Resumo: A diferenciação celular é acompanhada por mudanças no perfil da expressão gênica. Mecanismos epigenéticos envolvendo estrutura da cromatina e arquitetura nuclear regulam estas alterações. A diferenciação adipogênica de células-tronco mesenquimais isoladas da medula óssea (CTMs-MO) ou de tecido adiposo (CTMs-TA) foi utilizada como modelo para investigar estes mecanismos. A análise da lâmina nuclear, dos nucléolos e das histonas modificadas me/2me/3meH3K4, 3meH3K9, 3meH3K27, H2AZ e acH3 permitiu estabelecer um modelo inicial das alterações ocorridas. Os efeitos dos mecanismos epigenéticos na diferenciação adipogênica foram investigados utilizando-se os agentes modificadores de cromatina tricostatina A (TSA), um inibidor de histona desacetilases, e 5-aza-2'-deoxicitidina (5azadC), um agente desmetilante. Culturas subconfluentes de CTMs foram tratadas com 5, 50 ou 500 nM de TSA ou com 1, 10 ou 100 nM de 5azadC durante dois dias antes de se iniciar a indução da adipogênese. Após 14 dias, a diferenciação foi quantificada pela absorbância do corante Oil Red O e a expressão dos genes adipogênicos PPARG e FABP4, e do gene anti-adipogênico GATA2 foi avaliada por qPCR. O tratamento com 500 nM de TSA significativamente aumentou a expressão de acH3, embora a proliferação celular tenha diminuído nesta concentração. A TSA significativamente reduziu a adipogênese, exceto o tratamento com 5 nM em CTMs-MO. No entanto, houve associação parcial entre diferenciação e expressão gênica. O tratamento com 5azadC significativamente diminuiu a diferenciação adipogênica em todas as condições avaliadas e isto resultou na regulação negativa de PPARG e FABP4, e positiva de GATA2. Embora o conteúdo de DNA não tenha mudado nos tratamentos com 5azadC, a proliferação celular foi reduzida 24 horas após o término dos tratamentos. A resposta aos tratamentos foi mais acentuada em CTMs-TA do que em CTMs-MO, sugerindo a existência de distintas memórias epigenéticas conforme a origem celular. Como a assinatura epigenética afeta a diferenciação, ao se conhecer qual a linhagem-alvo preferencial daquela fonte de CTM, é possível direcionar seu uso nas terapias celulares. Assim, cada tipo celular teria uma aplicação específica visando melhorar a eficiência do processo de diferenciação.

Orientador: Maria Beatriz Duarte Gavião / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-26T13:36:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_PollianeMoraisde_D.pdf: 2230005 bytes, checksum: a03e416e657adde52ad89b778975278c (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Este estudo investigou a função mastigatória, o paladar, a presença de compostos sulfurados voláteis (CSV) e a bioquímica salivar em sujeitos saudáveis (18-33 anos), e a indução de adipócitos em glândula salivar e suas implicações em modelo animal. Três estudos foram conduzidos, apresentados na forma de capítulos. Capítulo 1: Investigou a performance e habilidade mastigatória, paladar e a possível relação com gênero, índice de massa corporal (IMC), circunferência de cintura (CC) e fluxo salivar estimulado (Stim) e não estimulado (Unst). Foram avaliados 171 indivíduos, (125? 46?). A performance mastigatória foi determinada pela capacidade de fragmentação do Optocal plus e habilidade mastigatória com o uso da escala visual analógica (EVA). O paladar foi verificado pela percepção dos quatro sabores primários. A estatística descritiva, teste de normalidade, correlação, comparação e modelos de regressão foram utilizados, sendo as variáveis dependentes a função mastigatória e o paladar e as independentes: gênero, idade, variáveis antropométricas e fluxo salivar. Na análise de regressão linear múltipla, as variáveis independentes não predisseram o modelo para performance mastigatória. Com a habilidade mastigatória (HM) o modelo explicou 14% da variabilidade e para o paladar 5%. Os resultados indicaram que a performance não foi relacionada com parâmetros antropométricos e salivares em indivíduos jovens saudáveis. A habilidade foi relacionada com IMC, CC e gênero. O paladar foi fracamente relacionado ao IMC e CC. Capítulo 2: Verificou a bioquímica salivar e presença de CSV e a possível interferência do IMC, fluxo e pH stim/unst. Para a verificação dos CSV foram avaliados 71 voluntários (57? 14 ?), utilizando o aparelho Oral chromeTM. Foram determinadas as concentrações de proteína total, cálcio, fosfato, amilase e ureia em 171 voluntários (125? 46 ?), em saliva stim/unst. A bioquímica salivar foi semelhante em relação à antropometria. No entanto, as respectivas concentrações diferiram significativamente entre saliva Stim/Unst, com exceção da amilase. Os indivíduos apresentaram quantidades semelhantes de CSV em relação ao IMC. Em indivíduos com valores críticos de metilmercaptana (CH3SH) observou-se correlação significativa (r=0.51) com o pH (unst). Capítulo 3: Investigou o eventual aparecimento de adipócitos nas glândulas salivares em modelo animal (camundongos). A adipogênese foi realizada com dieta rica em gordura, e ainda via receptor de proliferadores de peroxissoma gamma (PPAR gama) com rosiglitazona. Western blot, histoquímica e imunoistoquímica foram utilizadas. Análise de microarray foi realizada para verificar o efeito da dieta. Anticorpos: fosfo-4E BP1 e tirosina hidroxilase marcaram a atividade de mTOR e nervos, respectivamente. O microarray mostrou um número significativo de alterações genéticas. Em relação à dieta observou-se baixa ou nenhuma expressão de fosfo 4E-BP1 e aumento na atividade de tirosina hidroxilase. Em camundongos tratados com rosiglitazona verificou-se ativação de mTOR e tirosina hidroxilase. Conclusão: Pelos resultados dos três capítulos concluiu-se que em indivíduos jovens e saudáveis a função mastigatória e paladar não foram influenciados pelo padrão salivar e foram fracamente relacionados ao antropométrico. A bioquímica salivar e presença de CSV foi semelhante em relação à antropometria. Observaram-se mudanças relacionadas à atividade do sistema nervoso em glândula salivar de camundongos devido à dieta rica em gordura ou ativação de PPAR gamma / Abstract: This study investigated masticatory function, the presence of volatile sulfur compounds (VSC) and salivary biochemistry in healthy subjects (18-33 years), and also the induction of adipocytes in the salivary gland and its implication in an animal model. Three studies were conducted, presented as chapters. Chapter 1: Investigated the performance and chewing ability, taste, and the possible relationship to gender, body mass index (BMI), waist circumference (WC) and stimulated salivary flow (Stim) and unstimulated (Unst). 171 individuals (125? 46?) were evaluated. Masticatory performance was determined by the ability of fragmentation Optocal plus and chewing ability with the use of visual analogue scale (VAS). Taste was verified by the perception of the four primary flavors. Descriptive statistics, normality tests, correlation, comparison and multiple linear regression models were used. In multiple linear regression performance was not predict by the independent variables in the model. With chewing ability the model explained 14% of variability and 5% for the taste. The results indicated that masticatory performance was not related to anthropometric parameters and saliva in healthy young subjects. The ability was related to BMI, WC and Gender. Taste was weakly related to BMI and WC. Chapter 2: Verify the salivary biochemistry and presence of VSC and the possible influence of BMI, flow and pH (Stim)/(Unst). For the verification of VSC 71 volunteers (14 57? ?) were assessed using the Oral chromeTM device. The concentrations of: total protein, calcium, phosphate, urea and amylase were investigated in 171 volunteers (46 125? ?) in saliva (Stim) / (Unst). Biochemical salivary were similar in respect of anthropometry. However, the concentrations differed significantly between saliva (Stim)/(Unst), with the exception of amylase. The sample presented similar amounts of CSV in relation to BMI. In individuals with critical values of methylmercaptan (CH3SH) we observed a significant correlation (r = 0:51) with pH Unst. The results indicate that in healthy young subjects salivary biochemistry and VSC exhibit similar behaviour in relation to BMI. The (CH3SH) when greater than the normal limit concentration was correlated to pH Unst. Chapter 3: We investigated the possible appearance of adipocytes in the salivary glands in animal model (mice). Adipogenesis was performed with high-fat diet, and also via peroxisome proliferator-gamma (PPAR gamma) with rosiglitazone . Western blot, histochemistry and immunohistochemistry were used. Microarray analysis was performed to assess the effect of diet. Antibodies: phospho-4E-BP1 and tyrosine hydroxylase marked mTOR and nerves activity, respectively. The microarray showed a large number of genetic changes. Regarding diet was observed low or no expression of phospho-4E-BP1 and an increase in tyrosine hydroxylase activity. In mice treated with rosiglitazone there was activation of mTOR and tyrosine hydroxylase. The results suggest that there are changes in salivary gland innervation before stimuli for adipogenesis. Conclusion: We concluded that in healthy young individuals masticatory function was not influenced by the salivary pattern and was weakly related to anthropometric. Salivary Biochemical and presence of CSV was similar in relation to anthropometry. There are alterations in the activity of the nervous system in the salivary glands of mice due high fat diet or activation of PPAR gamma / Doutorado / Anatomia / Doutora em Biologia Buco-Dental

Orientador: Marcelo Lima Ribeiro / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-19T09:55:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arcari_DemetriusPaiva_D.pdf: 3728122 bytes, checksum: 75f31faf86eb21f9689a8b8e60ee7e1f (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A obesidade e considerada um problema de saúde publica, principalmente pelo fato desta estar associada com diversas patologias como a resistência a insulina (RI). Atualmente, diversas estratégias são utilizadas visando a redução de peso corporal, dentre estas se destaca o uso de produtos de origem vegetal, incluindo a Ilex paraguariensis, cujo nome comum e erva-mate. Muitos trabalhos mostram que os compostos detectados na erva-mate possuem diferentes funções biológicas, tais como: ação antioxidante, antiinflamatória, imunomodulatoria, anticancerígena, modificação do metabolismo de colesterol, entre outros. Muito embora diversos estudos destaquem as funções biológicas da erva-mate, pouco se sabe sobre sua capacidade de modulação na expressão de genes relacionados a obesidade, e seu efeito na via de sinalização da insulina. Deste modo o presente estudo teve como objetivo avaliar a ação do extrato aquoso de erva-mate tostado no processo de adipogênese e sua ação nos mecanismos de sinalização da insulina. Os dados do presente trabalho mostram que a erva-mate na concentração de 1,0g/kg em animais submetidos a dieta hiperlipídica aumentou a expressão de diferentes genes responsáveis pela ativação da AKT, reduziu a translocação nuclear de NF-kB e FOXO1, reduziu a expressão PEPCK e G6Pase ligados ao processo de gliconeogênese no tecido hepático. Os efeitos da erva-mate na sinalização da insulina foram ratificados, por analise protéica de IRS-1, IRS-2 e AKT, redução na resistência a insulina observada pelo teste do KITT e redução da glicemia basal. O presente trabalho demonstra ainda em cultura celular de 3T3-L1 que a erva-mate e alguns de seus principais compostos bioativos (ácido clorogênico, rutina e quercetina), possuem ação mais expressiva na etapa de diferenciação do adipócito e atuam modulando distintos genes relacionados ao processo de diferenciação do adipócitos. O trabalho ainda sugere que a erva-mate possa atuar in vitro e ex vivo de maneira mais expressiva na redução da adipogênese através da via WNT, visto pelo aumento da expressão de diferentes genes relacionados com essa via. O resultado final da ativação desta via e a repressão significativa de PPARy2 e C/EBP'alfa', principais fatores de transcrição necessários para que ocorra a etapa final do processo de diferenciação dos adipócitos, contribuindo assim para elucidar a redução do peso corpóreo e da gordura epididimal observada nos animais submetidos a dieta hiperlipídica tratados com erva-mate durante 60 dias, que por sua vez reduz a produção de citocinas, em especial o TNF-'alfa', contribuindo parcialmente para a melhora do quadro de sinalização a insulina observado apos intervenção / Abstract: Obesity is a problem of public health, mainly because it is associated with many conditions such especially insulin resistance (IR). Currently, several strategies have been used in order to reduce the total body weight, among these there is a growing evidence supporting the use of products of plant origin, including the Ilex paraguariensis, whose common name is yerba mate. Various studies have shown that the compounds found in yerba mate has several biological functions, such as antioxidant, anti-inflammatory, immunomodulatory, anticancer, modification of cholesterol metabolism and others. Although several studies highlight the biological functions of yerba mate, there are lack of evidence providing their ability to modulate expression of genes related to obesity and its effect on the insulin signaling pathway. Thus, the aim of this study was to evaluate the effects of yerba mate in gene expression that regulate adipogenesis and insulin signaling pathway. Our data showed yerba mate (1,0 g/kg) in animals subjected to high fat diet, increased different gene expression responsible for the activation of the AKT, reduction of FOXO1 and NF-kB nuclear translocation, reduction gene expression of PEPCK and G6Pase involved in gluconeogenesis process in liver. The effects of yerba mate in insulin signaling was confirmed by IRS-1, IRS-2 and AKT protein analysis, reduction in insulin test tolerance by KITT and reduction in glucose. Our data also showed in 3T3-L1 cell culture that yerba mate and some of its major bioactive compounds (chlorogenic acid, rutin and quercetin), act in an early stage of adipocyte differentiation and modulate different gene expression that regulate adipogenesis. Additionally, yerba mate can act in vitro and ex vivo in WNT pathway, seen by the increased expression of different genes in this pathway resulting in a significant repression of C/EBP'alfa' and PPARy2, the most important transcription factors essencial for the occurrence of adipocyte differentiation. This findings collaborate to elucidate the reduction of body weight and epididymal fat observed in animals subjected to high fat diet treated with yerba mate for 60 days, which reduces the production of cytokines, particularly TNF-'alfa', contributing partially to the improvement in insulin signaling observed after intervention / Doutorado / Genetica Animal e Evolução / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Ilex paraguariensis A. St.-Hil., conhecida como erva-mate, é uma árvore nativa da América do Sul onde as folhas e pequenos ramos secos são usados para preparar o chimarrão. Possui uma composição química complexa, da qual pode-se vislumbrar muitas aplicações potenciais, que poderiam vir a ampliar o emprego da erva-mate e, conseqüentemente, do mercado para esta matériaprima. As folhas de I. paraguariensis contem xantinas, flavonóides, derivados do ácido cafeoilquínico e uma quantidade significativa de saponinas triterpenóides (cerca de 10%). Neste estudo foram investigados quimicamente extratos hidroetanólicos de I. paraguariensis, de suas frações, e de algumas substâncias de referência, como também os efeitos desses na atividade antioxidante, no acúmulo de gordura (TG) e na atividade lipolítica em cultura de células 3T3-L1. Neste sentido obtivemos extratos brutos hidroetanólicos de folhas verdes (EBV) e secas (EBS) maceradas, os quais foram fracionados originando 8 frações. Ácido ursólico, ácido clorogênico e rutina foram quantificados por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Também foi realizada a determinação de fenóis por catequinas e pela precipitação por proteínas. A fração fenólicos da folha verde apresentou atividade antioxidante superior às substâncias de referência rutina e ácido clorogênico, enquanto que o ácido ascórbico apresentou a melhor atividade. O ensaio com brometo de 3- (4,5-dimetil)difenil tetrazólio (MTT) demonstrou que os extratos e padrões testados entre 50 μg/mL e 1000 μg/mL não foram citotóxicos para as células 3T3-L1. Dentre as frações testadas para a atividade na adipogênese, a fração resíduo aquoso da folha verde (RAV) apresentou maior inibição (24%) no teor de TG na concentração de 100 μg/mL. Dentre as substâncias de referência testadas, os melhores resultados foram obtidos com o ácido caféico nas concentrações de 300 μg/mL e da rutina na concentração de 100 μg/mL. Em relação à ativividade na lipólise, a fração RAV apresentou o melhor resultado nas concentrações de 50 e 75 μg/mL. Entre as substâncias de referência, o ácido gálico apresentou resultado significativo em relação à atividade antilipolítica nas concentrações de 500 e 1000 μg/mL. Para elucidar em qual estágio da adipogênese e da lipólise os extratos, frações e padrões atuam, são necessários a investigação da avaliação da ação desses extratos e frações através de análise de expressão de genes ligados a adipogênese e a atividade lipolítica. / Ilex paraguariensis A. St.-Hil., known as maté, is a native tree from South América which leaves and twigs are used to prepare the traditional beverage “chimarrão”. It has a complex chemical composition that might have many potential applications in order to increase the use of maté and then, in consequence, increase the market demand of this raw material. Leaves from I. paraguariensis have xanthines, flavonoids, cafeoylquinic acid derivatives and triterpenoid saponins (ca. 10%). Herein, it was investigated, both chemically and biologically, the hydroethanolic extracts of leaves from I. paraguariensis, its fractions, and some reference substances, as the antioxidant activity, the adipogenesis (TG) and lipolytic activities in 3T3-L1 cell culture. So, it was prepared hydroethanolic extracts of fresh (EBV) and dried leaves (EBS) by maceration, which submitted to further fractionation furnished 8 fractions. Ursolic acid, chlorogenic acid and rutin were determined in these samples by liquid chromatography (HPLC) Also, phenolic constituents were determined using catequines and protein precipitation methods. The phenolic fraction from fresh leaves presented better antioxidant activity than the tested reference substances (rutin and chlorogenic acid), while ascorbic acid presented the best activity. The MTT assay showed that the tested extracts and fractions among 50 μg/mL and 1000 μg/mL did not present citotoxicity to 3T3-L1 cells. Among the tested fractions to adipogenesis, the aqueous residue fraction from fresh leaves (RAV) presented best inibition (24%) of TG at 100 μg/mL. Among tested reference substances, cafeic acid at 300 μg/mL, and rutin at 100 μg/mL presented the best results. In relation to the lipolytic activity, the RAV fraction presented best results at 50 e 75 μg/mL and, among the tested reference substances, galic acid presented best results at 500 e 1000 μg/mL. In order to understand the mechanim of action of these fractions and reference substances at the adipogenesis and lipolysis further studies will be performed specially those about the influence on the gene expression.

Ilex paraguariensis A. St.-Hil., conhecida como erva-mate, é uma árvore nativa da América do Sul onde as folhas e pequenos ramos secos são usados para preparar o chimarrão. Possui uma composição química complexa, da qual pode-se vislumbrar muitas aplicações potenciais, que poderiam vir a ampliar o emprego da erva-mate e, conseqüentemente, do mercado para esta matériaprima. As folhas de I. paraguariensis contem xantinas, flavonóides, derivados do ácido cafeoilquínico e uma quantidade significativa de saponinas triterpenóides (cerca de 10%). Neste estudo foram investigados quimicamente extratos hidroetanólicos de I. paraguariensis, de suas frações, e de algumas substâncias de referência, como também os efeitos desses na atividade antioxidante, no acúmulo de gordura (TG) e na atividade lipolítica em cultura de células 3T3-L1. Neste sentido obtivemos extratos brutos hidroetanólicos de folhas verdes (EBV) e secas (EBS) maceradas, os quais foram fracionados originando 8 frações. Ácido ursólico, ácido clorogênico e rutina foram quantificados por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Também foi realizada a determinação de fenóis por catequinas e pela precipitação por proteínas. A fração fenólicos da folha verde apresentou atividade antioxidante superior às substâncias de referência rutina e ácido clorogênico, enquanto que o ácido ascórbico apresentou a melhor atividade. O ensaio com brometo de 3- (4,5-dimetil)difenil tetrazólio (MTT) demonstrou que os extratos e padrões testados entre 50 μg/mL e 1000 μg/mL não foram citotóxicos para as células 3T3-L1. Dentre as frações testadas para a atividade na adipogênese, a fração resíduo aquoso da folha verde (RAV) apresentou maior inibição (24%) no teor de TG na concentração de 100 μg/mL. Dentre as substâncias de referência testadas, os melhores resultados foram obtidos com o ácido caféico nas concentrações de 300 μg/mL e da rutina na concentração de 100 μg/mL. Em relação à ativividade na lipólise, a fração RAV apresentou o melhor resultado nas concentrações de 50 e 75 μg/mL. Entre as substâncias de referência, o ácido gálico apresentou resultado significativo em relação à atividade antilipolítica nas concentrações de 500 e 1000 μg/mL. Para elucidar em qual estágio da adipogênese e da lipólise os extratos, frações e padrões atuam, são necessários a investigação da avaliação da ação desses extratos e frações através de análise de expressão de genes ligados a adipogênese e a atividade lipolítica. / Ilex paraguariensis A. St.-Hil., known as maté, is a native tree from South América which leaves and twigs are used to prepare the traditional beverage “chimarrão”. It has a complex chemical composition that might have many potential applications in order to increase the use of maté and then, in consequence, increase the market demand of this raw material. Leaves from I. paraguariensis have xanthines, flavonoids, cafeoylquinic acid derivatives and triterpenoid saponins (ca. 10%). Herein, it was investigated, both chemically and biologically, the hydroethanolic extracts of leaves from I. paraguariensis, its fractions, and some reference substances, as the antioxidant activity, the adipogenesis (TG) and lipolytic activities in 3T3-L1 cell culture. So, it was prepared hydroethanolic extracts of fresh (EBV) and dried leaves (EBS) by maceration, which submitted to further fractionation furnished 8 fractions. Ursolic acid, chlorogenic acid and rutin were determined in these samples by liquid chromatography (HPLC) Also, phenolic constituents were determined using catequines and protein precipitation methods. The phenolic fraction from fresh leaves presented better antioxidant activity than the tested reference substances (rutin and chlorogenic acid), while ascorbic acid presented the best activity. The MTT assay showed that the tested extracts and fractions among 50 μg/mL and 1000 μg/mL did not present citotoxicity to 3T3-L1 cells. Among the tested fractions to adipogenesis, the aqueous residue fraction from fresh leaves (RAV) presented best inibition (24%) of TG at 100 μg/mL. Among tested reference substances, cafeic acid at 300 μg/mL, and rutin at 100 μg/mL presented the best results. In relation to the lipolytic activity, the RAV fraction presented best results at 50 e 75 μg/mL and, among the tested reference substances, galic acid presented best results at 500 e 1000 μg/mL. In order to understand the mechanim of action of these fractions and reference substances at the adipogenesis and lipolysis further studies will be performed specially those about the influence on the gene expression.

Ilex paraguariensis A. St.-Hil., conhecida como erva-mate, é uma árvore nativa da América do Sul onde as folhas e pequenos ramos secos são usados para preparar o chimarrão. Possui uma composição química complexa, da qual pode-se vislumbrar muitas aplicações potenciais, que poderiam vir a ampliar o emprego da erva-mate e, conseqüentemente, do mercado para esta matériaprima. As folhas de I. paraguariensis contem xantinas, flavonóides, derivados do ácido cafeoilquínico e uma quantidade significativa de saponinas triterpenóides (cerca de 10%). Neste estudo foram investigados quimicamente extratos hidroetanólicos de I. paraguariensis, de suas frações, e de algumas substâncias de referência, como também os efeitos desses na atividade antioxidante, no acúmulo de gordura (TG) e na atividade lipolítica em cultura de células 3T3-L1. Neste sentido obtivemos extratos brutos hidroetanólicos de folhas verdes (EBV) e secas (EBS) maceradas, os quais foram fracionados originando 8 frações. Ácido ursólico, ácido clorogênico e rutina foram quantificados por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Também foi realizada a determinação de fenóis por catequinas e pela precipitação por proteínas. A fração fenólicos da folha verde apresentou atividade antioxidante superior às substâncias de referência rutina e ácido clorogênico, enquanto que o ácido ascórbico apresentou a melhor atividade. O ensaio com brometo de 3- (4,5-dimetil)difenil tetrazólio (MTT) demonstrou que os extratos e padrões testados entre 50 μg/mL e 1000 μg/mL não foram citotóxicos para as células 3T3-L1. Dentre as frações testadas para a atividade na adipogênese, a fração resíduo aquoso da folha verde (RAV) apresentou maior inibição (24%) no teor de TG na concentração de 100 μg/mL. Dentre as substâncias de referência testadas, os melhores resultados foram obtidos com o ácido caféico nas concentrações de 300 μg/mL e da rutina na concentração de 100 μg/mL. Em relação à ativividade na lipólise, a fração RAV apresentou o melhor resultado nas concentrações de 50 e 75 μg/mL. Entre as substâncias de referência, o ácido gálico apresentou resultado significativo em relação à atividade antilipolítica nas concentrações de 500 e 1000 μg/mL. Para elucidar em qual estágio da adipogênese e da lipólise os extratos, frações e padrões atuam, são necessários a investigação da avaliação da ação desses extratos e frações através de análise de expressão de genes ligados a adipogênese e a atividade lipolítica. / Ilex paraguariensis A. St.-Hil., known as maté, is a native tree from South América which leaves and twigs are used to prepare the traditional beverage “chimarrão”. It has a complex chemical composition that might have many potential applications in order to increase the use of maté and then, in consequence, increase the market demand of this raw material. Leaves from I. paraguariensis have xanthines, flavonoids, cafeoylquinic acid derivatives and triterpenoid saponins (ca. 10%). Herein, it was investigated, both chemically and biologically, the hydroethanolic extracts of leaves from I. paraguariensis, its fractions, and some reference substances, as the antioxidant activity, the adipogenesis (TG) and lipolytic activities in 3T3-L1 cell culture. So, it was prepared hydroethanolic extracts of fresh (EBV) and dried leaves (EBS) by maceration, which submitted to further fractionation furnished 8 fractions. Ursolic acid, chlorogenic acid and rutin were determined in these samples by liquid chromatography (HPLC) Also, phenolic constituents were determined using catequines and protein precipitation methods. The phenolic fraction from fresh leaves presented better antioxidant activity than the tested reference substances (rutin and chlorogenic acid), while ascorbic acid presented the best activity. The MTT assay showed that the tested extracts and fractions among 50 μg/mL and 1000 μg/mL did not present citotoxicity to 3T3-L1 cells. Among the tested fractions to adipogenesis, the aqueous residue fraction from fresh leaves (RAV) presented best inibition (24%) of TG at 100 μg/mL. Among tested reference substances, cafeic acid at 300 μg/mL, and rutin at 100 μg/mL presented the best results. In relation to the lipolytic activity, the RAV fraction presented best results at 50 e 75 μg/mL and, among the tested reference substances, galic acid presented best results at 500 e 1000 μg/mL. In order to understand the mechanim of action of these fractions and reference substances at the adipogenesis and lipolysis further studies will be performed specially those about the influence on the gene expression.

Orientador: Mario Jose Abdalla Saad / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-19T05:14:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_AngelicaCostaAranhaCamacho_M.pdf: 3142690 bytes, checksum: 8065b10475eb506444c228857930fc87 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A obesidade é hoje considerada um problema de saúde pública. Essa condição é caracterizada pelo aumento do peso corporal, mais especificamente do tecido adiposo branco. A adipogênese (diferenciação do pré-adipócito em adipócito) é um fenômeno complexo e não muito bem caracterizado. Recentes estudos mostraram que os préadipócitos estão localizadas nas paredes dos vasos que irrigam o tecido adiposo. Estas células estão presentes exclusivamente neste tecido e expressam alguns marcadores, dentre eles o PDGFRß. O PDGFRß é um receptor tirosina quinase cujo papel na migração, proliferação e diferenciação de diversos tipos celulares tem sido extensivamente estudado. O AG1296 (6,7- dimetoxi-2-fenil-quinoxalina) é um potente inibidor do receptor PDGF, pertencente à classe da quinoxalinas. Deste modo, levando-se em consideração o papel do receptor PDGF no crescimento e proliferação celulares e o fato de que as células PDGFR_ positivas provenientes do tecido adiposo possuem alto potencial adipogênico, neste estudo investigamos o efeito do AG1296 na adipogênese de camundongos submetidos à dieta hiperlipídica e à dieta padrão. Nós também investigamos se essa inibição afetaria a sensibilidade à insulina desses grupos estudados. Para tanto, camundongos Swiss machos com seis semanas de vida foram divididos em quatro grupos: o grupo Controle que recebeu dieta padrão, o grupo C+AG1296 que recebeu dieta padrão e tratamento com AG1296, o grupo DH que recebeu dieta hiperlipídica somente e o grupo DH+AG1296 que recebeu dieta hiperlipídica e tratamento com AG1296. Peso corpóreo e ingestão alimentar foram medidos diariamente durante o tratamento (7 ou 15 dias). Através de Western blot, foram quantificadas as principais proteínas pró-adipogênicas (SREBP-1c, C/EBP? e PPAR?) e a fosforilação das principais proteínas da via da insulina (IR, IRS1 e AKT). Nossos resultados indicaram que nos animais controle, após 15 dias de tratamento com AG1296, houve uma redução nas três frações de tecido adiposo, associada a uma redução em algumas das proteínas adipogênicas, além de uma melhora na sinalização insulínica em fígado e músculo e uma redução na glicemia de jejum. Além disso, nos animais submetidos à dieta hiperlipídica, após 7 dias de tratamento com AG1296, foi possível observar uma redução nas proteínas adipogênicas e uma redução na fração epididimal do tecido adiposo. Houve também uma melhora na sinalização insulínica e na tolerância à glicose. Com isso, podemos sugerir que a inibição do PDGFRß pode ter um papel importante na adipogênese e na sinalização insulínica e pode ser um alvo potencial para prevenção da obesidade e resistência à insulina / Abstract: Obesity can be defined as a disease in which body fat is excessively accumulated. Adipogenesis is a complex and not completely known phenomenon. Recent studies showed that adipocyte progenitor cells are exclusively found in adipose tissue and express some markers like PDGFRß (Platelet-derived growth factor ß). AG1296 (6,7-dimethoxy-2-phenyl-quinoxaline) is a potent and selective inhibitor of PDGF receptor kinase. In this context, the main objective of this work was to investigate if the inhibition of PDGF receptor through AG1296 would be able to affect white adipose tissue generation in high-fat-diet-fed and standard-chow-fed mice. We also investigated if this inhibition would have an effect on the insulin sensitivity in these studied groups. For this purpose, six-week-old male Swiss mice were divided into four groups and assigned to receive the following diet and/or treatment: the control group (C) received standard rodent diet, the second group (C + AG1296) received standard rodent diet plus AG1296 (50 mg/Kg/day by gavage), the third group (HFD) received high fat diet (55% calories from fat, 29% calories from carbohydrate and 16% from protein) and the fourth group (HFD+AG1296) received high fat diet plus AG1296. Body weight and food intake were measured during the treatment (7 and 15 days). After that, tissues (epididymal, retroperitoneal and mesenteric adipose tissue, liver and muscle) were extracted and processed. Through Western blot analysis, we were able to quantify the main proteins related to adipogenesis (SREBP-1c, C/EBP? e PPAR?) and the phosphorylation of the main proteins from insulin pathway (IR, IRS1 and Akt). Our results indicated that on control mice, after 15 days of treatment with AG1296, there was a reduction on adipose fat pad, associated with reduction in some adipogenic proteins, an increase in insulin signaling in liver and muscle and a reduction in fasting plasma glucose. Futhermore, on mice fed a high fat diet, after 7 days of treatment with AG1296, it was possible to observe a reduction on adipogenesis proteins and a reduction in epididymal fat pad. Also, there was an improvement in insulin signaling pathway and in glucose tolerance. In conclusion, our results suggest that PDGFRß inhibition might have an important role in adipogenesis and in insulin signaling and could be a potential target for preventing obesity and insulin resistance / Mestrado / Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento / Mestre em Ciências