El presente trabajo retrospectivo y descriptivo, tuvo como objetivo determinar las complicaciones en todos los pacientes bajo tratamiento anticoagulante sometidos a cirugía oral menor ambulatoria en el Servicio de Medicina Oral y Cirugía Buco Máxilo Facial del Departamento de Estomatología del HCFAP entre 2006 y 2007. La suspensión del ácido acetil salicílico y el reemplazo de warfarina por Heparinas de bajo peso molecular, fueron las modificaciones de las dosis del fármaco AC más frecuentes. La frecuencia de complicaciones hemorrágicas fue baja (10%), y las infecciosas 3%. 02 casos (0.9%) de hemorragia post-operatoria tuvieron atención por emergencia hospitalaria. No hubo ningún caso de tromboembolia. El género femenino y masculino tuvieron igual número de complicaciones hemorrágicas. El género femenino tuvo más complicaciones infecciosas. La frecuencia de complicaciones según el tipo de medicación fue baja, 2% tomaban warfarina, 9% de pacientes que tomaban AAS, y 2% tomaban warfarina + AAS. Se concluyó que la frecuencia de complicaciones es baja, y se sugiere la elaboración de un protocolo de atención a este tipo de pacientes. / -- This retrospective and descriptive research's aim was to find complications in all anticoagulated patients who underwent minor oral surgery at the Oral Surgery Service of Estomathology Department at the Peruvian Air Force Hospital, during 2006 and 2007. It was found that warfarin replacement by Low-Molecular Weight Heparin and AAS withdrawal was frequent. The bleeding complication rate was low (10%), as well as infectious (3%). 02 cases of post-surgical bleeding required hospitalary emergency treatment. No thromboembolic events were found. Female and male patients had the same number of bleeding complications. Female gender had more infectious complicactions. Frequence of complications related to anticoagulant medication was low, 2% had warfarin, 9% had acetil salicylic acid (ASA), and 2% had warfarin + ASA. It was concluded that the complication rate was low, and elaboration of a treatment protocol is suggested

El presente trabajo retrospectivo y descriptivo, tuvo como objetivo determinar las complicaciones en todos los pacientes bajo tratamiento anticoagulante sometidos a cirugía oral menor ambulatoria en el Servicio de Medicina Oral y Cirugía Buco Máxilo Facial del Departamento de Estomatología del HCFAP entre 2006 y 2007. La suspensión del ácido acetil salicílico y el reemplazo de warfarina por Heparinas de bajo peso molecular, fueron las modificaciones de las dosis del fármaco AC más frecuentes. La frecuencia de complicaciones hemorrágicas fue baja (10%), y las infecciosas 3%. 02 casos (0.9%) de hemorragia post-operatoria tuvieron atención por emergencia hospitalaria. No hubo ningún caso de tromboembolia. El género femenino y masculino tuvieron igual número de complicaciones hemorrágicas. El género femenino tuvo más complicaciones infecciosas. La frecuencia de complicaciones según el tipo de medicación fue baja, 2% tomaban warfarina, 9% de pacientes que tomaban AAS, y 2% tomaban warfarina + AAS. Se concluyó que la frecuencia de complicaciones es baja, y se sugiere la elaboración de un protocolo de atención a este tipo de pacientes. / This retrospective and descriptive research's aim was to find complications in all anticoagulated patients who underwent minor oral surgery at the Oral Surgery Service of Estomathology Department at the Peruvian Air Force Hospital, during 2006 and 2007. It was found that warfarin replacement by Low-Molecular Weight Heparin and AAS withdrawal was frequent. The bleeding complication rate was low (10%), as well as infectious (3%). 02 cases of post-surgical bleeding required hospitalary emergency treatment. No thromboembolic events were found. Female and male patients had the same number of bleeding complications. Female gender had more infectious complicactions. Frequence of complications related to anticoagulant medication was low, 2% had warfarin, 9% had acetil salicylic acid (ASA), and 2% had warfarin + ASA. It was concluded that the complication rate was low, and elaboration of a treatment protocol is suggested

A varfarina é um medicamento da classe dos anticoagulantes orais cumarínicos muito utilizada na profilaxia de doenças tromboembólicas. Existe uma grande variação interindividual na resposta aos cumarínicos, uma vez que a farmacocinética e a farmacodinâmica do medicamento variam de acordo com fatores ambientais e genéticos. As enzimas CYP2C9, responsável pela maior parte da metabolização do fármaco, e VKORC1, alvo dos cumarínicos, estão diretamente envolvidas na farmacocinética e farmacodinâmica da varfarina, respectivamente. A enzima CYP4F2, envolvida na metabolização de vitamina K, atua de forma indireta na farmacodinâmica do medicamento. O fator II é um fator de coagulação dependente de carboxilação, sendo sua funcionalidade dependente da atuação da varfarina. Polimorfismos nestes genes estão relacionados com variação na resposta ao medicamento. Neste trabalho foi investigada a influência dos polimorfismos CYP2C9*2 e CYP2C9*3 no gene CYP2C9, -1639G>A, 1173C>T e 3730G>A no gene VKORC1, 1347C>T no gene CYP4F2 e 494C>T no gene F2 na dose/resposta de varfarina de forma independente, assim como foi elaborado um modelo incluindo fatores genéticos e não-genéticos capazes de predizer a dose de varfarina necessária a cada paciente. Para a realização das análises foram estudados 279 pacientes usuários de varfarina provenientes do Hospital de Clínicas de Porto Alegre com ascendência européia. Todos os SNPs dos genes CYP2C9, VKORC1, CYP4F2 e F2 foram identificados pelo sistema TaqMan de discriminação alélica através de PCR em tempo real. Os alelos CYP2C9*2 (P<0,001) e CYP2C9*3 (P<0,001) do gene CYP2C9, -1639A (P<0,001) e 1173T (P<0,001) do gene VKORC1 e 494T do gene F2 são responsáveis pela necessidade de uma dose menor do anticoagulante. Em contrapartida, os alelos 1347T do gene CYP4F2 e 3730A (P<0,001) do gene VKORC1 são responsáveis pela necessidade de uma dose maior de varfarina. Os valores de P referentes aos polimorfismos nos genes CYP4F2 e F2 referem-se à análise multivariada, após controlar por confundidores, pois na análise univariada estes polimorfismos não apresentaram associação com a dose de varfarina. A partir destes polimorfismos e de algumas variáveis clínicas foi elaborado um algoritmo que consegue explicar 63,3% da variação de dose de varfarina. Este algoritmo incluiu os seguintes fatores: peso, idade, uso de anlodipino, amiodarona, carbamazepina, -bloqueadores, diuréticos de alça e polimorfismos nos genes CYP2C9, VKORC1, CYP4F2 e F2. A média da diferença absoluta entre a dose predita e a dose observada foi de 6,9 mg/semana e a correlação entre as doses predita e observada foi rs=0,77. O modelo sugerido é um dos que apresenta maior coeficiente de determinação entre os descritos na literatura, porém, para que seja possível um futuro uso clínico é necessário que seja validado em uma amostra independente. Mais estudos também são necessários para que se consiga determinar os outros fatores que expliquem os 40% da variação de dose não explicada até o momento. / Warfarin is a drug from coumarin anticoagulant class widely used for thromboembolic disease prophylaxis. There is a wide interindividual variation in response to coumarins, since the pharmacokinetics and pharmacodynamics of this drug vary with environmental and genetic factors. The CYP2C9 enzyme, responsible for drug metabolism, and VKORC1, the coumarin target, are directly involved in the pharmacokinetics and pharmacodynamics of warfarin, respectively. The CYP4F2 enzyme, involved in the metabolism of vitamin K, acts indirectly on the pharmacodynamics of the drug. Factor II is a coagulation factor dependent on carboxylation, and its function depends on warfarin action. Polymorphisms in these genes are related to drug variation response. In this study we investigated the influence of the CYP2C9*2 and CYP2C9*3 polymorphisms in CYP2C9 gene, -1639G>A, 1173C>T and 3730G>A in the VKORC1 gene, 1347C>T in the CYP4F2 gene and 494C>T in the F2 gene with warfarin dose/response independently. In addition, a model including genetic and nongenetic factors able to predict warfarin dose needed for each patient was developed. The analysis was performed with 279 patients of European ancestry from the Hospital de Clínicas de Porto Alegre taking warfarin. All SNPs from CYP2C9, VKORC1, CYP4F2 and F2 genes were identified by TaqMan system of allelic discrimination by real-time PCR. The CYP2C9*2 (P <0.001) and CYP2C9*3 (P <0.001) polymorphisms in the CYP2C9 gene, -1639G>A (P <0.001) and 1173C>T (P <0.001) in VKORC1 gene and 494C>T in F2 gene are responsible for lower doses of anticoagulant. In contrast, the SNPs 1347C>T in the CYP4F2 gene and 3730G>A (P <0.001) in VKORC1 gene are responsible for higher doses of warfarin. P values regarding CYP4F2 and F2 polymorphisms refer to multivariate analysis after controlling for confounders, since in the univariate analysis these polymorphisms were not associated with warfarin dose. An algorithm considering these polymorphisms and some clinical variables was developed that explains 63.3% of the variation in warfarin dose. This algorithm included the following factors: body weight, age, use of anlodipine, amiodarone, carbamazepine, -blockers, loop diuretics and polymorphisms in CYP2C9, VKORC1, CYP4F2 and F2 genes. The average absolute difference between the predicted dose and observed dose was 6.9 mg/week and the correlation between the observed and predicted doses was rs=0.77. The model suggested is one with the higher coefficient of determination among those described in the literature, however, for a possible future clinical use it must be validated in an independent sample. More studies are warranted to find other factors that explain the 40% dose variation not explained so far.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia. / Made available in DSpace on 2013-07-16T02:49:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 239608.pdf: 5512255 bytes, checksum: 00cceccb4c52d8e338294b7c847232be (MD5) / Sorocea bonplandii (Baillon) Burger, Lanjow e Boer, devido à sua similaridade morfológica com Maytenus spp., é utilizada pela população com os mesmos fins medicinais desta. Ao contrário das espécies de Maytenus, que possuem inúmeros estudos químicos farmacológicos, as informações a respeito da espécie Sorocea bonplandii ainda são incipientes. Neste trabalho foram analisadas as frações éter de petróleo, clorofórmio e acetato de etila - obtidas de um extrato clorofórmico das folhas de S. bonplandii - quanto às suas atividades no bioensaio de letalidade para larvas de Artemia salina Leach. A fração com maior bioatividade neste ensaio foi a clorofórmica, da qual foram isolados e identificados, por ressonância magnética nuclear de 1H e 13C, um álcool primário saturado, o diterpeno fitol, um álcool vinílico de cadeia isoprenílica, uma mistura dos esteróides sitosterol e estigmasterol (sendo o primeiro a substância majoritária). Em outra etapa, após deslipidificação das folhas com éter de petróleo, foram preparados os extratos acetônico e metanólico. Deste foi isolado e identificado por espectrometria de massas e espectroscopia de infravermelho, o dissacarídeo sacarose. Os extratos metanólico e acetônico foram avaliados quanto a sua atividade anticoagulante in vitro. O extrato acetônico apresentou atividade anticoagulante nos testes de tempo de protrombina (TP) e tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPa). O mesmo extrato não apresentou atividade sobre a agregação plaquetária induzida por ADP assim como, no teste de tempo de trombina (TT). O extrato metanólico não demonstrou atividade em nenhum dos ensaios anteriores. O efeito anticoagulante evidenciado neste trabalho, nunca descrito para esta espécie, abre novas perspectivas para futuras investigações químico-biológicas, visando o isolamento e identificação da(s) substância(s) responsável(eis) por esta bioatividade.

A varfarina é um medicamento da classe dos anticoagulantes orais cumarínicos muito utilizada na profilaxia de doenças tromboembólicas. Existe uma grande variação interindividual na resposta aos cumarínicos, uma vez que a farmacocinética e a farmacodinâmica do medicamento variam de acordo com fatores ambientais e genéticos. As enzimas CYP2C9, responsável pela maior parte da metabolização do fármaco, e VKORC1, alvo dos cumarínicos, estão diretamente envolvidas na farmacocinética e farmacodinâmica da varfarina, respectivamente. A enzima CYP4F2, envolvida na metabolização de vitamina K, atua de forma indireta na farmacodinâmica do medicamento. O fator II é um fator de coagulação dependente de carboxilação, sendo sua funcionalidade dependente da atuação da varfarina. Polimorfismos nestes genes estão relacionados com variação na resposta ao medicamento. Neste trabalho foi investigada a influência dos polimorfismos CYP2C9*2 e CYP2C9*3 no gene CYP2C9, -1639G>A, 1173C>T e 3730G>A no gene VKORC1, 1347C>T no gene CYP4F2 e 494C>T no gene F2 na dose/resposta de varfarina de forma independente, assim como foi elaborado um modelo incluindo fatores genéticos e não-genéticos capazes de predizer a dose de varfarina necessária a cada paciente. Para a realização das análises foram estudados 279 pacientes usuários de varfarina provenientes do Hospital de Clínicas de Porto Alegre com ascendência européia. Todos os SNPs dos genes CYP2C9, VKORC1, CYP4F2 e F2 foram identificados pelo sistema TaqMan de discriminação alélica através de PCR em tempo real. Os alelos CYP2C9*2 (P<0,001) e CYP2C9*3 (P<0,001) do gene CYP2C9, -1639A (P<0,001) e 1173T (P<0,001) do gene VKORC1 e 494T do gene F2 são responsáveis pela necessidade de uma dose menor do anticoagulante. Em contrapartida, os alelos 1347T do gene CYP4F2 e 3730A (P<0,001) do gene VKORC1 são responsáveis pela necessidade de uma dose maior de varfarina. Os valores de P referentes aos polimorfismos nos genes CYP4F2 e F2 referem-se à análise multivariada, após controlar por confundidores, pois na análise univariada estes polimorfismos não apresentaram associação com a dose de varfarina. A partir destes polimorfismos e de algumas variáveis clínicas foi elaborado um algoritmo que consegue explicar 63,3% da variação de dose de varfarina. Este algoritmo incluiu os seguintes fatores: peso, idade, uso de anlodipino, amiodarona, carbamazepina, -bloqueadores, diuréticos de alça e polimorfismos nos genes CYP2C9, VKORC1, CYP4F2 e F2. A média da diferença absoluta entre a dose predita e a dose observada foi de 6,9 mg/semana e a correlação entre as doses predita e observada foi rs=0,77. O modelo sugerido é um dos que apresenta maior coeficiente de determinação entre os descritos na literatura, porém, para que seja possível um futuro uso clínico é necessário que seja validado em uma amostra independente. Mais estudos também são necessários para que se consiga determinar os outros fatores que expliquem os 40% da variação de dose não explicada até o momento. / Warfarin is a drug from coumarin anticoagulant class widely used for thromboembolic disease prophylaxis. There is a wide interindividual variation in response to coumarins, since the pharmacokinetics and pharmacodynamics of this drug vary with environmental and genetic factors. The CYP2C9 enzyme, responsible for drug metabolism, and VKORC1, the coumarin target, are directly involved in the pharmacokinetics and pharmacodynamics of warfarin, respectively. The CYP4F2 enzyme, involved in the metabolism of vitamin K, acts indirectly on the pharmacodynamics of the drug. Factor II is a coagulation factor dependent on carboxylation, and its function depends on warfarin action. Polymorphisms in these genes are related to drug variation response. In this study we investigated the influence of the CYP2C9*2 and CYP2C9*3 polymorphisms in CYP2C9 gene, -1639G>A, 1173C>T and 3730G>A in the VKORC1 gene, 1347C>T in the CYP4F2 gene and 494C>T in the F2 gene with warfarin dose/response independently. In addition, a model including genetic and nongenetic factors able to predict warfarin dose needed for each patient was developed. The analysis was performed with 279 patients of European ancestry from the Hospital de Clínicas de Porto Alegre taking warfarin. All SNPs from CYP2C9, VKORC1, CYP4F2 and F2 genes were identified by TaqMan system of allelic discrimination by real-time PCR. The CYP2C9*2 (P <0.001) and CYP2C9*3 (P <0.001) polymorphisms in the CYP2C9 gene, -1639G>A (P <0.001) and 1173C>T (P <0.001) in VKORC1 gene and 494C>T in F2 gene are responsible for lower doses of anticoagulant. In contrast, the SNPs 1347C>T in the CYP4F2 gene and 3730G>A (P <0.001) in VKORC1 gene are responsible for higher doses of warfarin. P values regarding CYP4F2 and F2 polymorphisms refer to multivariate analysis after controlling for confounders, since in the univariate analysis these polymorphisms were not associated with warfarin dose. An algorithm considering these polymorphisms and some clinical variables was developed that explains 63.3% of the variation in warfarin dose. This algorithm included the following factors: body weight, age, use of anlodipine, amiodarone, carbamazepine, -blockers, loop diuretics and polymorphisms in CYP2C9, VKORC1, CYP4F2 and F2 genes. The average absolute difference between the predicted dose and observed dose was 6.9 mg/week and the correlation between the observed and predicted doses was rs=0.77. The model suggested is one with the higher coefficient of determination among those described in the literature, however, for a possible future clinical use it must be validated in an independent sample. More studies are warranted to find other factors that explain the 40% dose variation not explained so far.

A varfarina é um medicamento da classe dos anticoagulantes orais cumarínicos muito utilizada na profilaxia de doenças tromboembólicas. Existe uma grande variação interindividual na resposta aos cumarínicos, uma vez que a farmacocinética e a farmacodinâmica do medicamento variam de acordo com fatores ambientais e genéticos. As enzimas CYP2C9, responsável pela maior parte da metabolização do fármaco, e VKORC1, alvo dos cumarínicos, estão diretamente envolvidas na farmacocinética e farmacodinâmica da varfarina, respectivamente. A enzima CYP4F2, envolvida na metabolização de vitamina K, atua de forma indireta na farmacodinâmica do medicamento. O fator II é um fator de coagulação dependente de carboxilação, sendo sua funcionalidade dependente da atuação da varfarina. Polimorfismos nestes genes estão relacionados com variação na resposta ao medicamento. Neste trabalho foi investigada a influência dos polimorfismos CYP2C9*2 e CYP2C9*3 no gene CYP2C9, -1639G>A, 1173C>T e 3730G>A no gene VKORC1, 1347C>T no gene CYP4F2 e 494C>T no gene F2 na dose/resposta de varfarina de forma independente, assim como foi elaborado um modelo incluindo fatores genéticos e não-genéticos capazes de predizer a dose de varfarina necessária a cada paciente. Para a realização das análises foram estudados 279 pacientes usuários de varfarina provenientes do Hospital de Clínicas de Porto Alegre com ascendência européia. Todos os SNPs dos genes CYP2C9, VKORC1, CYP4F2 e F2 foram identificados pelo sistema TaqMan de discriminação alélica através de PCR em tempo real. Os alelos CYP2C9*2 (P<0,001) e CYP2C9*3 (P<0,001) do gene CYP2C9, -1639A (P<0,001) e 1173T (P<0,001) do gene VKORC1 e 494T do gene F2 são responsáveis pela necessidade de uma dose menor do anticoagulante. Em contrapartida, os alelos 1347T do gene CYP4F2 e 3730A (P<0,001) do gene VKORC1 são responsáveis pela necessidade de uma dose maior de varfarina. Os valores de P referentes aos polimorfismos nos genes CYP4F2 e F2 referem-se à análise multivariada, após controlar por confundidores, pois na análise univariada estes polimorfismos não apresentaram associação com a dose de varfarina. A partir destes polimorfismos e de algumas variáveis clínicas foi elaborado um algoritmo que consegue explicar 63,3% da variação de dose de varfarina. Este algoritmo incluiu os seguintes fatores: peso, idade, uso de anlodipino, amiodarona, carbamazepina, -bloqueadores, diuréticos de alça e polimorfismos nos genes CYP2C9, VKORC1, CYP4F2 e F2. A média da diferença absoluta entre a dose predita e a dose observada foi de 6,9 mg/semana e a correlação entre as doses predita e observada foi rs=0,77. O modelo sugerido é um dos que apresenta maior coeficiente de determinação entre os descritos na literatura, porém, para que seja possível um futuro uso clínico é necessário que seja validado em uma amostra independente. Mais estudos também são necessários para que se consiga determinar os outros fatores que expliquem os 40% da variação de dose não explicada até o momento. / Warfarin is a drug from coumarin anticoagulant class widely used for thromboembolic disease prophylaxis. There is a wide interindividual variation in response to coumarins, since the pharmacokinetics and pharmacodynamics of this drug vary with environmental and genetic factors. The CYP2C9 enzyme, responsible for drug metabolism, and VKORC1, the coumarin target, are directly involved in the pharmacokinetics and pharmacodynamics of warfarin, respectively. The CYP4F2 enzyme, involved in the metabolism of vitamin K, acts indirectly on the pharmacodynamics of the drug. Factor II is a coagulation factor dependent on carboxylation, and its function depends on warfarin action. Polymorphisms in these genes are related to drug variation response. In this study we investigated the influence of the CYP2C9*2 and CYP2C9*3 polymorphisms in CYP2C9 gene, -1639G>A, 1173C>T and 3730G>A in the VKORC1 gene, 1347C>T in the CYP4F2 gene and 494C>T in the F2 gene with warfarin dose/response independently. In addition, a model including genetic and nongenetic factors able to predict warfarin dose needed for each patient was developed. The analysis was performed with 279 patients of European ancestry from the Hospital de Clínicas de Porto Alegre taking warfarin. All SNPs from CYP2C9, VKORC1, CYP4F2 and F2 genes were identified by TaqMan system of allelic discrimination by real-time PCR. The CYP2C9*2 (P <0.001) and CYP2C9*3 (P <0.001) polymorphisms in the CYP2C9 gene, -1639G>A (P <0.001) and 1173C>T (P <0.001) in VKORC1 gene and 494C>T in F2 gene are responsible for lower doses of anticoagulant. In contrast, the SNPs 1347C>T in the CYP4F2 gene and 3730G>A (P <0.001) in VKORC1 gene are responsible for higher doses of warfarin. P values regarding CYP4F2 and F2 polymorphisms refer to multivariate analysis after controlling for confounders, since in the univariate analysis these polymorphisms were not associated with warfarin dose. An algorithm considering these polymorphisms and some clinical variables was developed that explains 63.3% of the variation in warfarin dose. This algorithm included the following factors: body weight, age, use of anlodipine, amiodarone, carbamazepine, -blockers, loop diuretics and polymorphisms in CYP2C9, VKORC1, CYP4F2 and F2 genes. The average absolute difference between the predicted dose and observed dose was 6.9 mg/week and the correlation between the observed and predicted doses was rs=0.77. The model suggested is one with the higher coefficient of determination among those described in the literature, however, for a possible future clinical use it must be validated in an independent sample. More studies are warranted to find other factors that explain the 40% dose variation not explained so far.

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-09-24T20:21:45Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Anna Carolina Teixeira Mesquita.pdf: 1833249 bytes, checksum: 495771ad0010e48794c98504d2ad4f25 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-27T17:00:39Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Anna Carolina Teixeira Mesquita.pdf: 1833249 bytes, checksum: 495771ad0010e48794c98504d2ad4f25 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-27T17:00:40Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Anna Carolina Teixeira Mesquita.pdf: 1833249 bytes, checksum: 495771ad0010e48794c98504d2ad4f25 (MD5) Previous issue date: 2016-11-30 / FACEPE / Dentre os métodos para quantificação de heparinas têm se que o método turbidimétrico utiliza as condições de 37 ºC, pH reacional de 4,4 e tempo de reação de 1hora. Através da ferramenta estatística de planejamento de experimentos uma nova condição reacional foi obtida, garantindo o conhecimento da influência de cada fator sobre a metodologia. No comprimento de 500nm foi realizado um planejamento fatorial com ponto central 2³. Em seguida foi realizada a expansão deste planejamento com a adição dos níveis axiais com o objetivo de obtenção da superfície ótima do estudo das variáveis investigadas neste trabalho. Na literatura, é possível também encontrar a utilização de um comprimento de onda menor (290nm) para quantificação de complexos contendo concentrações menores de HBPM. Assim como em 500nm, também foi realizado um estudo de avaliação da influência destes fatores para o comprimento de onda de 290nm, cuja abordagem foi através do planejamento fatorial com ponto central 2³ e em seguida um 2². Os modelos construídos revelaram que mais de metade das variações (> 60%) puderam ser explicadas pelas variáveis investigadas nestes planejamentos em 500nm e 290nm. Então foram determinadas as novas condições para leituras obtidas em 500nm, sendo a temperatura em 37 ºC, pH reacional de 5,4 e tempo de reação em 45minutos. E para 290nm foram estabelecidas as condições experimentais de temperatura em 37ºC, pH reacional de 5,4 e o tempo de reação de 20minutos. Sobre a influência destes parâmetros na resposta do método foi comprovado que a temperatura reacional do meio, tanto para as respostas em 500nm, como em 290nm, não modifica a resposta. No entanto, o pH reacional para as leituras em 500nm produzem modificações consistentes no desempenho do método. O tempo de reação foi um ponto importante avaliado por este trabalho para ambos comprimentos de onda. Houve uma compreensão deste parâmetro frente as concentrações de HBPM que antes não tinha sido relatada em outro trabalho científico. Assim o tempo de reação para 500nm pôde ser modificado para 45minutos. E para 290nm para 20minutos. Após esta etapa de planejamento de experimentos, o método turbidimétrico foi validado de acordo com os parâmetros estabelecidos pelos guias do ICH para validação de procedimentos analíticos para a quantificação de diferentes concentrações de HBPM. A realização do estudo da curva de calibração demonstrou que o limite de quantificação para o comprimento de 500nm, com precisão e exatidão, foi até 20μg/mL. Sendo assim, a faixa de linearidade para o comprimento de 500nm foi de 20 – 200μg/mL e devido à presença de heterocedasticidade dos dados a equação de regressão obtida pelo método dos mínimos quadrados ponderados foi y = -0,03421 + 0,00340C. Já para o comprimento de 290nm a faixa de linearidade foi de 3 - 20μg/mL e a equação da regressão obtida pelo método dos mínimos quadrados ordinários foi y = -0,00921 + 0,00583C. A partir da aprovação do método para os demais parâmetros da validação o método foi robusto para variações de temperatura, preciso e exato para ambos comprimentos de onda. / Among the methods for the quantification of heparins have that the method turbidimétrico uses the conditions of 37° C, pH of reaction mass of 4,4 and reaction time of 1 hour. Through the statistical tool of design of experiments a new condition, a reaction mass was obtained, ensuring the knowledge of the influence of each factor on the methodology. At the length of 500nm was performed a factorial planning with central point 2³. Then was held the expansion of this planning with the addition of levels axial with the goal of obtaining the surface great the study of the variables investigated in this work. In the literature, it is possible to also find the use of a shorter wavelength (290nm) for the quantification of complexes containing lower concentrations of HBPM. As well as 500nm, there was also performed an assessment study of the influence of these factors to the wavelength of 290nm, whose approach has been through the factorial planning with central point 2³ and then one 2². The models constructed revealed that more than half of the variation (> 60%) could be explained by the variables investigated in these plans at 500nm and 290nm. Then there were certain new conditions to the readings obtained in 500nm, the temperature at 37°C , pH of reaction of 5,4 and reaction time in 45 minutes. And for 290nm were established the experimental conditions of temperature at 37ºC, pH, reaction 5,4 and the reaction time of 20minutes. About the influence of these parameters on the response of the method has been proven that the temperature reaction of the medium, both for the answers at 500nm, as in 290nm, does not modify the response. However, the pH of reaction for the readings at 500nm to produce changes consistent the performance of the method. The reaction time was an important point evaluated by this work for both wavelengths. There was an understanding of this parameter front the concentrations of HBPM that had not previously been reported in other scientific work. Thus the reaction time to 500nm could be modified for 45minutes. And for 290nm for 20minutes. After this step of the planning of experiments, the method turbidimétrico was validated according to the parameters established by the guides ICH for validation of analytical procedures for the quantification of different concentrations of HBPM. The study of the calibration curve showed that the limit of quantification for the length of 500nm, with precision and accuracy, was up to 20μg/mL. Thus, the range of linearity for the length of 500nm was 20 – 200μg/mL, and due to the presence of heterocedasticidade of the data the regression equation obtained by the method of least squares weighted was y = -0,03421 + 0,00340C. As for the length of 290nm in the range of linearity was 3 - 20μg/mL and the regression equation obtained by the method of ols was y = -0,00921 + 0,00583C. with The approval of the method for the other parameters of the validation the method was robust to variations of temperature, precise and accurate for both wavelengths.

A família das serino proteases inclui diversas proteínas envolvidas em uma variedade de processos fisiológicos, como digestão protéica, regulação da pressão arterial e da coagulação sanguínea, entre outros. Quando disfuncionais, relacionam-se à condições patológicas graves como trombose vascular, embolismo pulmonar, infarto agudo do miocárdio, isquemia cerebral, bem como com o quadro da hemofilia B, ocasionada pela deficiência de fator IX. A investigação dos mecanismos de ação e a compreensão do funcionamento de serino proteases e de seus inibidores, as serpinas, é essencial para desvendar mecanismos de doenças e para a modelagem de fármacos mais específicos e eficientes. A pesquisa de fármacos anti-trombóticos busca desenvolver produtos capazes de interferir no processo hemostático que pode resultar no grave quadro trombo-embólico. A nitroforina-2 (NP-2), produzida na secreção salivar do inseto barbeiro Rhodnius prolixus, é uma proteína dotada de potente ação anti-hemostática, atuando como um inibidor específico do complexo tenase intrínseco (TF/FVIIa/FIX). Em trabalho anterior, nosso grupo identificou que o fragmento correspondente ao segmento 90-110 de NP-2 possui atividade anticoagulante. Um modelo do complexo fator IXa (fIXa)-NP-2 foi gerado a partir do “docking” do peptídeo de NP-2 na provável região de ligação com fIXa. Este complexo foi usado como ponto de partida para a simulação por dinâmica molecular e refinamento da estrutura. Novos peptídeos foram propostos como o objetivo de gerar estruturas com maior afinidade por fIXa. Identificamos o hexapeptídeo LKEADE como apresentando melhor afinidade por fIXa, o qual sugerimos como “template” para o planejamento racional de fármacos com ação anticoagulante e anti-trombótica. Numa outra vertente de nosso trabalho, estudamos a superfamília de proteínas denominada serpinas (serpins, ou “SERine Protease INhibitors”) que engloba um grande conjunto de proteínas dotadas de estruturas similares e provenientes de vários e distintos organismos. A função inicialmente identificada para as serpinas foi de inibição de serino proteases da coagulação sangüínea; entretanto, muitas serpinas perderam esta função.Nestes estudos foram usados modelos ocultos de Markov para criar modelos e descrições possibilitando classificar as serpinas em relação à sua função biológica. Foram criadas assinaturas para cada grupo: seqüências consenso e padrões de aminoácidos distintos para cada modelo/função correspondente. Um modelo específico para serpinas da coagulação sangüínea foi criado. Para este modelo, foi gerada a expressão regular [IVTLM]-[FLVA]- F-S-P-[VLWYF]-[SG]-[IV] que descreve tal função. Além disso, ela codifica a seqüência de uma importante região envolvida na mudança conformacional e no funcionamento da serpina. Tanto esta seqüência quanto a estrutura secundária correspondente podem ser melhor investigadas, por sugerirem um alvo para inibição ou ativação. / The protein family of serine proteases comprises molecules involved in a wide range of physiological processes, such as regulation of blood pressure and coagulation. Dysfunctional serine proteases are related to pathological conditions such as embolism, heart failure, cerebral ischemia and also hemophilia B (the latter being a consequence of factor IX deficiency). The understanding of serine proteases mechanism of action, as well as of their inhibitors is a key step to the discover and develop new drugs. In the study of homeostasis, the search for anti-thrombotic drugs seek to avoid thrombosis and related conditions. The protein nitrophorin-2 (NP-2), found in the salivary glands of the hematophagous insect Rodnius prolixus, is a specific inhibitor of the intrinsic tenase complex (TF/fVIIa/fIX). In previous studies, we identified the NP-2 fragment (amino acid sequence 90-110) showing anticoagulant activity. Models of the complex factor IXa (fIXa) – NP-2 were created. This complex was used as a starting point for the molecular dynamic simulations and structure refinement. New NP-2 peptides were suggested, in order to achieve higher affinity complexes. We identified the hexapeptide LKEADE as showing higher affinity for fIXa, which we suggest to be used on rational drug design studies for anticoagulant drugs. The superfamily of proteins known as serpins (“Serine Protease Inhibitors”) involve a number of similar structures, found in a wide variety of organisms. Its function was initially identified as an inhibitor of blood clotting serine proteases. However, many serpins have lost that function in the course of natural evolution. Hidden Markov models were then used to create profiles classifying those proteins due to their biological function. We created signatures for each group of functional serpins in the form of consensus sequences and distinct amino acid patterns. A blood clotting-specific model was generated, which has yielded the regular expression [IVTLM]-[FLVA]-F-S-P-[VLWYF]-[SG]-[IV]. Such pattern also codes for a region of the structure involved in an extensive conformational change. The change is related to the activation of the serpin, and, therefore, both pattern and sequence should be investigated. Combined, these information suggest a powerful target for blood clotting inhibition.

A família das serino proteases inclui diversas proteínas envolvidas em uma variedade de processos fisiológicos, como digestão protéica, regulação da pressão arterial e da coagulação sanguínea, entre outros. Quando disfuncionais, relacionam-se à condições patológicas graves como trombose vascular, embolismo pulmonar, infarto agudo do miocárdio, isquemia cerebral, bem como com o quadro da hemofilia B, ocasionada pela deficiência de fator IX. A investigação dos mecanismos de ação e a compreensão do funcionamento de serino proteases e de seus inibidores, as serpinas, é essencial para desvendar mecanismos de doenças e para a modelagem de fármacos mais específicos e eficientes. A pesquisa de fármacos anti-trombóticos busca desenvolver produtos capazes de interferir no processo hemostático que pode resultar no grave quadro trombo-embólico. A nitroforina-2 (NP-2), produzida na secreção salivar do inseto barbeiro Rhodnius prolixus, é uma proteína dotada de potente ação anti-hemostática, atuando como um inibidor específico do complexo tenase intrínseco (TF/FVIIa/FIX). Em trabalho anterior, nosso grupo identificou que o fragmento correspondente ao segmento 90-110 de NP-2 possui atividade anticoagulante. Um modelo do complexo fator IXa (fIXa)-NP-2 foi gerado a partir do “docking” do peptídeo de NP-2 na provável região de ligação com fIXa. Este complexo foi usado como ponto de partida para a simulação por dinâmica molecular e refinamento da estrutura. Novos peptídeos foram propostos como o objetivo de gerar estruturas com maior afinidade por fIXa. Identificamos o hexapeptídeo LKEADE como apresentando melhor afinidade por fIXa, o qual sugerimos como “template” para o planejamento racional de fármacos com ação anticoagulante e anti-trombótica. Numa outra vertente de nosso trabalho, estudamos a superfamília de proteínas denominada serpinas (serpins, ou “SERine Protease INhibitors”) que engloba um grande conjunto de proteínas dotadas de estruturas similares e provenientes de vários e distintos organismos. A função inicialmente identificada para as serpinas foi de inibição de serino proteases da coagulação sangüínea; entretanto, muitas serpinas perderam esta função.Nestes estudos foram usados modelos ocultos de Markov para criar modelos e descrições possibilitando classificar as serpinas em relação à sua função biológica. Foram criadas assinaturas para cada grupo: seqüências consenso e padrões de aminoácidos distintos para cada modelo/função correspondente. Um modelo específico para serpinas da coagulação sangüínea foi criado. Para este modelo, foi gerada a expressão regular [IVTLM]-[FLVA]- F-S-P-[VLWYF]-[SG]-[IV] que descreve tal função. Além disso, ela codifica a seqüência de uma importante região envolvida na mudança conformacional e no funcionamento da serpina. Tanto esta seqüência quanto a estrutura secundária correspondente podem ser melhor investigadas, por sugerirem um alvo para inibição ou ativação. / The protein family of serine proteases comprises molecules involved in a wide range of physiological processes, such as regulation of blood pressure and coagulation. Dysfunctional serine proteases are related to pathological conditions such as embolism, heart failure, cerebral ischemia and also hemophilia B (the latter being a consequence of factor IX deficiency). The understanding of serine proteases mechanism of action, as well as of their inhibitors is a key step to the discover and develop new drugs. In the study of homeostasis, the search for anti-thrombotic drugs seek to avoid thrombosis and related conditions. The protein nitrophorin-2 (NP-2), found in the salivary glands of the hematophagous insect Rodnius prolixus, is a specific inhibitor of the intrinsic tenase complex (TF/fVIIa/fIX). In previous studies, we identified the NP-2 fragment (amino acid sequence 90-110) showing anticoagulant activity. Models of the complex factor IXa (fIXa) – NP-2 were created. This complex was used as a starting point for the molecular dynamic simulations and structure refinement. New NP-2 peptides were suggested, in order to achieve higher affinity complexes. We identified the hexapeptide LKEADE as showing higher affinity for fIXa, which we suggest to be used on rational drug design studies for anticoagulant drugs. The superfamily of proteins known as serpins (“Serine Protease Inhibitors”) involve a number of similar structures, found in a wide variety of organisms. Its function was initially identified as an inhibitor of blood clotting serine proteases. However, many serpins have lost that function in the course of natural evolution. Hidden Markov models were then used to create profiles classifying those proteins due to their biological function. We created signatures for each group of functional serpins in the form of consensus sequences and distinct amino acid patterns. A blood clotting-specific model was generated, which has yielded the regular expression [IVTLM]-[FLVA]-F-S-P-[VLWYF]-[SG]-[IV]. Such pattern also codes for a region of the structure involved in an extensive conformational change. The change is related to the activation of the serpin, and, therefore, both pattern and sequence should be investigated. Combined, these information suggest a powerful target for blood clotting inhibition.

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