 48 hours after stimulation, verifying that the bacteria caused a progressive increase in accumulation of cells, peaking at 24 HPE, higher than the other groups analyzed, and this time all tested drugs were effective in significantly reducing the buildup. The differential count of cells present in the exudate showed a predominance of lymphocytes and thrombocytes, and granulocyte macrophage followed with a later accumulation of the latter. Pretreatment with indomethacin and dexamethasone caused a blockage in the migration of all cells evaluated. The results showed that among the different doses of each drug tested was not observed any significant difference. Analysis of those exposed, suggest that eicosanoids, with in mammals, participate actively in the vascular phenomena and has important role in chemotaxis of leukocytes in acute inflammatory process induced by A. hydrophila in pacu

Resumo: Neste trabalho, investigou-se a cinética das alterações vasculares e celulares na aerocistite, induzida pela inoculação da Aeromonas hydrophila inativada em Piaractus mesopotamicus e inibição da atividade enzimática da fosfolipase A2 e ciclooxigenase na inflamação aguda. Para tanto, foram utilizadas a indometacina, meloxicam e a dexametasona, aplicados por via parenteral, 30 minutos antes do estímulo lesivo. As alterações de permeabilidade vascular foram avaliadas nos tempos de 30, 90, 120, 180 e 240 minutos pós-estímulo, observando-se que o máximo da exsudação plasmática ocorre com 180 MPE. O pré-tratamento com indometacina ou meloxicam, neste tempo, inibiu significativamente o aumento de permeabilidade vascular e a dexametasona apresentou um bloqueio mais precoce e efetivo do que os outros AINES, inibindo nos tempos de 120 e 180 MPE. O exsudato celular inflamatório foi avaliado seis, 24 e 48 horas após estímulo, verificando-se que a inoculação da bactéria causou aumento progressivo do acúmulo de células, atingindo o máximo após 24 HPE, sendo maior que nos outros grupos estudados. Neste tempo, verificou-se que todas as drogas testadas foram efetivas para a redução significativa do acúmulo celular. A contagem diferencial das células presentes no foco inflamado demonstrou predomínio de linfócitos e trombócitos, seguida de macrófagos e granulócitos, com acúmulo mais tardio destas últimas. O pré-tratamento com indometacina e dexametasona causou bloqueio no acúmulo de todas as células identificadas. Os resultados demonstraram que, entre as diferentes doses de cada droga testada, não foram observadas diferenças significativas. As avaliações sugeriram que os eicosanoides, assim como acontece em mamíferos, participam ativamente dos fenômenos vasculares e têm papel relevante na quimiotaxia de leucócitos / Abstract: In this teaching we investigated the kinetics of vascular and cellular changes in aerocistite induced by inoculation of inactivated Aeromonas hydrophila in Piaractus mesopotamicus and pharmacological effect of the enzymatic activity of phospholipase A2 and cyclooxygenase in acute inflammation. To this end, we used indomethacin, meloxicam and dexamethasone, applied intraparenteral 30 minutes before stimulation harmful. Changes in vascular permeability were evaluated in 30, 90, 120, 180 and 240 minutes post-stimulation, we observed that the maximum plasma exudation occurs with 180 MPE and pretreatment with indomethacin or meloxicam at this time significantly inhibited the increase vascular permeability and dexamethasone had a lock early and effective than other NSAIDs inhibited at 120 and 180MPE. The cellular inflammatory exudate was assessed with six, 24 and 48 hours after stimulation, verifying that the bacteria caused a progressive increase in accumulation of cells, peaking at 24 HPE, higher than the other groups analyzed, and this time all tested drugs were effective in significantly reducing the buildup. The differential count of cells present in the exudate showed a predominance of lymphocytes and thrombocytes, and granulocyte macrophage followed with a later accumulation of the latter. Pretreatment with indomethacin and dexamethasone caused a blockage in the migration of all cells evaluated. The results showed that among the different doses of each drug tested was not observed any significant difference. Analysis of those exposed, suggest that eicosanoids, with in mammals, participate actively in the vascular phenomena and has important role in chemotaxis of leukocytes in acute inflammatory process induced by A. hydrophila in pacu / Orientador: Flávio Ruas de Moraes / Coorientador: Marco Antonio de Andrade Belo / Banca: Rogério Salvador / Banca: Marileda Bonafim Carvalho / Mestre

O fitoplâncton é sensível às perturbações ambientais e identificar a viabilidade destes organismos é importante para o monitoramento aquático. O termo viabilidade tem sido usado neste contexto para determinar basicamente se o organismo está vivo ou morto. O uso de corantes vitais e mortais tem sido uma das técnicas aplicadas neste tipo de análise, mas ainda não se conhece a potencialidade de alguns corantes que se apliquem a espécies de fitoplâncton. Neste trabalho, foram utilizadas espécies de diferentes grupos taxonômicos mantidas em cultivo, as quais foram submetidas a uma série de corantes vitais e mortais com o objetivo de detectar a viabilidade do fitoplâcton marinho. Dentre os corantes testados, o vermelho neutro, azul de Evans e o fluorescente CMFDA tiveram os melhores resultados (observado x esperado) em testes com diferentes porcentagens de células vivas e mortas. A combinação entre o corante vital vermelho neutro e o mortal azul de Evans não foi efetiva para análise simultânea. Alexandrium tamiyavanichii foi a espécie que teve menor afinidade com os corantes. Também foram comparados diferentes métodos de observação e registro de células coradas e não coradas, provando que é possível substituir a observação direta da microscopia pela filmagem no microscópio ou pela FlowCAM. A vantagem do uso destes métodos é que além de serem mais rápidos, é possível salvar as imagens capturadas e não é necessário fazer a análise instantaneamente. O método da filmagem é vantajoso, pois é fácil de ser desenvolvido em qualquer laboratório. / Phytoplankton cells are sensitive to environmental perturbations and, therefore, identifying their viability is important for aquatic monitoring. The term viability has been used in this context to determine whether an organism is alive or dead. The use of vital and mortal stains to detect phytoplankton viability is a promising approach. In this study we investigated the efficiency of several vital and mortal dyes in detecting marine phytoplankton viability. Best results were achieved with neutral red, Evans blue and the fluorescent stain in tests with different percentages of live and dead cells. The combination of neutral red and Evans blue (vital and a mortal stains, respectively) was not effective in simultaneous analysis. Alexandrium tamiyavanichii had low affinity for any given stain. Different observational methods were compared, suggesting that direct microscopic counts can be replaced by image acquisition methods using either a microscope-mounted camera or a FlowCAM. Such imaging methods are fast, allow image archiving, and image processing can be performed on a later stage, which is useful when several experiments need to be run in a short period of time.

O fitoplâncton é sensível às perturbações ambientais e identificar a viabilidade destes organismos é importante para o monitoramento aquático. O termo viabilidade tem sido usado neste contexto para determinar basicamente se o organismo está vivo ou morto. O uso de corantes vitais e mortais tem sido uma das técnicas aplicadas neste tipo de análise, mas ainda não se conhece a potencialidade de alguns corantes que se apliquem a espécies de fitoplâncton. Neste trabalho, foram utilizadas espécies de diferentes grupos taxonômicos mantidas em cultivo, as quais foram submetidas a uma série de corantes vitais e mortais com o objetivo de detectar a viabilidade do fitoplâcton marinho. Dentre os corantes testados, o vermelho neutro, azul de Evans e o fluorescente CMFDA tiveram os melhores resultados (observado x esperado) em testes com diferentes porcentagens de células vivas e mortas. A combinação entre o corante vital vermelho neutro e o mortal azul de Evans não foi efetiva para análise simultânea. Alexandrium tamiyavanichii foi a espécie que teve menor afinidade com os corantes. Também foram comparados diferentes métodos de observação e registro de células coradas e não coradas, provando que é possível substituir a observação direta da microscopia pela filmagem no microscópio ou pela FlowCAM. A vantagem do uso destes métodos é que além de serem mais rápidos, é possível salvar as imagens capturadas e não é necessário fazer a análise instantaneamente. O método da filmagem é vantajoso, pois é fácil de ser desenvolvido em qualquer laboratório. / Phytoplankton cells are sensitive to environmental perturbations and, therefore, identifying their viability is important for aquatic monitoring. The term viability has been used in this context to determine whether an organism is alive or dead. The use of vital and mortal stains to detect phytoplankton viability is a promising approach. In this study we investigated the efficiency of several vital and mortal dyes in detecting marine phytoplankton viability. Best results were achieved with neutral red, Evans blue and the fluorescent stain in tests with different percentages of live and dead cells. The combination of neutral red and Evans blue (vital and a mortal stains, respectively) was not effective in simultaneous analysis. Alexandrium tamiyavanichii had low affinity for any given stain. Different observational methods were compared, suggesting that direct microscopic counts can be replaced by image acquisition methods using either a microscope-mounted camera or a FlowCAM. Such imaging methods are fast, allow image archiving, and image processing can be performed on a later stage, which is useful when several experiments need to be run in a short period of time.