Human Rhinoviruses (HRVs) utilize Internal Ribosome Entry Sites (IRES) to drive viral protein synthesis. IRESs are specialized RNA elements present within the 5’ UTR of mRNAs that recruit ribosomes independently of the 5’ m7G cap structure. hnRNP A1 (heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A1), a multifunctional RNA binding protein, is required for the IRES-dependent translation of many specific RNAs within the cell cytoplasm. The phosphorylation of hnRNP A1 is required for its cytoplasmic accumulation. I have identified and validated the role of HK2 in hnRNP A1 cellular localization by immunofluorescence microscopy, by analysis of HRV infection and by siRNA-based screening. These studies show that decreased HK2 protein levels lead to decreased cytoplasmic accumulation of hnRNPA1 during osmotic shock and HRV infection, to a decrease in HRV-infected cells and to decreased caspase activation in osmotically stressed and HRV-infected cells. Thus, HK2 may regulate hnRNP A1 cytoplasmic localization following HRV infection.

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The aim of this master's thesis is to deal with the problems of tests and testing. Firstly, tests, testing items, problems of solvability and unbiased assessment were described. On the basis of particular language tests - level A1 according to Common European Framework of Reference for Languages, which test foreigners' Czech (a foreign language for them) - the success rate of receptive skills (reading) and productive skills (writing) is compared. Concerning writing skills, there is a problem how to reach unbiased assessment. Finally, linguodidactic recommendation intended mainly for teachers of Czech as a foreign language is formulated. Keywords test, test's task, language level A1

A presente pesquisa descreve, analisa e discute a exequibilidade de efetiva comunicação oral entre aprendizes em nível inicial de aprendizagem de FLE. Fundamentando-nos em Kerbrat-Orecchioni (1990; 1996) e Marcuschi (2003; 2008) descrevemos o funcionamento da interação verbal, explicitando seus fatores internos bem como as condutas que determinam esta prática. Apoiando-nos ainda em obras que defendem um ensino pautado na interação e na espontaneidade, como, por exemplo, Kramsch (1984), Schiffler (1991) e Massaro (2008) expomos suas contribuições para a área da didática do francês língua estrangeira. Analisando efetivas interações entre aprendizes inscritos em um Curso Experimental que oferecemos junto ao Serviço de Cultura e Extensão da Faculdade de Filosofia, Letras e Ciências Humanas da Universidade de São Paulo, detectamos procedimentos de validação interlocutória (de caráter verbal, paraverbal e não verbal) utilizados para assegurar o sucesso da troca comunicativa espontânea na execução de tarefas linguageiras. A análise dos turnos de fala dos aprendizes evidenciou que a interação espontânea conduz naturalmente à colaboração na solução de problemas. Recorrendo frequentemente a reguladores e captadores, os aprendizes asseguram o pacto com o interlocutor, demonstrando assim seu engajamento discursivo na troca interacional em curso, ainda que pautado por restrições linguísticas características do nível inicial de aprendizagem de língua estrangeira. / The present research describes analyses and discusses the feasibility of effective oral communication of FFL (French as a Foreign Language) learners at an early stage. It is based upon Kerbrat-Orecchioni (1990; 1996) and Marcuschi (2003; 2008) and it describes how verbal interaction works, evincing its internal factors as well as the conducts that determine this practice. It also relies on books that defend the teaching grounded on interaction and spontaneity, as, for instance, Kramsch (1984), Schiffler (1991) and Massaro (2008) and it exposes their contribution to the teaching area of French as a foreign language. Analyzing effective interactions between learners enrolled in an Experimental Course offered in the Center of Culture and Extension of the Philosophy, Languages and Human Sciences College of the University of São Paulo, it has been noticed procedures of interlocutory validation (of verbal, paraverbal and non-verbal character) used to reassure the success of the spontaneous communication exchange in the execution of language tasks. The appraisal of the speaking turns of the apprentices has evidenced that the spontaneous interaction results in the collaboration of problem solving. Frequently recurring to regulators and receivers, learners ensure the agreement with the interlocutor, demonstrating, thus, their discoursive engagement in the interactional exchange in progress, despite its being based on linguistic restrictions, which are characteristic of the early stage of foreign language learning.

Adenosina e óxido nítrico, importantes neuromoduladores endógenos, atuam modulando finamente o controle neural cardiovascular no núcleo de trato solitário (NTS). Embora se tenha conhecimento sobre a relação entre adenosina e NO periférica e centralmente, em particular, no bulbo, os mecanismos pelos quais a adenosina interfere na dinâmica da neurotransmissão nitrérgica, ainda não são totalmente conhecidos. Logo, alterações na interação entre esses sistemas podem ser especialmente relevantes para indivíduos predispostos à hipertensão. Dessa forma, os objetivos do presente estudo foram estudar a interação entre o sistema adenosinérgico e nitrérgico em culturas de células da porção dorsomedial do bulbo de ratos normotenso Wistar Kyoto (WKY) e espontaneamente hipertensos (SHR). Para tal, utilizou-se técnicas para quantificação dos níveis de nitrito, PCR em tempo real e RNA de interferência. Foi observada uma redução e um aumento concentração-dependente nos níveis de nitrito e do mRNA da nNOS induzido pelos agonistas dos receptores A1(A1R) e A2A(A>sub>2AR), CPA e CGS21680, respectivamente. Os efeitos nos níveis de nitrito foram atenuados pela administração dos antagonistas seletivos dos A1R e A2AR, CPT e ZM241385. Knockdown dos A1R e A2AR mostraram que a redução da expressão desses receptores aumentaram e diminuíram os níveis de expressão da nNOS, respectivamente. Pré-tratamento com o inibidor não seletivo da nNOS, L-NAME, aboliu os níveis aumentados de nitrito desencadeados pelo CGS21680 em células de WKY e SHR. Por fim, é mostrado que a via cAMP-PKA está envolvida na sinalização que deflaga tantos os níveis reduzidos de nitrito, via A1R, quantos os níveis aumentados de nitrito, via A2AR, em culturas de WKY e SHR. Em síntese, nossos resultados destacam a influência da adenosina sobre a síntese de NO em culturas de células da porção dorsomedial do bulbo de ratos WKY e SHR. Pelo menos em parte, o perfil modulatório é diferenciado em ratos SHR / Adenosine and nitric oxide, important endogenous neuromodulators, act on the fine tuning regulation of neural cardiovascular control in the nucleus tractus solitarius (NTS). Although the relationship between adenosine and NO peripheral and centrally, is well established, in particular, in the oblongata medulla, the mechanisms by which adenosine interferes in the dynamics of nitrergic neurotransmission, is not completely understood. Thus, changes in the interaction between these systems may be especially relevant for individuals predisposed to hypertension. The aim of this study was to evaluate the interaction between the adenosinergic and nitrergic systems in cell culture from the dorsomedial medulla oblongata of Wistar Kyoto (WKY) and spontaneously hypertensive rats (SHR). This purpose was performed the quantification of nitrite level, RT-PCR analysis and RNA interference. We observed a concentration-dependent decrease and increase of nitrite and nNOS mRNA levels in cultured cells of WKY and SHR rats induced by agonists of adenosine A1 (A1R) and A2A receptor (A2AR), CPA and CGS21680, respectively. These effects in nitrite level were attenuated by the administration of the A1R and A2AR selective antagonist, CPT and ZM241385. Furthermore, knockdown of A1R and A2AR showed an increase and decrease of nNOS mRNA levels, respectively. The pretreatment with nonselective inhibitor of NOS, L-NAME, abolished nitrite-increased levels triggered by CGS 21680 in WKY and SHR cells. Finally, it is shown that the cAMP-PKA pathway is involved in A1R and A2AR -mediated decrease and increase in nitrite levels in SHR and WKY cells. In summary, our results highlight the influence of adenosine on nitric oxide levels in cultured cells from dorsal medulla oblongata of WKY and SHR rats. In part, the modulatory profile is different in the SHR strain

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Les interactions protéine-ligand interviennent dans de nombreux processus biochimiques et permettent notamment à certaines protéines sanguines d’assurer leur rôle de transport. Parmi ces protéines figurent notamment l’albumine, protéine la plus abondante du plasma, ou l’apolipoprotéine A1 (ApoA1), majoritaire au sein des lipoprotéines de haute densité (HDL). Dans un contexte diabétique, la glycation des protéines induit des modifications structurales affectant ainsi leur potentiel d’interaction.Le premier objectif de ce travail de thèse visait à déterminer l’impact de la glycation de l’albumine sur sa liaison au liraglutide, un médicament de plus en plus utilisé dans le traitement du diabète de type 2. Ensuite, la seconde partie de ce travail a consisté en la production d’une ApoA1 humaine recombinante fonctionnelle afin d’étudier ses propriétés d’interaction, sous forme libre ou associée aux phospholipides. La technique RMN (résonance magnétique nucléaire) a été utilisée sur les protéines préalablement marquées au fluor (pour le liraglutide) ou aux isotopes stables 13C/15N (pour l’ApoA1). La titration microcalorimétrique isotherme (ITC), méthode complémentaire à la RMN a été appliquée pour l’étude des interactions avec l’avantage de ne nécessiter aucun marquage. Différentes stratégies de clonage ont été explorées pour la surexpression de l’ApoA1 en bactérie Clearcoli.Les résultats obtenus démontrent une altération de l’affinité de l’albumine pour le liraglutide in vitro et in vivo, dépendante du degré de glycation. Ces résultats, enrichis d’une analyse lipidomique et peptidique, permettent d’expliquer les observations cliniques concernant la baisse de l’efficacité de médicaments liant l’albumine chez les patients ayant un diabète mal contrôlé. Concernant l’ApoA1, le choix de l’étiquette de fusion reste à optimiser, mais sa surexpression de manière soluble et abondante a été obtenue pour l’ApoA1 marquée et non marquée. / Protein-ligand interactions are involved in many biochemical processes. They are notably implicated in the role of transporter proteins in blood. Albumin, the most abundant plasma protein, and apolipoprotein A1 (ApoA1), which is the main component of high-density lipoprotein (HDL) belong to this class of proteins. In the context of diabetes, proteins are altered by glycation which leads to structural modifications and potentially affect their interactions.The first objective of this work was to determine the impact of albumin glycation on its binding to liraglutide, a drug increasingly used in the treatment of type 2 diabetes. Then, the second part of this work involved the production of recombinant functional human ApoA1 in order to study its interaction properties, in its lipid-free form or associated with phospholipids. The NMR (nuclear magnetic resonance) technique has been used on proteins previously labeled with fluorine (for liraglutide) or stable 13C/15N isotopes (for ApoA1). In addition, isothermal titration microcalorimetry (ITC), has been applied to the study of interactions with the advantage of not requiring any labeling. Various cloning strategies have been explored for the overexpression of ApoA1 in Clearcoli bacteria.The results demonstrate an alteration of the affinity of albumin for liraglutide in vitro and in vivo, depending on the degree of glycation. These results, supported by a lipidomic and peptide analysis, explain clinical observations concerning the decrease of efficacy of albumin-binding drugs in patients with poorly controlled diabetes. Regarding ApoA1, the choice of the fusion tag remains to be optimized, but both labeled and unlabeled ApoA1 were successfully overexpressed at high yields in a soluble form.

Submitted by Simone Souza (simonecgsouza@hotmail.com) on 2017-09-18T13:31:10Z No. of bitstreams: 1 DISS_2014_Afonso Bezerra Ribeiro.pdf: 2755836 bytes, checksum: 9328d5ba556fe7eb6eb229cb1cd9ecdc (MD5) / Approved for entry into archive by Jordan (jordanbiblio@gmail.com) on 2017-09-19T15:50:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISS_2014_Afonso Bezerra Ribeiro.pdf: 2755836 bytes, checksum: 9328d5ba556fe7eb6eb229cb1cd9ecdc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-19T15:50:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISS_2014_Afonso Bezerra Ribeiro.pdf: 2755836 bytes, checksum: 9328d5ba556fe7eb6eb229cb1cd9ecdc (MD5) Previous issue date: 2014-09-22 / A hanseníase é uma doença infecto contagiosa, endêmica, de evolução crônica, granulomatosa causada pelo M. leprae, que representa um grave problema de saúde pública no Brasil e em vários países do mundo. O objetivo deste estudo foi analisar as populações de neutrófilos, monócitos, células T CD4+, T CD8+ e T regulatórias no sangue periférico de pacientes com hanseníase nas formas clínicas multibacilar e paucibacilar bem como a expressão da proteína anti-inflamatória ANXA1 e os níveis de IL-10. A quantificação de leucócitos no sangue periférico dos pacientes com hanseníase e seus controles (indivíduos sadios sem histórico clínico de infecção – controle negativo; e paciente com tuberculose – controle positivo) foi realizada através da contagem em câmara hemocitométrica de Neubauer e diferencial em esfregaço sanguíneo. A determinação do fenótipo das células T CD4+, TCD8+ e Treg foi realizada através de imunofluorescência. A expressão da ANXA1 e os níveis de IL-10 nos leucócitos e plasma forma através das técnicas de imunofluorescência e ELISA. Os resultados foram analisados através da análise de variância (One-way ANOVA) com pós teste de Bonferroni. As associações entre dados não paramétricos foram analisadas por regressão linear e pelo coeficiente de correlação do teste de Spearman. Os resultados demonstraram queos leucócitos totais nos pacientes MB (22,93 x 106 ± 0,37 cel/mL) e PB (26,58 x 106 ± 1,12 cel/mL) apresentaram um aumento significativo do número de células quando comparado ao grupo CS (6,43 x 106 ± 0,74 cel/mL). Já grupo PB apresentou um aumento significativo também em relação ao grupo CP (21,45 x 106 ± 0,38 cel/mL). A população de monócitos nos pacientes MB estava aumentada (1,45 x 106 ± 0,28 cel/mL) quando comparados ao grupo CS (0,59 x 106 ± 0,70 cel/mL) e CP (0,70 x 106± 0,17 cel/mL). O grupo dos PB (0,23 x 106 ± 0,04 cel/mL) quando comparado ao grupo CS e CP não apresentou um aumento significativo entre os grupos. Já os neutrófilos dos pacientes MB (14,04 x 106 ± 0,53 cel/mL) quanto dos PB (14,28 x 106 ± 0,22 cel/mL) apresentaram aumento significativo em relação aos CS (3,42 x 106 ± 0,36 cel/mL) e CP (1,21 x 106 ± 0,06 cel/mL). Nas células T CD4+, foi observado um aumento nas formas clínicas MB (1,99 x 106 ± 0,29 cel/mL) e PB (1,89 x 106 ± 0,18 cel/mL) comparado aos controles sadio e positivo. Em relação as células T CD8+ , o número desse leucócito foi mais expressivo na forma MB (1,14 x 106 ± 0,10 cel/mL), do que o grupo CS (0,62 x 106 ± 0,05 cel/mL), enquanto que o grupo PB (0,28 x 106 ± 0,02 cel/mL) apresentou redução em relação ao grupo CS. Na população de células Treg, a forma clínica MB (1,85 x 106 ± 0,27) apresentou maior número quando comparado ao grupo CS (0,56 x 106 ± 0,07 cel/mL) e CP (0,30 x106 ± 0,02 cel/mL). O grupo PB (0,29 x 106± 0,03 cel/mL) não apresentou aumentou significativo quando comparado ao grupo CS e CP. A ANXA1 apresentou redução em leucócitos circulantes nos pacientes PB e MB, porém apresentou altos níveis liberada no plasma, sendo que os pacientes multibacilares apresentaram níveis superiores aos paucibacilares. Por se tratar de uma molécula reguladora da inflamação, sua ação parácrina poderia estar potencializando a ação anti-migratória e inibindo a ação pró-inflamatória nos leucócitos circulantes na infecção induzida por M. leprae, principalmente nos pacientes multibacilares. Nenhuma correlação foi observada entre a expressão da anexina-A1 e os níveis de IL-10 nos pacientes com hanseníase, indicando que essa proteína não está envolvida no mecanismo de indução de produção dessa citocina nos leucócitos circulantes. / Leprosy is endemic, infectious disease of chronic evolution, granulomatous caused by M. leprae, which represents a serious public health problem in Brazil and in countries around the world. The aim of this study was to analyze the populations of neutrophils, monocytes, TCD4+ cells, TCD8+ and T regulatory peripheral blood of patients with leprosy in multibacillary clinical and paucibacillary forms as well as the expression of anti-inflammatory ANXA1 protein and the levels of IL -10. Quantification of leukocytes in peripheral blood of leprosy patients and controls (healthy individuals without clinical history of infection - negative control, and patient with tuberculosis - positive control) was performed by hemocytometer Neubauer chamber counting and differential blood smear. The determination of the phenotype of TCD4+, TCD8+ and Treg cells was performed by immunofluorescence. The expression of ANXA1 and IL-10 levels in plasma and leukocytes by way of immunofluorescence and ELISA. The results were analyzed by analysis of variance (One-way ANOVA) with Bonferroni post test. The associations between non-parametric data were analyzed by linear regression and the correlation coefficient of Spearman. The results showed that the total leukocytes in patients MB (22.93 ± 0.37 x 106 cells / ml) and BP (26.58 ± 1.12 x 106 cells / ml) showed a significant increase in cell number when compared the CS group (6.43 ± 0.74 x 106 cells / mL). The CP group showed a significant increase also in relation to the CP group (21.45 ± 0.38 x 106 cells / ml). The population of monocytes in MB patients was increased (1.45 ± 0.28 x 106 cells / mL) compared to the CS group (0.59 ± 0.70 x 106 cells / mL) and CP (0.70 x 106 ± 0.17 cells / mL). The group of PB (0.23 x 0.04 ± 106 cells / mL) compared to CS and CP group did not show a significant increase between the groups. Neutrophils of MB patients (14.04 ± 0.53 x 106 cells / mL) and the PB (14.28 ± 0.22 x 106 cells / mL) showed a significant increase from the CS (3.42 x 106 ± 0.36 cell / ml) and CP (1.21 ± 0.06 x 106 cells / ml). TCD4+ cells, an increase was observed in clinical forms MB (1.99 ± 0.29 x 106 cells / ml) and BP (1.89 ± 0.18 x 106 cells / ml) compared to healthy, positive controls. Regarding the TCD8+ cells, the number of leukocytes was more significant in MB (1.14 x 0.10 ± 106 cells / mL) than the CS group (0.62 ± 0.05 x 106 cells / mL ), while the PB group (0.28 ± 0.02 x 106 cells / mL) decreased compared to the CS group. In the population of Treg cells, the clinical form MB (1.85 x 106 ± 0.27) had a higher number compared to the CS group (0.56 ± 0.07 x 106 cells / mL) and CP (0.30 x106 ± 0.02 cells / mL). The CP group (0.29 ± 0.03 x 106 cells / mL) had not increased significantly when compared to the CS group and CP. The ANXA1 decreased in circulating leukocytes in patients PB and MB, but showed high levels released into the plasma, and the multibacillary patients had levels above the paucibacillary. Being a regulatory molecule of inflammation, its paracrine action might be enhancing the anti-migratory action and inhibiting pro-inflammatory action in circulating leukocytes in infection induced by M. leprae, particularly in MB patients. No correlation was observed between the expression of annexin-A1 and IL-10 levels in patients with leprosy, indicating that this protein is not involved in the production of this cytokine induction mechanism in circulating leukocytes.

Submitted by Valquíria Barbieri (kikibarbi@hotmail.com) on 2018-04-18T21:33:42Z No. of bitstreams: 1 DISS_2015_Helen Aguiar Lemes da Silva.pdf: 1095638 bytes, checksum: 6455f6c98e8a5cf2bacf4cd9e2f12fae (MD5) / Approved for entry into archive by Jordan (jordanbiblio@gmail.com) on 2018-04-27T17:33:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISS_2015_Helen Aguiar Lemes da Silva.pdf: 1095638 bytes, checksum: 6455f6c98e8a5cf2bacf4cd9e2f12fae (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-27T17:33:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISS_2015_Helen Aguiar Lemes da Silva.pdf: 1095638 bytes, checksum: 6455f6c98e8a5cf2bacf4cd9e2f12fae (MD5) Previous issue date: 2015-03-27 / FAPEMAT / CNPq / A leishmaniose tegumentar americana é causada por protozoários do gênero Leishmania e a transmissão ocorre através da picada de flebotomíneos. É uma doença infecciosa, que acomete pele e mucosa. A resposta imune celular tem sido apontada como um importante fator na progressão das lesões da leishmaniose tegumentar. A proteína anti-inflamatória anexina-A1 é reconhecida como um importante mediador no processo inflamatório. O objetivo deste trabalho foi quantificar a expressão da anexina-A1, nos macrófagos e nas células T CD4+ e T CD8+ de fragmento da pele de paciente com leishmaniose cutânea, e correlacionar com o aspecto histopatológico. Biópsias de pele de pacientes (n=55) com leishmaniose cutânea foram processadas e analisadas. Para caracterizar a espécie de Leishmania foi utilizada PCR–ITS1/RFLP, identificando que todas as amostras biológicas apresentavam o parasita Leishmania brasiliensis. Na análise histopatológica, observou-se intensa migração leucocitária, evidenciando infiltrado histiolinfoplasmocitário. Em seguida foi realizada a determinação da expressão de anexina-A1 nos macrófagos e nas células T CD4+ e T CD8+ dos pacientes pela técnica de imunofluorescência. Na quantificação da expressão da anexina-A1, observou-se um aumento dessa proteína nos macrófagos da pele de pacientes com leishmaniose cutânea, quando comparados com essas células em individuos saudáveis (controle: 64,6 ± 3,0 UA; LT: 107,0 ± 2,7 UA; p<0,0001). Esses dados podem indicar a atuação dessa proteina durante o processo de fagocitose. Além disso, os macrófagos presentes nas lesões do tipo reação exudativa necrótica da pele de pacientes com leishmaniose cutânea apresentavam maior expressão dessa proteína (123,5 ± 6,9 UA) quando comparados com as células presentes nas lesões do tipo reação exudativa granulomatosa e reação exudativa celular (100,0 ± 4,1, p<0,01; e 104,6 ± 3,0, p<0,05). Esses dados podem indicar que, nas lesões do tipo reação exudativa necrótica, os macrófagos expressam mais anexina-A1 devido a ativação celular para fagocitose dos parasitas e de fragmentos celulares provenientes das regiões necróticas. Com relação as células T CD4+ e T CD8+, nossas análises demonstraram que essas células apresentavam maiores níveis de anexina-A1 nas lesões do tipo reação exudativa celular (TCD4+: 123,9 ± 11,6 UA) (TCD8+: 121,3 ± 9,0 UA), quando comparadas com as células presentes nas lesões do tipo reação exudativa granulomatosa e reação exudativa necrótica (TCD4+: 87,7 ± 5,2, p<0,05; e 53,7 ± 15,7, p<0,01) (TCD8+: 76,0 ± 11,4, p<0,05; e 77,0 ± 10,4, p<0,05). Esses dados demonstram que essa proteína está expressa durante a resposta celular frente aos antígenos da Leishmania. Além disso, a expressão aumentada da anexina-A1 nas células T presentes nas lesões do tipo reação exudativa celular pode ser explicada pelo aspecto mais disseminado do infiltrado histiolinfoplasmocitário, com maior presença de edema e ausência de contenção da infecção como ocorre nas lesões do tipo reação exudativa granulomatosa. Em conclusão, os dados apresentados nesse trabalho, em associação com os dados da literatura, demonstram a relevância da dinâmica da anexina-A1 na regulação do sistema imunológico durante a leishmaniose cutânea. Esses dados trazem, pela primeira vez, uma contribuição para o entendimento do papel da anexina-A1 na ativação dos macrófagos e células T na leishmaniose cutânea. Estudos futuros permitirão o entendimento preciso do mecanismo de ação da anexina-A1 no processo infeccioso da leishmaniose cutânea. / American tegumentary leishmaniasis is caused by protozoa of the genus Leishmania, and the transmission occurs through the sandflies bite. It is an infectious disease that affects the skin and mucosa. The cellular immune response has been identified as an important factor in the progression of tegumentary leishmaniasis lesions. The anti-inflammatory protein annexin A1 is recognized as an important mediator in the inflammatory process. The aim of this study is quantify the annexin-A1 expression in macrophages and CD4+ and CD8+ T cells from skin fragment of patients with cutaneous leishmaniasis, and correlates with histopathological aspects. Skin biopsies of patients (n= 55) with cutaneous leishmaniasis were processed and analyzed. To characterize the species of Leishmania, it was used ITS1-PCR/RFLP, which identified that all biological samples had parasite Leishmania brasiliensis. In the histological analysis, there was an intense leukocyte migration, showing lymphohistiocytic and plasmocytic infiltrate. Then, it was conducted the determination of annexin-A1 expression in macrophages and CD4+ and CD8+ T cells by immunofluorescence technique. In annexin-A1 expression quantification, there was an increase of this protein in macrophages from patients skin with cutaneous leishmaniasis, when compared to these cells from healthy individuals (control: 64.6 ± 3.0 AU, LT: 107.0 ± 2.7 AU; p <0.0001). These data might indicate the role of this protein in the phagocytic process. In addition, macrophages present in the necrotic exudative reaction skin lesions of patients with cutaneous leishmaniasis showed higher expression of the protein (123.5 ± 6.9 AU) when compared with cells present in the granulomatous exudative reaction and cellular exudative reaction lesions (100.0 ± 4.1, p <0.01, and 104.6 ± 3.0, p <0.05). These data may indicate that in necrotic exudative reaction lesions, macrophages express more annexin-A1 due to cell activation induce by phagocytosis of parasites and cellular debris from necrotic regions. Regarding CD4+ and CD8+ T cells, our analysis showed that these cells had higher levels of annexin-A1 in cellular exudative reaction lesions (CD4+: 123.9 ± 11.6 AU) (CD8+: 121.3 ± 9.0 AU) when compared with cells present in necrotic exudative reaction and granulomatous exudative reaction lesions (CD4+: 87.7 ± 5.2, p <0.05; and 53.7 ± 15.7, p <0.01) (CD8+ T: 76.0 ± 11.4, p <0.05; and 77.0 ± 10.4, p <0.05). These data demonstrate that this protein is active during the cellular response to Leishmania antigens. Furthermore the increased annexin-A1 expression in T cells from cellular exudative reaction lesion could be explained by the widespread aspect of lymphohistiocytic and plasmocytic infiltrate, with higher presence of edema and absence infection containment, as occurs in the granulomatous exudative reaction lesions. In conclusion, the data presented here, together with the literature, show the relevance of the annexin-A1 dynamics in the immune system regulation during cutaneous leishmaniasis. These data shows for the first time, a contribution to understanding the role of annexin-A1 in the activation of macrophages and T cells in the cutaneous leishmaniasis. Future studies will allow the accurate understanding of the annexin-A1 mechanism of action in the infection process of cutaneous leishmaniasis.

Adenosina e óxido nítrico, importantes neuromoduladores endógenos, atuam modulando finamente o controle neural cardiovascular no núcleo de trato solitário (NTS). Embora se tenha conhecimento sobre a relação entre adenosina e NO periférica e centralmente, em particular, no bulbo, os mecanismos pelos quais a adenosina interfere na dinâmica da neurotransmissão nitrérgica, ainda não são totalmente conhecidos. Logo, alterações na interação entre esses sistemas podem ser especialmente relevantes para indivíduos predispostos à hipertensão. Dessa forma, os objetivos do presente estudo foram estudar a interação entre o sistema adenosinérgico e nitrérgico em culturas de células da porção dorsomedial do bulbo de ratos normotenso Wistar Kyoto (WKY) e espontaneamente hipertensos (SHR). Para tal, utilizou-se técnicas para quantificação dos níveis de nitrito, PCR em tempo real e RNA de interferência. Foi observada uma redução e um aumento concentração-dependente nos níveis de nitrito e do mRNA da nNOS induzido pelos agonistas dos receptores A1(A1R) e A2A(A>sub>2AR), CPA e CGS21680, respectivamente. Os efeitos nos níveis de nitrito foram atenuados pela administração dos antagonistas seletivos dos A1R e A2AR, CPT e ZM241385. Knockdown dos A1R e A2AR mostraram que a redução da expressão desses receptores aumentaram e diminuíram os níveis de expressão da nNOS, respectivamente. Pré-tratamento com o inibidor não seletivo da nNOS, L-NAME, aboliu os níveis aumentados de nitrito desencadeados pelo CGS21680 em células de WKY e SHR. Por fim, é mostrado que a via cAMP-PKA está envolvida na sinalização que deflaga tantos os níveis reduzidos de nitrito, via A1R, quantos os níveis aumentados de nitrito, via A2AR, em culturas de WKY e SHR. Em síntese, nossos resultados destacam a influência da adenosina sobre a síntese de NO em culturas de células da porção dorsomedial do bulbo de ratos WKY e SHR. Pelo menos em parte, o perfil modulatório é diferenciado em ratos SHR / Adenosine and nitric oxide, important endogenous neuromodulators, act on the fine tuning regulation of neural cardiovascular control in the nucleus tractus solitarius (NTS). Although the relationship between adenosine and NO peripheral and centrally, is well established, in particular, in the oblongata medulla, the mechanisms by which adenosine interferes in the dynamics of nitrergic neurotransmission, is not completely understood. Thus, changes in the interaction between these systems may be especially relevant for individuals predisposed to hypertension. The aim of this study was to evaluate the interaction between the adenosinergic and nitrergic systems in cell culture from the dorsomedial medulla oblongata of Wistar Kyoto (WKY) and spontaneously hypertensive rats (SHR). This purpose was performed the quantification of nitrite level, RT-PCR analysis and RNA interference. We observed a concentration-dependent decrease and increase of nitrite and nNOS mRNA levels in cultured cells of WKY and SHR rats induced by agonists of adenosine A1 (A1R) and A2A receptor (A2AR), CPA and CGS21680, respectively. These effects in nitrite level were attenuated by the administration of the A1R and A2AR selective antagonist, CPT and ZM241385. Furthermore, knockdown of A1R and A2AR showed an increase and decrease of nNOS mRNA levels, respectively. The pretreatment with nonselective inhibitor of NOS, L-NAME, abolished nitrite-increased levels triggered by CGS 21680 in WKY and SHR cells. Finally, it is shown that the cAMP-PKA pathway is involved in A1R and A2AR -mediated decrease and increase in nitrite levels in SHR and WKY cells. In summary, our results highlight the influence of adenosine on nitric oxide levels in cultured cells from dorsal medulla oblongata of WKY and SHR rats. In part, the modulatory profile is different in the SHR strain