Orientador : Yoshitaka Gushikem / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-19T03:16:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Costa_CreusaMaieruMacedo_D.pdf: 5808237 bytes, checksum: 062c80614aac44064ee10cf9eba61dd7 (MD5) Previous issue date: 1985 / Doutorado

A partir das controvertidas q uest ões quanto ao processo de ligação dos metais com Hemateína, foram estabelecidas algumas questões fundamentais , obj etivos do presente estu do: - determinação de características de absorção UV- - Visível dos complexos de Estanho com Hemateína, visando obter sua estequiometria em solução e parâmetros termodinâmicos de formação , fornecendo dados para possíveis usos em química analítica; verificação das características de espectro vibra cional da Hemateína e de seus complexos, visando confirmar a estrutura proposta para o quelante e obter informações quanto ao tipo de complexação o corrido ; - determinação do estado de oxidação do ion metálico central, via espectroscopia Môssbauer, procurando esclarecer a similaridade nos espectros de visivel dos complexos sintetizados por ASMUS 20 ; - determinação de dados estrutur a is dos complexos sólidos, visando obter informações sobre composição, número de coordenação e simetria em torno do metal.

A partir das controvertidas q uest ões quanto ao processo de ligação dos metais com Hemateína, foram estabelecidas algumas questões fundamentais , obj etivos do presente estu do: - determinação de características de absorção UV- - Visível dos complexos de Estanho com Hemateína, visando obter sua estequiometria em solução e parâmetros termodinâmicos de formação , fornecendo dados para possíveis usos em química analítica; verificação das características de espectro vibra cional da Hemateína e de seus complexos, visando confirmar a estrutura proposta para o quelante e obter informações quanto ao tipo de complexação o corrido ; - determinação do estado de oxidação do ion metálico central, via espectroscopia Môssbauer, procurando esclarecer a similaridade nos espectros de visivel dos complexos sintetizados por ASMUS 20 ; - determinação de dados estrutur a is dos complexos sólidos, visando obter informações sobre composição, número de coordenação e simetria em torno do metal.

A partir das controvertidas q uest ões quanto ao processo de ligação dos metais com Hemateína, foram estabelecidas algumas questões fundamentais , obj etivos do presente estu do: - determinação de características de absorção UV- - Visível dos complexos de Estanho com Hemateína, visando obter sua estequiometria em solução e parâmetros termodinâmicos de formação , fornecendo dados para possíveis usos em química analítica; verificação das características de espectro vibra cional da Hemateína e de seus complexos, visando confirmar a estrutura proposta para o quelante e obter informações quanto ao tipo de complexação o corrido ; - determinação do estado de oxidação do ion metálico central, via espectroscopia Môssbauer, procurando esclarecer a similaridade nos espectros de visivel dos complexos sintetizados por ASMUS 20 ; - determinação de dados estrutur a is dos complexos sólidos, visando obter informações sobre composição, número de coordenação e simetria em torno do metal.

Não é raro criar equinos em áreas onde baixo teor de fósforo, indisponibilidade de cálcio e teor de oxalato nas plantas podem levar a desequilíbrios resultando em hiperparatireoidismo nutricional secundário. Normalmente, os minerais atuam no organismo na forma orgânica e não inorgânica, porém, ainda há controvérsia na literatura quanto ao uso de minerais orgânicos. Objetivando-se avaliar o efeito da adição de ácido oxálico na dieta, causando desequilíbrio entre cálcio e fósforo em potros, e se dietas com minerais orgânicos, quando comparadas a dietas com minerais inorgânicos, seriam capazes de evitar esse desequilíbrio e evitar o desenvolvimento da patologia, analisaram-se: pesos dos animais, parâmetros sorológicos, concentrações minerais nos pêlos, densidade mineral óssea e biópsias ósseas. Utilizaram-se 24 potros, sem raça definida, com idade entre 18 e 24 meses. Cada tratamento foi composto por 6 potros (3 machos e 3 fêmeas), totalizando 4 tratamentos, em delineamento inteiramente casualizado, com medidas repetidas no tempo, em arranjo fatorial 2x2: suplementação com minerais orgânicos ou minerais inorgânicos, e presença ou ausência de oxalato na dieta. A colheita de amostras foi realizada em 150 dias, sendo a pesagem a cada 15 dias, os parâmetros sorológicos, mineralogramas capilares e densitometrias ósseas a cada 30 dias, e biópsias ósseas a cada 75 dias. Os resultados demonstraram aumento linear dos pesos em relação aos períodos, independente dos tratamentos e não foram observadas diferenças significativas nos hemogramas dos animais no período experimental. Houve diferença no paratormônio (PTH) plasmático entre o grupo tratado com minerais inorgânicos + oxalato em relação aos outros tratamentos. O hormônio calcitonina não diferiu entre tratamentos e durante períodos, assim como os minerais lítio, molibdênio, zinco, escândio, ouro, prata, tungstênio, zircônio, bário, berílio, cádmio, chumbo e mercúrio (dosados por mineralograma capilar). Foi observada diferença na concentração capilar de cálcio, enxofre, boro, cobre e estrôncio em relação aos períodos, independente dos tratamentos. As médias das concentrações capilares de manganês, no tratamento com minerais inorgânicos + oxalato não apresentaram diferenças entre períodos; porém nos outros tratamentos, assim como nos minerais fósforo, magnésio, potássio, silício, sódio, cobalto, cromo, ferro, selênio, titânio, alumínio e níquel houve efeito quadrático em relação aos períodos. Quanto à densidade mineral óssea do III metacarpiano, não foi observada diferença entre tratamentos, nem entre sexos. Foi observado efeito de período na mobilização de cálcio, fósforo e magnésio nos ossos, independente dos tratamentos. A partir dos resultados desse estudo, pode-se concluir que o modelo de indução de desequilíbrio entre cálcio e fósforo com inclusão de oxalato de potássio é efetivo e produz o resultado esperado. A suplementação mineral é capaz de aumentar a densidade mineral óssea, em potros, independente da fonte e do sexo. A criação de desequilíbrio mineral através da inclusão de oxalato de potássio diminui concentrações de cálcio, fósforo e magnésio nos ossos, independente da fonte suplementada. Potros suplementados com minerais orgânicos, mesmo quando desafiados com a inclusão de oxalato de potássio na dieta, mantém níveis de PTH plasmáticos estáveis, demonstrando melhor resistência ao desequilíbrio entre cálcio e fósforo e evitando o desenvolvimento da osteodistrofia fibrosa / Not uncommonly, the creation of horses in areas where the low phosphorus content, the unavailability of calcium and oxalate levels in plants can lead to imbalances resulting in nutritional secondary hyperparathyroidism. Minerals exert their functions in the body almost entirely as chelated minerals, and not as inorganic ion, however, there is still much controversy in the literature regarding the use of organic minerals. Aiming to evaluate whether the addition of oxalic acid in the diet could induce an imbalance between calcium and phosphorus in foals, and if the diet with organic minerals, compared with diet with inorganic minerals, would be able to avoid this imbalance and prevent the development of pathology, serological parameters, mineral concentrations in hair, bone mineral density and bone biopsies were analyzed. It was used 24 crossbred foals, aged between 18 and 24 months. Each treatment consisted of 6 foals (three males and three females), totaling four treatments in a completely randomized design with repeated measures on time, in a 2x2 factorial arrangement: supplementation with minerals organic or not (inorganic minerals), and presence or absence of oxalate in the diet. Sampling was conducted over a period of 150 days, and the animal were weighed every 15 days, the serological parameters, bone densitometry and hair analysis collected every 30 days, and bone biopsies every 75 days. The results showed a linear increase of the weights trough the periods, regardless of the treatments, and there were no significant differences in blood counts of animals in the experimental period. The values of parathyroid hormone (PTH) showed no difference between the group treated with inorganic minerals + oxalate in relation to other treatments, and in this treatment, the average was 5.75 times higher than the averages of other treatments. The results showed that the hormone calcitonin did not change between treatments and periods as well as the mineral lithium, molybdenum, zinc, scandium, gold, silver, tungsten, zirconium, barium, beryllium, cadmium, lead and mercury (measured by hair analysis). Difference was observed in hair concentration of calcium, sulfur, boron, copper and strontium during periods, regardless of treatments. The hairs average concentration of manganese in treatment with inorganic minerals + oxalate did not differ during periods, but the other treatments, as well as the minerals phosphorus, magnesium, potassium, silicon, sodium, cobalt, chromium, iron, selenium, titanium, aluminum and nickel showed quadratic effects for the periods. No difference was observed between treatments or between sexes on III metacarpal bone mineral density during the study period. A period effect was observed in the mobilization of calcium, phosphorus and magnesium in bone, independent of treatments. With the results of this study, we can conclude that the model of induced imbalance between calcium and phosphorus with addition of potassium oxalate is effective and produces the expected result. The mineral supplementation can increase bone mineral density in foals, regardless of source and sex. The creation of mineral imbalance by adding potassium oxalate decreases the concentration of calcium, phosphorus and magnesium in the bones of foals, regardless of source supplemented. Foals supplemented with organic minerals, even when challenged with the addition of potassium oxalate in the diet, maintains levels of plasma PTH stable, showing more resistance to the imbalance between calcium and phosphorus and avoiding the development of fibrous osteodystrophy

Orientador: Adelino Vieira de Godoy Netto / Co-orientador: Fillipe Vieira Rocha / Banca: Carolina Valério Barra / Banca: Victor Marcelo Deflon / Resumo: Nos últimos anos, o interesse na obtenção de novos fármacos à base de metais visando o tratamento de cânceres vem aumentando consideravelmente. A descoberta da atividade antitumoral da cisplatina e seu subsequente sucesso como fármaco no tratamento do câncer inspirou o estudo de inúmeros complexos análogos, que apresentaram, em geral, padrões similares de atividade antitumoral e susceptibilidade à resistência. Por apresentarem mesmas configuração eletrônica e geometria em relação à compostos de Pt(II), compostos de coo rdenação contendo o íon Pd(II) foram amplamen te estudados, sendo reconhecido para os compostos de Pd(II) contendo ligantes N,S - doadores, modos de ação distintos em relação ao compostos de Pt(II). Neste trabalho foram sintetizados e caracterizados 4 novos complexos de paládio(II) do tipo [PdX (tedmPz') (PPh 3 )] {tedmPz' = N - etil - 1 - iminotiolato - 3,5 - dimetilpirazol; X = Cl -, Br -, I -, SCN - ; PPh 3 = trifenilfosfina}. Os complexos foram caracterizados pelas técnicas de espectroscopia vibracional na região do IV e RMN de 1 H e 13 C, análise elementar, espectrometria de massas ESI/MS e difração de raios X de monocristal, indicando um ambiente quadrático plano ao redor do metal, com seus sítios de coordenação ocupados pela trifenilfosfina, e pelo ligante tedmPz coordenado de maneira N,S - aniônica e ligante tiocianato ligado de modo N - terminal. Também é descrita a síntese e caracterização espectroscópica na região do IV e RMN de 1 H e 13 C do ligante tedmPz. A citotoxicidade in vitro do ligante e de todos os complexos foi avali ada pelo método do MTT, frente a s culturas celulares de tumores murinos MCF - 7 (adenocarcinoma mamário humano). Todos os compostos tiveram sua capacidade de interação com um nucleosídeo (guanosina) investigada com o objetivo de avaliar sua possível interaçã o covalente com o DNA. Os resultado... / Abstract: In the last years, the interest of new drugs based on metals in order to treat cancers has been increasing considerably. The discovery of cisplatin antitumor activity and its subsequent success as a cancer treatment drug has inspired the study of several analogous compounds, which presente d, in general, similar patterns of antitumor activity and susceptibility to resistance. By presenting the same electronic configuration and geometry of Pt (II) complexes, coordination complex containing Pd (II) ion have been extensively studied, and recogni zed different activity patterns for these compounds containing ligands N,S - donor in relation to compounds of Pt (II). In this work, were synthesized and characterized four novel complexes of palla dium (II) type [PdX (tedmPz ') (PPh 3 ) ] {tedmPz' = N - ethyl - 1 - imin othiolate - 3,5 - dimethylpyrazole; X = Cl -, Br -, I -, SCN - ; PPh 3 = triphenylphosphine}. The complexes were characterized by vibrational spectroscopy techniques in the IV region and 1 H NMR and 13 C NMR, elemental analysis, mass spectrometry ESI / MS and X - ray di ffraction of single crystal, indicating a square planar environment around the metal with its sites coordination occupied by triphenylphosphine, the N,S - anionic coordination of tedmPz ligand, the N - terminal coordination mode of thiocyanate . It is also desc ribed the synthesis and spectroscopic characterization in the IV region and 1 H NMR and 13 C for the tedmPz compound . The in vitro cytotoxicity of the ligand and all of the complexes were evaluated by the MTT method, against the cell cultures of murine tumors MCF - 7 (human breast adenocarcinoma). All compounds had their ability to interact with a nucleoside (guanosine) investigated wi th the objective of evaluating their possible covalent interaction with DNA. The results indicated that the variation of halide ligands did not affect the cytotoxicity of the compl... / Mestre

Orientador: Everson Alves Miranda / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-28T00:26:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Farinas_CristianeSanchez_M.pdf: 4627590 bytes, checksum: 7ef552e77ae4166d4028d7ec26d67232 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Glucagon é um hormônio que aumenta o nível de glicose sanguínea e sua principal aplicação como produto farmacêutico é no tratamento de hipoglicemia, especialmente associada ao diabetes. Além dessa importante aplicação e sendo o glucagon um produto de custo bastante elevado, existe a necessidade de se aprimorar seu processo- de purificação. O objetivo deste trabalho foi realizar estudos de adsorção de glucagon e insulina em silica-IDA- Me2+, através da técnica de cromatografia de afinidade por íons metálicos (IMAC), visando desenvolver um processo de purificação de glucagon a partir de fração de processamento industrial de insulina de pâncreas. Na primeira etapa, realizou-se experimentos em tanques agitados para determinar a cinética, capacidade de adsorção e influência do pH, força iônica e agente competidor na eluição do glucagon adsorvido em matriz silica-IDA-Cu2. A segunda etapa consistiu em experimentos em colunas de cromatografia líquida com leito fixo, com o glucagon, a insulina e a mistura deles, utilizando os metais Cu2+, Ni2+ e Zn2+. A condição que se mostrou mais promissora na separação da insulina do glucagon foi utilizando o metal níquel e eluição com gradiente degrau de pH. Esta condição foi avaliada na purificação de glucagon presente em duas frações do processamento industrial de insulina, a primeira rica em glucagon e uma segunda rica em insulina. O resultados mostraram um enriquecimento de glucagon em ambas as frações, sendo que um fator de purificação de glucagon de cinco foi obtido para a fração rica em insulina / Abstract: Glucagon is a hormone that increases blood glucose concentration and is used as a pharmaceutical product mainly in cases of hypoglycemia associated with diabetes. Given both its importance and cwrent1y high oost, improved purification processes are on demando Adsorption studies of glucagon and insulin on adsorbents of silica-IDA-Me2+ were carried out. By using immobilized metal ion affinity chromatography (IMAC), we conducted tests aimed at purifying glucagon present in an industrial insulin processing fraction. This method of separation is based on the se1ective mteractioD of a metal ion with aminoacid residues (specially histidine) present on the protein surface. Preliminary, experiments in stirred tanks were performed in order to determine the kinetics, adsorption isotherm and the influence of pH and ionic strength on adsorption. Next, fIxed bed chromatographic experiments with glucagon, insulin and a mixture of them was carried. Strong adsorption has been verüied for alI metais tested (Cu2+, Ni2+ and Zn2+). The most promising condition for glucagon and insulin separation was using Ni2+ as the metal ligant and desorption with pH step gradient. Studies with two industrial insulin processing fractions under this condition, one glucagon-rich and another insulin-rtch showed an increase in glucagon purity for both fractions with a purification factor of five for the latter fraction / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química

Não é raro criar equinos em áreas onde baixo teor de fósforo, indisponibilidade de cálcio e teor de oxalato nas plantas podem levar a desequilíbrios resultando em hiperparatireoidismo nutricional secundário. Normalmente, os minerais atuam no organismo na forma orgânica e não inorgânica, porém, ainda há controvérsia na literatura quanto ao uso de minerais orgânicos. Objetivando-se avaliar o efeito da adição de ácido oxálico na dieta, causando desequilíbrio entre cálcio e fósforo em potros, e se dietas com minerais orgânicos, quando comparadas a dietas com minerais inorgânicos, seriam capazes de evitar esse desequilíbrio e evitar o desenvolvimento da patologia, analisaram-se: pesos dos animais, parâmetros sorológicos, concentrações minerais nos pêlos, densidade mineral óssea e biópsias ósseas. Utilizaram-se 24 potros, sem raça definida, com idade entre 18 e 24 meses. Cada tratamento foi composto por 6 potros (3 machos e 3 fêmeas), totalizando 4 tratamentos, em delineamento inteiramente casualizado, com medidas repetidas no tempo, em arranjo fatorial 2x2: suplementação com minerais orgânicos ou minerais inorgânicos, e presença ou ausência de oxalato na dieta. A colheita de amostras foi realizada em 150 dias, sendo a pesagem a cada 15 dias, os parâmetros sorológicos, mineralogramas capilares e densitometrias ósseas a cada 30 dias, e biópsias ósseas a cada 75 dias. Os resultados demonstraram aumento linear dos pesos em relação aos períodos, independente dos tratamentos e não foram observadas diferenças significativas nos hemogramas dos animais no período experimental. Houve diferença no paratormônio (PTH) plasmático entre o grupo tratado com minerais inorgânicos + oxalato em relação aos outros tratamentos. O hormônio calcitonina não diferiu entre tratamentos e durante períodos, assim como os minerais lítio, molibdênio, zinco, escândio, ouro, prata, tungstênio, zircônio, bário, berílio, cádmio, chumbo e mercúrio (dosados por mineralograma capilar). Foi observada diferença na concentração capilar de cálcio, enxofre, boro, cobre e estrôncio em relação aos períodos, independente dos tratamentos. As médias das concentrações capilares de manganês, no tratamento com minerais inorgânicos + oxalato não apresentaram diferenças entre períodos; porém nos outros tratamentos, assim como nos minerais fósforo, magnésio, potássio, silício, sódio, cobalto, cromo, ferro, selênio, titânio, alumínio e níquel houve efeito quadrático em relação aos períodos. Quanto à densidade mineral óssea do III metacarpiano, não foi observada diferença entre tratamentos, nem entre sexos. Foi observado efeito de período na mobilização de cálcio, fósforo e magnésio nos ossos, independente dos tratamentos. A partir dos resultados desse estudo, pode-se concluir que o modelo de indução de desequilíbrio entre cálcio e fósforo com inclusão de oxalato de potássio é efetivo e produz o resultado esperado. A suplementação mineral é capaz de aumentar a densidade mineral óssea, em potros, independente da fonte e do sexo. A criação de desequilíbrio mineral através da inclusão de oxalato de potássio diminui concentrações de cálcio, fósforo e magnésio nos ossos, independente da fonte suplementada. Potros suplementados com minerais orgânicos, mesmo quando desafiados com a inclusão de oxalato de potássio na dieta, mantém níveis de PTH plasmáticos estáveis, demonstrando melhor resistência ao desequilíbrio entre cálcio e fósforo e evitando o desenvolvimento da osteodistrofia fibrosa / Not uncommonly, the creation of horses in areas where the low phosphorus content, the unavailability of calcium and oxalate levels in plants can lead to imbalances resulting in nutritional secondary hyperparathyroidism. Minerals exert their functions in the body almost entirely as chelated minerals, and not as inorganic ion, however, there is still much controversy in the literature regarding the use of organic minerals. Aiming to evaluate whether the addition of oxalic acid in the diet could induce an imbalance between calcium and phosphorus in foals, and if the diet with organic minerals, compared with diet with inorganic minerals, would be able to avoid this imbalance and prevent the development of pathology, serological parameters, mineral concentrations in hair, bone mineral density and bone biopsies were analyzed. It was used 24 crossbred foals, aged between 18 and 24 months. Each treatment consisted of 6 foals (three males and three females), totaling four treatments in a completely randomized design with repeated measures on time, in a 2x2 factorial arrangement: supplementation with minerals organic or not (inorganic minerals), and presence or absence of oxalate in the diet. Sampling was conducted over a period of 150 days, and the animal were weighed every 15 days, the serological parameters, bone densitometry and hair analysis collected every 30 days, and bone biopsies every 75 days. The results showed a linear increase of the weights trough the periods, regardless of the treatments, and there were no significant differences in blood counts of animals in the experimental period. The values of parathyroid hormone (PTH) showed no difference between the group treated with inorganic minerals + oxalate in relation to other treatments, and in this treatment, the average was 5.75 times higher than the averages of other treatments. The results showed that the hormone calcitonin did not change between treatments and periods as well as the mineral lithium, molybdenum, zinc, scandium, gold, silver, tungsten, zirconium, barium, beryllium, cadmium, lead and mercury (measured by hair analysis). Difference was observed in hair concentration of calcium, sulfur, boron, copper and strontium during periods, regardless of treatments. The hairs average concentration of manganese in treatment with inorganic minerals + oxalate did not differ during periods, but the other treatments, as well as the minerals phosphorus, magnesium, potassium, silicon, sodium, cobalt, chromium, iron, selenium, titanium, aluminum and nickel showed quadratic effects for the periods. No difference was observed between treatments or between sexes on III metacarpal bone mineral density during the study period. A period effect was observed in the mobilization of calcium, phosphorus and magnesium in bone, independent of treatments. With the results of this study, we can conclude that the model of induced imbalance between calcium and phosphorus with addition of potassium oxalate is effective and produces the expected result. The mineral supplementation can increase bone mineral density in foals, regardless of source and sex. The creation of mineral imbalance by adding potassium oxalate decreases the concentration of calcium, phosphorus and magnesium in the bones of foals, regardless of source supplemented. Foals supplemented with organic minerals, even when challenged with the addition of potassium oxalate in the diet, maintains levels of plasma PTH stable, showing more resistance to the imbalance between calcium and phosphorus and avoiding the development of fibrous osteodystrophy

Orientador: Sônia Maria Alves Bueno / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química / Made available in DSpace on 2018-08-26T10:22:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_LuanaCristinaAndradeda_D.pdf: 3401459 bytes, checksum: 94b29258ef88b106fed9841a38d11161 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: As imunoglobulinas do tipo G humana (IgG) são amplamente empregadas em tratamentos terapêuticos contra câncer, doenças auto-imunes e imunodeficiência adquirida e na área analítica, em testes diagnósticos. Os fragmentos Fab podem ser obtidos por clivagem enzimática da molécula de IgG nativa ou por tecnologia de DNA recombinante. O fragmento Fab é composto por regiões constantes e variáveis, sendo que as regiões variáveis de cadeias leve e pesada compõem o fragmento Fv. Tanto os fragmentos Fab quanto os fragmentos Fv foram citados como segunda e terceira geração de anticorpos, respectivamente, e têm sido crescente o interesse em empregá-los em tratamentos terapêuticos, visto que ambos possuem menor massa molar em relação a IgG intacta e preservam a capacidade de se ligar ao antígeno. Como a utilização destas proteínas nas áreas terapêutica e analítica requer um alto grau de pureza, estratégias de purificação vêm sendo desenvolvidas. No intuito de contribuir para o desenvolvimento de processos de purificação de fragmento Fab, estudou-se o emprego de ligantes alternativos aos bioespecíficos proteínas A, G e L, comumente empregados para este fim. Neste trabalho, a purificação dos fragmentos Fab foi realizada por cromatografia de afinidade com íons metálicos imobilizados (IMAC) e fenil boronato (FB). Quanto a IMAC, avaliou-se o efeito dos agentes quelantes IDA (ácido iminodiacético) e TREN (Tris 2(aminoetil) amina), os íons metálicos Cu2+, Ni2+ e Co2+ e os tampões Tris-HCl, fosfato de sódio e HEPES na ausência e na presença de NaCl para a purificação de Fab a partir de solução de clivagem enzimática de IgG humana policlonal. Os resultados foram analisados conjuntamente por Western blot e imunodifusão radial. No que se refere à pureza dos fragmentos Fab obtidos na etapa de flowthrough, a ordem crescente obtida foi TREN-Ni2+ (100%) > IDA-Ni2 (88,6%) > IDA-Co2+ (71,1%) > IDA-Cu2+ (63,9%). Em relação ao rendimento, obteve-se a seguinte ordem: TREN-Ni2+ (86,2%) = IDA-Co2+ (86,2%) > IDA-Ni2+ (74,3%) = IDA-Cu2+ (73,7%). No tocante à capacidade de adsorção de proteína total por mL de gel, obteve-se a ordem 14,3 mg mL-1 ( TREN-Ni2+) > 11,2 mg mL-1 (IDA-Ni2+) > 5,65 mg mL-1 (IDA-Cu2+) > 4,3 mg mL-1 (IDA-Co2+). O ligante FB adsorveu os fragmentos Fab e Fc e não promoveu a separação destes. Este trabalho possibilitou concluir que os agentes quelantes IDA e TREN com os íons metálicos empregados, possibilitam separar os fragmentos Fab de fragmentos Fc e obtê-los com grau de pureza satisfatório / Abstract: Polyclonal human G immunoglobulins are widely applied in therapeutic treatments for cancer, autoimmune diseases and immunodeficiency and in the analytical area of diagnostic testing. The human IgG Fab fragments can be obtained via enzymatic cleavage of the native molecule or recombinant DNA technology. The Fab is composed of constant regions (CL and CH) and variable (VL and VH). The variable regions of the light and heavy chains comprise the Fv fragment. Fab fragments and Fv fragments were cited as second and third generation of antibodies, respectively, and has been an increasing interest in employing them in therapeutic treatments, as both have molecular weight less than the intact IgG and preserve the affinity for the antigen. The applied these proteins in therapy and analytical investigation require a high degree of purity, so, different purification strategies have been developed. In order to contribute to the development of Fab fragment purification processes, we studied the use of alternative biospecific binding to proteins A, G and L, commonly applied for this purpose. In this work, the purification of the Fab fragments was performed by affinity chromatography with chelated metals (IMAC) and phenyl and boronate (PB) ligand immobilized on agarose gel. In this investigation, the metal chelates Cu 2+, Ni 2+ and Co 2+ were studied when tested in IDA (iminodiacetic acid) and TREN (Tris 2 (aminoethyl) amine) and buffer system Tris-HCl, sodium phosphate and HEPES with or without NaCl for purification of Fab fragments from enzymatic cleavage solution of polyclonal human IgG. The results of Western blot and radial immunodiffusion were analyzed together. For the purity of the Fab fragments obtained in flowthrough, the increasing order was obtained TREN-Ni2+ (100%) > IDA-Ni2+ (88.6%) > IDA-Co2+ (71.1%) > IDA-Cu2+ (63.9%). In relation to yield, we obtained the following order: TREN-Ni2+ (86.2%) = IDA-Co2+ (86.2%) > IDA-Ni2+ (74.3%) = IDA-Cu2+ (73.7% ). With regard to the total capacity protein adsorption per ml of gel, was obtained the order 14.3 mg mL-1 (TREN-Ni2+) > 11.2 mg mL-1 (IDA-Ni2+) > 5.65 mg ml -1 (IDA-Cu2+) > 4.3 mg ml-1 (IDA-Co2+). The binder FB adsorbed Fab and Fc did not cause separation thereof. This work led us to conclude that the chelating agents IDA and TREN with the metal ions used, enable separate the Fab fragments of Fc fragments and get them with satisfactory degree of purity / Doutorado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Doutora em Engenharia Quimica

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