Visando novos estudos com a proteína amilóide sérica A (SAA), propusemos a produção de seu recombinante humano em Escherichia coli, mais especificamente, a isoforma encontrada na fase aguda (A-SAA1) e da constitutivamente expressa (C-SAA4). Realizamos a expressão, identificação e purificação das proteínas recombinantes. Concomitantemente, também avaliamos o efeito da hipóxia na expressão e produção da proteína SAA nativa em linhagens de pré-adipócitos murinos 3T3-L1, não diferenciados e diferenciados e adipócitos humanos. Aparentemente quanto maior o grau de diferenciação celular, maior a expressão e produção da proteína. Para os adipócitos humanos, o perfil de expressão de mRNA da SAA mostra que SAA1>SAA2>SAA4 nas relações 500:150:1. Na hipóxia, há um aumento na expressão de SAA, entretanto não associamos esta expressão a um aumento da concentração da proteína. A importância do reconhecimento de que SAA pode ser umas das proteínas induzidas pela hipóxia em adipócitos é discutida em relação ao seu papel pró-inflamatório. / In order to provide more complex studies with the protein serum amyloid A (SAA), this study proposed the production of its human recombinant in bacteria (Escherichia coli), more specifically, the synthesis of the main isoform found in the acute phase (A-SAA1) and the constitutively expressed (C-SAA4). The expression, identification and purification of the recombinants proteins was performed. Concurrently, we also did a study evaluating the effect of hypoxia in the expression and protein production of native SAA in undifferentiated and differentiated murine preadipocytes 3T3-L1 and humans adipocytes. Apparently, the protein expression and production increases with the cell differentiation degree. For human adipocytes, we demonstrated the mRNA expression profile of SAA, in which SAA1 > SAA2 > SAA4 (500:150:1). In hypoxia, there is an increased expression of SAA, but we could not link it to an increase of protein concentration. The importance of recognizing that SAA may be one of the proteins induced by hypoxia in adipocytes is discussed in relation to the proinflammatory role of this protein.

Visando novos estudos com a proteína amilóide sérica A (SAA), propusemos a produção de seu recombinante humano em Escherichia coli, mais especificamente, a isoforma encontrada na fase aguda (A-SAA1) e da constitutivamente expressa (C-SAA4). Realizamos a expressão, identificação e purificação das proteínas recombinantes. Concomitantemente, também avaliamos o efeito da hipóxia na expressão e produção da proteína SAA nativa em linhagens de pré-adipócitos murinos 3T3-L1, não diferenciados e diferenciados e adipócitos humanos. Aparentemente quanto maior o grau de diferenciação celular, maior a expressão e produção da proteína. Para os adipócitos humanos, o perfil de expressão de mRNA da SAA mostra que SAA1>SAA2>SAA4 nas relações 500:150:1. Na hipóxia, há um aumento na expressão de SAA, entretanto não associamos esta expressão a um aumento da concentração da proteína. A importância do reconhecimento de que SAA pode ser umas das proteínas induzidas pela hipóxia em adipócitos é discutida em relação ao seu papel pró-inflamatório. / In order to provide more complex studies with the protein serum amyloid A (SAA), this study proposed the production of its human recombinant in bacteria (Escherichia coli), more specifically, the synthesis of the main isoform found in the acute phase (A-SAA1) and the constitutively expressed (C-SAA4). The expression, identification and purification of the recombinants proteins was performed. Concurrently, we also did a study evaluating the effect of hypoxia in the expression and protein production of native SAA in undifferentiated and differentiated murine preadipocytes 3T3-L1 and humans adipocytes. Apparently, the protein expression and production increases with the cell differentiation degree. For human adipocytes, we demonstrated the mRNA expression profile of SAA, in which SAA1 > SAA2 > SAA4 (500:150:1). In hypoxia, there is an increased expression of SAA, but we could not link it to an increase of protein concentration. The importance of recognizing that SAA may be one of the proteins induced by hypoxia in adipocytes is discussed in relation to the proinflammatory role of this protein.

O tecido adiposo já foi considerado um tecido metabolicamente pouco ativo, no entanto, os mais recentes avanços mostram que ele desempenha uma função importante no controle da homeostase energética. Baseado neste conceito, este trabalho objetivou caracterizar o perfil morfológico e metabólico de adipócitos isolados de três diferentes coxins adiposos, subcutâneo, peri-epididimal, retro-peritoneal (SC, PE e RP respectivamente). Os adipócitos dos diferentes coxins foram coletados e submetidos a análise morfológica, aos ensaios metabólicos e análise da expressão de enzimas envolvidas no metabolismo lipídico e glicídico. Os resultados mostraram diferença estatisticamente significativa no volume dos adipócitos das três regiões entre si (p<0,05), maior capacidade lipogênica dos adipócitos RP. Paralelamente, o tecido SC, mostrou maior expressão de enzimas envolvidas na via lipogênica (p< 0,05; SC vs PE e RP). / The adipose tissue was considered to be a little active metabolic tissue, however, the most recent advances show that it plays an important function in the control of the energy homostasis. Based on this concept, this work aimed to characterize the morphology and metabolism of isolated adipocytes of three different depots, like: subcutaneous, periepididymal, retroperitoneal (SC, PE and RP) . The adipocytes of the different depots had been collected and submitted to morphologic analysis, metabolic assays and to analysis of the enzymes expressions involved on lipids and glucose metabolism. The results showed statistical significant difference on volume of the adipocytes among the three different depots (p< 0, 05), high lipogenic capacity of RP adipocytes and higher expression of proteins involved in lipogenic patways of SC adipocytes (p<0, 05).

O tecido adiposo já foi considerado um tecido metabolicamente pouco ativo, no entanto, os mais recentes avanços mostram que ele desempenha uma função importante no controle da homeostase energética. Baseado neste conceito, este trabalho objetivou caracterizar o perfil morfológico e metabólico de adipócitos isolados de três diferentes coxins adiposos, subcutâneo, peri-epididimal, retro-peritoneal (SC, PE e RP respectivamente). Os adipócitos dos diferentes coxins foram coletados e submetidos a análise morfológica, aos ensaios metabólicos e análise da expressão de enzimas envolvidas no metabolismo lipídico e glicídico. Os resultados mostraram diferença estatisticamente significativa no volume dos adipócitos das três regiões entre si (p<0,05), maior capacidade lipogênica dos adipócitos RP. Paralelamente, o tecido SC, mostrou maior expressão de enzimas envolvidas na via lipogênica (p< 0,05; SC vs PE e RP). / The adipose tissue was considered to be a little active metabolic tissue, however, the most recent advances show that it plays an important function in the control of the energy homostasis. Based on this concept, this work aimed to characterize the morphology and metabolism of isolated adipocytes of three different depots, like: subcutaneous, periepididymal, retroperitoneal (SC, PE and RP) . The adipocytes of the different depots had been collected and submitted to morphologic analysis, metabolic assays and to analysis of the enzymes expressions involved on lipids and glucose metabolism. The results showed statistical significant difference on volume of the adipocytes among the three different depots (p< 0, 05), high lipogenic capacity of RP adipocytes and higher expression of proteins involved in lipogenic patways of SC adipocytes (p<0, 05).

A ausência de nutrientes durante o jejum leva a intensa mobilização de ácidos graxos (AG) do adipócito. A intensidade deste fenômeno deve ser controlada, pois o excesso de AG está associado a condições patológicas. Nestas condições, a lipogênese torna-se útil e a Gliceroneogênese indispensável. Nesta via, o lactato seria um substrato fisiológico e provável. Metodologia. Ratos machos Wistar foram divididos em grupos, Alimentado (Al) e Jejum (J) e os coxins subcutâneo (SC) e visceral retroperitoneal (RP) submetidos aos testes biológicos e moleculares. No Teste de Incorporação de [14C]-Acido Lático em Glicerol e no teste de captação de [14C]-Acido Lático o grupo Al mostrou maior capacidade (Al > J; *p<0.05; [N=8]). Nestes testes, a glicose (1 ou 4 mM) foi fundamental e a presença de insulina (10 nM) ampliou estes resultados em ambos os tecidos. Na expressão do transportador de monocarboxilatos 1 (MCT1) e da enzima fosfoenol piruvato carboxiquinase (PEPCK), não houve diferenças entre Al e J. Concluímos que a alimentação promove aumento da Glicroneogênese a partir do ácido lático e a expressão da PEPCK não exerceu influencia neste processo. No entanto, a glicose e a insulina, mostraram-se como potencializadores da Gliceroneogênese. / The absence of nutrients during fasting leads to intensive mobilization of adipocyte fatty acids (FA). The intensity of this phenomenon should be controlled because excess of the AG is associated with pathological conditions. Under these conditions, the lipogenesis and gliceroneogenesis are useful and indispensable. In this pathway, the lactate and likely would be a physiological substrate. Methodology. Male Wistar rats were divided into groups: (Al) and Fasting (J) and fat pad subcutaneous (SC) and visceral retroperitoneal (RP) subject to biological and molecular assays. The Test of Incorporation of [14C]-Latic Acid into Glycerol and test of uptake lactic-acid, Al group showed greater capacity (Al> J; * p <0.05; [N = 8]). In these tests, glucose (1 or 4 mM) was fundamental and the presence of insulin (10 nM) extended these findings in both tissues. In monocarboxylate transporter 1 expression (MCT1) and the enzyme phosphoenol pyruvate carboxykinase (PEPCK), there was no difference between Al and J. We concluded that feeding promotes increased Glicroneogênese from lactic acid and expression of PEPCK did not exercised influence in this process. However, glucose and insulin appeared as potentiators of Gliceroneogênese.

Submitted by Angela Maria de Oliveira (amolivei@uepg.br) on 2018-05-14T14:39:42Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Janete Machozeki.pdf: 3460027 bytes, checksum: 87b38a12a4dede2c42dbef87dd9de037 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-14T14:39:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Janete Machozeki.pdf: 3460027 bytes, checksum: 87b38a12a4dede2c42dbef87dd9de037 (MD5) Previous issue date: 2018-03-28 / A obesidade é uma doença multifatorial, com fisiopatologia complexa e atua como fator de risco para outras doenças, principalmente diabetes mellitus tipo 2 e doença cardiovascular. Quando a resistência insulínica está presente, caracteriza a síndrome metabólica, constituída por inflamação crônica de baixo grau, estresse oxidativo e disfunção de adipócitos. Esta pesquisa interdisciplinar avalia o efeito do uso precoce da metformina ou do orlistat na prevenção da disfunção de adipócitos em ratos wistar machos, adultos, submetidos à dieta hiperglicídica e hiperlipídica. Neste estudo foram avaliados quatro grupos de 10 animais, sendo que o grupo controle recebeu ração padrão balanceada. Outros 3 grupos receberam ração de cafeteria modificada, sendo que em 2 grupos houve intervenção farmacológica, 1 com metformina (40mg/dia) e outro com orlistat (10 mg/dia). As doses foram calculadas fundamentadas na taxa metabólica basal. Foram comparados evolução ponderal, parâmetros bioquímicos, e avaliação histomorfométrica da gordura visceral. Não houve diferença estatisticamente significativa na média de peso e nem nos parâmetros bioquímicos na comparação entre os grupos (p>0,05). Na avaliação histomorfométrica evidenciou-se hiperplasia de adipócitos em todos os grupos, porém foi mais significativo no grupo que usou a dieta padrão comparado aos que usaram dieta de cafeteria modificada, com ou sem intervenção terapêutica (p<0,001). Ocorreu maior hipertrofia de adipócitos no grupo que utilizou a dieta de cafeteria modificada (p<0,001). Os grupos com intervenção terapêutica não apresentaram diferença estatística quando em relação ao grupo de dieta balanceada (p>0,05). Este estudo demonstrou que doses pequenas de metformina ou orlistat preveniram a hipertrofia de adipócitos na gordura visceral, que é a etapa determinante para o desenvolvimento da síndrome metabólica. Esta pesquisa demonstrou que pode ser possível a prevenção de doenças crônicas não transmissíveis relacionadas à disfunção de adipócitos. / Obesity is a disease with a complex multifactorial pathophysiology and acts as a risk factor for other diseases, particularly type 2 diabetes mellitus and cardiovascular disease. When insulin resistance is present, the metabolic syndrome, consisting of chronic low-grade inflammation, oxidative stress and dysfunction of adipocytes. This interdisciplinary research evaluates the effect of early use of metformin or orlistat in preventing dysfunction of adipocytes in male wistar rats, adults, submitted to hiperglicídica and hiperlipídica diet. In this study we evaluated four groups of 10 animals, and the control group received standard balanced ration. Other 3 groups received cafeteria modified ration, and in 2 groups there was drug intervention, 1 with metformin (40 mg/day) and another with orlistat (10 mg/day). The doses were calculated based on basal metabolic rate. Were compared weight, biochemical parameter, and histomorphometry evaluation of visceral fat. There was no statistically significant difference in weight and nor in biochemical parameters in comparison between the groups (p > 0.05). Histomorphometry evaluation showed hyperplasia of adipocytes in all groups but was most significant in the group that used the standard diet compared to that used modified cafeteria diet, with or without therapeutic intervention (p < 0.001). Occurred more in the adipocytes of hypertrophy group that used the cafeteria diet modified p < 0.001). The therapeutic intervention groups showed no statistical difference when compared to the balanced diet Group (p > 0.05). This study has shown that small doses of metformin or orlistat prevented the hypertrophy of adipocytes in visceral fat, which is the decisive step for the development of the metabolic syndrome. This research demonstrated that it may be possible to the prevention of non-communicable chronic diseases related to dysfunction of adipocytes.

Chronic low-grade endotoxemia is an important player in obesity and insulin resistance associated to a high-fat diet (HFD). On the other hand, although it is known that intense endotoxemia and infection reduce appetite and induce intense catabolism, leading to weight loss during the acute inflammatory phase, the late effects of an intense endotoxemia were previously unexplored. Here we report that, besides the concurrent effects, multiple and intense endotoxemia causes long lasting biochemical alterations in the adipose tissue that intensify the harmful effects of a HFD. Mice submitted to multiple and severe endotoxemia had increased the adipose tissue expression of TLR-4, CD14 and SAA3, remaining altered after one week in recovery. When associated to a HFD, mice previously submitted to acute endotoxemia showed a more severe weight gain and impaired insulin sensitivity. Adopting the HFD as an obesogenic stimulus, we evaluated the participation of the protein serum amyloid A (SAA) in obesity development. Using a SAA-targeted antisense oligonucleotide, we observed that the depletion of SAA prevented metabolic alterations, endotoxin elevation, weight gain and insulin resistance in a diet-induced obesity protocol. Inadequate sleep is another important factor to be considered in the obesity epidemic. We found that sleep restriction (SR) causes biochemical and morphological alterations in mice adipose tissue. The levels of serum resistin and the adipose tissue mRNA expression of resistin, TNF-&#945; and IL-6 were increased after SR. When associated to a HFD, mice previously submitted to SR gained more weight with increased macrophage infiltration in the epididymal adipose tissue, and insulin resistance. SAA is also part of the initial biochemical alterations caused by SR. It was observed that the expression of SAA in liver and adipose tissue is upregulated, with return to baseline when sleep is restored. Furthermore, 48 hours of total sleep restriction in healthy human volunteers also caused a serum elevation in SAA concentrations. Considering that SAA induces cell proliferation, we suggest that situations with an increase in SAA production and the consecutive preadipocyte proliferation would prime the adipose tissue to further adipocyte differentiation and hypertrophy. Furthermore, we suggest that SAA alter LPS signaling, possibly inhibiting its clearance. The mechanism associating inflammation and obesity is complex and encompass a diversity of factors; the inflammatory protein SAA may be one of them. In conclusion, our data describes the relationship between SAA, acute inflammation, sleep restriction and obesity. / Endotoxemia crônica de baixo grau tem um importante papel na obesidade e resistência à insulina associada a uma ração hiperlipídica. Por outro lado, embora se saiba que a endotoxemia intensa e infecção reduzam o apetite e induzam a um intenso catabolismo, conduzindo a perda de peso durante a fase aguda da inflamação, os efeitos tardios da endotoxemia intensa nunca foram explorados. Aqui mostramos que, além dos efeitos correntes, a endotoxemia aguda provoca alterações bioquímicas prolongadas no tecido adiposo que intensificam os efeitos deletérios de uma ração hiperlipídica. Camundongos submetidos à endotoxemia aguda apresentaram aumento na expressão de TLR-4, CD14 e SAA3 no tecido adiposo, permanecendo alteradas após uma semana em recuperação. Quando associado a uma ração hiperlipídica, os camundongos previamente submetidos à endotoxemia aguda mostraram um ganho de peso mais pronunciado e uma maior resistência à insulina. Adotando a ração hiperlipídica como um estímulo obesogênico, foi avaliada a participação da proteína amilóide sérica A (SAA) no desenvolvimento da obesidade. Usando um oligonucleotídeo antisense anti-SAA, observamos que a depleção da SAA previne as alterações metabólicas, elevação de endotoxina, ganho de peso e resistência à insulina associadas a ração rica em gordura. O sono inadequado é outro fator importante a ser considerado na epidemia de obesidade. Descobrimos que a restrição do sono (SR) provoca alterações bioquímicas e morfológicas no tecido adiposo de camundongos. A concentração de resistina no soro e a expressão de mRNA no tecido adiposo de resistina, TNF-&#945; e IL- 6 foram aumentadas após SR. Quando associado a uma ração hiperlipídica, os camundongos submetidos previamente à SR ganharam mais massa com aumento da infiltração de macrófagos no tecido adiposo epididimal, e resistência à insulina. SAA também faz parte das alterações bioquímicas iniciais provocadas pelo SR. Observou-se que a expressão de SAA no fígado e tecido adiposo é regulada positivamente, com retorno ao basal quando o sono é restaurado. Além disso, 48 horas de restrição de sono total em voluntários humanos saudáveis também causou uma elevação nas concentrações séricas de SAA. Considerando que SAA induz proliferação, sugerimos que situações onde ocorra aumento na produção de SAA e a consecutiva proliferação celular, o tecido adiposo se tornaria predisposto a futura diferenciação e hipertrofia. Além disso, sugerimos que SAA altera a sinalização de LPS, possivelmente inibindo sua depuração. O mecanismo de associação entre a inflamação e a obesidade é complexo e inclui uma diversidade de fatores; a proteína inflamatória SAA pode ser um deles. Em conclusão, nossos dados descrevem a relação entre SAA, inflamação aguda, restrição do sono e obesidade.

Chronic low-grade endotoxemia is an important player in obesity and insulin resistance associated to a high-fat diet (HFD). On the other hand, although it is known that intense endotoxemia and infection reduce appetite and induce intense catabolism, leading to weight loss during the acute inflammatory phase, the late effects of an intense endotoxemia were previously unexplored. Here we report that, besides the concurrent effects, multiple and intense endotoxemia causes long lasting biochemical alterations in the adipose tissue that intensify the harmful effects of a HFD. Mice submitted to multiple and severe endotoxemia had increased the adipose tissue expression of TLR-4, CD14 and SAA3, remaining altered after one week in recovery. When associated to a HFD, mice previously submitted to acute endotoxemia showed a more severe weight gain and impaired insulin sensitivity. Adopting the HFD as an obesogenic stimulus, we evaluated the participation of the protein serum amyloid A (SAA) in obesity development. Using a SAA-targeted antisense oligonucleotide, we observed that the depletion of SAA prevented metabolic alterations, endotoxin elevation, weight gain and insulin resistance in a diet-induced obesity protocol. Inadequate sleep is another important factor to be considered in the obesity epidemic. We found that sleep restriction (SR) causes biochemical and morphological alterations in mice adipose tissue. The levels of serum resistin and the adipose tissue mRNA expression of resistin, TNF-&#945; and IL-6 were increased after SR. When associated to a HFD, mice previously submitted to SR gained more weight with increased macrophage infiltration in the epididymal adipose tissue, and insulin resistance. SAA is also part of the initial biochemical alterations caused by SR. It was observed that the expression of SAA in liver and adipose tissue is upregulated, with return to baseline when sleep is restored. Furthermore, 48 hours of total sleep restriction in healthy human volunteers also caused a serum elevation in SAA concentrations. Considering that SAA induces cell proliferation, we suggest that situations with an increase in SAA production and the consecutive preadipocyte proliferation would prime the adipose tissue to further adipocyte differentiation and hypertrophy. Furthermore, we suggest that SAA alter LPS signaling, possibly inhibiting its clearance. The mechanism associating inflammation and obesity is complex and encompass a diversity of factors; the inflammatory protein SAA may be one of them. In conclusion, our data describes the relationship between SAA, acute inflammation, sleep restriction and obesity. / Endotoxemia crônica de baixo grau tem um importante papel na obesidade e resistência à insulina associada a uma ração hiperlipídica. Por outro lado, embora se saiba que a endotoxemia intensa e infecção reduzam o apetite e induzam a um intenso catabolismo, conduzindo a perda de peso durante a fase aguda da inflamação, os efeitos tardios da endotoxemia intensa nunca foram explorados. Aqui mostramos que, além dos efeitos correntes, a endotoxemia aguda provoca alterações bioquímicas prolongadas no tecido adiposo que intensificam os efeitos deletérios de uma ração hiperlipídica. Camundongos submetidos à endotoxemia aguda apresentaram aumento na expressão de TLR-4, CD14 e SAA3 no tecido adiposo, permanecendo alteradas após uma semana em recuperação. Quando associado a uma ração hiperlipídica, os camundongos previamente submetidos à endotoxemia aguda mostraram um ganho de peso mais pronunciado e uma maior resistência à insulina. Adotando a ração hiperlipídica como um estímulo obesogênico, foi avaliada a participação da proteína amilóide sérica A (SAA) no desenvolvimento da obesidade. Usando um oligonucleotídeo antisense anti-SAA, observamos que a depleção da SAA previne as alterações metabólicas, elevação de endotoxina, ganho de peso e resistência à insulina associadas a ração rica em gordura. O sono inadequado é outro fator importante a ser considerado na epidemia de obesidade. Descobrimos que a restrição do sono (SR) provoca alterações bioquímicas e morfológicas no tecido adiposo de camundongos. A concentração de resistina no soro e a expressão de mRNA no tecido adiposo de resistina, TNF-&#945; e IL- 6 foram aumentadas após SR. Quando associado a uma ração hiperlipídica, os camundongos submetidos previamente à SR ganharam mais massa com aumento da infiltração de macrófagos no tecido adiposo epididimal, e resistência à insulina. SAA também faz parte das alterações bioquímicas iniciais provocadas pelo SR. Observou-se que a expressão de SAA no fígado e tecido adiposo é regulada positivamente, com retorno ao basal quando o sono é restaurado. Além disso, 48 horas de restrição de sono total em voluntários humanos saudáveis também causou uma elevação nas concentrações séricas de SAA. Considerando que SAA induz proliferação, sugerimos que situações onde ocorra aumento na produção de SAA e a consecutiva proliferação celular, o tecido adiposo se tornaria predisposto a futura diferenciação e hipertrofia. Além disso, sugerimos que SAA altera a sinalização de LPS, possivelmente inibindo sua depuração. O mecanismo de associação entre a inflamação e a obesidade é complexo e inclui uma diversidade de fatores; a proteína inflamatória SAA pode ser um deles. Em conclusão, nossos dados descrevem a relação entre SAA, inflamação aguda, restrição do sono e obesidade.

A ausência de nutrientes durante o jejum leva a intensa mobilização de ácidos graxos (AG) do adipócito. A intensidade deste fenômeno deve ser controlada, pois o excesso de AG está associado a condições patológicas. Nestas condições, a lipogênese torna-se útil e a Gliceroneogênese indispensável. Nesta via, o lactato seria um substrato fisiológico e provável. Metodologia. Ratos machos Wistar foram divididos em grupos, Alimentado (Al) e Jejum (J) e os coxins subcutâneo (SC) e visceral retroperitoneal (RP) submetidos aos testes biológicos e moleculares. No Teste de Incorporação de [14C]-Acido Lático em Glicerol e no teste de captação de [14C]-Acido Lático o grupo Al mostrou maior capacidade (Al > J; *p<0.05; [N=8]). Nestes testes, a glicose (1 ou 4 mM) foi fundamental e a presença de insulina (10 nM) ampliou estes resultados em ambos os tecidos. Na expressão do transportador de monocarboxilatos 1 (MCT1) e da enzima fosfoenol piruvato carboxiquinase (PEPCK), não houve diferenças entre Al e J. Concluímos que a alimentação promove aumento da Glicroneogênese a partir do ácido lático e a expressão da PEPCK não exerceu influencia neste processo. No entanto, a glicose e a insulina, mostraram-se como potencializadores da Gliceroneogênese. / The absence of nutrients during fasting leads to intensive mobilization of adipocyte fatty acids (FA). The intensity of this phenomenon should be controlled because excess of the AG is associated with pathological conditions. Under these conditions, the lipogenesis and gliceroneogenesis are useful and indispensable. In this pathway, the lactate and likely would be a physiological substrate. Methodology. Male Wistar rats were divided into groups: (Al) and Fasting (J) and fat pad subcutaneous (SC) and visceral retroperitoneal (RP) subject to biological and molecular assays. The Test of Incorporation of [14C]-Latic Acid into Glycerol and test of uptake lactic-acid, Al group showed greater capacity (Al> J; * p <0.05; [N = 8]). In these tests, glucose (1 or 4 mM) was fundamental and the presence of insulin (10 nM) extended these findings in both tissues. In monocarboxylate transporter 1 expression (MCT1) and the enzyme phosphoenol pyruvate carboxykinase (PEPCK), there was no difference between Al and J. We concluded that feeding promotes increased Glicroneogênese from lactic acid and expression of PEPCK did not exercised influence in this process. However, glucose and insulin appeared as potentiators of Gliceroneogênese.

A descoberta de aminopeptidase regulada por insulina (IRAP), a qual hidrolisa peptídeos como ocitocina e vasopressina e é receptora de angiotensina IV, destaca a importância do estudo do envolvimento de peptidases na função endócrina do adipócito. Estudos recentes detectaram alterações das atividades de aminopeptidase neutra e de dipeptidil peptidase IV (DPPIV) no plasma e no hipotálamo e hipocampo na obesidade induzida por glutamato monossódico (MSG). A presente tese propôs (i) a existência de atividades aminopeptidásicas ácida (APA), básica (APB), neutra insensível (APM) e sensível à puromicina (PSA), metionil (MetAP) e DPPIV, além da já conhecida (leucil (LAP)/cistil (CAP)/IRAP), nas frações de membrana plasmática (FM) e de alta (HDM) e baixa (LDM) densidade microssomal de adipócitos isolados do depósito de gordura retroperitoneal; (ii) que suas atividades catalíticas, expressões gênicas e tráfego subcelular seriam diferenciados entre obesos induzidos por MSG, submetidos ou não à privação alimentar e em animais controle sadios, submetidos ou não a privação alimentar; (iii) e influenciadas por insulina, angiotensina II, angiotensina IV e vasopressina. A existência de todas essas aminopeptidases no adipócito foi demonstrada, sendo a APM a que apresenta maior Vmax e maior eficiência catalítica e a APA a maior afinidade. Os animais obesos apresentaram aumento do diâmetro médio dos adipócitos e aumento do lipócrito, caracterizando hipertrofia adipocítica, enquanto os controles privados de alimento tiveram um aumento no número de adipócitos e aumento no lipócrito, caracterizando hiperplasia adipocítica. Pela primeira vez, um perfil variado de atividades aminopeptidásicas distribuídas em diferentes compartimentos subcelulares do adipócito é evidenciado juntamente com a demonstração de diferenças no padrão de distribuição destas atividades entre os ratos obesos e sadios, privados ou não de alimento. Dentre as novas aminopeptidases detectadas no adipócito não há nenhuma com a característica clássica de IRAP. No geral, as alterações das atividades catalíticas nas diferentes situações sob estudo mostram o envolvimento dessas novas aminopeptidases na regulação endócrina do balanço energético (provavelmente via ação hidrolítica sobre angiotensina II e vasopressina) sob modulação por angiotensina IV (APB, APM, DPPIV, LAP/IRAP, MetAP e PSA em animais controle sadios e APB em animais controle privados de alimento), angiotensina II (APB e PSA nos animais obesos) e vasopressina (APB nos animais obesos privados de alimento; e influenciadas em seu tráfego subcelular por angiotensina II (CAP, DPPIV e LAP/IRAP) e angiotensina IV (LAP/IRAP). O tráfego subcelular da conhecida atividade CAP/IRAP mostrou-se suscetível à insulina e vasopressina / The discovery of insulin-regulated aminopeptidase (IRAP), which hydrolyzes peptides such as oxytocin and vasopressin and is an angiotensin IV receptor, highlights the importance of the involvement of peptidases in the endocrine function of adipocyte. Recent studies have detected changes in aminopeptidase activities of neutral aminopeptidase and dipeptidyl peptidase IV (DPPIV) in the plasma and in the hypothalamus and hippocampus of rats with obesity induced by monosodium glutamate (MSG). The present thesis proposes (i) the existence of acid (APA), basic (APB), neutral insensitive (APM) and puromycin sensitive (PSA) aminopeptidases, methionyl aminopeptidase (MetAP) and dipeptidyl peptidase IV (DPPIV), besides the well-known cystyl (CAP) / leucine aminopeptidase (LAP) / IRAP) in plasma membrane (MF) and in high (HDM) and low (LDM) density microsomes of isolated adipocytes from retroperitoneal fat pad; (ii) that their catalytic activities, gene expression and subcellular trafficking were different among MSG-induced obese and healthy control rats (food deprived or not); (iii) and influenced by insulin, angiotensin II and IV, and vasopressin. The existence of all these adypocite aminopeptidases was demonstrated. APM has a highest Vmax and catalytic efficiency, while APA has a highest substrate affinity. The obese animals have increased mean diameter of adipocytes and lipocrit, characterizing hypertrophy, while the food deprived rats had an increased number of adipocytes and lipocrit, characterizing hyperplasia. For the first time, a profile of varied aminopeptidases activities distributed in different subcellular compartments of adipocyte is evidenced together with the demonstration of differences in the distribution pattern of these activities among the obese and healthy rats, food deprived or not. Among these novel aminopeptidases detected in adipocytes there is no one with the classical characteristic of IRAP. In general, changes on catalytic activities in these different situations show the involvement of these novel aminopeptidases in the endocrine regulation of energy balance (probably via hydrolytic action on angiotensin II and vasopressin) under modulation by angiotensin IV (APB, APM, DPPIV, LAP/IRAP, MetAP and PSA in healthy animals and APB in food deprived healthy animals), by angiotensin II (APB and PSA in obese) and by vasopressin (APB in food deprived obese animais); and under influence of by angiotensin II (CAP, DPPIV, LAP/IRAP) and angiotensin IV (LAP/IRAP) on their subcellular trafficking. Subcellular trafficking of the well-known CAP/IRAP was susceptible to insulin and vasopressin