A alface é a hortaliça folhosa mais consumida no mundo. É uma rica fonte de vitaminas e sais minerais que está presente no cardápio diário de grande parte da população brasileira. O nitrogênio é o nutriente mais importante para a produção de alface. O excesso ou falta desse nutriente acarretam queda na produção e problemas de qualidade nutritiva, por excesso de nitrato. A dose recomendada de nitrogênio varia muito entre autores e órgãos oficiais. Uma parte do nitrogênio aplicado ao solo é perdida por lixiviação, contaminando os mananciais de água. Devido a isso é recomendada a sua aplicação em diversas etapas, cujo número também é variável nas recomendações. Este trabalho teve por objetivo determinar qual a dose de nitrogênio e seu modo de aplicação que proporcionam a maior produção, sem comprometer a qualidade da alface do tipo “lisa”, nas condições de clima e solo do município de Eldorado do Sul, região da Grande Porto Alegre, RS. Foram realizados dois estudos, um testando doses crescentes de nitrogênio sob a forma de uréia e o outro testando o parcelamento em diversas épocas do cultivo. Foram avaliados a produção de matéria fresca e seca, os teores de nitrogênio, amônio e nitrato no tecido seco, a extração e a eficiência do uso do fertilizante. Os resultados revelam que a dose de 200 kgha-1 foi a que proporcionou maior rendimento da cultura e que a dose de 400 kgha-1 diminui a produção. A extração de nitrogênio foi da ordem de 35,7 kgha-1 e os teores de nitrogênio, amônio e nitrato foram respectivamente de 2,45%; 651,7 mg.kg-1 e 153,6 mg.kg-1. O teor de nitrato na alface foi muito menor do que o considerado prejudicial a saúde humana. A eficiência do uso do fertilizante foi de 12,06% quando aplicado 200 kgha-1 de N em 3 épocas. A eficiência do uso do adubo foi aumentada em 26,35% com o parcelamento em 4 doses iguais de 50 kg ha-1, aplicadas no plantio e aos 15, 30 e 45 dias após, sem alterar a qualidade visual e nutricional da alface. / Lettuce is the world’s most consumed leafy vegetable. It has a high content of vitamin C and minerals and is as well daily on the table of the Brazilian population. Because lettuce is harvested in its vegetative stage, nitrogen is very important for its production. Excess or deficiency results in reduced yields and poor quality. The recommended amount of nitrogen varies according to different researchers. Part of the applied nitrogen gets lost through leaching which contaminates underground waters. Therefore, nitrogen fertilization should be splitted in steps, and even though there are large variations between recommendations. The objective of this research was to determine which nitrogen rate and application time result in highest yields, without negative effects on quality under the growing conditions of the metropolitan area of Porto Alegre, Rio Grande do Sul, Brazil. Two studies were conducted. In the first one, the effects of increasing rates of nitrogen as urea were evaluated. In the second experiment, the effects of different application forms for the best urea rate were evaluated. From both experiments were analyzed fresh and dry weight of the harvest, total nitrogen, ammonium and nitrate contents in the dry matter, as well as calculated the amount of extracted nitrogen and the efficiency of fertilizer usage. From the first experiment it was concluded that the dose of 200kg.ha-1 results in the highest production and that even higher doses have negative effects on butterhead lettuce production. Nitrogen extraction was in the order of 35.7kg.ha-1, while nitrogen, ammonium and nitrate contents were 2.45%, 651.7mg.kg-1 and 153.6mg.kg-1, respectively. Nitrate contents stayed below the level considered harmful to human health and use efficiency of the fertilizer was 12.06%. Results from the second experiment indicate that splitting the best dose in four applications: at transplant and 15, 30 and 45 days after, is the most effective and increases in 26.35% the nitrogen absorption without changing crop quality.

Estudos recentes têm demonstrado o risco de contaminação microbiológica em frutas e vegetais irrigados com água não tratada, a qual é a mais utilizada na agricultura, tanto em nível mundial, quanto no Brasil. O objetivo da primeira parte deste trabalho foi avaliar a qualidade microbiológica das fontes de água superficiais de irrigação mais utilizadas no sul do Brasil e seu impacto sobre a segurança de alfaces. Para tanto, foram realizadas coletas mensais de água de irrigação e alfaces irrigadas de julho de 2014 a agosto de 2015, em quatro propriedades da região metropolitana de Porto Alegre. Na água de irrigação, foi verificada prevalência de 100% dos indicadores Coliformes Totais e Enterococcus spp., e de 84,8% do indicador E. coli genérica. Já para as amostras de alface, verificou-se também a prevalência de 100% para Coliformes Fecais e 38,3% para E. coli Genérica. Não houve diferença significativa entre os níveis dos indicadores para as diferentes fontes de água avaliadas. As amostras com contagens de E. coli acima de 100 UFC/100mL foram submetidas à análise de presença de patógenos entéricos. E. coli O157:H7 foi identificada em 13 das 64 amostras analisadas, sendo nove amostras de açude e quatro amostras de riachos. Salmonella spp. foi identificada em seis das 64 amostras, das quais quatro foram amostras de açude e duas de riachos Salmonella spp. foi identificada em 4 das 27 amostras avaliadas de alface. As altas contagens de Enterococcus spp. e E. coli genérica apresentaram uma correlação positiva com a presença de Salmonella spp. Foi verificada a influência de fatores climáticos e práticas agrícolas sobre os níveis de contaminação na alface. Na busca por fontes alternativas de água para utilização na agricultura, a água residual urbana vem sendo considerada uma boa opção. Entretanto, este tipo de água geralmente possui uma alta carga de contaminação microbiana. Em um segundo momento, foi avaliado a eficácia da aplicação de dióxido de cloro (ClO2) no tratamento de águas residuais urbanas com tratamento secundário. Verificou-se que o desinfetante foi capaz de melhorar a qualidade microbiológica da água, reduzindo significativamente o indicador E. coli quantificado pelo método tradicional em placas. Entretanto, esta diferença não foi observada quando a E. coli foi quantificada pelo método PMA-qPCR, indicando que o tratamento de água residual com ClO2 pode induzir as bactérias a entrar no estado viável mas não cultivável (VNC). A proporção de amostras positivas para a presença de patógenos foi baixa quando comparada à água sem tratamento (7 em 8) e com tratamento com ClO2 (1 em 8) Apesar dos bons resultados na redução da contaminação, foi observado um acúmulo significativo de cloratos nas amostras de alface, o que pode apresentar risco químico ao consumidor. Uma vez que foi identificada a presença de E. coli O157:H7 em fontes de água de irrigação no sul do Brasil, objetivou-se, em um terceiro momento do presente trabalho, avaliar a capacidade de adaptação e multiplicação de quatro isolados e um pool de E. coli O157:H7 quando inoculados em água de açude filtrada, a 26°C, por até 72 h. Os isolados identificados como Ec1(açude) e Ec2 (riacho) apresentaram diferenças significativas nos parâmetros de taxa máxima de crescimento e fase Lag. Os isolados também foram testados quanto ao comportamento frente ao desinfetante hipoclorito de sódio aplicado em água de irrigação filtrada, nas concentrações de 5 mg/L e 7 mg/L de cloro residual. Quando avaliada a redução pelo método tradicional em placas foi verificado uma redução de 100% dos isolados, após 30 min de contato com a água de irrigação tratada com o desinfetante a 7 mg/L, com uma concentração de 5 mg/L foram identificadas redução média de 3.15 (± 0.02) Log cfu / mL após 30 min. Já pelo método de quantificação por PMA-qPCR, não foi observada redução significativa entre as concentrações testadas, indicando um possível efeito bacteriostático do hipoclorito de sódio quando utilizado nas condições testadas. A partir dos resultados obtidos na presente tese, observa-se um alto risco de contaminação de vegetais irrigados por águas superficiais, sendo necessária a adoção de medidas de controle, em nível de produção primária. / Recent studies indicated microbial contamination risk in fruits and vegetables irrigated with untreated water, which is the most common source of irrigation water worldwide and in Brazil. The objective of the first part of this work was to evaluate microbial quality of superficial irrigation water sources used in Southern Brazil and its impact on lettuce safety. Samples of irrigation water and lettuces were taken once a month, from July 2014 to August 2015, from four rural farms at the metropolitan region of Porto Alegre city. For irrigation water, 100% prevalence of the indicators total coliforms and Enterococcus spp., and 84.8% for the indicator generic E. coli was determined. For lettuce samples, it was determined 100% prevalence of total coliforms and 38.3% of generic E. coli. There was no significant difference among the indicator levels for the different water sources evaluated. For samples with more than 100 cfu/100mL of generic E. coli, the presence of enteric pathogens was checked. E. coli O157:H7 was detected in 13 from 64 analyzed samples, 9 in pounds and 4 in streams. Salmonella spp. was found in 6 from 64 samples, 4 in pond and 2 in streams. On lettuce samples, Salmonella spp. was in 4 from 27 samples evaluated. High Enterococcus spp. and E. coli counts were positively related to Salmonella presence. It was verified the influence of climatic factors and agricultural practices on lettuce contamination levels Urban residual water is considered a good alternative for using in agriculture. However, this kind of water usually carries a high level of microbial contamination. So, the efficacy of chlorine dioxide (ClO2) in municipal wastewater with a secondary treatment was evaluated. Results show that the disinfectant improved water microbial quality, with significant reduction of generic E. coli when measured by the traditional plate count method. However, the same was not observed when generic E. coli was measured by PMA-qPCR method, which indicates that ClO2 treatment in residual water can induce bacteria to stay viable but not cultivable state (VBNC). The rate of positive samples for the presence of pathogens was low when waters before treatment (7 in 8) and after ClO2 treatment (1 in 8) were compared. Despite good results in water decontamination, significant chlorate accumulation was observed on lettuce samples, what may represent a chemical risk to the consumers. Once identified the presence of E. coli O157:H7 in irrigation water in Southern Brazil, the adaptation and multiplication capacity of 4 strains and a pool of E. coli O157:H7 was evaluated when inoculated in sterile irrigation water at 26°C up to 72 h The isolates Ec1 (from pond) and Ec4 (from stream) significantly differed for the maximum growth rate and lag phase. These isolates were also tested for their behavior against sodium hypochlorite applied in sterile irrigation water at concentrations of 5 mg/L and 7 mg/L of residual chlorine. Reduction of 100% from the isolates after 30 min in contact with the disinfectant at 7mg/L was observed. The concentration of 5 mg / L, caused a mean reduction of 3.15 (± 0.02) Log cfu / mL after 30 min by the plate count method. However, there was no significant reduction among the tested concentrations by using the PMA-qPCR method, indicating a possible bacteriostatic effect of sodium hypochlorite under the tested conditions. The results obtained in this work shows high contamination risk of vegetables when irrigated by superficial waters and highlight the need of control measures in primary production.

Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-09-05Bitstream added on 2014-12-02T11:21:37Z : No. of bitstreams: 1 000800061.pdf: 1547565 bytes, checksum: 2df2d2d64d204de432cc47eb081a5653 (MD5) / A murcha de fusário, causada pelo fungo de solo Fusarium oxysporum f.sp. lactucae é uma das doenças mais severas que ataca m a cultura da alface em todo o mundo. Em 2011, foram encontrados em uma plantação de alface n os município s de Capão Bonito e Campin as n o estado de São Paulo, sintomas característicos do ataque do patógeno. Plantas sintomáticas foram coletadas para identificação do patógeno. O s exame s em microscóp io óptico revel aram a presença de macroconídios falcados de coloração hialina, microconídi os hialinos unicelulares e testes de patogenicidade revelaram a presença de Fusarium oxysporum f.sp. lactucae . Efetuou - se o re - isolamento do patógeno, completa ndo - se assim o Postulado de Koch . No total, for am encontrados 4 isolados patogê nicos atacando pla ntas de alface. A partir do s isolados identificados , fo ram caracterizada s as variações patogênicas através de diferenciadoras de raça. Para esta finalidade foram utilizadas Patriot ( suscetível às raças 1, 2 e 3 ), Costa Rica ( resistente à raça 1 ; suscetível às raças 2 e 3 ), Summer Green ( suscetível às raças 1 e 3 ; resistente à raça 2 ) e Banchu Red Fire ( suscetível às raças 1 e 3, resistente à raça 2 ) . Os resultados obtidos identificaram a ocorrência da raça 3 de Folac. Este é o primeiro relato de ocorrência desta raça no Brasil . A partir do isolado selecionado como sendo o mais agressivo , e caracterizado como pertencente a raça 3 , r ealizou - se a triagem de genótipos de alface, afim de identificar fontes de resistência para uso em programas de melhoramento . No total de 63 genótipos testados apenas Onondaga, Itha ca, Sudenvil e JP - 11 apresentara m - se como resistente a raça 3 de Fusarium oxysporum f.sp. lactucae / The fusarium wilt, caused b y the soil fungus Fusarium oxysporum f.sp. soil lactucae is one of the most severe diseases that attack lettuce crop worldwide. In 2011, were found in a pla nting lettuce in Capão Bonito and Campinas in São Paulo, symptoms characteristic of this pathogen. S ymptomatic plants were collected for pathogen identification. The optical microscope examinations revealed the presence of hyaline staining falcate macroconidia, microconidia unicellular hyaline and pathogenicity tests revealed the presence of Fusarium oxy sporum f.sp. lactucae. We performed the re - isolation of the pathogen, there by supplementing the Koch's postulate. For this purpose were used: Patriot(susceptible to races 1, 2 and 3), Costa Rica (susceptible to races 2 and 3, resistant to race 1); Summer Green (susceptible to races 1 and 3; resistant to race 2) and Banchu Red Fire (susceptible to races 1 and 3, resistant to race 2). The results show the occurrence of race 3 of Folac. This is the first report of the case in Brazil. From the isolated select ed as being the 3 most aggressive, and characterized as belonging to race 3 was held screening of lettuce genotypes in order to identify sources of resistance for use in breeding programs. From of 63 genotypes tested only Onondaga, Ithaca, Sudenvil and JP - 11 were identified as resistant to race 3 of Fusarium oxysporum f.sp. lactucae

A alface é a hortaliça folhosa mais consumida no mundo. É uma rica fonte de vitaminas e sais minerais que está presente no cardápio diário de grande parte da população brasileira. O nitrogênio é o nutriente mais importante para a produção de alface. O excesso ou falta desse nutriente acarretam queda na produção e problemas de qualidade nutritiva, por excesso de nitrato. A dose recomendada de nitrogênio varia muito entre autores e órgãos oficiais. Uma parte do nitrogênio aplicado ao solo é perdida por lixiviação, contaminando os mananciais de água. Devido a isso é recomendada a sua aplicação em diversas etapas, cujo número também é variável nas recomendações. Este trabalho teve por objetivo determinar qual a dose de nitrogênio e seu modo de aplicação que proporcionam a maior produção, sem comprometer a qualidade da alface do tipo “lisa”, nas condições de clima e solo do município de Eldorado do Sul, região da Grande Porto Alegre, RS. Foram realizados dois estudos, um testando doses crescentes de nitrogênio sob a forma de uréia e o outro testando o parcelamento em diversas épocas do cultivo. Foram avaliados a produção de matéria fresca e seca, os teores de nitrogênio, amônio e nitrato no tecido seco, a extração e a eficiência do uso do fertilizante. Os resultados revelam que a dose de 200 kgha-1 foi a que proporcionou maior rendimento da cultura e que a dose de 400 kgha-1 diminui a produção. A extração de nitrogênio foi da ordem de 35,7 kgha-1 e os teores de nitrogênio, amônio e nitrato foram respectivamente de 2,45%; 651,7 mg.kg-1 e 153,6 mg.kg-1. O teor de nitrato na alface foi muito menor do que o considerado prejudicial a saúde humana. A eficiência do uso do fertilizante foi de 12,06% quando aplicado 200 kgha-1 de N em 3 épocas. A eficiência do uso do adubo foi aumentada em 26,35% com o parcelamento em 4 doses iguais de 50 kg ha-1, aplicadas no plantio e aos 15, 30 e 45 dias após, sem alterar a qualidade visual e nutricional da alface. / Lettuce is the world’s most consumed leafy vegetable. It has a high content of vitamin C and minerals and is as well daily on the table of the Brazilian population. Because lettuce is harvested in its vegetative stage, nitrogen is very important for its production. Excess or deficiency results in reduced yields and poor quality. The recommended amount of nitrogen varies according to different researchers. Part of the applied nitrogen gets lost through leaching which contaminates underground waters. Therefore, nitrogen fertilization should be splitted in steps, and even though there are large variations between recommendations. The objective of this research was to determine which nitrogen rate and application time result in highest yields, without negative effects on quality under the growing conditions of the metropolitan area of Porto Alegre, Rio Grande do Sul, Brazil. Two studies were conducted. In the first one, the effects of increasing rates of nitrogen as urea were evaluated. In the second experiment, the effects of different application forms for the best urea rate were evaluated. From both experiments were analyzed fresh and dry weight of the harvest, total nitrogen, ammonium and nitrate contents in the dry matter, as well as calculated the amount of extracted nitrogen and the efficiency of fertilizer usage. From the first experiment it was concluded that the dose of 200kg.ha-1 results in the highest production and that even higher doses have negative effects on butterhead lettuce production. Nitrogen extraction was in the order of 35.7kg.ha-1, while nitrogen, ammonium and nitrate contents were 2.45%, 651.7mg.kg-1 and 153.6mg.kg-1, respectively. Nitrate contents stayed below the level considered harmful to human health and use efficiency of the fertilizer was 12.06%. Results from the second experiment indicate that splitting the best dose in four applications: at transplant and 15, 30 and 45 days after, is the most effective and increases in 26.35% the nitrogen absorption without changing crop quality.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Agronomia, 2017. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2017-03-22T16:31:59Z No. of bitstreams: 1 2017_MaryannedaCostaPereira.pdf: 1490262 bytes, checksum: bd3f5f98d437ebd51e2bb331be913630 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2017-03-23T13:51:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_MaryannedaCostaPereira.pdf: 1490262 bytes, checksum: bd3f5f98d437ebd51e2bb331be913630 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-23T13:51:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_MaryannedaCostaPereira.pdf: 1490262 bytes, checksum: bd3f5f98d437ebd51e2bb331be913630 (MD5) / A alface é uma hortaliça folhosa de grande importância no Brasil, tanto em volume quanto em valor comercializado, podendo ser utilizada de diversas maneiras. Apesar da disponibilidade de cultivares nacionais com boas características e existência de regiões favoráveis à produção de sementes, poucos são os estudos realizados no sentido de avaliar o efeito do ambiente no florescimento e comportamento das sementes de alface, que são extremamente sensíveis às condições ambientais. Condições de elevada temperatura favorecem o pendoamento e florescimento precoce, resultando em produtos de baixa qualidade, devido ao sabor amargo das folhas, além prejudicarem a germinação das sementes. Nesse contexto, estudos sobre o florescimento e a produção de sementes de alface em diferentes épocas e locais podem contribuir para o desenvolvimento de novas cultivares tolerantes ao calor, assim como novas tecnologias de produção de sementes de alta qualidade fisiológica. Logo, esse trabalho teve como objetivos avaliar genótipos de alface quanto à qualidade fisiológica das sementes produzidas em duas épocas, verão/outono e outono/inverno, em diferentes locais, sendo campo aberto e telado, além de estudar diferentes métodos de obtenção de parâmetros de adaptabilidade e estabilidade de genótipos de alface em três épocas de cultivo, sendo verão, outono e inverno, em três locais de produção, no campo aberto, casa de vidro e telado. O experimento foi conduzido em campo aberto, telado e casa de vidro na Embrapa Hortaliças, com semeaduras em: época 1, dezembro/2015; época 2, abril/2016; época 3, junho/2016. Para a avaliação de qualidade fisiológica de sementes de alface foram utilizados os genótipos Everglades, Simpson, Vanda, BRS Mediterrânea e BRS Leila, e o delineamento foi inteiramente casualizado com duas repetições para teor de água e peso de mil sementes, e quatro repetições para peso por parcela, teste de germinação a 20°C e 35°C, primeira contagem de germinação a 20°C e 35°C, índice de velocidade de germinação a 20°C e 35°C, comprimento de raiz, emergência de plântulas, índice de velocidade de emergência, envelhecimento acelerado a 48 e 72 horas e condutividade elétrica. Nos estudos de parâmetros de adaptabilidade e estabilidade de genótipos de alface foram utilizados os genótipos Everglades, Simpson, Vanda, BRS Mediterrânea, BRS Leila e Elisa. O delineamento foi inteiramente casualizado com dez repetições e a característica avaliada foi o número de dias para antese. Nas avaliações de qualidade fisiológica de sementes produzidas em diferentes épocas e locais, a produção de sementes de alface em cultivo protegido mostrou-se vantajosa, independente da época de semeadura, e o período do verão/outono (época 1) apresentou melhores condições de desenvolvimento das plantas e produção de sementes, independentemente do local de produção. Nos estudos de parâmetros de adaptabilidade e estabilidade na variável antese, pelo método de Eberhart & Russel (1966), os genótipos BRS Mediterrânea e Vanda mostraram adaptabilidade específica a ambientes desfavoráveis e não foram encontrados genótipos de ampla adaptabilidade. O método de Cruz et al. (1989), mostrou-se mais refinado na recomendação de genótipos que o método de Eberhart & Russell (1966). O método do Trapézio Quadrático segundo Carneiro (1998), destacou-se entre os métodos estudados, devido à recomendação imediata dos genótipos. / Lettuce is a leafy vegetable of great importance in Brazil, both in transaction volume and commercial value, which can be used in various ways. Despite the availability of national cultivars with good characteristics and the existence of favorable regions for seed production, few studies have been carried out to evaluate the effect of the environment on the flowering and on the behavior of lettuce seeds, which are extremely sensitive to environmental conditions. High temperature conditions favor early plowing and flowering, resulting in low quality products, due to the bitter taste of its leaves, and are harmful to the seeds germination. In this context, studies on the flowering and production of lettuce seeds at different seasons and places may contribute to develop new heat tolerant cultivars, as well as new production technologies for high quality physiological seeds. Thus, the objective of this work was to evaluate lettuce genotypes on the physiological quality of the seeds produced in two seasons, summer/autumn and autumn/winter, in different locations, such as open field and greenhouse, and to study different methods to obtain adaptability and stability parameters of lettuce genotypes in three growing seasons, summer, fall and winter, in three production sites, in the open field, glass house and greenhouse. The experiment was conducted in the open field, greenhouse and glass house at Embrapa Vegetables. The sowings took place on: season 1, December/2015; season 2, April/2016; season 3, June/2016. For the physiological quality evaluation of lettuce seeds, we used the Everglades, Simpson, Vanda, BRS Mediterrânea and BRS Leila genotypes, and the design was completely randomized with two repetitions for the evaluated characteristics: water content, weight per plot, and four repetitions for weight of a thousand seeds, germination test at 20 °C and 35 °C, first germination count at 20 °C and 35 °C, germination rate index at 20 °C and 35 °C, root length, seedling emergence, emergence rate index, accelerated aging at 48 and 72 hours and electrical conductivity. In the studies on adaptability and stability parameters of lettuce genotypes, the Everglades, Simpson, Vanda, BRS Mediterrânea, BRS Leila and Elisa genotypes were used. The design was completely randomized with ten repetitions and the evaluated characteristic was the number of days until the anthesis. In the physiological quality evaluation of the seeds produced at different seasons and sites, the lettuce seeds production in protected cultivation was advantageous, regardless of the sowing season, and the summer/autumn period (season 1) presented better plant development and seed production conditions, regardless of the production site. In the studies of adaptability and stability parameters in the anthesis variable, by the Eberhart & Russel method (1966), the BRS Mediterrânea and Vanda genotypes showed specific adaptability to unfavorable environments and no genotypes of wide adaptability were found. It was noticiable that Cruz et al. (1989) methodology was more efficient on genotypes recommendation than Eberhart & Russell (1966). The methodology of Carneiro (1998) was more suitable due to the immediately recommendation of genotypes.

Orientador: Marcel Agenor Pavan / Banca: Renate Krause Sakate / Banca: Francisco Murilo Zerbini Junior / Banca: Olivier Le Gall / Banca: Ivan G. Maia / Resumo: A família Sequiviridae é constituída por dois gêneros: Waikavirus e Sequivirus. Os vírus apresentam partículas isométricas com aproximadamente 30nm de diâmetro e uma única fita de RNA sentido positivo, sendo que o genoma dos waikavírus é poliadenilado e dos sequivírus não. Dandelion yellow mosaic virus (DaYMV) foi relatado infectando alface em diferentes países da Europa e classificado no gênero Sequivirus, porém dados moleculares não estão disponíveis para este vírus. No Brasil, um vírus isométrico infectando alface foi isolado por Marinho et al., (1982) no Distrito Federal e denominado de Lettuce mottle virus (LeMoV). Um provável isolado deste vírus isométrico foi descrito mais tarde no estado de São Paulo por Stangarlin (1995), sendo encontrado frequentemente em infecções mistas com o Lettuce mosaic virus (LMV). Em ensaios de microscopia eletrônica utilizando antissoro policlonal específico para Dandelion yellow mosaic sequivirus (DaYMV) e extrato foliar de plantas infectadas pelo LeMoV, foi verificada uma reação sorológica parcial (Chaves, 1999), indicando que o LeMoV possivelmente seria um membro do gênero Sequivirus, família Sequiviridae. Um protocolo funcional de purificação tanto para o LeMoV como para o DaYMV foi desenvolvido e sequências parciais do genoma de ambos os vírus foram obtidas usando preparações virais purificadas e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The Sequiviridae family is constituted by two genus: Waikavirus and Sequivirus. The virus have approximately 30nm of diameter and a single-stranded of positive sense RNA. The genome of waikavirus is polyadenylated and of sequivirus not. Dandelion yellow mosaic virus (DaYMV) was reported in different countries of the Europe infecting lettuce and classified in the Sequivirus genus however, molecular data are not available for this virus. In the region of Federal District, Brazilan isometric virus infecting lettuce was isolated by Marinho et. al., (1982) and called of Lettuce mottle virus (LeMoV). Probable a strain of this isometric virus was described later in the Sao Paulo state by Stangarlin (1995), frequently found in mixed infections with the Lettuce mosaic virus (LMV). Using specific polyclonal antiserum for Dandelion yellow mosaic sequivirus (DaYMV) and foliar extract of plants infected for the LeMoV, a partial serological reaction was verified for this virus (Chaves, 1999), indicating that the LeMoV could be possibly a member of Sequivirus genus, Sequiviridae family. A functional protocol of purification was developed for LeMoV and DaYMV and partial genome sequences for both virus was obtained using virus purified preparation and degenerated primers for the Sequiviridae family. Sequences of the LeMoV-AF197 and the DaYMV-DSM2 were analyzed and showed a high identity with other members of the family. Universal primers that detect both viruses and specifics primers for LeMoV and DaYMV were used in diagnosistic tests based on RT-PCR. The specific primers amplified one fragment of 300bp for the LeMoV and 331bp for the DaYMV, being highly specific for diagnosis because no antiserum with good properties are available for these viruses. Different sequivirus proceeding from Brazil (BR11), Chile (Ch36), Holland (DSM2) and France (2227) were also evaluated in this work... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Estudos recentes têm demonstrado o risco de contaminação microbiológica em frutas e vegetais irrigados com água não tratada, a qual é a mais utilizada na agricultura, tanto em nível mundial, quanto no Brasil. O objetivo da primeira parte deste trabalho foi avaliar a qualidade microbiológica das fontes de água superficiais de irrigação mais utilizadas no sul do Brasil e seu impacto sobre a segurança de alfaces. Para tanto, foram realizadas coletas mensais de água de irrigação e alfaces irrigadas de julho de 2014 a agosto de 2015, em quatro propriedades da região metropolitana de Porto Alegre. Na água de irrigação, foi verificada prevalência de 100% dos indicadores Coliformes Totais e Enterococcus spp., e de 84,8% do indicador E. coli genérica. Já para as amostras de alface, verificou-se também a prevalência de 100% para Coliformes Fecais e 38,3% para E. coli Genérica. Não houve diferença significativa entre os níveis dos indicadores para as diferentes fontes de água avaliadas. As amostras com contagens de E. coli acima de 100 UFC/100mL foram submetidas à análise de presença de patógenos entéricos. E. coli O157:H7 foi identificada em 13 das 64 amostras analisadas, sendo nove amostras de açude e quatro amostras de riachos. Salmonella spp. foi identificada em seis das 64 amostras, das quais quatro foram amostras de açude e duas de riachos Salmonella spp. foi identificada em 4 das 27 amostras avaliadas de alface. As altas contagens de Enterococcus spp. e E. coli genérica apresentaram uma correlação positiva com a presença de Salmonella spp. Foi verificada a influência de fatores climáticos e práticas agrícolas sobre os níveis de contaminação na alface. Na busca por fontes alternativas de água para utilização na agricultura, a água residual urbana vem sendo considerada uma boa opção. Entretanto, este tipo de água geralmente possui uma alta carga de contaminação microbiana. Em um segundo momento, foi avaliado a eficácia da aplicação de dióxido de cloro (ClO2) no tratamento de águas residuais urbanas com tratamento secundário. Verificou-se que o desinfetante foi capaz de melhorar a qualidade microbiológica da água, reduzindo significativamente o indicador E. coli quantificado pelo método tradicional em placas. Entretanto, esta diferença não foi observada quando a E. coli foi quantificada pelo método PMA-qPCR, indicando que o tratamento de água residual com ClO2 pode induzir as bactérias a entrar no estado viável mas não cultivável (VNC). A proporção de amostras positivas para a presença de patógenos foi baixa quando comparada à água sem tratamento (7 em 8) e com tratamento com ClO2 (1 em 8) Apesar dos bons resultados na redução da contaminação, foi observado um acúmulo significativo de cloratos nas amostras de alface, o que pode apresentar risco químico ao consumidor. Uma vez que foi identificada a presença de E. coli O157:H7 em fontes de água de irrigação no sul do Brasil, objetivou-se, em um terceiro momento do presente trabalho, avaliar a capacidade de adaptação e multiplicação de quatro isolados e um pool de E. coli O157:H7 quando inoculados em água de açude filtrada, a 26°C, por até 72 h. Os isolados identificados como Ec1(açude) e Ec2 (riacho) apresentaram diferenças significativas nos parâmetros de taxa máxima de crescimento e fase Lag. Os isolados também foram testados quanto ao comportamento frente ao desinfetante hipoclorito de sódio aplicado em água de irrigação filtrada, nas concentrações de 5 mg/L e 7 mg/L de cloro residual. Quando avaliada a redução pelo método tradicional em placas foi verificado uma redução de 100% dos isolados, após 30 min de contato com a água de irrigação tratada com o desinfetante a 7 mg/L, com uma concentração de 5 mg/L foram identificadas redução média de 3.15 (± 0.02) Log cfu / mL após 30 min. Já pelo método de quantificação por PMA-qPCR, não foi observada redução significativa entre as concentrações testadas, indicando um possível efeito bacteriostático do hipoclorito de sódio quando utilizado nas condições testadas. A partir dos resultados obtidos na presente tese, observa-se um alto risco de contaminação de vegetais irrigados por águas superficiais, sendo necessária a adoção de medidas de controle, em nível de produção primária. / Recent studies indicated microbial contamination risk in fruits and vegetables irrigated with untreated water, which is the most common source of irrigation water worldwide and in Brazil. The objective of the first part of this work was to evaluate microbial quality of superficial irrigation water sources used in Southern Brazil and its impact on lettuce safety. Samples of irrigation water and lettuces were taken once a month, from July 2014 to August 2015, from four rural farms at the metropolitan region of Porto Alegre city. For irrigation water, 100% prevalence of the indicators total coliforms and Enterococcus spp., and 84.8% for the indicator generic E. coli was determined. For lettuce samples, it was determined 100% prevalence of total coliforms and 38.3% of generic E. coli. There was no significant difference among the indicator levels for the different water sources evaluated. For samples with more than 100 cfu/100mL of generic E. coli, the presence of enteric pathogens was checked. E. coli O157:H7 was detected in 13 from 64 analyzed samples, 9 in pounds and 4 in streams. Salmonella spp. was found in 6 from 64 samples, 4 in pond and 2 in streams. On lettuce samples, Salmonella spp. was in 4 from 27 samples evaluated. High Enterococcus spp. and E. coli counts were positively related to Salmonella presence. It was verified the influence of climatic factors and agricultural practices on lettuce contamination levels Urban residual water is considered a good alternative for using in agriculture. However, this kind of water usually carries a high level of microbial contamination. So, the efficacy of chlorine dioxide (ClO2) in municipal wastewater with a secondary treatment was evaluated. Results show that the disinfectant improved water microbial quality, with significant reduction of generic E. coli when measured by the traditional plate count method. However, the same was not observed when generic E. coli was measured by PMA-qPCR method, which indicates that ClO2 treatment in residual water can induce bacteria to stay viable but not cultivable state (VBNC). The rate of positive samples for the presence of pathogens was low when waters before treatment (7 in 8) and after ClO2 treatment (1 in 8) were compared. Despite good results in water decontamination, significant chlorate accumulation was observed on lettuce samples, what may represent a chemical risk to the consumers. Once identified the presence of E. coli O157:H7 in irrigation water in Southern Brazil, the adaptation and multiplication capacity of 4 strains and a pool of E. coli O157:H7 was evaluated when inoculated in sterile irrigation water at 26°C up to 72 h The isolates Ec1 (from pond) and Ec4 (from stream) significantly differed for the maximum growth rate and lag phase. These isolates were also tested for their behavior against sodium hypochlorite applied in sterile irrigation water at concentrations of 5 mg/L and 7 mg/L of residual chlorine. Reduction of 100% from the isolates after 30 min in contact with the disinfectant at 7mg/L was observed. The concentration of 5 mg / L, caused a mean reduction of 3.15 (± 0.02) Log cfu / mL after 30 min by the plate count method. However, there was no significant reduction among the tested concentrations by using the PMA-qPCR method, indicating a possible bacteriostatic effect of sodium hypochlorite under the tested conditions. The results obtained in this work shows high contamination risk of vegetables when irrigated by superficial waters and highlight the need of control measures in primary production.

Orientador : Mirtha Nelly Uboldi Eiroa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-28T20:52:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Porto_Ernani_D.pdf: 42841587 bytes, checksum: 506c0ae29d3ca2e0a7efe9082170f6db (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Estudou-se a incidência de Listeria monocvtoJ!enesem quatro tipos de hortaliças: alface (LQctuccasativa), repolho (flrassica oleracea cavitata), agrião (liastrium officinale) e salsa rE.etroselinumcrisvum), através do enriquecimento a ~C130 dias. As amostras foram adquiridas no município de Campinas-SP. Foram analisadas 50 amostras de 25 g de cada hortaliça, perfazendo 200 amostras. Foram encontradas oito amostras positivas para o microrganismo, co"espondendo a 3,2% do total examinado. Das hortaliças analisadas somente no repolho não houve isolamentos de L. onocvtoJ!enes. Todas as hortaliças positivas apresentaram 4% de incidência da bactéria. Os estudos se prolongaram durante 2 anos e a maioria dos isolamentos (62,5%) oco"eu no mês de janeiro, período que coincidiu com temperaturas mais elevadas e maior precipitação pluviométrica.. Também foi estimada a população natural de L. monocvtoJ!enes de amostras de alface adquiridas no mercado. Foram analisadas 50 amostras de 50 g. A estimativa da população foi feita através da técnica dos tubos múltiplos, incubados a ~C130 dias. Duas amostras foram positivas, apresentando uma população média estimada de 1,2 NMPlg de alface. Foram realizados ensaios de sanificação de alfaces artificialmente inoculadas com o microrganismo. As alfaces foram contaminadas com população conhecida de L. monocvtogenes, e sanificadas por 15 mino Os sanificantes testados foram ácido acético (0,3%, 0,5%,I,OOÁeJ1,5%), hipoclorito de sódio 100 mglL de cloro ativo pH 7,0 e dicloroisocianurato de sódio 100 mglL de cloro ativo. As reduções obtidas, em ciclos logarítmicos para o ácido acético foram: 0,8 ciclos para a solução 0,3%, 1,4 ciclos para 0,5%, 1,3 ciclos para I,OOÁeJ1,4 ciclos para a solução 1,5%. Para o hipoclorito de sódio solução 100 mglL de cloro livre foi obtida uma redução de 1,9 ciclos e com o dicloro-isocianurato de sódio 100 mglL de cloro livre a redução foi de 2,4 ciclos, sendo este o produto mais eficiente. Foi estudado o comportamento de L. monocvtogenes em alfaces minimamente processadas acondicionadas em atmosfera modificada, ATM, (900ÁJN], 5% CO] e 5% O]) durante a armazenagem a ~C e 15"C.As alfaces contaminadas com população conhecida de L. monocvtoJ!enesforam sanificadas com dicloro-isocianurato de sódio a 143 mglL de cloro livre e acondicionadas em porções de 100 g em embalagens de polipropileno e polietileno de baixa densidade. Em nenhuma das temperaturas houve inibição de L. monocvtogenes. A ~C a população de L. monocvtoJ!enes sofreu um pequeno aumento inicial e depois permaneceu estável até o 2]° dia de estocagem. Na estocagem a 15"C a população de L. monocvtoJ!enes aumentou 3 ciclos logarítmicos nos 7 dias de estocagem. Finalmente, foram feitos estudos para determinar se a cenoura possui substâncias inibidoras de L. monocvtoJ!enes. Foi utilizado o suco de cenoura em diversos ensaios para avaliar o efeito sobre o microrganismo, com resultados contraditórios. Metodologias difêrentes utilizadas para a contagem de um mesmo suco contaminado por L. monocvtoJ!enes mostraram resultados diferentes, sugerindo que este pode ser um fator de influência. Mais estudos são necessários para se obter uma conclusão definitiva sobre o assunto / Abstract: The incidence of Listeria monocvtoJ!enes in the following four vegetables was studied: lettuce (l:.actucca sativa), cabbage (!1rassica oleracea caTJitata),water cress (Nastrium oljicinale) and parsley fE..etrselinum crisTJUm),by enrichment at 4 °c/30 days. Samples were acquired in the city of Campinas, SP, Brazil. Fifty 25g samples of each vegetable were analyzed, giving a total of 200 samples. Eight positive samples were found, representing 3.2% of the total number examined Of the vegetables analyzed, only the cabbage showed no positive results for L. monocvtogenes. Ali the positive vegetables presented 4% incidence of the bacterium. The studies covered a 2 year period and the majority ofthe positive isolations (62.5%) occurred in January, period in which both temperatures and rainfall are at their highest. The natural population of L. monocvtoJ!enes in lettuce samples acquired on the mar/ret, was also determined Fifty 50g samples were analyzed. Counts was made using the multiple tube technique, incubating at ~ C/30 days. Two samples were positive, giving a mean population of 1.2 NMP/g of lettuce. Some sanification tests were also carried out in lettuce, using samples artificially contaminated with the microorganism. The lettuce heads were contaminated with a known population of L. monocvtogenes, and sanifying for 15 min.. The sanifying agents tested were acetic acid (0.3%, 0.5%, 1.0% and 1.5%), sodium hypochlorite pH 7.0 containing 100 mglL active chlorine and sodium dichloro-isocyanurate also containing 100 mglL active chlorine. After the prescribed contact time, the agent was immediately neutralized and a survival count made. For acetic acid, the reductions obtained were, in logarithmic cycles:0.8 cycles for the 0.3% solution, 1.4% for the 0.5% solution, 1.3% cyclesfor the 1.5% solution. For the sodium hypoclorite solution containing 100 mglL active chlorine, a reduction of 1.9 cycles was achieved and for the sodium dichloro-isocyanurate solution, also containing 100 mglL active chlorine, the reduction was to the order of 2.4 cycles, this being the most efficient agent tested. The behavior of L. monocvtoJ!enes in minimally processed lettuce, packaged in a modified atmosphere (9()OANJ1. 5% COl and 5% OJJ was also studied, during storage at ~ and 1SOC. Lettuce leaves contaminated with a know population of L. monocvtoJ!enes were sanitized with sodium dichloro-isocyanurate containing 143 mglL free chlorine and then packed in 100 g portions in po/ypropylene and low density polyethylene packages. The organism was not inhibited at either of the temperatures used. At ~ C the population of L. monocvtogenes suffered a slight increase initially and then remained stable up to the 21stday ofthe storage. At ISOC, the population ofL. monocytogenes increased by 3 cycles in the 7 days of storage. Finally some studies were carried out to see if carrots tissue contained any substances which inhibited L. monocvtogenes. Carrot juice was used in various trials to evaluate its effect on the microorganism, giving contradictory results. In some trials the bacterium proliferated, whilst in others, it was apparent/y inhibited. Different counting methodologies usedfor the same juice contamined by L. monocvtoJ!enes gave different results, suggesting that this could be a factor of influence. More studies are needed in order to come to a definitive conclusion on this point / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador: Fumio Yokoya / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-29T03:22:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Thiney_PatriciaAugustodeOliveira_D.pdf: 21304299 bytes, checksum: 1abf6ae1c3911fb9cf86ffbd98bb068e (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Frutose é o açúcar natural mais doce, sendo uma alternativa segura para substituir a sacarose. A inulinase tem um importante papel na produção de frutose através da hidrólise enzimática da inulina, que pode ser realizada em uma única etapa e render até 95% de conversão. Este trabalho teve como objetivo estudar a produção da inulinase por Kluyveromyces marxianus varo bulgaricus ATCC 16045 utilizando diferentes fontes de carbono e nitrogênio, visando obter um meio viável comercialmente, nos mesmos níveis de produção do meio convencional. Técnicas de planejamento experimental e análise de superfície de resposta foram utilizadas para otimizar o meio de cultivo para produção da enzima. Foram estudadas as variáveis concentração de melaço, água de maceração de milho e extrato de levedura. Para este estudo utilizou-se quatro planejamentos fatoriais completos, sendo alcançada uma atividade enzimática máxima de 138U/mL. Após foi possível reduzir ainda mais o custo do meio, com a substituição do extrato de levedura pelo Prodexlac, extrato de levedura produzido pela indústria Prodesa que contém 44% de proteína, e retirando-se K2HPO4 do meio, atingido-se uma atividade enzimática de 113U/mL. Verificou-se que o primeiro e segundo meios otimizados representam 13% e 1,93% do custo do meio sintético otimizado, respectivamente. Assim neste trabalho foi possível a otimização na produção da enzima, utilizando meios alternativos, sem reduzir os níveis de produção obtidos com meio sintético, tomando ainda, o meio economicamente mais viável. / Abstract: Fructose is the sweetest sugar, being a safe altemative for sucrose. Inulinase may play an important role in fructose production by enzymatic hidrolysis of inulin. The reaction occurs in a single step and it is possible to obtain up to 95% of conversion. In this work the optimization of the conditions of inulinase production by Kluyveromyces marxianus varo bulgaricus ATCC 16045 using different carbon and nitrogen sources is carried out in order to obtain more suitable culture conditions for comercial exploration, with a similar production leveI to conventional culture conditions. Factorial design and surface response analysis were used to optimize the culture conditions for inulinase production and the enzymatic reaction parameters. In the enzyme production the following variables were studied: melass, AMM and yeast extract. The use of the technique of complete factorial design, resulted in a enzymatic activity of 138U/mL After that, it was possible to minimize the cost, changing the yeast extract by Prodexlac, produced by Prodesa Inc. wich contains 44% protein and removing K2HPO4 from the medium formulation, and with this medium the activity reached 113U/mL. It has been show that the first and second medium formulation represented 13% and 1,93% ofthe cost ofthe previous synthetic optimized medium, respectively. Finally, this work made possible the enzymatic production optimization, using low cost altemative medium, without reducing the production leveI achieved with the synthetic medium, tuming this process economically more interesting. / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador : Roberto Testzlaf / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Agricola / Made available in DSpace on 2018-07-19T05:25:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Hamada_Emilia_M.pdf: 2390437 bytes, checksum: 8f6bd921e5375ac374c0be189a078737 (MD5) Previous issue date: 1993 / Resumo: Experimento com alface, sob aplicação de diferentes lâminas de água de irrigação, através do sistema de gotejamento, foi conduzido no Campo Experimental, da Faculdade de Engenharia Agrícola, da Universidade Estadual de Campinas. o cultivar utilizado foi o "Floresta", pertencente ao Grupo Lisa ou Manteiga. O delineamento empregado foi o inteiramente casualizado, com quatro tratamentos de irrigação e cinco repetições. As aplicações de água tinham frequência diária, com lâminas determinadas através de percentagens (120%, 100%, 80% e 60%) da evaporação do tanque "Classe Ali. Foram avaliados o crescimento e a produção comercial, através dos seguintes parâmetros: massa fresca total, massa seca total, área foliar, altura e número de folhas por planta, índices de crescimento da análise clássica (taxa de crescimento da cultura, taxa de crescimento relativo, taxa de assimilação líquida e razão de área foliar), produtividade da cultura, qualidade comercial da alface e eficiência do uso de agua. Os resul tados obtidos indicaram, que embora nao fosse encontrada diferença estatística significativa entre as lâminas de água aplicadas e os parâmetros isiológicos estudados, a cultura reagiu ao efeito das diferentes lâminas de água aplicadas, principalmente, na fase final do seu desenvolvimento. O tratamento TI20 foi o que apresentou os melhores resultados de massa fresca total, número de folhas por planta e área foliar. A maior produtividade média e as maiores produções de melhor qualidade comercial também foram obtidas neste tratamento. Em contrapartida, a maior eficiência de uso de água foi obtida no tratamento T60. A diferenciação do crescimento, entre os tratamentos, permitiu definir a existência de períodos distintos de necessidade e resposta à água pela planta. Dessa forma, poderiam ser aplicadas menores lâminas de água (T60 ou T80), no início do ciclo (até os 22 dias após o transplante) e, na fase final do desenvolvimento, as maiores lâminas de água (TIOO ou TI20) / Mestrado / Agua e Solo / Mestre em Engenharia Agrícola