Orientador: Euripedes Ferreira / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Parana, Setor de Ciencias Agrarias / Resumo: Para um estudo dos parâmetros normais das condições imunológicas de potros PSI recém-nascidos até um seguimento de 120 dias, realizou-se a colheita e processamento de sangue periférico, para posterior obtenção de soro e linfócitos do mesmo. Para estabelecer níveis de imunoglobulinas da amostragem do soro obtido dos animais hígidos ( 10), realizou-se a determinação da proteína total, eletroforese de proteínas, e imunodifusão&o radial simples, verificando-se que os potros recém-nascidos são agamaglobulinêmicos ao nascer, apresentando apenas uma pequena quantidade de IgM. Já às 24 horas, as IgG, M e A dos potros apresentam níveis semelhantes aos do soro da égua, sendo que em todo o período de observação ( 120 dias) cada uma das imunoglobulinas tem um comportamento diferente. Os níveis de IgG após 24 horas até ás 72 horas permanecem em torno de 3450,6mg/dl, caindo ao final do primeiro mês para 2017,5 mg/dl, enquanto que no segundo, no terceiro e no quarto mês ficam em torno de 1406 mg/dl. A IgM dos potros, ao nascer, está em torno de 19,60 mg/dl indo a 46,26 mg/dl nas primeiras 72 horas, sofrendo um pequeno decréscimo ao primeiro mês ( 40,52 mg/dl ), estabilizando-se ao término do período de observação em torno de 81,78 mg/dl. Já a IgA, inexistente ao nascer, apresenta-se em torno de 75 mg/dl nas primeiras 72 horas, revelando uma queda no primeiro mês (42,4 mg/dl), finalizando o período de observação com 77,07 mg/dl. Para estabelecer os parâmetros normais das subpopulações linfocitárias T e B, usou-se técnicas de marcadores de membranas. Quanto aos linfócitos T, com a formação de rosetas com eritrócitos heterógenos, determinou-se que os mesmos, apresentanse em torno de 3,4% a 10,8% em todo período de observação. Já os linfócitos B mostraram-se, através de técnicas de fluorescência, em porcentagens altas nos primeiros dias de vida (aproximadamente 37,95%) e após o 3Qq dia os valores estabilizaram-se entre 10,7% a 18,1%. / Abstract: The present study was undertaken in order to stablish the normal immunological parameters, under normal conditions, of foal as newborn until 120 days of life. The humoral immunity was assessed throug the assay of total protein in the serum, by electrophoresis and simple radial immunedifusion. It was found that newborn foal has agammaglobulinemia soon after birth, with a very low level of IgM. However, after 24 hours, the serum levels of IgG, IgA and IgM are similar as the serum levels of its mother. The behavior of different immunoglobulins in the subsequent 120 days is quite different for each immunoglobulin. The IgG level between 24 and 72 hours is around 3450.6mg/dl, in the first month, falling to 2017.5mg/dl and by the second and third months is maintained at 1406m/dl. The IgM level at birth is around 19.60mg/dl, raising to 46.26mg/dl in the first 24 hours, falling to 40.52mg/dl by the first month and, again, raising and stabilising at 81.78mg/dl at 120 days. The IgA, not present at birth, raises to 75mg/dl in the next 72 hours, falling to 42.4mg/dl in the first month and. stabilising at 77.07mg/dl by the 120 days. The T and B lymphocytes are determined by using specific surface marker of each sub-population. The T lymphocytes were identified through rosette formation, using guinea pig erythrocytes. The T lymphocytes ranged from 3.4% to 10.8% during the different periods of this study. The B lymphocytes were identified by detecting immunoglobulins on its surface. Antihorse immunoglobulin conjugated with fluorescein was employed. A very high percentage of B lymphocytes (37.95%) was detected in the first days of life and after one month the percentage ranged between 10.7 and 18,1%

Não é raro criar equinos em áreas onde baixo teor de fósforo, indisponibilidade de cálcio e teor de oxalato nas plantas podem levar a desequilíbrios resultando em hiperparatireoidismo nutricional secundário. Normalmente, os minerais atuam no organismo na forma orgânica e não inorgânica, porém, ainda há controvérsia na literatura quanto ao uso de minerais orgânicos. Objetivando-se avaliar o efeito da adição de ácido oxálico na dieta, causando desequilíbrio entre cálcio e fósforo em potros, e se dietas com minerais orgânicos, quando comparadas a dietas com minerais inorgânicos, seriam capazes de evitar esse desequilíbrio e evitar o desenvolvimento da patologia, analisaram-se: pesos dos animais, parâmetros sorológicos, concentrações minerais nos pêlos, densidade mineral óssea e biópsias ósseas. Utilizaram-se 24 potros, sem raça definida, com idade entre 18 e 24 meses. Cada tratamento foi composto por 6 potros (3 machos e 3 fêmeas), totalizando 4 tratamentos, em delineamento inteiramente casualizado, com medidas repetidas no tempo, em arranjo fatorial 2x2: suplementação com minerais orgânicos ou minerais inorgânicos, e presença ou ausência de oxalato na dieta. A colheita de amostras foi realizada em 150 dias, sendo a pesagem a cada 15 dias, os parâmetros sorológicos, mineralogramas capilares e densitometrias ósseas a cada 30 dias, e biópsias ósseas a cada 75 dias. Os resultados demonstraram aumento linear dos pesos em relação aos períodos, independente dos tratamentos e não foram observadas diferenças significativas nos hemogramas dos animais no período experimental. Houve diferença no paratormônio (PTH) plasmático entre o grupo tratado com minerais inorgânicos + oxalato em relação aos outros tratamentos. O hormônio calcitonina não diferiu entre tratamentos e durante períodos, assim como os minerais lítio, molibdênio, zinco, escândio, ouro, prata, tungstênio, zircônio, bário, berílio, cádmio, chumbo e mercúrio (dosados por mineralograma capilar). Foi observada diferença na concentração capilar de cálcio, enxofre, boro, cobre e estrôncio em relação aos períodos, independente dos tratamentos. As médias das concentrações capilares de manganês, no tratamento com minerais inorgânicos + oxalato não apresentaram diferenças entre períodos; porém nos outros tratamentos, assim como nos minerais fósforo, magnésio, potássio, silício, sódio, cobalto, cromo, ferro, selênio, titânio, alumínio e níquel houve efeito quadrático em relação aos períodos. Quanto à densidade mineral óssea do III metacarpiano, não foi observada diferença entre tratamentos, nem entre sexos. Foi observado efeito de período na mobilização de cálcio, fósforo e magnésio nos ossos, independente dos tratamentos. A partir dos resultados desse estudo, pode-se concluir que o modelo de indução de desequilíbrio entre cálcio e fósforo com inclusão de oxalato de potássio é efetivo e produz o resultado esperado. A suplementação mineral é capaz de aumentar a densidade mineral óssea, em potros, independente da fonte e do sexo. A criação de desequilíbrio mineral através da inclusão de oxalato de potássio diminui concentrações de cálcio, fósforo e magnésio nos ossos, independente da fonte suplementada. Potros suplementados com minerais orgânicos, mesmo quando desafiados com a inclusão de oxalato de potássio na dieta, mantém níveis de PTH plasmáticos estáveis, demonstrando melhor resistência ao desequilíbrio entre cálcio e fósforo e evitando o desenvolvimento da osteodistrofia fibrosa / Not uncommonly, the creation of horses in areas where the low phosphorus content, the unavailability of calcium and oxalate levels in plants can lead to imbalances resulting in nutritional secondary hyperparathyroidism. Minerals exert their functions in the body almost entirely as chelated minerals, and not as inorganic ion, however, there is still much controversy in the literature regarding the use of organic minerals. Aiming to evaluate whether the addition of oxalic acid in the diet could induce an imbalance between calcium and phosphorus in foals, and if the diet with organic minerals, compared with diet with inorganic minerals, would be able to avoid this imbalance and prevent the development of pathology, serological parameters, mineral concentrations in hair, bone mineral density and bone biopsies were analyzed. It was used 24 crossbred foals, aged between 18 and 24 months. Each treatment consisted of 6 foals (three males and three females), totaling four treatments in a completely randomized design with repeated measures on time, in a 2x2 factorial arrangement: supplementation with minerals organic or not (inorganic minerals), and presence or absence of oxalate in the diet. Sampling was conducted over a period of 150 days, and the animal were weighed every 15 days, the serological parameters, bone densitometry and hair analysis collected every 30 days, and bone biopsies every 75 days. The results showed a linear increase of the weights trough the periods, regardless of the treatments, and there were no significant differences in blood counts of animals in the experimental period. The values of parathyroid hormone (PTH) showed no difference between the group treated with inorganic minerals + oxalate in relation to other treatments, and in this treatment, the average was 5.75 times higher than the averages of other treatments. The results showed that the hormone calcitonin did not change between treatments and periods as well as the mineral lithium, molybdenum, zinc, scandium, gold, silver, tungsten, zirconium, barium, beryllium, cadmium, lead and mercury (measured by hair analysis). Difference was observed in hair concentration of calcium, sulfur, boron, copper and strontium during periods, regardless of treatments. The hairs average concentration of manganese in treatment with inorganic minerals + oxalate did not differ during periods, but the other treatments, as well as the minerals phosphorus, magnesium, potassium, silicon, sodium, cobalt, chromium, iron, selenium, titanium, aluminum and nickel showed quadratic effects for the periods. No difference was observed between treatments or between sexes on III metacarpal bone mineral density during the study period. A period effect was observed in the mobilization of calcium, phosphorus and magnesium in bone, independent of treatments. With the results of this study, we can conclude that the model of induced imbalance between calcium and phosphorus with addition of potassium oxalate is effective and produces the expected result. The mineral supplementation can increase bone mineral density in foals, regardless of source and sex. The creation of mineral imbalance by adding potassium oxalate decreases the concentration of calcium, phosphorus and magnesium in the bones of foals, regardless of source supplemented. Foals supplemented with organic minerals, even when challenged with the addition of potassium oxalate in the diet, maintains levels of plasma PTH stable, showing more resistance to the imbalance between calcium and phosphorus and avoiding the development of fibrous osteodystrophy

Em um delineamento em Quadrado Latino 4X4 balanceado, foram utilizados quatro potros, filhos do mesmo garanhão, com idade entre 10 e 12 meses e peso médio de 270 kg (dp ± 9,80 Kg). Foram analisados os efeitos, por regressão simples polinomial, da inclusão dos níveis de 5, 10, 15 e 20 % de óleo de soja, no concentrado, sobre aceitabilidade, coeficiente de digestibilidade aparente da matéria seca (CDAMS), matéria orgânica (CDAMO), proteína bruta (CDAPB), extrato etéreo (CDAEE), fibra insolúvel em detergente neutro (CDAFDN), em detergente ácido (CDAFDA) e sobre a concentração plasmática de colesterol total (COL) e suas frações nas lipoproteína de densidade muito baixa (VLDL-C), lipoproteína de densidade baixa (LDL-C), lipoproteína de densidade alta (HDL-C) e triglicérides totais (TRG). O aumento do nível de inclusão de óleo afetou (p<0,05) o CDAMO, CDAFDN e CDAFDA, apresentando uma resposta quadrática, com diminuição da digestibilidade após o valor esperado de 10,7%, 9,5% e 10,5% EE na dieta, respectivamente. Observou-se resposta linear (p<0,05) dos tratamentos sobre a concentração plasmática de colesterol e LDL-C, apresentando diminuição 0,65 mg/dL de colesterol e 0,58 mg/dL de LDL-C para cada 1% de aumento no EE no concentrado. A inclusão de óleo de soja afetou a digestibilidade da dieta, principalmente na fração parede celular e diminuiu a concentração plasmática de colesterol e HDL-C. / In a balanced 4x4 Latin Square design, 04 foals from the same stallion were used. They aged between 10 and 12 months and their average weight was 270±9.80 kg. The effects of soybean oil inclusion at the concentrated on acceptability, coefficient of apparent digestibility to dry matter (CADAMS), organic matter (CADOM), crude protein (CADCP), ethereal extract (CADEE), neutral detergent fiber (CADNDF), acid detergent (CADADF) and the plasma concentrations of total cholesterol (COL) and the fractions in Very Low Density Lipoprotein (VLDL - C), low-density lipoprotein (LDL-C), high-density lipoprotein (HDL-C) and total triglycerides (TRG), at the following levels of 5, 10, 15 and 20%, were analyzed by simple polynomial regression. Increase in the level of oil inclusion affected (P<0.05) CADOM, CADNDF and CADADF, showing a quadratic response. For those parameters, digestibility was decreased after inclusion of 10.7%, 9.5% and 10.5 of EE% in the diet, respectively. There was a linear response (P<0.05) to the treatments on the cholesterol plasma concentration and LDL-C; each 1% of increase in EE on the diet caused a decreased of 0.65 mg/dL on cholesterol and 0.58 mg / dL on LDL-C. The inclusion of soybean oil affected the digestibility of the diet, mainly on cell wall fraction, and decreased the concentration of plasma cholesterol and HDL-C.

Não é raro criar equinos em áreas onde baixo teor de fósforo, indisponibilidade de cálcio e teor de oxalato nas plantas podem levar a desequilíbrios resultando em hiperparatireoidismo nutricional secundário. Normalmente, os minerais atuam no organismo na forma orgânica e não inorgânica, porém, ainda há controvérsia na literatura quanto ao uso de minerais orgânicos. Objetivando-se avaliar o efeito da adição de ácido oxálico na dieta, causando desequilíbrio entre cálcio e fósforo em potros, e se dietas com minerais orgânicos, quando comparadas a dietas com minerais inorgânicos, seriam capazes de evitar esse desequilíbrio e evitar o desenvolvimento da patologia, analisaram-se: pesos dos animais, parâmetros sorológicos, concentrações minerais nos pêlos, densidade mineral óssea e biópsias ósseas. Utilizaram-se 24 potros, sem raça definida, com idade entre 18 e 24 meses. Cada tratamento foi composto por 6 potros (3 machos e 3 fêmeas), totalizando 4 tratamentos, em delineamento inteiramente casualizado, com medidas repetidas no tempo, em arranjo fatorial 2x2: suplementação com minerais orgânicos ou minerais inorgânicos, e presença ou ausência de oxalato na dieta. A colheita de amostras foi realizada em 150 dias, sendo a pesagem a cada 15 dias, os parâmetros sorológicos, mineralogramas capilares e densitometrias ósseas a cada 30 dias, e biópsias ósseas a cada 75 dias. Os resultados demonstraram aumento linear dos pesos em relação aos períodos, independente dos tratamentos e não foram observadas diferenças significativas nos hemogramas dos animais no período experimental. Houve diferença no paratormônio (PTH) plasmático entre o grupo tratado com minerais inorgânicos + oxalato em relação aos outros tratamentos. O hormônio calcitonina não diferiu entre tratamentos e durante períodos, assim como os minerais lítio, molibdênio, zinco, escândio, ouro, prata, tungstênio, zircônio, bário, berílio, cádmio, chumbo e mercúrio (dosados por mineralograma capilar). Foi observada diferença na concentração capilar de cálcio, enxofre, boro, cobre e estrôncio em relação aos períodos, independente dos tratamentos. As médias das concentrações capilares de manganês, no tratamento com minerais inorgânicos + oxalato não apresentaram diferenças entre períodos; porém nos outros tratamentos, assim como nos minerais fósforo, magnésio, potássio, silício, sódio, cobalto, cromo, ferro, selênio, titânio, alumínio e níquel houve efeito quadrático em relação aos períodos. Quanto à densidade mineral óssea do III metacarpiano, não foi observada diferença entre tratamentos, nem entre sexos. Foi observado efeito de período na mobilização de cálcio, fósforo e magnésio nos ossos, independente dos tratamentos. A partir dos resultados desse estudo, pode-se concluir que o modelo de indução de desequilíbrio entre cálcio e fósforo com inclusão de oxalato de potássio é efetivo e produz o resultado esperado. A suplementação mineral é capaz de aumentar a densidade mineral óssea, em potros, independente da fonte e do sexo. A criação de desequilíbrio mineral através da inclusão de oxalato de potássio diminui concentrações de cálcio, fósforo e magnésio nos ossos, independente da fonte suplementada. Potros suplementados com minerais orgânicos, mesmo quando desafiados com a inclusão de oxalato de potássio na dieta, mantém níveis de PTH plasmáticos estáveis, demonstrando melhor resistência ao desequilíbrio entre cálcio e fósforo e evitando o desenvolvimento da osteodistrofia fibrosa / Not uncommonly, the creation of horses in areas where the low phosphorus content, the unavailability of calcium and oxalate levels in plants can lead to imbalances resulting in nutritional secondary hyperparathyroidism. Minerals exert their functions in the body almost entirely as chelated minerals, and not as inorganic ion, however, there is still much controversy in the literature regarding the use of organic minerals. Aiming to evaluate whether the addition of oxalic acid in the diet could induce an imbalance between calcium and phosphorus in foals, and if the diet with organic minerals, compared with diet with inorganic minerals, would be able to avoid this imbalance and prevent the development of pathology, serological parameters, mineral concentrations in hair, bone mineral density and bone biopsies were analyzed. It was used 24 crossbred foals, aged between 18 and 24 months. Each treatment consisted of 6 foals (three males and three females), totaling four treatments in a completely randomized design with repeated measures on time, in a 2x2 factorial arrangement: supplementation with minerals organic or not (inorganic minerals), and presence or absence of oxalate in the diet. Sampling was conducted over a period of 150 days, and the animal were weighed every 15 days, the serological parameters, bone densitometry and hair analysis collected every 30 days, and bone biopsies every 75 days. The results showed a linear increase of the weights trough the periods, regardless of the treatments, and there were no significant differences in blood counts of animals in the experimental period. The values of parathyroid hormone (PTH) showed no difference between the group treated with inorganic minerals + oxalate in relation to other treatments, and in this treatment, the average was 5.75 times higher than the averages of other treatments. The results showed that the hormone calcitonin did not change between treatments and periods as well as the mineral lithium, molybdenum, zinc, scandium, gold, silver, tungsten, zirconium, barium, beryllium, cadmium, lead and mercury (measured by hair analysis). Difference was observed in hair concentration of calcium, sulfur, boron, copper and strontium during periods, regardless of treatments. The hairs average concentration of manganese in treatment with inorganic minerals + oxalate did not differ during periods, but the other treatments, as well as the minerals phosphorus, magnesium, potassium, silicon, sodium, cobalt, chromium, iron, selenium, titanium, aluminum and nickel showed quadratic effects for the periods. No difference was observed between treatments or between sexes on III metacarpal bone mineral density during the study period. A period effect was observed in the mobilization of calcium, phosphorus and magnesium in bone, independent of treatments. With the results of this study, we can conclude that the model of induced imbalance between calcium and phosphorus with addition of potassium oxalate is effective and produces the expected result. The mineral supplementation can increase bone mineral density in foals, regardless of source and sex. The creation of mineral imbalance by adding potassium oxalate decreases the concentration of calcium, phosphorus and magnesium in the bones of foals, regardless of source supplemented. Foals supplemented with organic minerals, even when challenged with the addition of potassium oxalate in the diet, maintains levels of plasma PTH stable, showing more resistance to the imbalance between calcium and phosphorus and avoiding the development of fibrous osteodystrophy

Em um delineamento em Quadrado Latino 4X4 balanceado, foram utilizados quatro potros, filhos do mesmo garanhão, com idade entre 10 e 12 meses e peso médio de 270 kg (dp ± 9,80 Kg). Foram analisados os efeitos, por regressão simples polinomial, da inclusão dos níveis de 5, 10, 15 e 20 % de óleo de soja, no concentrado, sobre aceitabilidade, coeficiente de digestibilidade aparente da matéria seca (CDAMS), matéria orgânica (CDAMO), proteína bruta (CDAPB), extrato etéreo (CDAEE), fibra insolúvel em detergente neutro (CDAFDN), em detergente ácido (CDAFDA) e sobre a concentração plasmática de colesterol total (COL) e suas frações nas lipoproteína de densidade muito baixa (VLDL-C), lipoproteína de densidade baixa (LDL-C), lipoproteína de densidade alta (HDL-C) e triglicérides totais (TRG). O aumento do nível de inclusão de óleo afetou (p<0,05) o CDAMO, CDAFDN e CDAFDA, apresentando uma resposta quadrática, com diminuição da digestibilidade após o valor esperado de 10,7%, 9,5% e 10,5% EE na dieta, respectivamente. Observou-se resposta linear (p<0,05) dos tratamentos sobre a concentração plasmática de colesterol e LDL-C, apresentando diminuição 0,65 mg/dL de colesterol e 0,58 mg/dL de LDL-C para cada 1% de aumento no EE no concentrado. A inclusão de óleo de soja afetou a digestibilidade da dieta, principalmente na fração parede celular e diminuiu a concentração plasmática de colesterol e HDL-C. / In a balanced 4x4 Latin Square design, 04 foals from the same stallion were used. They aged between 10 and 12 months and their average weight was 270±9.80 kg. The effects of soybean oil inclusion at the concentrated on acceptability, coefficient of apparent digestibility to dry matter (CADAMS), organic matter (CADOM), crude protein (CADCP), ethereal extract (CADEE), neutral detergent fiber (CADNDF), acid detergent (CADADF) and the plasma concentrations of total cholesterol (COL) and the fractions in Very Low Density Lipoprotein (VLDL - C), low-density lipoprotein (LDL-C), high-density lipoprotein (HDL-C) and total triglycerides (TRG), at the following levels of 5, 10, 15 and 20%, were analyzed by simple polynomial regression. Increase in the level of oil inclusion affected (P<0.05) CADOM, CADNDF and CADADF, showing a quadratic response. For those parameters, digestibility was decreased after inclusion of 10.7%, 9.5% and 10.5 of EE% in the diet, respectively. There was a linear response (P<0.05) to the treatments on the cholesterol plasma concentration and LDL-C; each 1% of increase in EE on the diet caused a decreased of 0.65 mg/dL on cholesterol and 0.58 mg / dL on LDL-C. The inclusion of soybean oil affected the digestibility of the diet, mainly on cell wall fraction, and decreased the concentration of plasma cholesterol and HDL-C.

As Espécies Reativas de Oxigênio (EROs) conferem proteção aos seres vivos contra os contínuos ataques de microrganismos, além de serem responsáveis por diversos eventos fisiológicos. No entanto um desequilíbrio entre a produção das EROs e os agentes antioxidantes resulta diversos processos patológicos nos mais variados sistemas em seres humanos e em animais. Durante a gestação ocorrem alterações do metabolismo que podem levar a um aumento de subprodutos da oxidação. Assim como a gestação, o nascimento também impõe um período com alta demanda energética, alta tensão de oxigênio e, por consequência, determina um momento crítico na vida do neonato, por ser exigida uma rápida adaptação da condição hipóxica (intra útero) para hiperóxica (extra útero). Desta forma, o objetivo desta dissertação foi verificar o estado oxidativo das éguas no terço final da gestação, no periparto e no pós-parto levando em consideração o efeito da paridade, bem como a condição oxidativa de neonatos durante os primeiros sete dias de vida. Como indicadores de oxidação foram mensurados os níveis de TBARS e oxidação de proteína. Foi quantificado o ferro total e como parâmetros antioxidantes, foram medidas as atividades das enzimas GPx e SOD, e as concentrações de bilirrubina. Nos potros verificamos que a SOD não apresentou diferença significativa no periodo analisado. As concentrações de bilirrubina foram mais baixas no primeiro tempo avaliado, e tanto a bilirrubina total quanto a indireta elevaram-se às 12 horas e então caíram entre as 72h e 168h. Já a GPx demonstrou aumento da sua atividade nos tempos 12 e 72h quando comparada ao tempo 0h. Verificou-se altos níveis de TBARS no primeiro momento pós-nascimento, uma conseguinte diminuição às 12h seguida de estabilização nos demais tempos. Já a avaliação do período gestacional das éguas indicou um efeito de interação entre paridade e tempo gestacional apenas para o ferro total. SOD e oxidação proteica não apresentaram alterações significantes no período estudado. Tanto a GPx quanto as TBARS apresentaram efeito de tempo, com evidente alteração entre o parto, apresentando aumento e o pós-parto apresentando diminuição de atividade e das concentrações dessas variáveis. Concluímos que em potros, a peroxidação lipídica ao nascimento apresentou-se alta sugerindo um balanço pró-oxidativo durante tal período, o que poderia caracterizar um aumento nos níveis de EROs com finalidade de completar importantes eventos fisiológicos. Quanto a bilirrubina indireta e a GPx podemos sugerir que frente aos altos níveis da peroxidação lipídica houve um estímulo para ativação dos sistemas antioxidantes que envolvem essas biomoléculas e que as duas tenham agido concomitantemente visando equilibrar os níveis de EROs. Com relação às éguas, apontamos que a paridade não tem influencia sobre o estabelecimento da homeostase oxidativa em éguas e que no momento do parto as mesmas passam por um desbalanço oxidativo transiente. Ou seja, o desbalanço oxidativo faz parte tanto do momento do parto quanto da primeira semana de vida dos potros, possivelmente desempenhando um papel fisiológico em abas categorias. / Reactive Oxygen Species (ROS) produced protect living beings against the continuous attacks of microorganisms, as well as being responsible for several physiological events, so oxidative homeostasis is a premise. However, an imbalance between the production of ROS and the antioxidant agents causes several pathological processes in the most varied systems in humans and animals. During pregnancy it is suggested that alterations of the metabolism take place, consequently the increase of by-products of the oxidation during the gestational period. Like gestation, the birth also imposes a period with high energy demand, high oxygen tension and, consequently, it determines a critical moment in the life of the newborn because it is required a rapid adaptation of the same to the change of hypoxic condition (intra uterus) To hyperoxic (extra uterus). The aim of this dissertation was to verify the oxidative status of mares in the final third of gestation, peripartum and postpartum, taking into account the parity effect, as well as the oxidative condition of neonates during the first seven days of life. As oxidation indicators, the levels of TBARS and protein oxidation were measured. Total iron was quantified and as antioxidant parameters, activities of GPx and SOD enzymes, and bilirubin concentrations were measured. In the foals we verified that the SOD showed no significant difference in the analyzed time. Bilirubin concentrations were lower in the first time evaluated, and both total and indirect bilirubin increased at 12 hours and then fell between 72h and 168h. On the other hand, GPx showed an increase in its activity in times 12 and 72h when compared to time 0h. There were high levels of TBARS at the first post-birth moment, a consequent decrease at 12h, followed by stabilization at the other times. The results with mares indicated interaction effect between parity and gestational time only for total iron. SOD and protein oxidation did not present significant alterations in the studied period. Both GPx and TBARS presented a time effect, with an evident alteration between childbirth and postpartum, and there was an increase and decrease, respectively, in the activity and concentrations of these variables. We conclude that in foals, lipid peroxidation at birth was high suggesting a pro-oxidative balance during such period, which could characterize an increase in the levels of ROS in order to complete important physiological events. Regarding indirect bilirubin and GPx, we can suggest that in the face of the high levels of lipid peroxidation there was a stimulus for the activation of the antioxidant systems that involve these biomolecules and that the two have acted concomitantly in order to maintain the high levels of EROs at non detrimental levels. Regarding mares, we pointed out that parity has no influence on the establishment of oxidative homeostasis in mares and that at the time of delivery they undergo transient oxidative imbalance. That is, oxidative imbalance is part of both the calving moment and the first week of life of foals, possibly playing a physiological role in categories.

Infecções pulmonares de potros jovens por Rhodococcus equi resultam em grave pneumonia levando à morte um grande número de animais todos os anos. Até o momento não há nenhuma vacina aceita globalmente para a prevenção da rodococose equina. O único tratamento preconizado é baseado em antibioticoterapia, porém os protocolos clínicos são longos, de alto custo, com efeitos colaterais e tem favorecido a seleção de cepas resistentes aos antibióticos. Diversas estratégias no desenvolvimento de uma vacina segura e eficiente contra a rodococose foram propostas, porém, não induziram um efeito protetor considerável. O principal fator de virulência do R. equi descrito e amplamente estudado é a proteína vapA, no entanto, outras proteínas localizadas na ilha de patogenicidade estão presentes em amostras de R. equi virulento extraídos de animais infectados. Trabalhos recentes têm demonstrado a presença do gene vapG em todas as cepas virulentas e este gene é altamente expresso quando a bactéria reside no interior de macrófagos, tornando-o um possível alvo vacinal. Nosso grupo já possui experiência prévia no uso de linhagem de Salmonella enterica Typhimurium atenuada carreando a proteína vapA. Baseado nos resultados positivos obtidos, foi construída uma linhagem atenuada de S. enterica Typhimurium 3987 expressando a proteína vapG. A administração desta linhagem em camundongos foi capaz de induzir proteção contra R. equi virulento. Os resultados observados foram a colonização e persistência da Salmonella nos órgãos alvo, a redução da carga bacteriana de R. equi, e a indução de um perfil imune protetor semelhante ao observado em animais adultos resistentes. Observou-se o aumento da produção de IL-12p70 e IFN-, alem da presença de níveis aumentados de IL-4 e a redução dos níveis de TNF-. Observou-se também o aumento na subpopulação de células T auxiliares (CD4+) com perfil de memória, além de aumento na população de linfócitos B totais quando comparado aos grupos controles. Este conjunto de resultados indica que a imunização com Salmonella enterica Typhimurium expressando a proteína vapG gera uma resposta imune celular eficiente tornando esta linhagem uma possível candidata a vetor vacinal. Alem disso, sugere que outros antígenos do R. equi podem ser / Pulmonary infections in young foals by Rhodococcus equi result in severe pneumonia, leading to death a large number of animals every year. There is no globally accepted vaccine for the prevention of equine rhodococosis so far. To date, the only acceptable treatment is based on antibiotics, but the clinical protocols are long lasting, expensive, having side effects and favoring the emergence of drug resistant strains. Several strategies for developing a safe and effective vaccine against rhodococosis have been proposed, however, none has induced a significant protective effect. The main virulence factor of R. equi described and extensively studied is the protein vapA, although other proteins encoded by genes in pathogenicity islands are detected in samples of virulent R. equi, isolated from infected animals. Recent works have demonstrated that the vapG gene is present in all virulent strains, and that this gene is highly expressed when bacteria reside within macrophages, making it a potential vaccine target. Our group has already been working with an attenuated Salmonella enterica Typhimurium strain expressing the VapA protein. Even though our results were very promising, we decided to construct a second vaccine strain expressing the VapG protein. Based on the positive results, it was constructed an attenuated strain of S. enterica Typhimurium 3987 expressing the vapG protein. Interestingly, the VapG-expressing strain induced protection against virulent R. equi in mouse model of infection. We could observe colonization and persistence of Salmonella vaccine cells in target organs, with reduction of bacterial loads of R. equi and induction of a protective immune profile similar to that seen in resistant adult animals. We could also observe increased production of IL-12p70 and IFN- in addition to the presence of increased levels of IL-4 and reduced levels of TNF-. Moreover, we detected an increase in the subpopulation of T helper cells (CD4), with a profile of memory, as well as in the population of B lymphocytes, when compared to control groups. This set of results shows that immunization with Salmonella enterica Typhimurium expressing the VapG protein raises an efficient cellular immune response, making this strain a potential candidate for vaccine vector. Furthermore, this work suggests that other R. equi antigens may be taken into account for vaccine construction, besides the VapA protein utilized in the majority of studies.

A infecção por Rhodococcus equi é a causa mais comum de pneumonia em potros durante os primeiros 6 meses de idade e as medidas utilizadas no controle da infecção são freqüentemente ineficientes. Os protocolos de tratamento são longos, de alto custo e nem sempre eficazes. A prevenção da rodococose através da imunização de potros com vacina eficaz e segura tem sido um desafio. Estudos recentes se baseiam na utilização da proteína A associada a virulência (VapA), que tem sido descrita como importante indutora da imunidade contra R. equi. Este estudo avaliou a resposta clínica e imunitária desenvolvida por potros imunizados com cepa atenuada de S. enterica Typhimurium capaz de expressar o antígeno VapA (grupo teste) ou apenas S. enterica Typhimurium sem o gene vapA (grupo controle), antes e após o desafio experimental. Duas etapas experimentais foram estabelecidas de acordo com a via de imunização: intranasal ou oral em até 12 horas após o nascimento e aos 14 dias de idade. Os animais do grupo teste e do grupo controle foram desafiados experimentalmente com cepa virulenta de R. equi 28 dias após o nascimento. Para acompanhar o desenvolvimento dos sinais clínicos, foram realizados exames clínicos, hemogramas e exames complementares de imagem. O padrão de resposta imune desenvolvida foi avaliada através da dosagem de munoglobulinas, mensuração da expressão de citocinas, ensaio de proliferação de linfócitos, isolamento de R. equi e perfil citológico do LTB. As manifestações clínicas foram observadas de maneira menos intensa nos animais do grupo teste da segunda etapa experimental e óbitos decorrentes da rodococose ocorreram apenas nos animais do grupo controle (2/3). Os animais do grupo teste apresentaram uma resposta de IgGb mais intensa quando comparada aos animais do grupo controle, porém não foi observado diferença estatística. A linfoproliferação e a expressão de citocinas de padrão Th1 foram superiores nos animais do grupo teste. Em contraste, os animais do grupo controle apresentaram uma resposta caracterizada pela maior expressão da citocina IL-4. A produção de IgA local foi mais significativa nos animais imunizados com Salmonella carreando vapA. Não foram observados efeitos tóxicos graves resultantes da imunização em nenhuma das etapas experimentais. A vacinação de potros neonatos com S. enterica Typhimurium expressando VapA foi considerada segura, capaz de modular eficientemente a resposta imune e aparentemente capaz de proteger contra a infecção experimental com R. equi. / Rhodoccocus equi is the major cause of pneumonia in foals during the first six months and control measures are frequently ineffective. Treatment protocols are long, expensive and do not always produce good results. Rhodococcosis prevention through immunization of foals using a safe and efficient vaccine is still a challenge. Recent studies are based on the use of the virulence associated protein A (vapA) which has been described as an important inducer of immunity against R. equi. The present study evaluated the clinical and immune response of foals vaccinated with an attenuated strain of S. enterica Typhimurium expressing VapA antigen (test group) or S. enterica Typhimurium without the vapA gene (control group), previous to and following experimental challenge. Two experimental phases were established according to the immunization route: intranasal or oral vaccination up to 12 hrs following birth and at 14 days of age. The experimental and control groups were challenge on day 28 with a virulent stain of R. equi. Clinical examination, complete hemograms and image complementary exams were used to evaluate the development of clinical signs. Immune response patterns were evaluated though immunoglobulin dosage, cytokine expression, lymphocyte proliferation essays, isolation of R. equi and cytological profiles of TBW. Clinical manifestation was less intense in the test group during the second experimental phase, and death occurred only in the control group (2/3) and was due to R. equi pneumonia. The test group produced a more intense IgGb response when compared to controls however no statistical difference was observed. Lymphoproliferation and Th1 cytokine expression were higher in the test group. In contrast, controls produced an IL-4 response. Local IgA was significantly higher in animals immunized with Salmonella carrying vapA. Immunization protocols produced no severe toxic effect. The vaccination of neonatal foals with S. enterica Typhimurium expressing VapA was considered safe, produced efficient modulation of the immune response and is apparently able to protect against experimental R.equi infection.

As Espécies Reativas de Oxigênio (EROs) conferem proteção aos seres vivos contra os contínuos ataques de microrganismos, além de serem responsáveis por diversos eventos fisiológicos. No entanto um desequilíbrio entre a produção das EROs e os agentes antioxidantes resulta diversos processos patológicos nos mais variados sistemas em seres humanos e em animais. Durante a gestação ocorrem alterações do metabolismo que podem levar a um aumento de subprodutos da oxidação. Assim como a gestação, o nascimento também impõe um período com alta demanda energética, alta tensão de oxigênio e, por consequência, determina um momento crítico na vida do neonato, por ser exigida uma rápida adaptação da condição hipóxica (intra útero) para hiperóxica (extra útero). Desta forma, o objetivo desta dissertação foi verificar o estado oxidativo das éguas no terço final da gestação, no periparto e no pós-parto levando em consideração o efeito da paridade, bem como a condição oxidativa de neonatos durante os primeiros sete dias de vida. Como indicadores de oxidação foram mensurados os níveis de TBARS e oxidação de proteína. Foi quantificado o ferro total e como parâmetros antioxidantes, foram medidas as atividades das enzimas GPx e SOD, e as concentrações de bilirrubina. Nos potros verificamos que a SOD não apresentou diferença significativa no periodo analisado. As concentrações de bilirrubina foram mais baixas no primeiro tempo avaliado, e tanto a bilirrubina total quanto a indireta elevaram-se às 12 horas e então caíram entre as 72h e 168h. Já a GPx demonstrou aumento da sua atividade nos tempos 12 e 72h quando comparada ao tempo 0h. Verificou-se altos níveis de TBARS no primeiro momento pós-nascimento, uma conseguinte diminuição às 12h seguida de estabilização nos demais tempos. Já a avaliação do período gestacional das éguas indicou um efeito de interação entre paridade e tempo gestacional apenas para o ferro total. SOD e oxidação proteica não apresentaram alterações significantes no período estudado. Tanto a GPx quanto as TBARS apresentaram efeito de tempo, com evidente alteração entre o parto, apresentando aumento e o pós-parto apresentando diminuição de atividade e das concentrações dessas variáveis. Concluímos que em potros, a peroxidação lipídica ao nascimento apresentou-se alta sugerindo um balanço pró-oxidativo durante tal período, o que poderia caracterizar um aumento nos níveis de EROs com finalidade de completar importantes eventos fisiológicos. Quanto a bilirrubina indireta e a GPx podemos sugerir que frente aos altos níveis da peroxidação lipídica houve um estímulo para ativação dos sistemas antioxidantes que envolvem essas biomoléculas e que as duas tenham agido concomitantemente visando equilibrar os níveis de EROs. Com relação às éguas, apontamos que a paridade não tem influencia sobre o estabelecimento da homeostase oxidativa em éguas e que no momento do parto as mesmas passam por um desbalanço oxidativo transiente. Ou seja, o desbalanço oxidativo faz parte tanto do momento do parto quanto da primeira semana de vida dos potros, possivelmente desempenhando um papel fisiológico em abas categorias. / Reactive Oxygen Species (ROS) produced protect living beings against the continuous attacks of microorganisms, as well as being responsible for several physiological events, so oxidative homeostasis is a premise. However, an imbalance between the production of ROS and the antioxidant agents causes several pathological processes in the most varied systems in humans and animals. During pregnancy it is suggested that alterations of the metabolism take place, consequently the increase of by-products of the oxidation during the gestational period. Like gestation, the birth also imposes a period with high energy demand, high oxygen tension and, consequently, it determines a critical moment in the life of the newborn because it is required a rapid adaptation of the same to the change of hypoxic condition (intra uterus) To hyperoxic (extra uterus). The aim of this dissertation was to verify the oxidative status of mares in the final third of gestation, peripartum and postpartum, taking into account the parity effect, as well as the oxidative condition of neonates during the first seven days of life. As oxidation indicators, the levels of TBARS and protein oxidation were measured. Total iron was quantified and as antioxidant parameters, activities of GPx and SOD enzymes, and bilirubin concentrations were measured. In the foals we verified that the SOD showed no significant difference in the analyzed time. Bilirubin concentrations were lower in the first time evaluated, and both total and indirect bilirubin increased at 12 hours and then fell between 72h and 168h. On the other hand, GPx showed an increase in its activity in times 12 and 72h when compared to time 0h. There were high levels of TBARS at the first post-birth moment, a consequent decrease at 12h, followed by stabilization at the other times. The results with mares indicated interaction effect between parity and gestational time only for total iron. SOD and protein oxidation did not present significant alterations in the studied period. Both GPx and TBARS presented a time effect, with an evident alteration between childbirth and postpartum, and there was an increase and decrease, respectively, in the activity and concentrations of these variables. We conclude that in foals, lipid peroxidation at birth was high suggesting a pro-oxidative balance during such period, which could characterize an increase in the levels of ROS in order to complete important physiological events. Regarding indirect bilirubin and GPx, we can suggest that in the face of the high levels of lipid peroxidation there was a stimulus for the activation of the antioxidant systems that involve these biomolecules and that the two have acted concomitantly in order to maintain the high levels of EROs at non detrimental levels. Regarding mares, we pointed out that parity has no influence on the establishment of oxidative homeostasis in mares and that at the time of delivery they undergo transient oxidative imbalance. That is, oxidative imbalance is part of both the calving moment and the first week of life of foals, possibly playing a physiological role in categories.

A infecção por Rhodococcus equi é a causa mais comum de pneumonia em potros durante os primeiros 6 meses de idade e as medidas utilizadas no controle da infecção são freqüentemente ineficientes. Os protocolos de tratamento são longos, de alto custo e nem sempre eficazes. A prevenção da rodococose através da imunização de potros com vacina eficaz e segura tem sido um desafio. Estudos recentes se baseiam na utilização da proteína A associada a virulência (VapA), que tem sido descrita como importante indutora da imunidade contra R. equi. Este estudo avaliou a resposta clínica e imunitária desenvolvida por potros imunizados com cepa atenuada de S. enterica Typhimurium capaz de expressar o antígeno VapA (grupo teste) ou apenas S. enterica Typhimurium sem o gene vapA (grupo controle), antes e após o desafio experimental. Duas etapas experimentais foram estabelecidas de acordo com a via de imunização: intranasal ou oral em até 12 horas após o nascimento e aos 14 dias de idade. Os animais do grupo teste e do grupo controle foram desafiados experimentalmente com cepa virulenta de R. equi 28 dias após o nascimento. Para acompanhar o desenvolvimento dos sinais clínicos, foram realizados exames clínicos, hemogramas e exames complementares de imagem. O padrão de resposta imune desenvolvida foi avaliada através da dosagem de munoglobulinas, mensuração da expressão de citocinas, ensaio de proliferação de linfócitos, isolamento de R. equi e perfil citológico do LTB. As manifestações clínicas foram observadas de maneira menos intensa nos animais do grupo teste da segunda etapa experimental e óbitos decorrentes da rodococose ocorreram apenas nos animais do grupo controle (2/3). Os animais do grupo teste apresentaram uma resposta de IgGb mais intensa quando comparada aos animais do grupo controle, porém não foi observado diferença estatística. A linfoproliferação e a expressão de citocinas de padrão Th1 foram superiores nos animais do grupo teste. Em contraste, os animais do grupo controle apresentaram uma resposta caracterizada pela maior expressão da citocina IL-4. A produção de IgA local foi mais significativa nos animais imunizados com Salmonella carreando vapA. Não foram observados efeitos tóxicos graves resultantes da imunização em nenhuma das etapas experimentais. A vacinação de potros neonatos com S. enterica Typhimurium expressando VapA foi considerada segura, capaz de modular eficientemente a resposta imune e aparentemente capaz de proteger contra a infecção experimental com R. equi. / Rhodoccocus equi is the major cause of pneumonia in foals during the first six months and control measures are frequently ineffective. Treatment protocols are long, expensive and do not always produce good results. Rhodococcosis prevention through immunization of foals using a safe and efficient vaccine is still a challenge. Recent studies are based on the use of the virulence associated protein A (vapA) which has been described as an important inducer of immunity against R. equi. The present study evaluated the clinical and immune response of foals vaccinated with an attenuated strain of S. enterica Typhimurium expressing VapA antigen (test group) or S. enterica Typhimurium without the vapA gene (control group), previous to and following experimental challenge. Two experimental phases were established according to the immunization route: intranasal or oral vaccination up to 12 hrs following birth and at 14 days of age. The experimental and control groups were challenge on day 28 with a virulent stain of R. equi. Clinical examination, complete hemograms and image complementary exams were used to evaluate the development of clinical signs. Immune response patterns were evaluated though immunoglobulin dosage, cytokine expression, lymphocyte proliferation essays, isolation of R. equi and cytological profiles of TBW. Clinical manifestation was less intense in the test group during the second experimental phase, and death occurred only in the control group (2/3) and was due to R. equi pneumonia. The test group produced a more intense IgGb response when compared to controls however no statistical difference was observed. Lymphoproliferation and Th1 cytokine expression were higher in the test group. In contrast, controls produced an IL-4 response. Local IgA was significantly higher in animals immunized with Salmonella carrying vapA. Immunization protocols produced no severe toxic effect. The vaccination of neonatal foals with S. enterica Typhimurium expressing VapA was considered safe, produced efficient modulation of the immune response and is apparently able to protect against experimental R.equi infection.