Tesis por compendio de publicaciones / Los cítricos son uno de los principales cultivos a nivel mundial, pero su producción se ve reducida por diferentes tipos de estrés. Entre ellos, la salinidad es el que probablemente causa un mayor impacto, principalmente en zonas áridas y semiáridas que son las zonas principales de producción de cítricos. La mejora de patrones de cítricos mediante métodos tradicionales se encuentra limitada por factores relacionados con su biología reproductiva. Como alternativa, el desarrollo de herramientas biotecnológicas como la mutagénesis, en combinación con el cultivo de tejidos, deberían ser consideradas como valiosas estrategias para abordar la mejora genética de estas especies. En el presente trabajo, se ha desarrollado por primera vez un protocolo simple y eficaz de micropropagación, a partir de material adulto, de tres importantes patrones de cítricos. Si bien existen diferencias debidas al genotipo, fueron indispensables, para la multiplicación de los explantos, medios con alta concentración salina, como DKW o MS, y diferentes combinaciones de BA y GA o BA y AD. Durante la fase de enraizamiento, la adición de auxinas ha sido esencial, si bien mientras que en Macrophylla, los mejores resultados se obtuvieron con combinaciones de IBA e IAA, en Naranjo amargo y Cleopatra, se obtuvieron con IBA y NAA. La aclimatación de los explantos fue casi del 100% para todos los patrones estudiados. Este protocolo podría ser usado para la producción de plantas de patrones de cítricos certificadas y como fuente de material aséptico y genéticamente homogéneo para estudios de comportamiento frente a diferentes estreses y para su uso en programas de mejora genética mediante mutagénesis o transformación. La evaluación del comportamiento de los cultivos en campo bajo condiciones salinas es realmente complicada debido a la variabilidad de la salinidad y a la importante interacción que se produce con otros factores ambientales. El cultivo de tejidos ofrece una alternativa eficaz para el estudio de los mecanismos implicados en la tolerancia a la salinidad, ya que proporciona una respuesta relativamente rápida en un ambiente controlado. Se analizó la respuesta a la salinidad de explantos de Macrophylla en proliferación o en enraizamiento. La tasa de crecimiento de los explantos disminuyó con el aumento de la concentración de NaCl en el medio de cultivo en los dos tipos de explantos. A nivel fisiológico, la concentración total de clorofila disminuyó de manera significativa con la sal, y este efecto fue más significativo en los explantos enraizados. Para contrarrestar el daño por la sales, los explantos respondieron mediante la síntesis y acumulación de sustancias osmoprotectoras como prolina y glicina betaína. La concentración de Na+ y Cl- en los explantos de Macrophylla aumentó de manera significativa con la salinidad, pero los niveles fueron más altos en los explantos en proliferación. Los resultados obtenidos sugieren que los importantes daños sufridos en los explantos se deben principalmente a la toxicidad celular de los iones salinos, principalmente al Cl-. Se ha desarrollado un sistema eficiente de organogénesis in vitro, para explantos nodales adultos de Macrophylla y Naranjo amargo, que podría ser utilizado para la introducción de variación genética a través de transformación o mutagénesis. El protocolo fue optimizado variando la concentración de los reguladores del crecimiento, las condiciones de incubación, el medio basal y el tipo de explanto usado. La adición de BA (2-3 mg/l) y el periodo de inducción en oscuridad (3-4 semanas) fueron indispensables para la regeneración de los explantos y el tipo de explanto o el medio basal tuvieron una gran influencia. Los mejores resultados fueron obtenidos con segmentos nodales, frente al uso de segmentos internodales, y la eficiencia organogénica fue superior cuando se utilizaron explantos de la zona apical del brote. / Citrus fruits are regarded as the major culture around the world, but citrus production is limited by abiotic stress. Among them, salinity is probably the most impacting adverse condition, mainly in arid and semiarid regions, where citrus are produced. The improvement of Citrus rootstock via conventional breeding strategies is normally hampered by several factors related to their reproductive biology, such as large tree size, polyembryony, high level of heterozygosity, and long juvenile period. As alternatives, biotechnological techniques, such as plant tissue culture in combination with mutagenesis, should be looked on as valuable strategies for improvement of Citrus rootstocks. In the present work, has been developed a simple and useful methods of micropropagation from mature plants of alemow, Sour orange and Cleopatra mandarin, by optimization of culture medium (nutrients salts and growth regulators), since introduction of plant material, multiplication and rooting in vitro to acclimatization ex vitro. In general, although differences due to the genotype were observed, in all rootstocks, best results in micropropagation phase were obtained in DKW-based culture medium in combination with BA and GA. In the rooting stage, IBA and IAA combinations for alemow, and NAA and IBA for Cleopatra mandarin or Sour orange produced highest rooting percentages. Success during acclimatization was close to 100 % for all rootstocks. These micropropagated explants could be used for the production of certified citrus rootstocks plants and as an ideal source of aseptic and homogeneous material for different transformation or mutagenesis experiments, and the protocol of micropropagation described in this study can be easily applied for the effective propagation of genetically modified plants. Evaluating field performance crops under saline conditions is notoriously difficult because of the variability of salinity within fields and the enormous potential for interactions with other environmental factors. In vitro tissue culture is a simple system that offers a suitable alternative to studying physiological mechanisms of tolerance to salinity, since it provides relatively fast responses, a short generation time and a controlled environment. In the present study, the possible use of in vitro culture to evaluate the growth and physiological responses to salt-induced stress in cultivated explants of alemow was analyzed. All growth parameters were decreased significantly by these NaCl treatments. At physiological level, in both type of explants, a reduction in chorophyll contents was observed. For osmotic adjustment, high concentrations of compatible solutes (proline and quaternary ammonium compounds QAC) were accumulated in tissues. The Na+ and Cl- concentrations in the explants increased significantly with the salinity level, but Cl- levels were higher, so we suggest that the important deleterious effects in the in vitro explants of Citrus macrophylla grown at increasing NaCl concentrations were due mainly to toxic effects of saline ions, particularly Cl-, at the cellular level. There is evidence that in vitro nodal segments of Citrus macrophylla respond to salinity in a similar way to the whole plant, so this technique could be used for pre-selection and evaluation of salt tolerance. An efficient system of regeneration via organogenesis is the first step in the successful introduction of genetic variation by mutagenesis or genetic transformation. In the present study, we have evaluated the effect of the composition of culture media, incubation conditions, and explant type and origin, on in vitro organogenesis of two citrus rootstocks, alemow and sour orange, using mature tissues taken from in vitro-proliferated shoots. Explants from two citrus rootstocks showed similar responses on the regeneration medium. Best results were obtained when explants from apical shoots were used and cultured in darkness in DKW basal medium in combination with BA. This regeneration protocol could be integrated in a Citrus rootstocks salinity breeding program.

La transformació de terres marginals, juntament amb un augment dels processos de degradació del sòl (p. e. salinització) estan traslladant l'agricultura a sòls més desfavorables, fet que obliga al desenvolupament de noves estratègies de maneig dels cultius. Durant els últims anys s'han introduït noves estratègies de reg, com el reg localitzat enterrat (subsurface drip irrigation, SDI) o el reg deficitari controlat, tot i que resulta necessari avaluar la seva viabilitat i sostenibilitat quan són aplicades en sòls amb propietats físiques limitants. Alhora, l'ús d'esmenes orgàniques i les tècniques d’aeració forçada estan sorgint com a mètodes de recuperació de sòls a baix cost, que podrien millorar potencialment el rendiment dels cultius en situacions desfavorables. És important estudiar els efectes d'aquestes estratègies i tècniques sobre les propietats del sòl, així com en la fisiologia dels cultius i la seva productivitat, tot i que també sobre paràmetres de qualitat d'importància creixent en el sector fructícola, com el potencial de conservació de la fruita. L'objectiu general d'aquesta tesi ha estat el d'avaluar diferents estratègies de maneig del sòl i de reg, i estudiar els seus efectes en plantacions de presseguer i nectarina en sòls amb condicions físiques limitants. / La transformación de tierras marginales, junto con un aumento de los procesos de degradación del suelo (p. ej. salinización) están trasladando la agricultura a suelos más desfavorables, lo que obliga al desarrollo de nuevas estrategias de manejo de los cultivos. Durante los últimos años se han introducido nuevas estrategias de riego, como el riego localizado enterrado (subsurface drip irrigation, SDI) o el riego deficitario controlado, a pesar de que resulta necesario evaluar su viabilidad y sostenibilidad cuando son aplicadas en suelos con propiedades físicas limitantes. Al mismo tiempo, el uso de enmiendas orgánicas y las técnicas de aireación forzada están surgiendo como métodos de recuperación de suelos a bajo coste, que podrían mejorar potencialmente el rendimiento de los cultivos en situaciones desfavorables. Es de suma importancia el estudiar los efectos de estas estrategias y técnicas sobre las propiedades del suelo, así como en la fisiología de los cultivos y su productividad, aunque también sobre parámetros de calidad de importancia creciente en el sector frutícola, como el potencial de conservación de la fruta. El objetivo general de esta tesis fue el de evaluar diferentes estrategias de manejo de suelo y riego, y estudiar sus efectos en plantaciones de melocotón y nectarina en suelos con condiciones físicas limitantes. / Transformation of marginal land along with an increase of soil degradation processes (e.g. salinization) is moving the agriculture into more unfavorable soils, forcing the development of new management strategies. Subsurface drip irrigation (SDI) and deficit irrigation strategies have been widely studied although it is necessary to evaluate their feasibility and sustainability when applied in soils with limiting physical properties. At the same time, organic soil amendments and oxygation techniques are arising as low-cost soil reclamation methods that could potentially improve the crop performance under such situations. It is of paramount importance to study the effects of these strategies and techniques on soil properties as well as on crop physiology and productivity, but also on some quality parameters of growing importance in the fruit sector, such as fruit storability. The general aim of this thesis was to assess various soil management and irrigation strategies and study their effects on peach and nectarine orchards under limiting soil conditions.

Se ha realizado un estudio de la competencia ejercida entre margall (Lolium rigidum Gaud.)y cebada (Hordeum vulgäre L.) en condiciones de cultivo mediterráneas. Se realizaron tresensayos en Lleida durante el periodo 1992/1995 y uno en Wongan Hills (Australia Occidental)durante el año 1995. En cada ensayo se sembraron un rango diferente de densidades de cebaday margall con el objetivo de estudiar la influencia de la densidad del cultivo sobre el crecimientoy el desarrollo del margall y estudiar la influencia de la mala hierba sobre el rendimiento y losparámetros del rendimiento de la cebada.El aumento de la densidad de siembra de cebada permitió reducir de forma considerable eldesarrollo y la capacidad reproductiva de L rigidum. En el ensayo de la campaña 92/93 se observóque al aumentar la densidad de cebada de O a 400 plantas/m2 se producía una disminución de labiomasa de la mala hierba del 85 %, del número de espigas del 80 %, del número de semillas del60 % y del peso de 1000 semillas del 40 %. En el ensayo 93/94 se observó una disminución debiomasa del 49 % al aumentar la densidad de cebada de 75 a 300 kg/ha y en la 94/95 del 23 % alaumentarla de 75 a 150 kg/ha. En Australia se consiguió una reducción del 70 % en la biomasay el número de espigas de L rigidum al aumentar la densidad de siembra del cultivo de 25 a 200kg/ha.En la campaña 1993/94 realizada en Lleida no se detectó ningún efecto de competencia delmargall sobre la cebada, atribuyéndose al hecho de que durante toda esa campaña hubo un elevadodéficit de agua en el suelo que Junto a una germinación tardía del margall, hicieron que éste semostrara menos competitivo. En la campaña siguiente, en cambio, se observó una pérdida derendimiento semejante en todas las densidades de la cebada y que fue ajustada a un modelo de tipolineal. Una densidad de 1000 plantas/m2 de L. rigidum provocaron unas pérdidas del 36 % en laproducción de cebada. La competencia se produjo esencialmente en un período temprano de lacampaña, pues el único componente del rendimiento afectado fue el número de espigas por m2delcultivo (entre un 26 y un 33 % de reducción).En la campaña 1995 realizada en Wongan Hills, las pérdidas de rendimiento oscilaron entre el48 y el 100 %, siendo mayores en las parcelas con menor densidad de siembra del cereal. Lacompetencia de L rigidum con la cebada fue importante al inicio y al final del ciclo, de forma quesu presencia produjo reducciones del 65 % en el número de espigas de la cebada y del 20 % enel peso de 1000 granos de la misma.El mayor poder competitivo de L. rigidum en Australia también se reflejó en el valor del umbraleconómico; éste fvie mayor en Lleida (de 108 a 122 plantas/m2, dependiendo de la eficaciaesperada del tratamiento) que en Wongan Hills (de 25 a 29 plantas/m2).

La present tesi analitza els efectes de la fragmentació del bosc i les pertorbacions humanes associades sobre l'estructura, la composició i l'estat de conservació dels boscos en un paisatge peri-urbà mediterrani (la plana del Vallès), tenint en compte factors climàtics, topogràfics, de pertorbació humana i paisatgístics que operen a diverses escales. També es fa especial èmfasi en l'interès dels resultats obtinguts pel que fa a la conservació i la gestió de la biodiversitat forestal en aquestes àrees fortament humanitzades. Més concretament, s'analitzat:- La importància de les variables ambientals, les pertorbacions antròpiques i l'estructura de la clapa i del paisatge sobre el recobriment arbori de Quercus i Pinus. - La importància dels grups de variables esmentades sobre la composició florística de les clapes de bosc de la plana del Vallès. També la resposta individual de cada espècie per tal d'identificar espècies indicadores. - Les preferències antròpiques a l'hora de gestionar i freqüentar les clapes de bosc peri-urbanes en relació a les característiques estructurals d'aquestes.- L'efecte de la mida de la clapa de bosc, dels usos del sòl adjacents, de la distància al marge del bosc i de la interacció d'aquests tres factors sobre la riquesa i la composició florística del sotabosc.

Segons estimació del Consell Regulador de l'any 2012, es van vendre 243 milions d'ampolles de vins escumosos amb denominació d'origen Cava, havent-hi registrats 253 cellers elaboradors de Cava i 163 empreses elaboradores del vi base. Per tant, és un sector econòmic important tant a Catalunya com en altres països, el qual vol oferir el millor producte als consumidors. La indústria elaboradora de vins escumosos considera important tenir paràmetres objectius que permetin estandarditzar la qualitat dels seus productes, i així poder garantir la millor qualitat d'aquests. L'aspecte visual és la primera característica que notem i que pot delectar o generar rebuig, podent influir en la percepció de l'aroma i/o el gust. L’estabilitat del color d'aquests vins en el procés d’elaboració, així com durant la distribució i l’emmagatzematge, és un aspecte de gran interès per les bodegues. El color dels vins escumosos acostuma a atribuir-se als compostos fenòlics procedents del raïm, tot i que hi ha altres substàncies en el medi que també poden contribuir en el procés de l'enfosquiment. Per altre banda, durant la rima les mares de segona fermentació poden alliberar o adsorbir compostos que poden alterar la qualitat visual dels vins, i per tant influir en el fenomen de l'enfosquiment. L’objectiu principal d’aquesta tesi Doctoral és avaluar el paper de les mares sobre el fenomen de l'enfosquiment i els compostos relacionats, així com trobar marcadors químics relacionats amb l'enfosquiment per crear models matemàtics per poder predir el període òptim de consum dels vins escumosos. Per a assolir aquest objectiu es van dissenyar dos mostrejos. Un per conèixer l'efecte de les mares de segona fermentació del Cava sobre l'enfosquiment i els compostos relacionats i l'altre per generar models matemàtics que permetin predir el temps màxim en el vi conservarà les seves propietats òptimes segons les condicions de conservació. En el primer, es va procedir a fer un estudi paral·lel amb dos series de vins comparant el període de rima i el mateix temps de vida comercial conservat en les mateixes condicions de celler. En el segon, es va realitzar un mostreig amb sis series de vins comercials, durant més de dos anys, conservats a diferents temperatures reals d'emmagatzematge (nevera, celler i ambient). No s'ha observat que les mares tinguin un paper destacat en la cinètica de formació de l'enfosquiment. Per altra banda, s'ha identificat el 5-HMF en el Cava i s'ha avaluat com a marcador de qualitat relacionat amb l'enfosquiment. En aquest sentit, aquest compost augmenta linealment amb el temps en el rang de temperatures estudiat. S'ha observat que posseïx bones característiques per ser emprat com a marcador de temps-temperatura, millors que la del clàssic paràmetre A420 i els compostos fenòlics. S'ha estudiat la cinètica de formació del 5-HMF, i a partir dels paràmetres cinètics s'han generat models matemàtics que permeten predir el temps de vida en el que el vi conserva les seves òptimes propietats. Aquests models permetran a les bodegues elaboradores de vins escumosos saber quan de temps els seus vins conservaran les propietats òptimes, així com disposar d'una eina útil per saber com han estat conservats els vins en cas de reclamació. / The sparkling wine wineries consider important to have parameters that allow standardizing the quality of their products, so they can guarantee the best quality of their wines. The appearance is the first characteristic we notice and can generate delight or rejection, and also it can influence the perception of smell and/or taste. The color stability of these wines in the process, as well as during distribution and storage, is something of great interest for the wineries . The color of sparkling wines is usually attributed to phenolic compounds from the grape, although there are other substances in the environment that can also contribute to the browning process. On the other hand, during the second fermentation the lees can release or adsorb compounds that may alter the visual quality of the wines, and thus have influence to the browning phenomenon. The main objective of this thesis is to evaluate the role of the lees on the phenomenon of browning and related compounds, as well as find chemical markers related to the browning in order to create mathematical models to predict the optimum period consumption sparkling wines. It has not been observed that lees have a role in the kinetics of formation of browning. Furthermore, 5-HMF has been identified in Cava and also it has been evaluated as a marker of quality related to browning. In this sense, this compound increases linearly with time in the temperature range studied. It has been observed that possesses good characteristics to be used as a marker as time-temperature parameter, with better properties than the classic A420 and phenolic compounds. We have studied the kinetics of formation of 5-HMF, and from these kinetic parameters were generated mathematical models that allow predicting the lifetime which the wine retains its optimum properties. These models allow sparkling wine producers to know how long their wines will retain their optimum properties and also provide a useful tool to see how the wines have been preserved in case of complaint. / Según estimación del Consejo Regulador del año 2012, se vendieron 243 millones de botellas de vinos espumosos con denominación de origen Cava, habiendo registradas 253 bodegas elaboradoras de Cava y 163 empresas elaboradoras del vino base. Por tanto, es un sector económico importante tanto en Catalunya como en otros países. La industria elaboradora de vinos espumosos quiere ofrecer el mejor producto a los consumidores así que considera importante tener parámetros objetivos que permitan estandarizar la calidad de sus productos. El aspecto visual es la primera característica que notamos y que puede deleitar o generar rechazo, pudiendo influir en la percepción del aroma y/o sabor. La estabilidad del color de estos vinos en el proceso de elaboración, así como durante la distribución y el almacenamiento, es un aspecto de gran interés para las bodegas. El color de los vinos espumosos suele atribuirse a los compuestos fenólicos procedentes de la uva, aunque hay otras sustancias en el medio que también pueden contribuir en el proceso del oscurecimiento . Por otro lado, durante la rima las lías de segunda fermentación pueden liberar o adsorber compuestos que pueden alterar la calidad visual de los vinos, y por tanto influir en el fenómeno del oscurecimiento . El objetivo principal de esta tesis doctoral es evaluar el papel de las lías sobre el fenómeno del oscurecimiento y los compuestos relacionados, así como encontrar marcadores químicos relacionados con el oscurecimiento para crear modelos matemáticos para predecir el periodo óptimo de consumo los vinos espumosos. Para lograr este objetivo se diseñaron dos muestreos: Uno para conocer el efecto de las lías de segunda fermentación del Cava sobre el pardeamiento y los compuestos relacionados y el otro para generar modelos matemáticos que permitan predecir el tiempo máximo en el vino conservará sus propiedades óptimas según las condiciones de conservación. En el primero, se procedió a realizar un estudio paralelo con dos series de vinos comparando el período de rima y el mismo tiempo de vida comercial conservado en las mismas condiciones de bodega . En el segundo , se realizó un muestreo con seis series de vinos comerciales, durante más de dos años, conservados a diferentes temperaturas reales de almacenamiento (nevera, bodega y ambiente ). No se ha observado que las lías tengan un papel destacado en la cinética de formación del pardeamiento. Por otra lado, se ha identificado el 5- HMF en el Cava y se ha evaluado como marcador de calidad relacionado con el pardeamiento. En este sentido, este compuesto aumenta linealmente con el tiempo en el rango de temperaturas estudiado. Se ha observado que posee buenas características para ser utilizado como marcador de tiempo- temperatura, mejores que la del clásico parámetro A420 y los compuestos fenólicos. Se ha estudiado la cinética de formación del 5-HMF, y a partir de los parámetros cinéticos se han generado modelos matemáticos que permiten predecir el tiempo de vida en el que el vino conserva sus óptimas propiedades. Estos modelos permitirán a las bodegas elaboradoras de vinos espumosos saber cuánto tiempo sus vinos conservarán las propiedades óptimas, así como disponer de una herramienta útil para saber cómo han sido conservados los vinos en caso de reclamación.

El resveratrol és un component del vi, el qual té uns potencials efectes beneficiosos en malalties relacionades amb l'envelliment com poden ser el càncer, la malaltia cardiovascular, la diabetis i les malalties neurodegeneratives, augmentant l'esperança de vida d'organismes simples i mamífers actuant com a mimetic de la restricció calòrica. Els biomarcadors nutricionals poden ser una millor mesura de l'exposició dietètica que les dades estimades mitjançant enquestes alimentàries, perquè tenen tres grans avantatges envers les enquestes : a) els biomarcadors nutricionals són més precisos; b) les dades dietètiques són normalment més inadequades degut a les limitacions en les dades de composició dels aliments; c) l'anàlisi del biomarcador proporciona una mesura més pròxima del nutrient específic que les dades dietètiques perquè és una mesura integrada del metabolisme del component. Un biomarcador ideal ha de ser quantitativament robust, específic, sensible als canvis en la ingesta del component dietètic, i un període de vida mig adequat. La hipòtesis d'aquesta tesi doctoral ha estat la de determinar els metabòlits urinaris del resveratrol (URM) com a biomarcadors útils de la consumició del vi.Es van realitzar dos estudis clínics aleatoritzats, creuats, prospectius. En el primer estudi 10 homes sans van consumir 30g d'etanol/dia en forma de cava o ginebra durant 28 dies. En el segon assaig, 10 dones sanes van consumir 20g d'etanol/dia en forma de vi blanc o negre durant 28 dies. A més a més es van analitzar 1000 participants free-living en un estudi per avaluar efectes d'una dieta mediterrània en la prevenció primària de la malaltia cardiovascular (estudi de PREDIMED). Les anàlisis de URM foren realitzades mitjançant LC-MS/MS després d'una extracció en fase sòlida. Es van utilitzar els valors predictius i la corba ROC per determinar l'exactitud de la prova diagnòstica.S'utilitza una metodologia robusta LC-MS/MS per determinar el URM en humans. La dosis diària de consumició de vi va ser correlacionada positivament amb els URM (r = 0.895, p< 0.001). En l'anàlisi estadístic mitjançant corba ROC es van obtenir els valors òptims de sensibilitat, la especificitat i els valors predictius.També es van estimar ingesta dietètica del resveratrol i del piceid (R&P) en la població adulta espanyola. Per aquest propòsit es va compilar una completa base de dades de composició d'aliments de R&P en aliments d'origen espanyol. L'estudi on es va aplicar va ser la cohort espanyola de l'estudi European Prospective Investigation into Cancer and nutrition (EPIC), on participen 40685 voluntaris. La mediana estimada i la mitjana de R&P van ser 100 i 933 microgr./d respectivament. La font més important de R&P van ser els vins (98.4%).Per tant, els URM se poden utilitzar com a una mesura objectiva i útil del consum de vi en estudios clínics i garns estudis epidemiològics free-living. / Resveratrol, a constituent of wine, has been shown to have beneficial effects on diseases of ageing including cancer, cardiovascular disease, diabetes and neurodegeneration, as well as increase stress resistance and extent the lifespan of organisms and mammals as caloric restriction mimetic. Nutritional biomarkers may be a better measure of dietary exposure than self-reported dietary data, because they have three distinct advantages over dietary data: a) biochemical markers of some nutrient intake are more precise than dietary assessment; b) dietary data are often inadequate because of limitation in food composition data; c) biomarker analysis provides a more proximal measure of specific nutrient intake than dietary data because it is useful as an integrated measure of the metabolism of the component. An ideal biomarker should be quantitatively robust, specific, sensitive to changes in intake of the dietary component, and have an adequate half-life. The hypothesis of this thesis was to assess urinary resveratrol metabolites (URM) as useful biomarkers of wine consumption.We performed two randomized, crossover trials and a cohort study. In the first study 10 healthy men consumed 30 g ethanol/day as sparkling wine or gin for 28 days. In the second trial, 10 healthy women consumed 20 g ethanol/day as white or red wine for 28 days. Furthermore 1000 free living participants in a study on the effects of a Mediterranean diet on primary prevention of cardiovascular disease (PREDIMED study) were also evaluated. Analyses of URM were carried out by LC-MS/MS after a solid phase extraction. We used predictive values and ROC curve analyses to assess the diagnostic accuracy.A robust methodology using LC-MS/MS analysis was applied to determinate the URM in humans. The reported daily dose of wine consumption was correlated positively with URM (r = 0.895, p<0.001). With the ROC curve analysis, optimal values of sensitivity, specifity and predictive values were obtained.We also estimated the dietary intake of resveratrol and piceid (R&P) in the Spanish adult population. For this purpose, a food composition data base (FCDB) of R&P in Spanish foods was compiled. The study included 40685 subjects a who were included in the European Prospective Investigation into Cancer and nutrition (EPIC)-Spain cohort. The estimated median and mean of R&P intake were 100 and 933 microgr./d respectively. The most important source of R&P were wines (98·4%).URM can be used as an objective an useful measure of wine consumption in clinical and large free-living epidemiologic studies.

S'ha aprofundit en l'estudi dels principals mecanismes bioquímics que intervenen en la coloració de varietats vermelles de poma, i de la influència que en els mateixos exerceixen els factors ambientals, especialment la temperatura i el material vegetal. Així, s'ha estudiat l'efecte que té en la coloració la modificació de les condicions ambientals mitjançant el reg per *aspersión; per altra banda s'ha avaluat el comportament *agronómico de noves varietats, en el que es refereix fonamentalment a la millora del color, respecte a unes altres tradicionalment conreades. / Se ha profundizado en el estudio de los principales mecanismos bioquímicos que intervienen en la coloración de variedades rojas de manzana, y de la influencia que en los mismos ejercen los factores ambientales, especialmente la temperatura y el material vegetal. Así, se ha estudiado el efecto que tiene en la coloración la modificación de las condiciones ambientales mediante el riego por aspersión; por otra parte se ha evaluado el comportamiento agronómico de nuevas variedades, en lo que se refiere fundamentalmente a la mejora del color, con respecto a otras tradicionalmente cultivadas.

l cultivar de tomate MT presenta una serie de características fenotípicas, como un corto ciclo biológico (inferior a 3 meses) y pequeño tamaño (menos de 20 cm), que hacen que sea más adecuado para estudios en laboratorio que otros cultivares de tomate. El objetivo general planteado al iniciar este trabajo fue determinar el comportamiento in vitro del cv. MT, así como llevar a cabo un estudio de los perfiles de metabolitos secundarios y de los patrones de expresión proteica en suspensiones celulares sometidas a la elicitación con MJ, en presencia y en ausencia de dos tipos de β-CDs: metiladas al azar (CDsM) o hidroxipropiladas al azar (CDsH). El fin último es explorar el potencial de las suspensiones celulares derivadas del cv. MT para utilizar este sistema en la producción de metabolitos con alto valor añadido. Para abordar este objetivo se han utilizado diversas técnicas de análisis cromatográfico (HPLC-MS y GC-MS), electroforético (SDS-PAGE e IEF), citológico (TTC y FDA) y espectrofotométrico (determinaciones de metabolitos y de diversas actividades enzimáticas); también se ha llevado a cabo la microsecuenciación de fragmentos peptídicos por nanoLC ESI MS/MS y se han utilizado las herramientas bioinformáticas correspondientes para el análisis de los resultados. Las suspensiones celulares presentaron una acumulación de compuestos fenólicos y triterpenos máxima durante la fase de crecimiento exponencial. La elicitación de las suspensiones celulares con MJ y CDsM o CDsH, separadamente o en combinación, dio lugar a un aumento de los niveles de isofucosterol,sitosterol y taraxasterol, si bien los mayores cambios se registraron en los tratamientos con CDsM. Sin embargo, los mayores niveles de fenoles solubles totales se obtuvieron en los tratamientos combinados, sobre todo en el tratamiento CDsM+MJ. Además, ambos elicitores (CDs+MJ) actuaron de forma sinérgica en la producción de ácido cafeico en el medio intracelular, indicando que la naturaleza fisicoquímica de las CDs influyó en su capacidad para estimular la producción de metabolitos y para actuar como agentes secuestrantes. Por otra parte, en los tratamientos de elicitación se observó, en general, una diminución de las actividades enzimáticas peroxidasa, PAL, endoquitinasa y 1,3-glucanasa en presencia de CDsM y un aumento de dichas actividades enzimáticas en presencia de CDsH, en los tratamientos con MJ y, sobre todo, en los combinados (CDs+MJ), lo que indica que las CDs y el MJ son capaces de regular diferencialmente la actividad de estas enzimas. El análisis del proteoma extracelular de las suspensiones celulares mediante separación monodimensional en geles de poliacrilamida y microsecuenciación en las suspensiones elicitadas con CDsM+MJ permitió la identificación de diez fragmentos trípticos cuyas secuencias de aminoácidos mostraron homología con varías proteínas PR de S. lycopersicum, quitinasas, una proteína asociada a la muerte celular biótica y una peroxidasa catiónica. Estas proteínas podrían formar parte de las respuestas de defensa en suspensiones celulares de tomate MT. Además de las proteínas inducidas en el tratamiento de elicitación, se identificaron una serie de proteínas constitutivas, como proteínas PR del tipo PR-1 y PR-5, endoquitinasas, quitinasas, peroxidasas, una proteína inhibidora de endoglucanasas fúngicas específicas de xiloglucano (XEGIP) y otras enzimas hidrolíticas implicadas en la ruptura de xilanos y arabinoxilanos como la LeXYL2 y la α-L-Arabinofuranosidasa, que pueden estar implicadas en la modificación de la arquitectura de la pared celular durante el crecimiento del cultivo. / ABSTRACT The tomato cultivar Micro-Tom displays several phenotypic characteristics such as small size (less than 20 cm) and a reduced life cycle (less than three months), which make it more suitable for laboratory experiments than standard cultivars. The overall objective proposed in this research is to know the in vitro behavior of Micro-Tom as well as analyzing the response of MT cell cultures to elicitation with methyl jasmonate (MJ) and two cyclodextrins (randomly methylated cyclodextrins, CDsM, and randomly hydroxypropyl -cyclodextrins, CDsH), alone or in combination, exploring the changes on both secondary metabolite and protein expression patterns that occur in these cell cultures in the presence of these elicitors. To address this objective, a variety of different techniques including: chromatographic (HPLC-MS and GC-MS), electrophoretic (SDS-PAGE and IEF), cytological (TTC and FDA) and spectrophotometric (for the determination of metabolites and enzymatic activities) methods were used. Moreover, tryptic fragments of SDS-PAGE bands of interest were analyzed by nanoLC ESI MS/MS and the LC-ESI-MS/MS spectra submitted to the database-mining tool for protein identification. An accumulation of both phenolic and triterpenoids compounds was seen during the exponential phase of non-elicited cell suspension cultures. Under elicitation conditions, an increase in the levels of isofucosterol, -sitosterol and taraxasterol was observed, although the highest levels of these compounds were found in CDsM-treated cells. In contrast, the highest levels of phenolic compounds were detected in the presence of both elicitors, especially in CDsM+MJ-treated cells. Moreover, both elicitors act synergistically to stimulate the production of caffeic acid in the intercellular medium, suggesting that the physicochemical properties of CDs have a great influence in their ability to induce the production of secondary metabolites and in their metabolite-sequestering properties. On the other hand, a decrease in the enzymatic activities of peroxidase, PAL, endochitinase and -1,3-glucanase was observed in CDsM-treated cells whereas an increase of these enzymatic activities occurred in the presence of CDsH, MJ, and in the combined treatments, indicating that both elicitors are able to differentially regulate the activity of these enzymes. Analysis of the extracellular proteome showed the presence of amino acid sequences homologous to several pathogenesis-related (PR) proteins, a cationic peroxidase, and a biotic cell death-associated protein, which suggests that MJ and CDs could play a role in mediating defense-related gene product expression in MT. Moreover, several constitutive proteins were also identified such as PR 1 and 5 proteins, endochitinases, chitinases, peroxidases, an inhibitor protein of xyloglucan-specific fungal endoglucanase (XEGIP), and other hydrolytic enzymes like LeXYL2 and L-arabinofuranosidase, which are cell wall-degrading enzymes involved in the breakdown of xylans and arabinoxylans, suggesting their involvement in the modification of the cell wall architecture during cell culture growth.

Durante tres años climatológicamente diferentes (2006, 2007 y 2008), se evaluó el impacto de la añada, el vigor de la vid y la heterogeneidad del racimo sobre la composición de la uva y el vino en terruños precoces y tardíos de Cariñena y Garnacha situados en la región mediterránea cálida de la Terra Alta. Para determinar si la maduración del racimo era homogénea, sus partes distales fueron analizadas por separado. Mediante cromatografía, se identificaron los antocianos de la baya y las proantocianidinas de las semillas. El terruño tardío presentó mayor rendimiento y menor concentración de azúcares y antocianos que el precoz. En año cálido (2007), se acumularon más antocianos que en año templado (2008), pero la respuesta de cada variedad fue distinta según el vigor. Los antocianos acilados tendían a concentrarse en las bayas inferiores. En año templado, las semillas presentaron niveles altos de monómeros flavan-3-ol y baja polimerización de procianidinas, mientras que en año cálido los niveles de procianidinas también dependían del vigor. / For three climatically different years (2006, 2007 and 2008), the impact of vintage, vine vigor and bunch heterogeneity was evaluated on grape and wine composition in early and late terroirs of Carignan and Grenache, which were located in the warm Mediterranean region of Terra Alta. To determine the homogeneity of the bunch ripening, top and bottom half of the bunch were analyzed separately. Berry anthocyanins and seed proanthocyanidins were identified by chromatography. The late terroir provided higher yield and lower concentration of sugars and anthocyanins than the early terroir. In warm year (2007), anthocyanins were more concentrated than in temperate year (2008), but the response of each variety differed according to the vigor. Acylated anthocyanins tended to concentrate in the bottom berries. In temperate year, seeds had high levels of monomeric flavan-3-ol and low polymerization of procyanidins, whereas in warm year the procyanidin levels also depended on the vigor.

El siglo XXI plantea un nuevo reto para la agricultura: las predicciones de aumento de la población mundial exigen aumentar la productividad de los cultivos. La incidencia del cambio climático sobre regiones históricamente agrícolas es causa ya del descenso en el rendimiento agrícola, al estar afectados por el impacto creciente de estreses abióticos como la sequía y la salinidad. Una de las estrategias para abordar este desafío es la generación y análisis de colecciones de mutantes de especies vegetales de gran importancia agro-alimentaria como tomate para la identificación de genes y la disección de mecanismos implicados en el desarrollo y la producción así como en la tolerancia a estreses abióticos. Dentro del programa de mutagénesis insercional con T-DNA en tomate que se lleva a cabo entre los grupos de investigación del IBMCP, UAL y CEBAS, en este trabajo nos hemos centrado en la identificación de mutantes afectados en el desarrollo reproductivo, que en último extremo afecta a la producción de fruto, y en la respuesta a la salinidad y la sequía, por ser estreses abióticos tan importantes por su incidencia en el rendimiento final. En el primer caso se aborda la identificación y caracterización de un mutante de gran interés agronómico por su fenotipo afectado en el desarrollo reproductivo, denominado afs1 (abnormal fruit set-1). El mutante afs1 se caracteriza por presentar una mayor tasa de cuajado de fruto, reflejada en un marcado aumento del número de frutos que, aunque de menor tamaño, promueven una mejora significativa de la producción. Entre las características de afs1 cabe destacar que sus frutos son partenocárpicos y destacan por su mayor calidad debido a una mayor concentración de glucosa y fructosa, así como de ácido cítrico, que dan lugar a un incremento del índice de sabor. La mutación responsable de dicho fenotipo no se debe a una inserción de T-DNA si no a una mutación somaclonal generada durante la transformación y cultivo in vitro, algo ya observado en otras colecciones de mutantes insercionales, y se está procediendo a su localización genómica. En el segundo caso se aborda la caracterización de un mutante alterado en la respuesta al estrés salino e hídrico. El mutante se ha denominado wak1 (Wall-associated kinase 1), ya que la mutación responsable ha sido etiquetada por un inserto T-DNA que se sitúa en la región promotora del gen SlWAK1, que forma parte de un clúster génico de cuatro isoformas que están localizadas en el cromosoma 9, que codifican para unas proteínas quinasas asociadas a pared celular (cell wall-associated kinases). Aunque la expresión del gen SlWAK1 está anulada en el mutante, no lo están sin embargo los genes flanqueantes SlWAK2 y SlWAK3. El mutante wak1 presenta un fenotipo similar a la planta no transformada cuando se cultiva sin estrés, muestra un fenotipo sutil en condiciones de estrés hídrico y salino a medio plazo, y finalmente reduce significativamente el rendimiento en términos de producción de fruto en estrés a largo plazo. A nivel fisiológico, el mutante wak1 presenta mayor tolerancia al estrés iónico inducido por salinidad, con menor acumulación de Na+ en hoja. Sin embargo, el mutante es sensible al estrés osmótico inducido tanto por estrés salino como hídrico. Además, la anulación del gen SlWAK1 provoca una acumulación de sacarosa en raíz, relacionada con una alteración en la expresión de genes implicados en el metabolismo de sacarosa. Considerados en conjunto, los resultados de la caracterización de estos mutantes fenotípicamente tan diferentes demuestran el gran interés que tiene el análisis de mutantes para avanzar en el conocimiento de los procesos y los genes clave en el desarrollo y en la tolerancia a estreses abióticos. / The XXI century poses new challenges to agriculture: the predictions of global population growth invite us to focus all our efforts on increasing crop yields. In turn, the impact of climate change on historically farming regions promotes the decrease of the performance of these vegetable species with high agronomic interest, such as the tomato, which is one of the most important global vegetable species. Among the strategies proposed to address the problems exposed, generating mutant collections is one of the most widespread strategies and it has provided much information about processes, pathways and relevant mechanisms. To this end, a collection of insertional mutants using an enhancer trapping has been created in the commercial cultivar of the tomato "Moneymaker" and we have directed our interest in selecting mutants affected in the reproductive development and in the response to abiotic stresses (salinity and drought) to be key processes that directly affect the final crop yield. Within the collection, we have identified a mutant with high agronomic interest related to reproductive development, which we have named afs1 (abnormal furit set-1), characterized by an increased vegetative growth rate and higher rate of fruit set. Their flowers show an opening in the base of the stamen caused by the early fruit set, initiated before the anthesis. The higher fruit set rate is reflected in the increase in fruits number, despite the smaller size, leading to a significant improvement in the production and final yield in greenhouse conditions. Among the characteristics of production, it is noteworthy that this afs1 produces parthenocarpic fruits with improved organoleptic characteristics, brought about by an increase in glucose and fructose, and citric acid therefore, leads to an increased rate of flavor. It has also been selected and characterized by a mutant response to salt and water stresses, named wak1 (Wall-associated Kinase 1) which carries a T-DNA inserted in the promoter region for canceling the SlWAK1 gene expression in the mutant. This gene is part of a gene cluster consisting of four total WAK isoforms genes in chromosome 9. qPCR expression analysis has indicated that the SlWAK1 expression is root specific and reduces its expression levels in response to salt stress . The two flanking SlWAK1 isoforms genes (referred to SlWAK3 and SlWAK2 in this paper) are not affected by the T-DNA insertion and have a similar pattern to the described for SlWAK1 response. At a phenotypic level, this mutant has a WT phenotype in standard culture conditions and displays a subtle phenotype under water and salt stresses, characterized by a significant reduction in the height rate of the aerial part, and the reduction of shoot water content. Paradoxically, despite the reduction in development, salt stress experiences have shown that the wak1 mutant has an increased tolerance to the accumulation of toxic concentrations of Na+ in the shoot. Furthermore, it has been shown that this mutant is sensitive to osmotic effect, which occurred in both the water stress and in the first phase of the salt stress. The results indicate that the basis of this sensitivity is an alteration in osmotic adjustment ability and in the sugar metabolism promotes an increased sucrose transport to the root at the expense of the growth rate and the transport of water toward the apex.