Made available in DSpace on 2016-01-26T12:51:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 danielaprudenteteixeiranunes_dissert.pdf: 2007548 bytes, checksum: 1b9b96cf5d50556af914f8157e7d26ec (MD5) Previous issue date: 2010-12-16 / Adenosine deaminase (ADA), an enzyme coded by ADA gene (20q13.11) acts in adenosine metabolism and it is involved in the modulation of the immune response. ADA gene G22A polymorphism originates two co-dominants alleles ADA*01 and ADA*02 and influences the level of ADA enzyme in the organism. Apparently it has a fundamental role in gestational maintenance. The ADA*02 allele has been associated as protector effect against recurrent spontaneous abortion (RSA) in European Caucasian women. Aim: To investigate if ADA gene G22A polymorphism is associated with occurrence of RSA in Brazilian women. Methods: After obtaining the written consent 311 women were selected to compose two groups: G1 with previous history of RSA (n=129) and G2 without previous history of RSA (n=182). Genomic DNA was isolated from peripheral blood using commercial kits. The PCR-RFLP method was used to identify ADA gene G22A polymorphism. p>0005 was considered statistically significant. Results: The frequencies of ADA*01;*01, ADA*01;*02 and ADA*02;*02 genotypes were similar in both groups (G1 and G2) with no statistically significance differences observed (p = 0,7170; x2 = 0,6653; GL = 2). ADA*01 and ADA*02 alleles frequencies were 95,6% and 4,4% in G1 group and 94,9% and 5,1% in G2 group, respectively (p = 0,8433; OR = 1,179; CI 95%: 0,5340 2.601). Conclusion: The results suggest that ADA alleles ADA*01 and ADA*02 are not associated with RSA. It xvi is possible that the reduction of ADA levels resulting from the presence of at least one ADA*02 allele do not have a role against abortion in Brazilian women. / Polimorfismo G22A do gene ADA e abortamento espontâneo recorrente: ausência de associação Introdução: A adenosina deaminase (ADA), uma enzima codificada pelo gene ADA (20q13.11), atua no metabolismo da adenosina e modula a resposta imune. O polimorfismo G22A deste gene origina os alelos co-dominantes ADA*01 e ADA*02 e influencia o nível de expressão da enzima ADA, que possui papel fundamental na manutenção da gestação. O alelo ADA*02 tem sido associado a um efeito protetor contra o abortamento espontâneo recorrente (AER) em mulheres caucasianas européias. Objetivo: Investigar se o polimorfismo G22A do gene ADA se associa à ocorrência de AER em brasileiras. Métodos: Após obtenção do Termo de Consentimento Livre e Esclarecido (Parecer CEP FAMERP 308/2008), 311 mulheres foram selecionadas para compor dois grupos: G1 com histórico de AER (N=129) e G2 sem histórico de AER (N=182). O DNA genômico foi extraído a partir de sangue periférico com o uso kit comercial. O polimorfismo G22A do gene ADA foi identificado com o uso do método PCR-RFLP. O valor p>0,005 foi considerado significante. Resultados: As frequências dos genótipos ADA*01;*01, ADA*01;*02 e ADA*02;*02 foram semelhantes entre os grupos e não apresentaram diferenças estatisticamente significantes (p = 0,7170; χ2 = 0,6653; GL = 2). As frequências dos alelos ADA*01 e ADA*02 em G1 foram iguais a 95,6% e 4,4%; em G2, 94,9% e 5,1%, respectivamente (p=0,8433; OR=1,179; IC 95%: 0,5340-2.601). Conclusões: Os resultados sugerem que xiv os alelos ADA*01 e ADA*02 do gene ADA não estão associados ao AER. É possível que a redução nos níveis da ADA resultantes do alelo ADA*02 não apresente um efeito protetor contra o AER em brasileiras.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Metabolic syndrome (MetS) is a complex disorder represented by a set of cardiovascular risk factors, including endothelial dysfunction, oxidative stress and inflammation. Syzygium cumini has hypoglycemic, anti-inflammatory, antipyretic, hypolipidemic and antioxidant properties, besides antiviral and anticarcinogenic action. Considering the importance of MetS in the current economic and social context, morbidity and complications following this pathology, the aim of this study was to assess biochemical and inflammatory parameters in patients with MetS. Moreover, to check the effect of aqueous extract of Syzygium cumini (ASc), as well as its mechanism of action on the activity of the enzyme adenosine deaminase (ADA) and other biochemical parameters under hyperglycemic and oxidative conditions in vitro. To develop the first step of this work, were obtained samples of serum and whole blood of patients diagnosed with MetS (n=40) before initiating a physical activity program, in which we analyzed biochemical, oxidative and inflammatory parameters. The results showed an increase in ADA, acetylcholinesterase (AChE) and dipeptidyl peptidase IV (DPP-IV) activities in lymphocytes of patients with MetS. Further, in these patients, we observed an increase in the activity of butyrylcholinesterase (BuChE) and ˠ- glutamyltransferase (ˠ-GT) and in C-reactive protein (hsCRP) and nitric oxide (NOx) levels, as well as disturbances in antioxidant defenses and some correlations between the parameters analyzed were obtained. Thus, these results demonstrated that MetS affects the purinergic and cholinergic systems reflecting the inflammatory and immune status of these patients, besides altering the antioxidant defenses of the same. For in vitro determinations, first, erythrocytes (RBCs) from healthy individuals were used. ASc was able to prevent the increase in ADA activity caused by exposure of RBCs to hyperglycemic conditions for 2 hours. Also, ASc acted on the activity of ADA similarly caffeine and insulin, on the other hand, dipyridamole attenuated the effect of ASc by antagonizing its the effect or by competition with the extract. Thus, it can be suggested that the ASc act by influencing the metabolism of adenosine, and its effect is related to the presence of phenolic compounds and the antioxidant properties attributed to this plant. In the next step of this work , we observed an increase in the ADA activity and lipid peroxidation and decreased cell viability after exposure of lymphocytes from healthy subjects to 2,2 ' -azobis -2- amidinopropane dihydrochloride ( AAPH ) by 2 hours in vitro. ASc and gallic acid were able to reduce the ADA activity, but did not alter the lipid peroxidation caused by AAPH . The ASc increased cell viability and reduced the activity of the enzyme lactate dehydrogenase ( LDH ). ASc, by reducing the activity of ADA, may be increasing adenosine levels and helping to maintain the beneficial effects caused by the same, such as antioxidant, anti-inflammatory and antithrombotic actions. Furthermore, the results demonstrate the cytoprotective effect evidenced by the extract. We conclude that the changes found in patients with MetS are related to inflammatory and oxidative processes and may favor the prevention and control of this clinical situation Also, the protective effects demonstrated by ASc contribute to the understanding of the wide use of this plant and its therapeutic value in the treatment of various clinical conditions. / A Síndrome Metabólica (SMet) é um transtorno complexo representado por um conjunto de fatores de risco cardiovascular, entre eles a disfunção endotelial, o estresse oxidativo e a inflamação. O Syzygium cumini, conhecido popularmente como jambolão, é uma planta que apresenta propriedades hipoglicêmicas, antiinflamatórias, antipiréticas, hipolipidêmicas e antioxidantes, além de ação antiviral e anticarcinogência. Considerando a importância da SMet no contexto social e econômico atual, a morbidade e as complicações consequentes desta situação clínica, o objetivo deste estudo foi avaliar parâmetros bioquímicos e inflamatórios em pacientes com SMet. Além disso, verificar o efeito do extrato aquoso de Syzygium cumini (ASc), bem como o seu mecanismo de ação sobre a atividade da enzima Adenosina desaminase (ADA) e outros parâmetros bioquímicos sob condições hiperglicêmicas e oxidativas, in vitro. Para o desenvolvimento da primeira etapa deste trabalho, foram utilizadas amostras de soro e sangue total de pacientes com diagnóstico de SMet (40 pessoas) antes de iniciarem um programa de atividades físicas, nos quais foram analisados parâmetros bioquímicos, inflamatórios e oxidativos. Os resultados demonstraram um aumento na atividade das enzimas ADA, acetilcolinesterase (AChE) e dipeptidil peptidase IV (DPP-IV) em linfócitos de pacientes com SMet. Ainda, nesses pacientes, observou-se um aumento na atividade das enzimas Butirilcolinesterase (BuChE) e gama-glutamiltransferase (GGT), e nos níveis de proteína C reativa (PCR) e óxido nítrico (NOx), bem como alterações nas defesas antioxidantes e algumas correlações entre os parâmetros analisados foram obtidos. Assim, esses resultados demonstraram que a SMet afeta a atividade da ADA e o sistema colinérgico refletindo o estado imune e inflamatório desses pacientes, além de alterar as defesas antioxidantes dos mesmos. Para as análises in vitro, primeiramente, foram utilizados eritrócitos (RBCs) de indivíduos saudáveis. O ASc foi capaz de prevenir o aumento na atividade da ADA causado pela exposição dos RBCs a condições hiperglicêmicas por 2 horas. Ainda, o ASc atuou sobre a atividade da ADA de maneira semelhante a cafeína e a insulina; por outro lado, o dipiridamol atenuou o efeito do ASc por antagonizar o efeito do mesmo ou por competição com o extrato. Assim,pode-se sugerir que o ASc influencia no metabolismo da adenosina, além de seu efeito estar relacionado a presença de compostos fenólicos e às propriedades antioxidantes atribuídas a essa planta. Na etapa seguinte da realização deste trabalho, observou-se um aumento na atividade da ADA e na lipoperoxidação, e redução da viabilidade celular após a exposição de linfócitos de indivíduos saudáveis ao 2,2 -azobis (aminodipropano) dihidrocloreto (AAPH) por 2 horas, in vitro. O ASc e ácido gálico foram capazes de reduzir a atividade da ADA, mas não alteraram a lipoperoxidação causada pelo AAPH. O ASc aumentou a viabilidade celular e reduziu a atividade da enzima Lactato desidrogenase (LDH). O ASc ao reduzir a atividade da ADA, pode estar aumentando os níveis de adenosina e colaborando para a manutenção dos efeitos benéficos provocados pela mesma, como ações antioxidantes, antiinflamatórias e antitrombóticas. Além disso, os resultados demonstraram o efeito citoprotetor evidenciado pelo extrato. Podemos concluir que as alterações encontradas nos pacientes com SMet estão relacionadas aos processos inflamatórios e oxidativos e podem favorecer medidas de prevenção e controle desta situação clínica. Também, os efeitos protetores demonstrados pelo ASc contribuem para o entendimento da ampla utilização desta planta e de seu valor terapêutico no tratamento de diversas patologias clínicas.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / O Clostridium difficile tem como principal fator de virulÃncia a toxina A (TxA), a qual provoca inflamaÃÃo e destruiÃÃo tecidual aguda em intestinos de animais experimentais e de pacientes com a doenÃa induzida por esta bactÃria. Em locais de injÃria tecidual, adenosina à produzida em altas concentraÃÃes, onde exerce uma sÃrie de efeitos antiinflamatÃrios, limitados por sua rÃpida degradaÃÃo pela enzima adenosina desaminase. O objetivo deste trabalho foi investigar o efeito da inibiÃÃo da enzima adenosina desaminase pelo EHNA (eritro-9-(2-hidrÃxi-3-nonil)-adenina) sobre a enterite induzida pela TxA do C. difficile em alÃa ileal de camundongos. Para isto, injetamos EHNA (90 &#956;mol/kg) ou PBS i.p. 30 minutos antes da administraÃÃo de TxA (10 a 100 &#956;g) ou PBS na alÃa ileal isolada. Os animais foram sacrificados 3 horas depois da induÃÃo da enterite e as alÃas foram retiradas para estudo. As razÃes peso/comprimento da alÃa e volume de secreÃÃo/comprimento da alÃa foram calculadas e amostras de tecido foram coletadas para histopatologia, dosagem de atividade de mieloperoxidase (MPO), dosagem de TNF-&#945;, IL-1&#946; e IL-10 por ELISA, imunohistoquÃmica para TNF-&#945;, IL-1&#946;, NOS induzÃvel e PTX3, e PCR para TNF-&#945;, IL-1&#946; e PTX3. A injeÃÃo de TxA (10 a 100 &#956;g) nas alÃas ileais aumentou significativamente (p<0,05) as razÃes peso/comprimento da alÃa e volume de secreÃÃo/comprimento da alÃa com resultados consistentes a partir de 50 &#956;g. A TxA promoveu significativa (p<0,05) destruiÃÃo tecidual, edema, infiltraÃÃo de cÃlulas inflamatÃrias, aumento das citocinas TNF-&#945; e IL-1&#946;, e elevaÃÃo de iNOS e PTX3. Todos esses parÃmetros foram significativamente revertidos com o uso do EHNA (p<0,05). Em adiÃÃo, a TxA nÃo alterou os nÃveis de IL-10 em relaÃÃo ao controle, mas o prÃ-tratamento com EHNA promoveu uma elevaÃÃo nos nÃveis desta citocina. Assim, concluÃmos que na enterite induzida pela TxA em camundongos o EHNA demonstrou um potente efeito antiinflamatÃrio, reduzindo consideravelmente a lesÃo tecidual, a migraÃÃo neutrofÃlica, a expressÃo e os nÃveis de citocinas prÃinflamatÃrias (TNF-&#945;, IL-1&#946;) e produzindo um aumento nos nÃveis de IL-10. AlÃm disso, a administraÃÃo de TxA induziu um aumento na expressÃo da proteÃna PTX3 e no nÃmero de cÃlulas imunomarcadas para iNOS no tecido ileal, ambos revertidos pelo EHNA / The main factor of virulence in Clostridium difficile is toxin A (TxA), which can induce inflammation and acute tissue injury in the bowels of animals and humans affected by this organism. The high concentration of adenosine generated upon injury produces a number of antiinflammatory effects limited by rapid degradation by adenosine deaminase. The objective of this study was to determine the effect of EHNA (erythro-9-(2-hydroxy-3-nonyl)-adenine) inhibition of adenosine deaminase upon TxA-induced ileal loop enteritis in mice. EHNA (90 &#956;mol/kg) or PBS was injected i.p. 30 minutes prior to TxA (10-100 &#956;g) or PBS instillation into the ligated ileal loop. The animals were euthanized 3 hours after enteritis induction and the ileal loops were retrieved for analysis. The weight/length ratio and the secretion volume/length ratio were calculated and tissue samples were submitted to histopathological study, myeloperoxidase assay (MPO), measurement of TNF-&#945;, IL-1&#946; and IL-10 levels with ELISA, immunohistochemical tests for TNF-&#945;, IL-1&#946;, inducible NOS and PTX3, and PCR assay for TNF-&#945;, IL-1&#946; and PTX3. The instillation of TxA (10-100 &#956;g) into the ileal loop significantly increased (p<0.05) the weight/length ratio and the secretion volume/length ratio with consistent results above 50 &#956;g. TxA induced a significant amount (p<0.05) of histological damage, edema and inflammatory cell infiltration and increased the production of TNF-&#945;, IL-1&#946;, iNOS and PTX3. All changes were significantly reverted by treatment with EHNA (p<0.05). Moreover, IL-10 levels remained unchanged in animals treated with TxA, but increased in animals receiving EHNA. In conclusion, in mice with TxA-induced enteritis EHNA produced considerable antiinflammatory effects, reducing tissue injury, neutrophil migration, the expression and levels of proinflammatory cytokines (TNF-&#945; and IL-1&#946;) and producing an increase in IL-10 levels. In addition, TxA instillation increased PTX3 expression and the number of cells immunolabeled for iNOS in the ileal tissue, both of which were reverted by EHNA