Submitted by Ana Carla Almeida (ana.almeida@ucsal.br) on 2016-09-28T19:25:13Z No. of bitstreams: 1 Sinara Tese Doutorado VF sem Ata.pdf: 3106761 bytes, checksum: 1c3387f2c26b1a4e4bf1480f28d7b4b4 (MD5) / Approved for entry into archive by Rosemary Magalhães (rosemary.magalhaes@ucsal.br) on 2016-10-06T18:21:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Sinara Tese Doutorado VF sem Ata.pdf: 3106761 bytes, checksum: 1c3387f2c26b1a4e4bf1480f28d7b4b4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-06T18:21:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sinara Tese Doutorado VF sem Ata.pdf: 3106761 bytes, checksum: 1c3387f2c26b1a4e4bf1480f28d7b4b4 (MD5) Previous issue date: 2015-11-20 / As experiências com o parentesco por afinidade vivenciadas pelo casal nas famílias de origem podem esclarecer a forma como as relações com o parentesco por afinidade se apresentam na vida conjugal atual? O presente estudo analisa as repercussões advindas das experiências com o parentesco por afinidade que o casal vivenciou nas famílias de origem na construção dessas relações na vida conjugal atual, com enfoque sobre os sogros. Consiste num estudo qualitativo, com delineamento de estudo de casos múltiplos, a partir de uma abordagem fundamentada na epistemologia sistêmica. Foram realizadas entrevistas semi-estruturadas com três casais, de forma individual, em uma amostra de conveniência, com os seguintes critérios de inclusão: estar entre 25 e 45 anos de idade; ser de classe média; ser heterossexual; apresentar grau de instrução médio ou superior; encontrar-se em primeira união conjugal; ter os dois representantes parentais vivos e possuir filhos. Os dados foram analisados inicialmente isolados, caso a caso, a partir do que emergiu das falas, depois agrupados, a partir de aspectos incomuns obtidos através do método comparativo constante. Os resultados obtidos remetem a aspectos recorrentes como: questão da moradia e revisão de fronteiras; cônjuges como mediadores entre o parceiro e seu parentesco por afinidade; sogros como avós; fortalecimento do “eu absoluto”. Estes resultados confirmam a transmissão intergeracional dos padrões interacionais do casamento dos pais pelos casais investigados, aparecendo a tendência a uma repetição por gênero, por pelo menos um dos cônjuges. Revelam-se, nesses processos de interações, a existência de um jogo de interesse das famílias de origem, no papel de avós, como forma de manter o novo casal ligado a eles, que merece ser cuidadosamente estudado. / Can experiments with relationship by marriage experienced by the couple in their original families clarify how relations with kinship affinity are presented in the current married life? This study analyzes the resulting repercussions of experiences with kinship by marriage the couple lived in their original families in building these relationships in the current married life, focusing on the parents-in-laws. It is a qualitative study, with multiple cases study design from a reasoned approach to systemic epistemology. Semi-structured interviews with three couples were held individually in a convenience sample, based on the following inclusion criteria: be between 25 and 45 years old; be middle class; be heterosexual; present degree of high school or university education; be first conjugal union; have both parents alive, and have children. Data were initially analyzed individually, case by case, based on what emerged from the talks, then grouped from unusual aspects obtained through the constant comparative method. The results refer to recurring issues such as: issue of housing and border revision; spouses as mediators between the partner and their relationship by marriage; in-laws as grandparents; strengthening the "absolute I". These results confirm the intergenerational transmission of wedding interaction patterns of parents for couples investigated, showing a tendency to repetition by gender, by at least one of the spouses. These interactions processes reveal the existence of a set of interests from the original families, in the role of grandparents as a way to keep the new couple attached to them, which deserves to be carefully studied.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-05-08T18:42:12Z No. of bitstreams: 1 CinthiaMeirellyDeAraujoElpidio_DISSERT.pdf: 4353427 bytes, checksum: 62f438ac4ae7fb4d67e844f0f38cd0a1 (MD5) / Approved for entry into archive by Monica Paiva (monicalpaiva@hotmail.com) on 2017-05-08T18:46:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 CinthiaMeirellyDeAraujoElpidio_DISSERT.pdf: 4353427 bytes, checksum: 62f438ac4ae7fb4d67e844f0f38cd0a1 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-08T18:46:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CinthiaMeirellyDeAraujoElpidio_DISSERT.pdf: 4353427 bytes, checksum: 62f438ac4ae7fb4d67e844f0f38cd0a1 (MD5) Previous issue date: 2016-02-03 / O objetivo do presente trabalho ? sintetizar e caracterizar um adsorvente pelicular adequado ao processo de Adsor??o em Leito Expandido (ALE). O composto sintetizado possui um n?cleo composto de esferas de zirc?nia estabilizadas com ?tria e recobertas por uma matriz insol?vel de agarose. Nos ensaios para obten??o das part?culas revestidas foi utilizado um sistema agitado com temperatura controlada. A prote?na modelo (Albumina de Soro Bovino - BSA) foi utilizada como adsorbato durante os ensaios. Uma triagem dos corantes reativos (ligantes) Azul Brilhante de Remazol RN, Remazol Azul Turquesa G 133% e Remazol Amarelo Ouro RGB Concentrado foi feita variando-se o pH para encontrar o ligante com maior capacidade de adsor??o e a melhor condi??o para operar o processo. O corante Remazol Amarelo Ouro RGB Concentrado foi selecionado, visto que apresentou um bom desempenho (26,02 mg/g adsorvente) e se mostrou mais est?vel em pH 4,5 a 5,0. A an?lise morfol?gica das part?culas revestidas foi realizada por microscopia ?ptica e mostrou que a espessura do adsorvente pelicular ? aproximadamente 5 ?m. A distribui??o de tamanho realizada em Granul?metro Cilas mostrou que a maioria das part?culas adsorventes possui di?metro entre 112 - 300 ?m, cujo di?metro m?dio foi 197,54 ?m e 202,25 ?m, para a esfera sem e com cobertura, respectivamente. A densidade ligante mostrou que a quantidade de BSA adsorvida ? maior quando a rela??o corante/adsorvente (?g/mg) ? maior. O estudo cin?tico da part?cula imobilizada mostrou o decaimento padr?o. A isoterma de adsor??o mostrou que pela equa??o de Langmuir a capacidade de adsor??o m?xima (qm) da BSA com a part?cula revestida imobilizada com o corante reativo Remazol Amarelo Ouro RGB Concentrado ? igual a 102,328 mg/mL de adsorvente. Palavras-chave: adsor??o em leito expandido, cromatografia por afinidade, adsorvente pelicular. / O objetivo do presente trabalho ? sintetizar e caracterizar um adsorvente pelicular adequado ao processo de Adsor??o em Leito Expandido (ALE). O composto sintetizado possui um n?cleo composto de esferas de zirc?nia estabilizadas com ?tria e recobertas por uma matriz insol?vel de agarose. Nos ensaios para obten??o das part?culas revestidas foi utilizado um sistema agitado com temperatura controlada. A prote?na modelo (Albumina de Soro Bovino - BSA) foi utilizada como adsorbato durante os ensaios. Uma triagem dos corantes reativos (ligantes) Azul Brilhante de Remazol RN, Remazol Azul Turquesa G 133% e Remazol Amarelo Ouro RGB Concentrado foi feita variando-se o pH para encontrar o ligante com maior capacidade de adsor??o e a melhor condi??o para operar o processo. O corante Remazol Amarelo Ouro RGB Concentrado foi selecionado, visto que apresentou um bom desempenho (26,02 mg/g adsorvente) e se mostrou mais est?vel em pH 4,5 a 5,0. A an?lise morfol?gica das part?culas revestidas foi realizada por microscopia ?ptica e mostrou que a espessura do adsorvente pelicular ? aproximadamente 5 ?m. A distribui??o de tamanho realizada em Granul?metro Cilas mostrou que a maioria das part?culas adsorventes possui di?metro entre 112 - 300 ?m, cujo di?metro m?dio foi 197,54 ?m e 202,25 ?m, para a esfera sem e com cobertura, respectivamente. A densidade ligante mostrou que a quantidade de BSA adsorvida ? maior quando a rela??o corante/adsorvente (?g/mg) ? maior. O estudo cin?tico da part?cula imobilizada mostrou o decaimento padr?o. A isoterma de adsor??o mostrou que pela equa??o de Langmuir a capacidade de adsor??o m?xima (qm) da BSA com a part?cula revestida imobilizada com o corante reativo Remazol Amarelo Ouro RGB Concentrado ? igual a 102,328 mg/mL de adsorvente. Palavras-chave: adsor??o em leito expandido, cromatografia por afinidade, adsorvente pelicular.

Orientador: Sonia Maria Alves Bueno / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-08T05:04:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ribeiro_MarianaBorsoi_D.pdf: 5252506 bytes, checksum: b9eb50542c7fa4e04b6b4c83526b4ccc (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: As imunoglobulinas do isotipo G (IgG) são usadas enOlmemente em aplicações terapêuticas e são requeridas, usualmente, com um elevado grau de pureza. V álias técnicas cromatográficas vêm sendo investigadas para a purificação de IgG a partir do plasma humano. Neste trabalho, investigou-se o efeito dos agentes quelantes ácido iminodiácetico (IDA), ácido aspártico carboxi-metilado (CM-Asp) e TIis-2(aminoetil)amina (TREN) na purificação de IgG a partir do plasma humano utilizando a técnica de cromatografia de afinidade com os íons metálicos imobilizados em membranas de fibras ocas. Para tanto, foram realizados experimentos de adsorção em diferentes sistemas tamponantes em membranas de álcool de poli(etileno) vinílico (PEV A) finamente c011adas e em módulos de filtração derivatizados com IDA, TREN e CM-Asp, utilizando-se os íons metálicos níquel e cobre. A seletividade dos adsorventes foi verificada por eletroforese SDS-P AGE e análise nefelométrica. As melhores condições de purificação foram encontradas utilizando-se as membranas PEV A-CM-Asp-Ni(II) em módulo de filtração, em presença do tampão TrisHCI 25 mM pH 7,0 e eluição por acréscimo da concentração de TIis, sendo obtida IgG com aproximadamente 90% de pureza. As membranas de PEV A-CM-Asp-Ni(II) em módulos de filtraçã? apresentaram melhor seletividade, segundo eletroforese SDS-P AGE, e capacidade dinâmica de adsorção maior comparadas às membranas finamente cortadas (capacidade média de adsorção: 53,0 e 7,7 mg de IgG pOT g seca de membrana, respectivamente). O modelo de LangmUir ajustou-se às isotermas de adsorção, à temperatura ambiente, mostrando alta capacidade de adsorção para os sistemas PEV A-IDA-Ni(II) e PEV A-CM Asp-Ni(II) (204,6 e 302,3 mg/g seca de membrana, respectivamente) e constantes de dissociação característica de sistemas de média afinidade (6, I e 10,1 x 10-6 M, respectivamente). A análise dos parâmetros termodinâmicos encontrados para o sistema modelo PEV A-IDA-Ni(II)-IgG, indicaram a complexidade das interações, indicando a existência de interações hidrofóbicas, eletrostáticas e de ligações de coordenação. Neste trabalho, conseguiu-se purificar IgG a partir do plasma humano em! uma única etapa, utilizando-se a técnica da cromatografia em membranas de afinidade, demonstrando a alta potencialidade da utilização do método desenvolvido em processos industriais / Abstract: The use of immunoglobulin G (lgG) in therapeutic applications has growing vastly and it is used in the treatment of a growing number of indications. Several chromatographic techniques have been investigated for IgG purification. In this work, we investigated the effect of the chelators iminodiacetic acid (IDA), carboxymethylaspartate acid (CM-Asp) and Tris-2(aminoethyl)amine (TREN) for IgG purification, from human plasma using Immobilized Metal-ion Affinity Chromatography (IMAC) technique using hollow fibers membranes as support to the chromatographic experiments. For that, adsorption experiments were done, using different buffers systems, on filtration module and on finely cut poly(ethylene) vinyl alcohol (PEV A) membranes containing chelators IDA, TREN and CM-Asp with the metallic ions nickel and copper. The adsorbent selectivity was verified through electrophoresis SDS-PAGE and nefelometric analysis. Best purification conditions were found with PEV A-CM-Asp-Ni(ll) filtration module in the presence of 25 mM Tris HCI pH 7.0 and elution by increasing Tris concentration. In this case, it was possible to obtain IgG with approximately 90% of purity. According to electrophoresis SDS-P AGE and nefelometric analysis, PEV A-CM-Asp-Ni(ll) filtration modules showed better selectivity and superior adsorption dynamic capacity for IgG than those obtained by finely cut membranes (medium adsorption capacity: 53.0 and 7.7 mg of IgG /g of dry membrane, respectively). Lagmüir model adjusted to adsorption isotherms at room temperature (250 C), showed high adsorption capacity for PEV A-IDA-Ni(ll) and PEV A-CM-Asp-Ni(ll) systems (204.6 and 302.3 mg/g dry of membrane, respectively) and showed dissociation constants characteristic of medium affinity systems (6.1 and 10.1 x 10-6 M, respectively). The thermodynamic parameters analysis obtained for PEV A-IDA-Ni(ll)-lgG system indicated the complexity of the interactions, and the existence of hydrophobic and electrostatics interaction besides the coordination bound. In this work, we could purify IgG from human plasma in a single stage, using the affinity chromatographic membranes technique, allowing in this way, the treatment of great volumes per unit of time, showing the high potentiality of this method in industrial processes / Doutorado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Doutor em Engenharia Química

Orientador: Sonia Maria Alves Bueno / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química / Made available in DSpace on 2018-08-09T16:21:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_PaulaTimoteoda_D.pdf: 1311022 bytes, checksum: 1652a409f13e2bb4e1a18a9dcb28d2fa (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Raiva ou hidrofobia é uma infecção viral que atinge o sistema nervoso central, ocorrendo em animais e humanos. As proteínas principais encontradas no vírus da raiva que atuam ativando o sistema imune são a nucleoproteína N (NPV) e a glicoproteína G, uma proteína transmembrana que forma o envelope viral e induz a produção de anticorpos neutralizantes que protegem contra o ataque viral. Este trabalho visou a purificação da glicoproteína G do vírus da raiva com cauda de polihistidina (GPV) a partir do lisado e do sobrenadante da cultura de células de inseto Drosophila melanogaster Schneider 2 (S2AcGPV2), transfectadas com o vetor pAc 5.1/V5-His A contendo o gene da GPV, empregando cromatografia de afinidade por íons metálicos imobilizados (IMAC). Os aspectos abordados neste trabalho foram a derivatização do gel de agarose com o agente quelante ácido iminodiacético (agarose-IDA) e a avaliação da seletividade, capacidade e reprodutibilidade do gel de agarose-IDA-Ni2+ na adsorção da GPV em função de diferentes sistemas tamponantes e de diferentes estratégias de dessorção de GPV (abaixamento de pH ou aumento da concentração de agente competitivo). A seletividade em cada sistema tamponante foi determinada por eletroforese SDSPAGE das frações dos picos de proteína obtidos nas cromatografias e a quantificação de GPV presente nas frações cromatográficas foi realizada através de ensaios do tipo ELISA. A melhor condição utilizada para a purificação da glicoproteína G foi a alimentação de lisado de células em coluna contendo agarose-IDA-Ni2+ equilibrada com tampão fosfato de sódio 20 mM, cloreto de sódio 500 mM, imidazol 2 mM pH 7,0. A lavagem foi realizada com tampão fosfato de sódio 20 mM, cloreto de sódio 500 mM, imidazol 2 mM pH 6,0 e a eluição por aumento de concentração de imidazol para 200 e 500 mM. Os resultados demonstraram a potencialidade de utilização do método de IMAC para a purificação da glicoproteína G do vírus da raiva / Abstract: Rabies or hydrophobia is a viral infection that affects the central nervous system, occuring in animals and humans. The main proteins found in rabies virus that activates the immunological system are the N nucleoprotein (NPV) and the G glycoprotein, a transmembrane protein that forms the spikes of the virus and induces virus-neutralizing antibodies that protect against infection. This research aimed at the purification of the rabies virus glycoprotein containing a polyhistidine tag (GPV) from lisate and supernatant of Drosophila melanogaster Schneider 2 (S2AcGPV2) cells culture, transfected with the vector pAc 5.1/V5-His A containing the GPV gene, using immobilized metal íon affinity chromatography (IMAC). The aspects developed in this project were the agarose gel derivatization with the chelating agent iminodiacetic acid (IDA) and the evaluation of the agarose-IDA-Ni2+ gel seletivity, capacity and reproductibility at the GPV adsorption, regarding different buffer systems and different GPV's desorption strategies (lowering the pH of the buffer or increasing the concentration of a competitive agent in the buffer). The seletivity in each buffer system was determined by performing SDS-PAGE electrophoresis on the chromatographic samples with the larger concentration of proteins, and the GPV quantification in these samples was determined by ELISA assays. The best results of purification were found when lisate was fed into an agarose-IDA-Ni2+ column equilibrated with 20 mM sodium phosphate buffer containing 500 mM sodium chloride and 2 mM imidazole pH 7,0. The washing step was proceeded with 20 mM sodium phosphate buffer containing 500 mM sodium chloride and 2 mM imidazole pH 6,0 and the elution proceeded by raising the imidazole concentration at the wash buffer to 200 e 500 mM. The results demonstrated the potencial of using IMAC to purify rabies virus G glycoprotein / Doutorado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-11-19T12:25:23Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Gean Carlos Sousa Gonzaga - 2015.pdf: 2479646 bytes, checksum: d85220319554b1544933aa25ea2c672c (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-11-19T12:27:30Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Gean Carlos Sousa Gonzaga - 2015.pdf: 2479646 bytes, checksum: d85220319554b1544933aa25ea2c672c (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-19T12:27:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Gean Carlos Sousa Gonzaga - 2015.pdf: 2479646 bytes, checksum: d85220319554b1544933aa25ea2c672c (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-08-06 / This paper addresses the theorem of Napoleon on historical, conceptual perspectives, and focusing on demonstrations and applications properties as well. In the rst chapter, are discussed aspects of the history and Napoleon Bonaparte biography. In the second chapter are addressed notions of Plane Geometry, Linear Algebra, of Rigid Transformation of Complex Numbers and Related Transformations. In the third chapter, statements are presented, generalizations (especially the so-called Barlotti Theorem), properties and applications in exercises. / O presente trabalho aborda o teorema de Napoleão em perspectivas históricas e conceituais, enfocando demonstrações e propriedades. No primeiro capítulo, são abordados aspectos da biogra a de Napoleão Bonaparte. No segundo capítulo são abordadas no- ções de Geometria Plana, de Álgebra Linear, de Transformações Rígidas, de Números Complexos e Transformações A ns. No terceiro capítulo, são apresentadas demonstra ções, generalizações (em especial, o chamado Teorema de Barlotti), propriedades e aplicações em exercícios.

La présente recherche a pour but fondamental dinterpréter lactuel système juridique brésilien à partir de linclusion, dans le Code Civil de 2002, de lunion stable en tant que générateur de parenté par alliance entre lun des partenaires et les enfants enfants et adolescents de l\'autre. Elle vise également à soutenir la thèse de la nécessité d\'une nouvelle interprétation de la doctrine et des changements législatifs concernant l\'institut de lunion stable pour assurer les droits des enfants non communs à cette union, ainsi que la nécessité de prévoir une restriction à la constitution de lunion stable en cas de relation concubinaire. Pour atteindre lobjectif proposé et prenant appui sur la législation civile depuis le droit romain jusquà l\'heure actuelle, nous avons cherché à investiguer les principaux effets découlant de lunion stable et de la parenté par alliance et à examiner, dans la société contemporaine, les relations vécues par les familles formées par des couples en seconde union lorsque l\'un des parents a obtenu la garde des enfants à la suite de la séparation et qui plus tard est allé vivre en union stable avec un autre partenaire. Le choix de ce sujet répond à la nécessité d\'étudier quelques effets de ce fait, certains prévus par les législations en vigueur et d\'autres non; de même que de connaître et de comprendre la réalité sociale et certaines questions juridiques et sociales encore peu étudiées auxquelles sont confrontées certaines familles vivant dans une telle situation, du point de vue des enfants, par rapport à la protection intégrale de l\'enfant et de l\'adolescent, et celui des partenaires, afin de rendre plus effective l\'application de la loi. La procédure méthodologique employée a compris aussi bien la recherche bibliographique fondée sur le Droit brésilien et, en partie, sur le Droit étranger que la recherche sur le terrain menée auprès de cinq familles à faible revenu, composées de couples où l\'un des partenaires est en seconde union, domiciliées dans la ville de Paranaíba dans létat de Mato Grosso do Sul. En interprétant le système juridique actuel et en le mettant en relation avec les recherches, les principaux résultats ont indiqué que, par rapport à l\'union stable, l\'acceptation par la Loi Suprême réglementée postérieurement par les Lois ns. 8.971/1994 et 9.278/1996 et l\'inclusion de cet institut dans le Code Civil/2002 ont contribué à minimiser les discussions sur l\'illégalité et l\'immoralité qui pesait sur les familles constituées de cette façon, en assurant ainsi une plus grande sécurité aux relations personnelles et patrimoniales entre les partenaires; et, en ce qui concerne la parenté par alliance, il a été constaté que, sous réserve des restrictions légales ou des droits assurés au consanguin ou de toute autre origine, de la parente par alliance découlent des droits et des devoirs comme pour tous les autres types de parenté, puisque le partenaire aura les obligations de garde, d\'entretien et d\'éducation des enfants enfants et adolescents de l\'autre partenaire. / A presente pesquisa tem por objetivo fundamental interpretar o atual sistema jurídico a partir do fato de ter sido incluída, no Código Civil de 2002, a união estável como geradora do parentesco por afinidade entre um dos conviventes e os filhos crianças e adolescentes do outro, além de defender a tese da necessidade de nova interpretação doutrinária e da alteração legislativa do instituto da união estável para assegurar os direitos dos filhos não comuns da união estável, bem como da necessidade da previsão de uma restrição para a constituição de união estável nos casos de relação concubinária. Para alcançar o objetivo proposto, buscou-se, com fundamento na legislação civil desde o Direito Romano até a atualidade, investigar os principais efeitos decorrentes da união estável e do parentesco por afinidade e, assim, examinar, na sociedade contemporânea, as relações vivenciadas pelas famílias formadas por casais em segunda união, nas quais um dos pais, após a separação, obteve a guarda dos filhos e posteriormente passou a conviver com outro parceiro em união estável. A escolha do tema se deu em razão da necessidade de estudar alguns efeitos desse fato, uns previstos pelas legislações vigentes e outros não; de conhecer e compreender a realidade social e determinadas questões jurídicas e sociais pouco investigadas pelas quais perpassam as famílias que vivem nessa situação, sob a perspectiva dos filhos, em relação à proteção integral à criança e ao adolescente, e dos conviventes, a fim de tornar mais efetiva a aplicação da lei. O procedimento metodológico constituiu-se tanto de pesquisa bibliográfica fundamentada no direito brasileiro e, em parte, no direito estrangeiro, quanto da pesquisa de campo com cinco famílias de baixa renda, formadas por casais em que um dos conviventes está em segunda união, residentes na cidade de Paranaíba/MS. Ao relacioná-las ao atual sistema jurídico, os principais resultados indicaram que, em relação à união estável, a aceitação pela Lei Maior posteriormente regulamentada pelas Leis ns. 8.971/1994 e 9.278/1996 e pela inclusão do instituto no Código Civil/2002 contribuiu para minimizar as discussões sobre a ilegalidade e a imoralidade que pesava sobre as famílias constituídas dessa forma, assegurando maior garantia às relações pessoais e patrimoniais entre os conviventes; e, no que respeita ao parentesco por afinidade, verificou-se que, ressalvadas as restrições legais ou os direitos assegurados ao consanguíneo ou de qualquer outra origem, dele se instituem direitos e deveres como em todas as demais espécies de parentesco, uma vez que o convivente terá os deveres de guarda, sustento e educação dos filhos, criança e adolescente, do outro.

Orientador: Sônia Maria Alves Bueno / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química / Made available in DSpace on 2018-08-25T04:00:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_CarlaReis_M.pdf: 2012737 bytes, checksum: 29446d9a4e9ff14301c100dcd3fb82ab (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Anticorpos monoclonais (AcM) são imunoglobulinas secretadas por clones de linfócitos B imortalizados obtidos pela tecnologia de hibridomas. Esses clones são cultivados em meios de cultura complexos e, geralmente, liberam baixas concentrações de AcM, dificultando as etapas de purificação. Como a utilização destas proteínas nas áreas terapêutica e analítica requer um alto grau de pureza, diferentes estratégias de purificação vêm sendo desenvolvidas, mas usualmente os anticorpos são purificados por cromatografia de afinidade com proteína A ou G imobilizada, o que representa um elevado custo de produção para processos industriais. No intuito de contribuir para o desenvolvimento de processos de purificação dessas moléculas, estudou-se a purificação do AcM anti-Trypanosoma cruzi isotipo IgG2a em orto-fosfo-serina (OPS) imobilizado em gel de agarose. Contrário ao relatado em literatura, observou-se que o agente quelante apresentou baixa capacidade em imobilizar o íon metalico Ni2+. Além disso, o quelato formado adsorveu a molécula alvo juntamente com impurezas do sobrenadante do meio de cultura. Foi observado também que o OPS se comporta como ligante de troca iônica seletivo para IgG2a em solução tampão Tris-HCl 50 mmol/L pH 7,0, quando imobilizado em gel de agarose ativado com CNBr, porém os ensaios realizados com o ligante imobilizado em gel ativado com bisoxirano demonstraram que a inserção de uma molécula espaçadora reduz a seletividade do adsorvente. O AcM foi recuperado com elevado grau de pureza quando empregado em solução tampão Tris-HCl 50 mmol/L pH 7,0 e dessorção pelo acréscimo de NaCl 1,0 mol/L para promover aumento da força iônica. Os resultados de ensaios dinâmicos revelaram que a eficiência de recuperação do produto foi de 97,3% e a capacidade dinâmica de adsorção foi 0,39 mg de AcM/mL de gel devido. Este trabalho sugere a potencialidade de utilização do ligante OPS para a purificação dos anticorpos anti-Trypanosoma cruzi (IgG2a) / Abstract: Monoclonal antibodies (mAb) are immunoglobulins produced by lynphocyte B clones immortalized by the hibridoma technology. Those clones are cultivated in complex medium and generally produce low levels of mAb, interfering on purificaton steps. Since these antibodies are required for analytical and therapeutical purposes, the need of highly pure antibodies is imperative. Although they are usually purified by chromatografic techniques utilizing immobilized protein A ligands, different strategies for downstream processes have been studied to overcome the high costs of these conventional medias for industrial scale purposes. Aiming to contribute with the development of such processes, the anti-Trypanosoma cruzi mAb (IgG2a isotype) was investigated under chromatographic conditons twards the affinity ligand ortho-phospho-L-serine (OPS) immobilized onto agarose beads. It was observed that despite the fact this ligand has been reported as a chelating agent for the purification of immunoglobulins by IMAC technique, OPS presented low chelating capacity for Ni2+ and the metal complex formed adsorbed the desired protein within culture medium contaminants. It was also observed that under buffering conditions of Tris-HCl 50 mmol/L pH 7.0 OPS behaves as a selective ionic exchanger ligand for IgG2a when immobilized in CNBr activated agarose. On the other hand, when immobilized in bisoxirane activated agarose, OPS has shown that the presence of a spacer arm reduces the selectivity of the adsorbent. The mAb was recuperated in one single step with highly putity degree when operated with adsorption buffer Tris-HCl 50 mmol/L pH 7.0 and elution by increasing the ionic strength with the addition of NaCl 1.0 mol/L. The dynamic tests results showed that the efficiency for product recovery was 97.3% and the dynamic binding capacity was 0.39 mg of mAb/mL swollen agarose. This work suggests the potencial use os OPS ligand affinity for the purification of IgG2a antibodies anti-Trypanosoma cruzi in a single step / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestra em Engenharia Química

Orientador: Sonia Maria Alves Bueno / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química / Made available in DSpace on 2018-08-23T20:44:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Serracchiani_MarcelMafei_M.pdf: 2065791 bytes, checksum: 04a95a39ac0691a669c45efc9e3fc435 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A produção de proteínas recombinantes em plantas transgênicas tem se mostrado uma forma segura, eficiente e barata de obtenção em grande escala de várias proteínas de interesse, tais como vacinas, enzimas industriais, bioativos, biofarmacos e anticorpos e seus fragmentos. Contudo, para que a produção de proteínas recombinantes em plantas se torne viável é necessário o desenvolvimento de um processo de recuperação e separação da molécula alvo que seja eficiente e reprodutivo, pois a produção de biomoléculas em plantas transgênicas, assim como os métodos tradicionais de produção, apresentam componentes indesejáveis que devem ser removidos. Neste trabalho, avaliou-se a purificação de fragmentos Fab de IgG humana adicionados artificialmente (spiking) a extrato protéico de soja não transgênica utilizando-se a técnica de cromatografia de afinidade por íons metálicos imobilizados (IMAC). Estudou-se o efeito dos quelatos IDA-Ni(II) e TREN-Ni(II), dos sistemas tamponantes Tris-HCl, fosfato de sódio e Mes, na presença e na ausência de sal (NaCl) na purificação de fragmentos Fab. Primeiramente foram realizados experimentos cromatográficos com as proteínas nativas do extrato proteico do grão de soja. Dos resultados obtidos, selecionou-se, para o adsorvente agarose-TREN-Ni(II), o sistema tamponante Tris-HCl/Tris-HCl na ausência de NaCl, e para o adsorvente agarose-IDA-Ni(II), selecionou-se o sistema tamponante fosfato de sódio/acetato de sódio contendo NaCl. Estes sistemas tamponantes e adsorventes foram utilizados para purificação dos fragmentos Fab adicionados (spiking) ao extrato proteico de grãos de soja. Em agarose-TREN-Ni(II), os fragmentos Fab foram purificados por cromatografia negativa, obtendo-se 66% dos fragmentos Fab na etapa de flowthrough e lavagem, com um grau de pureza de 91% e fator de purificação de 1,4. Para o adsorvente agarose-IDA-Ni(II), os fragmentos Fab foram purificados por cromatografia tradicional (eluição a pH 5,8), obtendo-se alto grau de pureza do fragmento Fab purificados, com um fator de purificação de 2,5. Este estudo contribuiu para obter conhecimento de base para posterior aplicação da técnica de IMAC na purificação de proteínas recombinantes produzidas em sementes de plantas transgênicas / Abstract: The recombinant proteins production using transgenic plants have been considered a safe, efficient and cheap way of producing on large scale innumerous proteins of interest, such as vaccines, industrial enzymes, bioactives, biopharmaceuticals and antibody and it fragments. However, for the production of recombinant proteins in plants become viable is necessary to develop a process for recovery and separation of the target molecule that is efficient and reproductive, because the production of biomolecules in transgenic plants, as well as traditional production methods, have components reactions which must be removed. In this work, the purification of Fab fragments of human IgG added artificially (spiking) to extract non-transgenic soy protein, using the technique of affinity chromatography on immobilized metal ions (IMAC), was evaluated. The effect of chelating agents IDA-Ni(II) and TREN-Ni(II), and the buffers Tris, sodium phosphate and Mes, in presence and the absent of NaCl, was studied for the Fab purification. First, the chromatographic experiments with the native proteins of soybean extract were performed. From the results obtained, it was selected, for the adsorbent TREN-Ni(II), the buffers system Tris-HCl/Tris-HCl without NaCl, and for the adsorbent IDA-Ni(II), the buffer system sodium phosphate/ sodium acetate with NaCl was selected. These adsorbents and buffer systems were used for purification of Fab fragments added (spiking) to soybean extract proteins. In the agarose adsorbent TREN-Ni (II), Fab fragments were purified by negative chromatography, obtaining 66% of Fab fragments in flowthrough and wash steps with a purity of 91% and purification factor of 1.4. For the adsorbent agarose-IDA-Ni (II), Fab fragments were purified by traditional chromatography (elution at pH 5.8), obtaining a high purity of the purified FAB, with a purification factor of 2.5. This study contributed to obtain knowledge base for application of the technique on the IMAC purification of recombinant proteins produced in transgenic plant seeds / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química

Orientador: Sonia Maria Alves Bueno / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-02T17:38:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Serpa_Gisele_M.pdf: 3619704 bytes, checksum: 1feef42faa8bb785a83f4c9f481a438c (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Anticorpos monoc1onais são imunoglobulinas secretadas por uma célula híbrida, chamada hibridoma, que é fonnada pela fusão de um linfócito (produtor de anticorpos) e uma célula de mieloma, o que faz do hibridoma uma célula produtora de anticorpos virtualmente imortal. Os anticorpos monoc1onais têm sido utilizados nas áreas analítica e terapêutica, o que implica na necessidade de obtenção de anticorpos de alta pureza. Muitos estudos têm sido realizados visando a purificação de anticorpos monoc1onais, e destacam-se as técnicas de adsorção seletiva, como as cromatografias de troca iônica, hidrofóbicas e de a:f11Údade. Neste trabalho aplicou-se a cromatografia em membranas de álcool polietileno-vinílico, derivatizadas com ácido iminodiacético (IDA), com íons metálicos imobilizados na purificação de anticorpos monoc1onais IgGl a partir de sobrenadante de cultura celular. Para determinar as melhores condiçôes de adsorção e eluição, foram testados os íons Cu2+, Ni2+, Zn2+ e C02+, na presença de diferentes sistemas tamponantes. A seletividade dos metais, em cada um dos sistemas, foi determinada através de eletroforese SDS-PAGE e testes ELISA das frações dos picos de proteína obtidos. A melhor condição de purificação foi a alimentação de sobrenadante de cultura celular previamente precipitado e dialisado com solução de sulfato de amônio, em coluna contendo PEVA-IDA-Zn2+, em presença de tampão Tris-HCI 50 mM a pH 7,0 e eluição por aumento de concentração de Tris. A partir das isotermas de adsorção, determinou-se a capacidade máxima de adsorção e a constante de dissociação do complexo IDA­Zn2+-IgGl que de acordo com o ajuste dos parâmetros pelo modelo de Langmuir, mostraram uma alta capacidade de adsorção (63,4 mg/g de membrana seca) e uma constante de dissociação (8,lxlO-6 M) característica de sistemas de média afinidade. Foram também determinadas as curvas de ruptura para o processo proposto, através de experimentos de fIltração a diferentes vazões de alimentação, utilizando um módulo contendo as fibras ocas com Zn2+ imobilizado, construído em nosso laboratório / Abstract: Monoc1onal antibodies are immunoglobulins produced by a hybrid cell ca11ed hybridoma. These cells result from the fusion of lymphocytes with malignant myeloma cells. Hybridomas cells express both the lymphocyte's property of specific-antibody production and the immortal character of the myeloma cells. Monoc1onal antibodies have been used in analy1ica1 and therapeutica1 areas. This application needs high1y pure antibodies. Many techniques have been studied focusing monoc1onal antibodies purification. These techniques inc1ude ion exchange, hydrophobic and affinity chromatography. In this study, we applied polyethylenevinyl alcohol (PEV A) membranes in the purification of monoc1onal antibody from cell culture supem.atant. These membranes were derivatized with the quelant agent, iminodiacetic acid (IDA). We evaluated the adsorption and purification of monoc1onal antibodies on the matrix with different immobilized metal ios, Cu2+, Ni2+, Zn2+ and C02+ and with different buffers. According to SDS­PAGE electrophoresis and ELISA analysis, the higher selectivity was obtained in the presence of 50 mM Tris-HCl buffer, pH 7,0 and with elution by increasing Tris concentration, with immobilized Zn2+, wich provided the purification of IgG with traces of albumin. The adsorbent capacity and the dissociation constant of the complex IDA-Zn2+-IgGI were determinated from adsorption isotherms. According to the Langmuir model, the results indicated that the matrix presents high adsorption capacity (63,4 mg/g de chy membrane) and a dissociation constant (8,1 x 10-6 M) characteristic for intermediate affinity systems. We also evaluated the breaktrough curves for PEVA-IDA-Zn2+ membrane chromatography for the antibodies purification using different flow rates. These breaktrough CUIVes are important to sca1e up procedure / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química

Orientador: Sônia Maria Alves Bueno / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química / Made available in DSpace on 2018-08-18T14:28:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tsai_YuanMing_M.pdf: 3416327 bytes, checksum: d37231cf12f3af7bab5f7826907d5180 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: O presente trabalho teve como objetivo principal, o estudo comparativo dos agentes quelantes CM-Asp e IDA no processo da purificação de IgG humana por cromatografia de afinidade por íon metálico cobalto imobilizado em diferentes sistemas tamponantes na presença e ausência do sal NaCl. Observou-se, para todos os sistemas tamponantes estudados, a adição de sal foi desfavorável em termos de capacidade e seletividade de adsorção de IgG para ambos os agentes quelantes. De acordo com eletroforeses SDS-PAGE e análises nefelométricas, os melhores resultados foram observados em presença de Tris-HCl 25 mmol/L, pH 7,0 para o quelato CM-Asp-Co2+ e fosfato de sódio 25 mmol/L com imidazol 2 mmol/L, pH 7,0 para o quelato IDA-Co2+, obtendo-se fatores de purificação de 8,1 e 4,1 e pureza de 100% e 96%, respectivamente. Foram determinadas as curvas de ruptura por meio de experimentos cromatográficos realizados a diferentes diluições do soro humano, os resultados obtidos evidenciaram uma maior eficiência em termos da capacidade de adsorção nas diluições a 5 e 10 vezes (0,89 e 1,03 mg de proteína total/mL gel) comparado a soro diluído a 2,5 vezes (0,40 mg de proteína total/mL gel), tendo estes demonstrado comportamentos similares ao apresentado em etapa cromatográfica. Os dados de adsorção de IgG foram bem representados pelo modelo de Langmuir-Freundlich, a 25ºC, fornecendo valor de Qm igual a 94,44 mg IgG/mL gel e constante de dissociação de 8,18 x 10-5 mol/L, ordem de grandeza característica para ligantes pseudobioespecíficos / Abstract: In this work, we targeted the comparative study between chelating ligands agarose-CM-Asp and agarose-IDA in the purification of human IgG by Immobilized Metal-ion Affinity Chromatography (IMAC) with immobilized cobalt ion in different buffering systems in the presence or absence of salt. For all buffering systems the addition of salt was unfavorable in terms of adsorption capacity of IgG for both chelating ligands. The best results were obtained in the absence of salt. According to SDS-PAGE electrophoresis and nephelometric analysis, the best conditions observed were Tris-HCl 25 mmol/L, pH 7,0 for the agarose-CM-Asp and sodium phosphate 25 mmol/L with imidazole 2 mmol/L for the agarose-IDA (purification factor of 8,1 and 4,1 and purity of 100% and 96%, respectively). Chromatographic experiments were carried out with different dilutions of human serum to determine the breakthrough curves. The results showed a higher efficiency in terms of adsorption capacity at dilutions of 5 and 10 times (0.89 and 1.03 mg of protein Total / mL gel) compared to serum diluted 2.5 times (0.40 mg total protein / mL gel), these results had similar behaviors as those showed in the chomatografic stage. The adsorption data of IgG at 25ºC were well represented by Langmuir-Freundlich model. Values of Qm equal 94,44 mg of IgG/mL gel and dissociation constant of 8,18 x 10-5 mol/L, characteristic magnitude of pseudospecific ligands / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química