Orientador: Celia Regina Nogueira / Resumo: Os hormônios tireoidianos (HT) são essenciais para a sobrevivência, estando envolvidos nos processos de desenvolvimento, crescimento e metabolismo. As ações dos HT são distintas para diferentes órgãos alvos, e podem ocorrer por meio de seus receptores TRα e TRβ, ou por vias alternativas, as quais podem envolver a integrina αvβ3, as proteínas quinases ativadas por mitógenos (MAPK) e a fosfatidil inositol 3 quinase (PI3K). O tecido adiposo (TA) representa um importante alvo dos HT; produzem várias substâncias biologicamente ativas com diferentes funções fisiológicas, denominadas adipocinas, entre elas a leptina e adiponectina. A leptina é considerada um sinal adipostático ao cérebro e está envolvida na regulação do balanço energético. Adiponectina está envolvida em importantes efeitos metabólicos, como estimulação da oxidação de ácidos graxos, redução da gliconeogênese e aumento da termogênese. Vários estudos têm procurado relacionar a síntese de leptina e adiponectina com os HT; entretanto, os resultados obtidos são controversos. O objetivo desse trabalho foi avaliar o envolvimento da via PI3K nos efeitos da triiodotironina (T3) sobre a expressão gênica de leptina, adiponectina e do TRα em cultura de adipócitos, 3T3-L1. Para isso utilizamos inibidor da via PI3K, LY294002 e inibidor da síntese proteica (ciclohexamida - CHX), para verificar se ação do T3 é direta ou indireta. Após a diferenciação das células 3T3-L1 elas foram incubadas por uma hora com T3 na presença ou ausênci... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The thyroid hormones (HT) are essential for survival, being involved in the processes of development, growth and metabolism. Process actions are distinct for different organs, and may occur either directly through its receptors TRα and TRβ, or indirectly through alternative pathways, which may involve integrin αvβ3, the mitogen-activated protein kinases (MAPK) or phosphatidyl inositol 3 kinase (PI3K). Adipose tissue (TA) is an important target of HT; it produces various biologically active substances with different physiological functions, called adipokines, including leptin and adiponectin. Leptin is considered an adipostatic signal to the brain and is involved in the regulation of energy balance. Adiponectin is involved in important metabolic effects, such as stimulating fatty acid oxidation, reducing gluconeogenesis and increasing thermogenesis. Several studies have sought to relate the leptin and adiponectin synthesis with HT, however the results are controversial. The present study aimed to examine the effects of triiodothyronine (T3), on the modulation of leptin, adiponectin and TRα expression and the involvement of the PI3K signaling pathway in adipocytes, 3T3-L1, cell culture. Will be used pathway inhibitors PI3K, LY294002, and protein synthesis inhibitors (cycloheximide - CHX), to examine whether directly or indirectly T3 action. After the differentiation of the cells 3T3-L1 will be incubated by one hour with T3 in the presence or absence of the inhibitors mentioned ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:07:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Introdução: O tecido adiposo armazena energia e secreta várias moléculas endócrino/parácrina como a angiotensina II (AII) e expressa receptores como de insulina e de AII (AT1 e AT2). Esses hormônios estão envolvidos em várias patologias tais como a obesidade, hipertensão, diabetes e aterosclerose. Objetivos: Caracterização morfológica da cultura primária de adipócitos humanos e da resposta ao estímulo dos hormônios AII e insulina. Métodos: Para caracterização morfológica fez-se a coloração com Oil red O, gotículas de lipídios, MitoTracker red, mitocôndrias e ERTracker, retículo endoplasmático. Determinaram-se também as fases do ciclo celular, tamanho e complexidade das populações das células cultivadas e dispersas através da citometria de fluxo. O cultivo das células foi realizado de acordo com Hauner et al. (1989). Para as medidas do Ca2+ intracelular foi utilizada a análise por microscopia de fluorescência de alta resolução. As células adiposas foram caracterizadas por imunocitoquímica utilizando-se anticorpos para insulina, AT1 da AII, receptor de insulina e lectina conjugados com um marcador fluorescente. Resultados: Por microscopia confocal verificou-se a presença de várias gotículas lipídicas, citoesqueleto, mitocôndrias, retículo endoplasmático e membrana celular preservados, e próprios dos pré adipócitos, Os pré-adipócitos apresentaram receptores e grânulos de insulina e o receptor AT1. Também se verificou por citometria de fluxo a amostra de células rescém-dispersas que pôde ser classificada como pré- adipócito. A avaliação temporal dos níveis de Ca2+ nas células de pré-adipócitos humanos estimuladas com a AII e insulina induzem respostas transientes no caso da AII o aumento imediato das [Ca2+]i seguido da diminuição desta resposta e no caso da insulina apresentou oscilações nas [Ca2+]i na presença deste agonista. Conclusões: Determinou-se a caracterização morfológica da cultura primária de adipócitos humanos como pré-adipócitos por:apresentarem morfologia semelhante a fibroblastos e inúmeras gotículas de lipídios; evidenciado a presença dos receptores de angiotensina II (AT1) e insulina (RI) por imunofluorescência. As células presentes na amostra do tecido adiposo apresentaram tamanho e complexidade de pré-adipócitos; Nos pré-adipócitos humanos cultivados verificou-se o aumento dos níveis intracelulares de Ca2+ que foi transiente para o estímulo com angiotensina II e oscilatório para a insulina. / Introduction: The adipose tissue stores energy and secretes several endocrine/paracrine molecules as the angiotensin II (AII) and expresses receptors as of insulin and of AII (AT1 and AT2). These hormones are involved in several pathologies such as the obesity, hypertension, diabetes and atherosclerosis. Objectives: Morphologic characterization of the primary culture of human adipocytes and of the answer to the incentive of the AII hormones and insulin. Methods: For morphologic characterization the coloration with Oil red O, lipids droplets, MitoTracker red, mitochondrias and ERTracker, endoplasmic reticulum was made. It also determined the phases of the cellular cycle, size and the populations complexity of the cultivated cells and disperse through the flow cytometry. The cells cultivation was accomplished in agreement with Hauner et al. (1989). For the Ca2+ intracellular measures the analysis by fluorescence microscope of high resolution was used. The adipose cells were characterized by immunocytochemistry using antibodies for insulin, AT1 of AII, insulin receptor and lectina conjugated with a fluorescent marker. Results: For confocal microscope was verified the presence of several lipidics droplets, cytoskeleton, mitochondrias, endoplasmic reticulum and cellular membrane preserved, characteristic on preadipocytes. The preadipocytes presented receptors and insulin granules and AT1 receptor It was also verified by flow cytometry the sample of newly-dispersed cells that could be classified as preadipocyte. The temporary evaluation of the Ca2+ levels in the human adipocytes cells which were stimulated with AII and insulin showed that AII induced transient answers, by the immediate increase of the [Ca2+]i followed by the decrease of this response. The insulin presented oscillations in the [Ca2+]i during the presence of this agonist. Conclusions: For confocal microscopy was determined the morphologic characterization of the primary culture of human adipocytes as preadipocytes and evidenced the presence of the receivers of angiotensina II (AT1) and insulin (RI) for imunofluorescência. The present cells in the sample of the fatty fabric presented size and preadipocytes complexity; In the cultivated human preadipocytes the increase of the levels intracelulares of Ca2+ was verified that was transient for the incentive with angiotensina II and oscillatory for the insulin. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

As tiazolidinodionas (TZDs) são sensibilizadores de insulina utilizados no tratamento do diabetes mellitus tipo 2. Contudo, apesar dos efeitos benéficos sobre a glicemia, importantes efeitos adversos incluindo perda óssea e aumento de adiposidade são relatados com o uso clínico das TZDs. Assim, é necessário o desenvolvimento de novos derivados de TZDs com potenciais efeitos benéficos sobre a hiperglicemia e menos efeitos adversos. Neste estudo, investigamos os efeitos de 5 novos derivados de TZDs (LYSO-7, GQ-89, GQ-150, GQ-177 e SF-3) sobre a diferenciação celular de pré-osteoblastos murinos MC3T3-E1, pré-adipócitos murinos 3T3-L1 e pré-adipócitos SGBS de linhagem humana. Seus potenciais efeitos sobre a utilização de glicose, a produção de adipocinas e mediadores pró-inflamatórios também foram avaliados, utilizando linhagens murinas e humanas de adipócitos, e macrófagos THP-1 de linhagem humana. O principal achado de nosso estudo foi que os novos derivados de TZDs estimulam a utilização celular de glicose, porém não alteram o processo de diferenciação celular de pré-osteoblastos e pré-adipócitos, quando comparados com a TZD clássica Rosiglitazona. Conforme esperado, o tratamento com Rosiglitazona na concentração de 5 μM inibiu a osteogênese de pré-osteoblastos murinos MC3T3-E1. No entanto, o tratamento com 2 novos derivados de TZDs (GQ-89 e GQ-177) na mesma concentração não afetou a diferenciação celular, sendo possível observar níveis de mineralização de matriz extracelular similares aos do grupo controle. Além disso, enquanto a GQ-89 estimulou a atividade da fosfatase alcalina, a GQ-177 não modulou sua atividade enzimática e induziu a expressão gênica de osteocalcina. Contudo, ambos inibiram a expressão de Runx2 e colágeno. Por sua vez, quando os efeitos foram avaliados sobre a diferenciação de adipócitos, foi possível observar que ao contrário do efeito pró-adipogênico constatado com a Rosiglitazona na concentração de 1 μM, as TZDs GQ-150, GQ-177, LYSO-7 e SF-3 foram incapazes de induzir o acúmulo lipídico em pré-adipócitos murinos e humanos. Além disso, a GQ-150 inibiu a expressão gênica de C/EBPα, assim como a expressão gênica e os níveis protéicos de CD36, enquanto que a SF-3 estimulou a expressão gênica de C/EBPα e de FABP4 e diminuiu a expressão gênica e os níveis protéicos de CD36, os quais não foram modificados pela LYSO-7 em pré-adipócitos murinos 3T3-L1. No entanto, em pré-adipócitos SGBS de linhagem humana, nenhum efeito sobre os marcadores de fenótipo adipogênico C/EBPα e FABP4 foi observado com os novos derivados de TZDs. Ademais, os novos derivados de TZDs não interferiram na via de sinalização de Wnt, não apresentaram qualquer efeito sobre a expressão de adipocinas (adiponectina, resistina e leptina) e mediadores pró-inflamatórios (IL-6, CCL2/MCP-1, TNF-α e JNK), bem como não ativaram o fator de transcrição PPARγ no ensaio de gene repórter. Por sua vez, a LYSO-7, GQ-150 e SF-3 aumentaram o consumo de glicose em presença de insulina em adipócitos 3T3-L1 e modificaram a atividade de enzimas mitocondriais em adipócitos SGBS e macrófagos THP-1. Entretanto, o efeito sensibilizador de insulina foi confirmado somente com a GQ-177 pelo aumento da captação de glicose e somente a LYSO-7 e a SF-3 foram capazes de inibir o consumo de oxigênio e modificar a taxa de glicólise em macrófagos, sugerindo que também poderiam alterar os níveis de ATP/ADP. Considerando que baixos níveis de ATP estimulam a via de sinalização de AMPK, essa via também foi investigada em nosso estudo. Entretanto, os resultados sobre a ativação de AMPK foram inconclusivos. Desse modo, nossos resultados apontam que os novos derivados de TZDs não atuam como ligantes de PPARγ, apresentam atividade sensibilizadora de insulina in vitro, e que exercem menores efeitos antiosteoblásticos e adipogênicos quando comparados com a Rosiglitazona. Mais estudos são necessários para elucidar os mecanismos responsáveis por esses efeitos, bem como para estabelecer se os novos derivados de TZDs são mais seguros in vivo, com relação ao risco de fraturas ósseas e ganho de massa adiposa. / Thiazolidinediones (TZDs) are insulin sensitizers used in the treatment of type 2 diabetes mellitus. However, despite the beneficial effects on blood glucose, significant adverse effects including bone loss and increased adiposity are reported with the clinical use of TZDs. Thus, it is necessary to develop new derivatives of TZDs with potential beneficial effects on hyperglycemia and fewer adverse effects. In this study, we investigated the effects of 5 new derivatives of TZDs (LYSO-7, GQ-89, GQ-150, GQ-177 e SF-3) on cellular differentiation in murine MC3T3-E1 preosteoblasts, murine 3T3-L1 preadipocytes, and SGBS preadipocytes from human lineage. Potential effects on glucose consumption, adipokines, and pro-inflammatory mediators were also assessed using murine and human strains of adipocytes, and macrophages from human THP-1 lineage. The main finding of this study was that new derivatives of TZDs stimulate glucose consumption, but do not change the cell differentiation process of preosteoblasts and preadipocytes compared to classical TZD Rosiglitazone. As expected, the treatmet with Rosiglitazone, at 5μM, inhibited the osteogenesis in murine MC3T3-E1 preosteoblasts. However, the treatment with 2 new derivatives of TZDs (GQ-89 and GQ-177) at the same concentration did not affect cell differentiation, and levels of mineralization of the extracellular matrix similar to the control group were observed. In addition, whereas the GQ-89 stimulated the activity of alkaline phosphatase, GQ-177 does not modulate its enzymatic activity and induced gene expression of osteocalcin. However, both of them inhibit the expression of Runx2 and collagen. In turn, when the effects were assessed on the adipocyte differentiation, unlike the proadipogenic effect observed with Rosiglitazone at a concentration of 1 μM, the new TZDs GQ-150, GQ-177, LYSO-7 and SF-3 were unable to induce lipid accumulation in human and murine preadipocytes. In addition, GQ-150 inhibited the gene expression of C/EBPα , as well as the gene expression and protein levels of CD36, whereas SF-3 stimulated the gene expression of C/EBPα and FABP4 and decreased gene expression and protein levels of CD36, which was not modified by LYSO-7 on murine 3T3- L1 preadipocytes. However, no effect on markers of adipogenic phenotype C/EBPα and FABP4 has been observed with the novel derivatives of TZDs in human SGBS preadipocytes. Furthermore, the new derivatives of TZDs do not interfere with the Wnt signaling pathway, showed no effect on the adipokines expression (adiponectin, resistin and leptin) and proinflammatory mediators (IL-6, CCL2 / MCP-1, TNF α and JNK) and did not activate the transcription factor PPARγ in the gene reporter assay. In turn, LYSO-7, GQ-150, and SF-3 increased glucose consumption in the presence of insulin in 3T3-L1 adipocytes and modified the activity of mitochondrial enzymes in SGBS adipocytes and THP-1 macrophages. However, the effect on insulin sensitization was confirmed only to GQ-177 that increased glucose uptake and just LYSO-7 and SF-3 were able to inhibit oxygen consumption and modify the rate of glycolysis in macrophages, suggesting that they could also alter the levels of ATP/ADP. Since low levels of ATP could stimulate AMPK pathway, this signaling pathway was also investigated in our study. However, the results on the AMPK activation were inconclusive. Thus, our results demonstrate that the new derivatives of TZDs do not act as PPARγ ligands, present insulin sensitizing activity in vitro, and display minor antiosteoblastic and adipogenic effects when compared to Rosiglitazone. More studies are needed to elucidate the exact mechanisms responsible for these effects, as well as to establish whether the safety of the new TZDs with respect to the risk of bone fractures and body mass gain using in vivo models.

Orientador: Ellen Cristini de Freitas / Banca: Julio Sergio Marchini / Banca: Adelino Sanchez Ramos da Silva / Resumo: Objetivo: O objetivo desse estudo foi de avaliar os efeitos da suplementação de taurine no tecido adipose em ratos obesos treinados. Métodos: Ratos machos Wistar foram alimentados com dieta controle e hipercalórica para induzir a obesidade, e divididos em 4 grupos: controle (CT, dieta controle, n =6); sedentário (SD, dieta hipercalórica, n=6); sedentátio taurina (SDTAU; dieta hipercalórica e suplementação de taurina; n=6); treinado (TR; dieta hipercalórica e exercício físico; n=6), treinado taurina (TRTAU; dieta hipercalórica, suplementação de taurina e exercício físico; n =6). Resultados: Foi observado um aumento significativo do peso dos animais dos grupos SD e SDTAU em comparação com grupos de TR e TRTAU. Observou-se que os grupos que foram suplementados com taurina (SDTAU e TRTAU) apresentaram um aumento significativo na concentração sérica de taurina. A área total do grupo de animais SDTAU foi 132% superior em relação ao grupo TRTAU (p <0,0073). Em relação à área de gordura foi observada diferença significativa no grupo SDTAU quando comparado com os grupos treinados associados ou não com a suplementação de taurina. O Os grupos SDTAU e SD apresentaram maior peso da gordura epididimal (p <0,0001), enquanto que o valor mais baixo foi observado no grupo TRTAU. Em relação ao tamanho dos adipócitos grupos houve diferença estatisticamente significativa entre eles. Conclusão: Com base nos resultados apresentados, pode concluir-se que oito semanas de suplementação com taurina associado com exercício foi capaz de reduzir a gordura visceral e diminuir o peso da gordura epididimal. No entanto, a suplementação de taurina com e sem o exercício não causaram mudanças no tamanho do adipócito. / Abstract: Pupose: The objective of this study was to evaluate the effects of taurine supplementation in adipose tissue of obese trained mice. Methods: Male Wistar mice were fed with control or hypercaloric diet to induce obesity, and divided into 4 groups: control (CT, control diet, n =6); sedentary (SD, high calorie diet, n= 6); taurine sedentary (SDTAU, high calorie diet with taurine supplementation, n=6); trained (TR, high calorie diet and physical exercise, n=6), taurine trained (TRTAU, high calorie diet with taurine supplementation and physical exercise, n=6). Results: A significant increase in the weight of animals in SD and SDTAU groups compared to groups TR and TRTAU. It is observed that the groups that were supplemented with taurine (SDTAU and TRTAU) showed a significant increase in the blood taurine concentration. The total area of the animals SDTAU group was 132 % higher compared to TRTAU group (p< 0.0073). Regarding fat area was observed significant difference in SDTAU group when compared with to the trained groups associated or not with taurine supplementation. SDTAU and the SD group showed greater weight of epididymal fat (p< 0.0001), while the lowest value was observed in TRTAU group. Regarding the size of adipocytes groups there was significant statistically difference between them. Conclusion: Based on the results presented, it can be concluded that eight weeks of supplementation with taurine associated with exercise was able to reduce visceral fat and decrease the weight of epididymal fat. However, taurine supplementation with and without exercise have not caused changes in the size of the adipocyte. / Mestre

Submitted by MIRIANE DE OLIVEIRA null (miriane.deoliveira@yahoo.com.br) on 2016-03-14T13:42:50Z No. of bitstreams: 1 Tese Miriane de Oliveira 2016 II.pdf: 8269819 bytes, checksum: 06d6147cbc170e832f61a251756885a2 (MD5) / Approved for entry into archive by Sandra Manzano de Almeida (smanzano@marilia.unesp.br) on 2016-03-14T18:06:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 oliveira_m_dr_bot.pdf: 8269819 bytes, checksum: 06d6147cbc170e832f61a251756885a2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-14T18:06:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 oliveira_m_dr_bot.pdf: 8269819 bytes, checksum: 06d6147cbc170e832f61a251756885a2 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os hormônios tireoidianos (HT) são essenciais para a sobrevivência, estando envolvidos nos processos de desenvolvimento, crescimento e metabolismo. As ações dos HT são distintas para diferentes órgãos alvos, e podem ocorrer por meio de seus receptores TRα e TRβ, ou por vias alternativas, as quais podem envolver a integrina αvβ3, as proteínas quinases ativadas por mitógenos (MAPK) e a fosfatidil inositol 3 quinase (PI3K). O tecido adiposo (TA) representa um importante alvo dos HT; produzem várias substâncias biologicamente ativas com diferentes funções fisiológicas, denominadas adipocinas, entre elas a leptina e adiponectina. A leptina é considerada um sinal adipostático ao cérebro e está envolvida na regulação do balanço energético. Adiponectina está envolvida em importantes efeitos metabólicos, como estimulação da oxidação de ácidos graxos, redução da gliconeogênese e aumento da termogênese. Vários estudos têm procurado relacionar a síntese de leptina e adiponectina com os HT; entretanto, os resultados obtidos são controversos. O objetivo desse trabalho foi avaliar o envolvimento da via PI3K nos efeitos da triiodotironina (T3) sobre a expressão gênica de leptina, adiponectina e do TRα em cultura de adipócitos, 3T3-L1. Para isso utilizamos inibidor da via PI3K, LY294002 e inibidor da síntese proteica (ciclohexamida - CHX), para verificar se ação do T3 é direta ou indireta. Após a diferenciação das células 3T3-L1 elas foram incubadas por uma hora com T3 na presença ou ausência dos inibidores citados acima. Posteriormente ao período de tratamento foi realizada a análise de expressão gênica de mRNA (leptina, adiponectina e TRα) por RT- PCR e de proteina (leptina) pela técnica de Western Blot. Os resultados para leptina, assim como para TRα, demonstraram a ativação da via de sinalização PI3K para ação do T3 na expressão gênica desses genes, sendo que essa ação pode ser indireta ou direta, dependendo da dose de hormônio administrada. Em relação a adiponectina, a dose suprafisiológica de T3 (sem a ativação da via PI3K) ou desativação da via PI3K eleva os níveis dessa adipocina, e constatamos que a ação do T3, nessa dose, sobre os níveis de mRNA de adiponectina é indireta em adipócitos, 3T3-L1. Em resumo, durante uma hora de tratamento, diferentes doses de T3 aumentam os níveis de expressão das adipocinas, leptina e adiponectina, e do TRα em cultura celular de adipócitos, 3T3-L1, e a via de sinalização PI3K se faz importante para a ação do T3. / The thyroid hormones (HT) are essential for survival, being involved in the processes of development, growth and metabolism. Process actions are distinct for different organs, and may occur either directly through its receptors TRα and TRβ, or indirectly through alternative pathways, which may involve integrin αvβ3, the mitogen-activated protein kinases (MAPK) or phosphatidyl inositol 3 kinase (PI3K). Adipose tissue (TA) is an important target of HT; it produces various biologically active substances with different physiological functions, called adipokines, including leptin and adiponectin. Leptin is considered an adipostatic signal to the brain and is involved in the regulation of energy balance. Adiponectin is involved in important metabolic effects, such as stimulating fatty acid oxidation, reducing gluconeogenesis and increasing thermogenesis. Several studies have sought to relate the leptin and adiponectin synthesis with HT, however the results are controversial. The present study aimed to examine the effects of triiodothyronine (T3), on the modulation of leptin, adiponectin and TRα expression and the involvement of the PI3K signaling pathway in adipocytes, 3T3-L1, cell culture. Will be used pathway inhibitors PI3K, LY294002, and protein synthesis inhibitors (cycloheximide - CHX), to examine whether directly or indirectly T3 action. After the differentiation of the cells 3T3-L1 will be incubated by one hour with T3 in the presence or absence of the inhibitors mentioned above. After hormone treatment was measured the of leptin, adiponectin and TRα gene expression using RT-PCR in real time, it was also assessed the expression of leptin by Western blot. The results to leptin, as well as TRα, demonstrated that the activation of the PI3K signaling pathway has a role in TH-mediated direct or indirect gene expression, depending on the dose administered. Regarding adiponectin, T3 supraphysiological dose (without activation of the PI3K pathway) or deactivation of the PI3K pathway raises the levels of this adipokine in adipocytes, 3T3-L1. In summary, during an hour of treatment, different doses of T3 increase of adipokines levels of expression, leptin and adiponectin, and TRα in cell culture of adipocytes 3T3-L1 and PI3K signaling pathway becomes important for action T3.

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-17Bitstream added on 2014-08-13T18:00:21Z : No. of bitstreams: 1 000761591.pdf: 654448 bytes, checksum: 81dc07eca2bdfb73c1933089f1b5ed3c (MD5) / Estudos sobre o desenvolvimento dos adipócitos têm se tornado importante, devido ao fato da diferenciação deste tipo celular estar associado a diversas doenças crônicas e/ou degenerativas, tais como hipertensão, diabetes, doenças cardiovasculares e câncer, as quais possuem vínculo com a obesidade, devido, em parte, à expansão do tecido adiposo. A vitamina D tem demonstrado relação com a obesidade e, portanto, estudar suas bases moleculares, vias metabólicas e interação com tecidos, como o tecido adiposo, é necessário para auxiliar futuramente as ações práticas e clínicas do controle das doenças que acometem grande parte da população. Assim, o presente estudo objetiva estudar essas interações in vitro utilizando pré adipócitos humanos SGBS para a avaliação da expressão dos genes VDR, GR e PPARγ. Para este estudo foram feitas três repetições biológicas independentes e separado por tempo de tratamento (4 horas, 12 horas, 24 horas, 4 dias, 8 dias e 12 dias) e pré-adipócitos as células do tempo 0 hora. Em todos os tempos avaliados as células foram divididas em dois grupos: controle (etanol) e tratado (1,25(OH)2D3). Realizou-se extração de RNA total com posterior análise de expressão gênica via RT-qPCR. Ao se comparar a expressão relativa dos genes alvo com o pré-adipócito não tratado (0h), para ambos os grupos e tempos, o gene GR apresentou diferença estatisticamente significativa (p<0,001) para o grupo tratado com vitamina D nos tempos 12 e 24h, 4, 8 e 12 dias, e para o grupo controle os tempos 12 e 24h, 4 e 8 dias. Encontrou-se diferença significativa para o gene PPARɣ no grupo tratado para os tempos 8 e 12 dias, resultado semelhante ao grupo controle, quando comparados com o préadipócito (0h). A expressão basal do gene VDR não apresentou diferença estatisticamente significativa quando comparado com o pré-adipócito. No entanto, no que tangue o fold change, o gene VDR foi o único a... / Studies on the development of adipocytes have become important due to the fact that differentiation of this cell type is associated with several chronic and or degenerative diseases such as hypertension, diabetes, cardiovascular disease and cancer, which have link with obesity due in part to the expansion of adipose tissue. Vitamin D has shown relationship with obesity and their molecular bases, pathways and interaction with tissues, such as adipose tissue, therewise studies are necessary to support future clinical practices and actions to control of diseases that affecs large populations. This research aims to study these interactions in vitro using SGBS human adipocytes to assess the expression of VDR, GR and PPARɣ genes. For this study, three independent biological replicates were made separate at treatment times (4 hours, 12 hours, 24 hours, 4 days , 8 days and 12 days) and pre- adipocyte cells from time 0 hour. At all times the cells were evaluated divided into two groups: control (ethanol) and treated (1,25(OH)2D3). Total RNA extraction with subsequent analysis of gene expression by RT-qPCR were performed. When comparing the relative expression of target genes with untreated pre-adipocyte (0h) for both groups and times, the GR gene showed a statistically significant difference ( p < 0.001 ) for the group treated with vitamin D in 12 hours, 24 hours, and, 4, 8 and 12 days for the control group and the times 12 and 24 hours, 4 and 8 days. There was significant difference for PPARɣ gene in the group treated at times 8 and 12 days, similar to the control group results, when compared with the pre-adipocyte (0h). The basal expression of the VDR gene showed no statistically significant difference when compared with the preadipocyte. However, for the fold change, the VDR gene was the only to show expression statistically different at time 0h having a negative expression of 2.87 (p <0.05) at time 4 days. The values of fold change found in...

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-03-28Bitstream added on 2014-08-13T18:00:05Z : No. of bitstreams: 1 000767273.pdf: 813036 bytes, checksum: 1f4cef23671bdff7ab7f46d510271cca (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Objetivo: O objetivo desse estudo foi de avaliar os efeitos da suplementação de taurine no tecido adipose em ratos obesos treinados. Métodos: Ratos machos Wistar foram alimentados com dieta controle e hipercalórica para induzir a obesidade, e divididos em 4 grupos: controle (CT, dieta controle, n =6); sedentário (SD, dieta hipercalórica, n=6); sedentátio taurina (SDTAU; dieta hipercalórica e suplementação de taurina; n=6); treinado (TR; dieta hipercalórica e exercício físico; n=6), treinado taurina (TRTAU; dieta hipercalórica, suplementação de taurina e exercício físico; n =6). Resultados: Foi observado um aumento significativo do peso dos animais dos grupos SD e SDTAU em comparação com grupos de TR e TRTAU. Observou-se que os grupos que foram suplementados com taurina (SDTAU e TRTAU) apresentaram um aumento significativo na concentração sérica de taurina. A área total do grupo de animais SDTAU foi 132% superior em relação ao grupo TRTAU (p <0,0073). Em relação à área de gordura foi observada diferença significativa no grupo SDTAU quando comparado com os grupos treinados associados ou não com a suplementação de taurina. O Os grupos SDTAU e SD apresentaram maior peso da gordura epididimal (p <0,0001), enquanto que o valor mais baixo foi observado no grupo TRTAU. Em relação ao tamanho dos adipócitos grupos houve diferença estatisticamente significativa entre eles. Conclusão: Com base nos resultados apresentados, pode concluir-se que oito semanas de suplementação com taurina associado com exercício foi capaz de reduzir a gordura visceral e diminuir o peso da gordura epididimal. No entanto, a suplementação de taurina com e sem o exercício não causaram mudanças no tamanho do adipócito. / Pupose: The objective of this study was to evaluate the effects of taurine supplementation in adipose tissue of obese trained mice. Methods: Male Wistar mice were fed with control or hypercaloric diet to induce obesity, and divided into 4 groups: control (CT, control diet, n =6); sedentary (SD, high calorie diet, n= 6); taurine sedentary (SDTAU, high calorie diet with taurine supplementation, n=6); trained (TR, high calorie diet and physical exercise, n=6), taurine trained (TRTAU, high calorie diet with taurine supplementation and physical exercise, n=6). Results: A significant increase in the weight of animals in SD and SDTAU groups compared to groups TR and TRTAU. It is observed that the groups that were supplemented with taurine (SDTAU and TRTAU) showed a significant increase in the blood taurine concentration. The total area of the animals SDTAU group was 132 % higher compared to TRTAU group (p< 0.0073). Regarding fat area was observed significant difference in SDTAU group when compared with to the trained groups associated or not with taurine supplementation. SDTAU and the SD group showed greater weight of epididymal fat (p< 0.0001), while the lowest value was observed in TRTAU group. Regarding the size of adipocytes groups there was significant statistically difference between them. Conclusion: Based on the results presented, it can be concluded that eight weeks of supplementation with taurine associated with exercise was able to reduce visceral fat and decrease the weight of epididymal fat. However, taurine supplementation with and without exercise have not caused changes in the size of the adipocyte.

Orientador: Lúcia Regina Ribeiro / Coorientador: Mário Sérgio Mantovani / Banca: Maria Inês Pardini / Banca: Daniele Sartori / Resumo: Estudos sobre o desenvolvimento dos adipócitos têm se tornado importante, devido ao fato da diferenciação deste tipo celular estar associado a diversas doenças crônicas e/ou degenerativas, tais como hipertensão, diabetes, doenças cardiovasculares e câncer, as quais possuem vínculo com a obesidade, devido, em parte, à expansão do tecido adiposo. A vitamina D tem demonstrado relação com a obesidade e, portanto, estudar suas bases moleculares, vias metabólicas e interação com tecidos, como o tecido adiposo, é necessário para auxiliar futuramente as ações práticas e clínicas do controle das doenças que acometem grande parte da população. Assim, o presente estudo objetiva estudar essas interações in vitro utilizando pré adipócitos humanos SGBS para a avaliação da expressão dos genes VDR, GR e PPARγ. Para este estudo foram feitas três repetições biológicas independentes e separado por tempo de tratamento (4 horas, 12 horas, 24 horas, 4 dias, 8 dias e 12 dias) e pré-adipócitos as células do tempo 0 hora. Em todos os tempos avaliados as células foram divididas em dois grupos: controle (etanol) e tratado (1,25(OH)2D3). Realizou-se extração de RNA total com posterior análise de expressão gênica via RT-qPCR. Ao se comparar a expressão relativa dos genes alvo com o pré-adipócito não tratado (0h), para ambos os grupos e tempos, o gene GR apresentou diferença estatisticamente significativa (p<0,001) para o grupo tratado com vitamina D nos tempos 12 e 24h, 4, 8 e 12 dias, e para o grupo controle os tempos 12 e 24h, 4 e 8 dias. Encontrou-se diferença significativa para o gene PPARɣ no grupo tratado para os tempos 8 e 12 dias, resultado semelhante ao grupo controle, quando comparados com o préadipócito (0h). A expressão basal do gene VDR não apresentou diferença estatisticamente significativa quando comparado com o pré-adipócito. No entanto, no que tangue o fold change, o gene VDR foi o único a... / Abstract: Studies on the development of adipocytes have become important due to the fact that differentiation of this cell type is associated with several chronic and or degenerative diseases such as hypertension, diabetes, cardiovascular disease and cancer, which have link with obesity due in part to the expansion of adipose tissue. Vitamin D has shown relationship with obesity and their molecular bases, pathways and interaction with tissues, such as adipose tissue, therewise studies are necessary to support future clinical practices and actions to control of diseases that affecs large populations. This research aims to study these interactions in vitro using SGBS human adipocytes to assess the expression of VDR, GR and PPARɣ genes. For this study, three independent biological replicates were made separate at treatment times (4 hours, 12 hours, 24 hours, 4 days , 8 days and 12 days) and pre- adipocyte cells from time 0 hour. At all times the cells were evaluated divided into two groups: control (ethanol) and treated (1,25(OH)2D3). Total RNA extraction with subsequent analysis of gene expression by RT-qPCR were performed. When comparing the relative expression of target genes with untreated pre-adipocyte (0h) for both groups and times, the GR gene showed a statistically significant difference ( p < 0.001 ) for the group treated with vitamin D in 12 hours, 24 hours, and, 4, 8 and 12 days for the control group and the times 12 and 24 hours, 4 and 8 days. There was significant difference for PPARɣ gene in the group treated at times 8 and 12 days, similar to the control group results, when compared with the pre-adipocyte (0h). The basal expression of the VDR gene showed no statistically significant difference when compared with the preadipocyte. However, for the fold change, the VDR gene was the only to show expression statistically different at time 0h having a negative expression of 2.87 (p <0.05) at time 4 days. The values of fold change found in... / Mestre

Orientador: Celio Kenji Miyasaka / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-12T23:28:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fonseca_CarenFernandaNavarroda_M.pdf: 642682 bytes, checksum: 5ba563cf4536604afdecde132b47d3fe (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A Fosfatidilcolina (PC) exerce vários efeitos no organismo humano. Este fosfolipídeo é encontrado em abundância nas membranas celulares e, juntamente com a fosfatidiletanolamina, somam mais de 75% do total de fosfolipídeos presentes nestas. A PC vem sendo utilizada em clínicas dermatológicas, de estética e emagrecimento, pois, parece ser eficaz para eliminar gordura localizada, em especial no abdome, quadril, joelhos, pescoço e pálpebras inferiores. Este trabalho teve por objetivo, estudar os efeitos da PC solubilizada em diferentes compostos (deoxicolato de sódio, etanol, detergente Tween® 80 e albumina) sobre os adipócitos epididimais isolados de ratos machos da linhagem Wistar. Atualmente, não há estudos científicos conclusivos liberando o seu uso farmacológico e, portanto, há a necessidade de mais pesquisas que definam seus mecanismos de ação. Para atingirmos o objetivo proposto, utilizou-se o método de isolamento e contagem dos adipócitos e também a determinação do glicerol no meio de incubação. Sendo assim, o tratamento que obteve maior quantidade de glicerol produzido foi o Tween® 80 e Tween® 80 + PC no tempo de incubação de 15 minutos e o DS + PC no tempo de incubação de 30 minutos / Abstract: The phosphatidylcholine (PC) has severa effects on the human body. This phospholipid is found in abundance in cell membranes and, together with phophatidylethanolamine, up over 75% of total phospholipids present in these. The PC has been used in clinical dermatology, weight loss of aesthetics and therefore appears to be effective for removing localized fat, especially in the abdomen, hips, knees, neck and lower eyelids. This work was aimed at, to study the effects of PC solubilized in different compounds (sodium deoxycholate, ethanol, Tween ® 80 detergent and albumin) on adipocytes isolated epididymis of male rats of Wistar strain. Currently, there is no conclusive scientific studies drug releasing its use and therefore there is a need for more research to define its mechanisms of action. To achieve the proposed objective, we used the method of isolation and counting of adipocytes and the determination of glycerol in the middle of incubation. Thus, the treatment they received higher amount of glycerol produced was the Tween ® 80 and Tween ® 80 + PC in the incubation period of 15 minutes and DS + PC in the incubation time of 30 minutes / Mestrado / Nutrição Experimental e Aplicada à Tecnologia de Alimentos / Mestre em Alimentos e Nutrição

Orientador: Dora Maria Grassi-Kassisse / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-13T16:45:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Francesconi_ElainePatriciaMaltezSouza_D.pdf: 3201819 bytes, checksum: 12b57dbd9c491f94ccbc38e657b254fe (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: O adipócito é a unidade funcional do tecido adiposo branco e o principal reservatório de energia, tendo um papel chave na investigação fisiológica dos mecanismos controladores da estocagem e mobilização de lipídeos e hoje sabe-se ser um importante sítio produtor de lactato. A obesidade e o diabetes tipo II estão associados, no homem, com um aumento na concentração de lactato sanguíneo e é mediado pelo adrenoceptor subtipo a1. Iniciamos este trabalho avaliando a relação das concentrações plasmáticas de glicose, insulina e lactato em indivíduos normais e indivíduos obesos mórbidos antes e durante a realização do clamp euglicêmico-hiperinsulinêmico. Apenas a insulinemia no jejum estava aumentada significativamente no grupo de homens obesos o que sugere fortemente que existe uma menor sensibilidade à insulina neste grupo experimental. O índice de HOMA neste estudo apontou para uma maior resistência insulinica no grupo de homens obesos, que foi significativamente maior principalmente ao final do clamp, sendo inclusive maior para homens obesos em relação a mulheres obesas. Verificamos uma inter-relação importante com a hiperinsulinemia, pois á medida que a insulina aumenta ao longo do clamp, a concentração de lactato decresce significativamente. As concentrações plasmáticas de lactato apresentaram-se bastante elevadas em indivíduos com IMC entre 40-55 Kg/m2, diminuindo â medida que o IMC estava próximo de 70 kg/m2. No tempo 180 de clamp do grupo obeso, a concentração de lactato caiu a ponto de alcançar numericamente os valores basais do seu respectivo grupo controle. Os adipócitos isolados de obesos mórbidos produziram mais glicerol em todas as concentrações utilizadas de noradrenalina em relação ao grupo de eutróficos, inclusive no basal. Quando foi adicionado o prazosin (mM), houve um aumento na produção de glicerol. Em nossos ensaios observamos que o tecido adiposo isolado de obesos apresenta uma produção basal de lactato significativamente elevada. Quando o estímulo utilizado foi a noradrenalina, a produção foi significativamente maior em adipócitos isolados de obesos quando comparados a eutróficos. A quantidade de lactato produzida pela noradrenalina em adipócitos isolados de obesos foi semelhante àquela produzida pela cirazolína, agonista seletivo de adrenoceptores a1. Nenhum antagonista utilizado, prazosin, WB4I04 ou BMY7378, produziu qualquer efeito sobre a produção de lactato, seja em eutróficos ou obesos. Quando a produção de lactato em adipócitos isolados foi induzida pela insulina, não houve diferença significativa na quantidade de lactato produzida por adipócitos de obesos quando comparados com eutróficos, exceto na concentração de 500 mU/ml. A estimulação máxima induzida pela insulina em eutróficos foi de 3 vezes e foi maior que aquela observada em adipócitos isolados de obesos que foi de 2,4 vezes. Estes resultados permitem inferir que não é a insulina o principal secretagogo de lactato responsável pela produção aumentada em adipócitos isolados de obesos. Por outro lado, quando co-íncubamos noradrenalina com crescentes concentrações de insulina pudemos observar uma produção de lactato significativamente mais elevada, em todos os pontos, proveniente de adipócitos isolados de obesos. Podemos concluir que os adipócitos de indivíduos obesos produzem lactato diferencial mente em relação ao gênero, e este lactato pode estar sendo usado em outras vias metabólicas auxiliando no desencadeamento das patologias relacionadas à obesidade / Abstract: The adipocyte is the functional unit of fat white and the main reservoir of energy, taking a key role in research physiological mechanisms of control of storage and mobilization of lipids and today it is known to be an important site producer of lactate. Obesity and type II diabetes are associated, in humans, with an increase lactate concentration in the blood. We started this work lactate and is mediated by adrenoceptor subtype evaluating the relationship plasma concentrations of glucose, insulin and lactate in normal and morbid obese subjects before and during the clamp euglicemico-hiperinsulinemico. Only in fasting insulin was increased significantly in the group of obese men which strongly suggests that there is less sensitivity to insulin in this group experimental. The HOMA index of this study pointed to a larger group of insulin resistance in obese men, which was significantly higher mainly the end of the clamp, and even higher for obese men regarding obesity women. We find an important inter-relationship with hyperinsulinemia, because that will measure the insulin increases over the clamp, the concentration of lactate decreases significantly. Plasma concentrations of lactate had to be quite high in individuals with BMI between 40-55 Kg/m2, decreasing as a BMI of 70 kg/m2 was next. At the time 180, clamp the obese group, the concentration of lactate fell about to reach numerically the baseline of their respective control group. The isolated adipocytes of obese morbid produced more glycerol concentrations used in all of norepinephrine in the group of eutrophic, including the basement. When the addition of prazosin (1 M) there was an increase in the production of glycerol. In our tests found m. that the fat isolated from obese presents a production base of lactate significantly high. When the stimulation was used to norepinephrine, the production was significantly higher in isolated adipocytes of obese compared to eutrophic. The amount of lactate produced by norepinephrine in isolated adipocytes of obese was similar to that produced by cirazolina, of selective I. None antagonist used, prazosin, WB4104 or BMY7378,a adrenoceptor agonist produced no effect on the production of lactate, in eutrophic or obese. When the production of lactate in isolated adipocytes was induced by insulin, there was no significant difference in the amount of lactate produced by adipocytes of mU / ml. The obese compared with eutrophic, except to the concentration of 500 maximum stimulation induced by insulin in eutrophic was 3 times and was higher than that observed in isolated adipocytes of obese which was 2.4 times. These results indicate that it is not the main insulin secretagogo of lactate responsible for increased production in isolated adipocytes of obese. On the other hand, when co-incubated with noradrenaline the concentrations of insulin have seen a lactate production significantly higher, at all points, from isolated adipocytes of obese. We can conclude that adipocytes of obese individuals produce lactate differentially in relation to gender, and this lactate may be being used in other metabolic pathways helping to trigger the diseases related to obesity / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular