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Caracterização de amostras de Erysipelothrix spp. isoladas de suínos nos últimos 30 anos / Characterization of Erysipelothrix spp. strains isolated from swine in last 30 yearsTania Alen Coutinho 24 June 2010 (has links)
Erysipelothrix rhusiopathiae é um importante patógeno em suinocultura e apesar do uso freqüente de vacinas contra o mesmo na maior parte das propriedades produtoras do país, a ocorrência de quadros clínicos da infecção tem sido amplamente observada e diagnosticada. Tendo em vista o ressurgimento deste agente como causa de prejuízos econômicos para a indústria suinícola nacional e seu potencial risco à saúde pública, este estudo teve como objetivo caracterizar 151 amostras de Erysipelothrix spp. isoladas de suínos nos útlimos 30 anos por meio de sorotipagem, determinação da susceptibilidade antimicrobiana, AFLP e PFGE. Dentre os 151 isolados, 139 foram classificados em 18 sorotipos diferentes (1a, 1b, 2a, 2b, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 11, 12, 15, 17, 19, 21, 24 e 25), sendo que o sorotipo 2b foi o mais freqüente. Os perfis de susceptibilidade antimicrobiana foram muito semelhantes entre os isolados, o que impossibilitou a subtipagem dos isolados de Erysipelothrix spp. pelos testes de sensibilidade. Dentre os primers testados no AFLP, o HI-G foi o mais adequado à tipagem molecular de Erysipelothrix spp. Apesar do AFLP/HI-G e da PFGE apresentarem o mesmo índice discriminatório (0,98), a PFGE apresentou melhor relação com os dados epidemiológicos que o AFLP/HI-G, tendo em conta os agrupamentos por ela gerados. Independente da técnica molecular empregada, não foi observado a discriminação entre isolados recentes e históricos, bem como um padrão epidemiológico fixo de agrupamento dos mesmos. Contudo, o AFLP/HI-G pode ser uma alternativa interessante para diferenciar as espécies de Erysipelothrix, assim como a PFGE tem grande potencial para agrupar isolados deste gênero de acordo com os sorotipos. / Erysipelothrix rhusiopathiae is an important pathogen in swine production and even with the frequent use of vaccines against it in most of Brazilian pig farms, the occurrence of clinical manifestations of its infection has been widely observed and diagnosed. Given the resurgence of this agent as a cause of economic losses to the national pig industry and its potential risk to public health, this study aimed to characterize 151 samples of Erysipelothrix spp. isolated from swine in last 30 years by serotyping, determination of antimicrobial susceptibility, AFLP and PFGE. Among the 151 isolates, 139 were classified in 18 different serotypes (1a, 1b, 2a, 2b, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 11, 12, 15, 17, 19, 21, 24 and 25) and serotype 2b was the most frequent. The susceptibility profiles were very similar among the isolates, which precluded the subtyping of Erysipelothrix spp. isolates by sensitivity tests. Among the primers tested in AFLP, the HI-G was the most suitable for molecular typing of Erysipelothrix spp. Despite AFLP/HI-G and PFGE provided the same discriminatory index (0.98), PFGE presented better relationship with epidemiological data than AFLP/HI-G, given the types of groups generated by it. Regardless of the molecular technique employed, there was no discrimination between recent and historical isolates as well as a fixed epidemiological pattern of grouping them. Nevertheless AFLP/HI-G could be an interesting alternative for Erysipelothrix species discrimination, even as PFGE has a good potential to diferenciate this genus according to serotypes.
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Caracterização fenotípica e genotípica de isolados de Actinobacillus pleuropneumoniae provenientes de diferentes estados brasileiros / Phenotypic and genotypic characterization of Actinobacillus pleuropneumoniae isolates from different Brazilian statesBárbara Letícia Pereira Costa 11 April 2017 (has links)
A infecção por Actinobacillus pleuropneumoniae, doença conhecida como pleuropneumonia suína, assumiu grande importância na suinocultura moderna devido à alta ocorrência observada nos rebanhos. O impacto da doença está relacionado à capacidade do agente em causar pneumonia severa, levando os animais a óbito ou doença crônica, resultando em graves prejuízos zootécnicos. Diante desse cenário, o controle e monitoramento do agente se faz importante por meio da identificação dos diferentes sorotipos, da análise genética e da determinação dos perfis de resistência aos antimicrobianos. O objetivo do presente estudo foi caracterizar fenotípica e genotípicamente estirpes de Actinobacillus pleuropneumoniae isoladas a partir de quadros de pneumonia em suínos. Um total de 85 estipes de A. pleuropneumoniae foram submetidas a reação em cadeia pela polimerase (PCR) para identificação e sorotipagem, determinação da concentração inibitória mínima de antimicrobianos, polimorfismo do comprimento de fragmentos amplificados (AFLP) e eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE). Os sorotipos mais frequentes foram: 5 (38,8%), 10 (29,4%), 7 (5,9%), 8 (5,9%) e 6 (3,5%), sendo que 14 (16,5%) estirpes foram não tipáveis. Foi observada alta heterogeneidade de perfil genético entre as estirpes analisadas, tanto pelo AFLP quanto pelo PFGE, e o índice discriminatório para cada técnica foi 0,97 e 0,84, respectivamente. Todas as estirpes foram sensíveis ao ceftiofur, gentamicina, tulatromicina e tilmicosina, sendo que 98,8% das estirpes foram resistentes à tilosina e altas taxas de resistência foram observadas ainda para as tetraciclinas, clindamicina e sulfadimetoxina. / Infection by Actinobacillus pleuropneumoniae, a disease known as swine pleuropneumonia, has gained greater relevance to modern pig farming due to the high recurrence rate observed in herds. The impact of the disease relates to the capacity of the agent to cause severe pneumonia, leading to animal death or chronic conditions, thus resulting in severe zootechnical losses. In view thereof, the control and monitoring of the agent is key, being performed through the identification of different serotypes, genetic analysis and determination of antimicrobial resistance profiles. The objective of this study was to characterize phenotypically and genotypically Actinobacillus pleuropneumoniae strains isolated from swine with clinical presentation of pneumonia. A total of 85 strains of A. pleuropneumoniae were subject to polymerase chain reaction (PCR) for identification and serotyping, determination of the minimal inhibitory concentration, amplified fragment length polymorphism (AFLP) and pulsed field gel electrophoresis typing techniques (PFGE). Most recurring serotypes were: 5 (38.8%), 10 (29.4%), 7 (5.9%), 8 (5.9%) and 6 (3.5%), of which 14 (16.5%) strains were nontypeable. High genetic heterogeneity was observed for both AFLP and PFGE, and the discriminatory index for each technique was 0.97 and 0.84, respectively. All 85 strains were susceptible to ceftiofur, gentamicin, tulatromicin and tilmicosin, 84 of which were resistant to tylosin, and high resistance rates were also observed for clindamycin, tetracyclines and sulfadimethoxine.
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Análise morfológica, bioquímica e genética do brilho do tegumento em variedades de feijoeiro (Phaseolus vulgaris L.) / Morphological, biochemical and genetic analysis of seed coat shininess in common bean varieties (Phaseolus vulgaris L.)Enéas Ricardo Konzen 03 June 2011 (has links)
Diversas características interferem na aceitabilidade de variedades de feijoeiro (Phaseolus vulgaris L.) no mercado consumidor, como o brilho do tegumento. Geralmente, o feijão com brilho é rejeitado para consumo, pois apresenta difícil cozimento. No entanto, o brilho pode conferir resistência ao ataque de insetos e patógenos à semente, podendo constituir uma vantagem para o melhoramento do feijão. A presença de brilho é devida à expressão do gene Asp (Asper) na forma alélica dominante. Genótipos aspasp, portanto, apresentam tegumento opaco. Outro gene, J (Joker), interfere na expressão da característica, de modo que o alelo recessivo j diminui a intensidade do brilho e altera a coloração do tegumento. J é considerado o precursor de polifenois denominados pró-antocianidinas. Na presença j estes compostos não são sintetizados. No presente trabalho foram genotipadas variedades de feijoeiro crioulas [Serro Azul Brilhante (SAB - tegumento brilhante) e Fosco (SAF - tegumento opaco) e Puebla-152 (P-152 - brilhante)] e a cultivar Diamante Negro (DN - opaco), contrastantes para o brilho do tegumento. Análises fenotípicas, morfológicas e bioquímicas permitiram inferir os genótipos das variedades e avaliar a segregação do brilho em populações derivadas de cruzamentos entre contrastantes: SAF x SAB e P-152 x DN. Os resultados mostraram que as variedades não variam para J, apenas para Asp, sendo que SAB e P-152 carregam Asp e SAF e DN o alelo asp. Em todos os cruzamentos a segregação foi de três brilhantes (Asp) para um opaco (asp) na geração F2 e de cinco brilhantes para três opacos em F3. A partir dos resultados, as variedades foram contrastadas por meio de marcadores de AFLP, analisando-se a similaridade genética e identificando-se bandas diferenciadoras entre as mesmas. A partir disso, foi empregada a metodologia de Bulk Segregant Analysis na população F2 de P-152 x DN, para encontrar marcadores AFLP candidatos ao mapeamento do brilho. Foram encontrados marcadores associados que, no entanto, revelaram serem falsos positivos. Análises utilizando marcadores microssatélites ou análises bioinformáticas de sintenia com a soja poderiam ser realizadas, visando detectar marcadores precisamente ligados à característica / Several characteristics interfere in acceptability of common bean varieties (Phaseolus vulgaris L.) by consumers, like seed coat shininess. Generally, varieties with shiny seed coat are rejected by consumers due to their difficult cooking. However, shininess could confer resistance to insects attak and also pathogens to the seed, giving an advantage for this trait in common bean breeding. The presence of shininess is due the expression of the Asp (Asper) gene in the dominant allelic form. Other gene, J (Joker), interferes on the expression of this characteristic, with j conditioning a less shiny seed coat and changing seed coat color. J is considered the precursor of a class of polyfenols called pro-anthocyanidins. In the presence of j these compounds are not synthesized. In the present work we genotyped common bean landraces [Shiny Serro Azul (SAB shiny seed coat) and Dull Serro Azul (SAF dull seed coat) and Puebla-152 (P-152 shiny)] and the cultivar Diamante Negro (DN dull), contrasting for seed coat shininess. Phenotypic, morphological and biochemical analyses allowed to genotype all varieties and evaluate the segregation of shinines in populations derived from crosses between contrasting genotypes: SAF x SAB and P-152 x DN. Results showed that varieties do not vary for J, only for Asp. SAB and P-152 carry Asp and SAF and DN carry asp. In all crosses segregation was of three shiny (Asp) for one opaque (asp) in F2 and of five shiny for three dull in F3. Based on the results, all varities were contrasted by AFLP markers, analyzing genetic similarity and identifying differencial bands among all of them. Further it was used the Bulk Segregant Analysis method in population F2 of the cross P-152 x DN, aiming to find candidate AFLP markers for shininess mapping. We found markers associated but they revealed to be false positives. Further analyses using microsatellite markers or sinteny comparisons with soybean genome could be done, aiming to find specific markers linked to this trait
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Isolamento e caracterização genotípica de cepas de Bordetella avium através da eletroforese em campo pulsado (PFGE) e polimorfismo do comprimento de fragmentos amplificados (AFLP) / Isolation and genotypic characterization of Bordetella avium strains by pulsed field gel electrophoresis (PFGE) and amplified fragment length polymorphism (AFLP)Cleise Ribeiro Gomes 21 September 2011 (has links)
A Bordetella avium é o agente etiológico da bordetelose aviária, uma doença altamente contagiosa que afeta o trato respiratório superior das aves. B. avium adere-se preferencialmente às células do epitélio ciliado traqueal, promovendo inflamação e deformação da mucosa respiratória. As infecções do trato respiratório das aves resultam em grandes prejuízos para toda indústria avícola, desta forma, o presente estudo teve como objetivo a caracterização genotípica e de sensibilidade a antimicrobianos de isolados de B. avium provenientes de perus com histórico de aerossaculite. Dentre os 300 animais examinados, isolou-se B. avium de 13 aves e foram selecionadas 20 cepas do agente para os estudos posteriores. Através do antibiograma realizado pela técnica de disco difusão observou-se um alto número de cepas resistentes aos antimicrobianos beta lactâmicos (amoxacilina, ampicilina, penicilina e ceftiofur), assim como para lincomicina, sulfonamidas e combinação sulfonamidas/trimetoprima (cotrimoxazol) e uma grande heterogeneidade resultando em 15 perfis distintos. Os antimicrobianos com maiores níveis de sensibilidade foram o florfenicol, seguidos pelas quinolonas, doxiciclina e pelas tetraciclinas. Todas as cepas foram caracterizadas através da PFGE e do AFLP, apresentando 15 pulsotipos e 16 perfis genotípicos respectivamente. Os métodos fenotípicos e genotípicos apresentaram capacidade discriminatória semelhante e revelaram uma grande diversidade dentre os isolados analisados. / Bordetella avium is the etiologic agent of avian bordetellosis, a highly contagious disease that affects the upper respiratory tract of birds. B. avium adheres preferentially to ciliated tracheal epithelial cells, promoting inflammation and deformation of the respiratory mucosa. Infections of the respiratory tract of birds resulting in large losses for the entire poultry industry in this way, this study aimed to characterize genotypic and antimicrobial susceptibility of isolates of B. avium from turkeys with a history of Airsacculitis. Among the 300 animals examined, B. avium was isolated from 13 turkeys and 20 strains were selected for further studies. Through the antibiogram performed by disk diffusion technique was observed a high number of strains resistant to beta-lactamic antibiotics (amoxicillin, ampicillin, penicillin and ceftiofur), as well as, lincomycin, sulfonamides and sulfonamide combination/ trimethoprim (cotrimoxazole) and a high level of heterogeneity resulting in 15 different profiles. The antimicrobials with higher levels of sensitivity were florfenicol, followed by quinolones, doxycycline and tetracycline. All strains were characterized through to PFGE and AFLP, presenting 15 pulsotypes and 16 genetic profiles, respectively. Phenotypic and genotypic methods showed similar discriminatory capacity and presented a high diversity among isolates examined.
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Caracterização de amostras de Erysipelothrix spp. isoladas de suínos nos últimos 30 anos / Characterization of Erysipelothrix spp. strains isolated from swine in last 30 yearsCoutinho, Tania Alen 24 June 2010 (has links)
Erysipelothrix rhusiopathiae é um importante patógeno em suinocultura e apesar do uso freqüente de vacinas contra o mesmo na maior parte das propriedades produtoras do país, a ocorrência de quadros clínicos da infecção tem sido amplamente observada e diagnosticada. Tendo em vista o ressurgimento deste agente como causa de prejuízos econômicos para a indústria suinícola nacional e seu potencial risco à saúde pública, este estudo teve como objetivo caracterizar 151 amostras de Erysipelothrix spp. isoladas de suínos nos útlimos 30 anos por meio de sorotipagem, determinação da susceptibilidade antimicrobiana, AFLP e PFGE. Dentre os 151 isolados, 139 foram classificados em 18 sorotipos diferentes (1a, 1b, 2a, 2b, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 11, 12, 15, 17, 19, 21, 24 e 25), sendo que o sorotipo 2b foi o mais freqüente. Os perfis de susceptibilidade antimicrobiana foram muito semelhantes entre os isolados, o que impossibilitou a subtipagem dos isolados de Erysipelothrix spp. pelos testes de sensibilidade. Dentre os primers testados no AFLP, o HI-G foi o mais adequado à tipagem molecular de Erysipelothrix spp. Apesar do AFLP/HI-G e da PFGE apresentarem o mesmo índice discriminatório (0,98), a PFGE apresentou melhor relação com os dados epidemiológicos que o AFLP/HI-G, tendo em conta os agrupamentos por ela gerados. Independente da técnica molecular empregada, não foi observado a discriminação entre isolados recentes e históricos, bem como um padrão epidemiológico fixo de agrupamento dos mesmos. Contudo, o AFLP/HI-G pode ser uma alternativa interessante para diferenciar as espécies de Erysipelothrix, assim como a PFGE tem grande potencial para agrupar isolados deste gênero de acordo com os sorotipos. / Erysipelothrix rhusiopathiae is an important pathogen in swine production and even with the frequent use of vaccines against it in most of Brazilian pig farms, the occurrence of clinical manifestations of its infection has been widely observed and diagnosed. Given the resurgence of this agent as a cause of economic losses to the national pig industry and its potential risk to public health, this study aimed to characterize 151 samples of Erysipelothrix spp. isolated from swine in last 30 years by serotyping, determination of antimicrobial susceptibility, AFLP and PFGE. Among the 151 isolates, 139 were classified in 18 different serotypes (1a, 1b, 2a, 2b, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 11, 12, 15, 17, 19, 21, 24 and 25) and serotype 2b was the most frequent. The susceptibility profiles were very similar among the isolates, which precluded the subtyping of Erysipelothrix spp. isolates by sensitivity tests. Among the primers tested in AFLP, the HI-G was the most suitable for molecular typing of Erysipelothrix spp. Despite AFLP/HI-G and PFGE provided the same discriminatory index (0.98), PFGE presented better relationship with epidemiological data than AFLP/HI-G, given the types of groups generated by it. Regardless of the molecular technique employed, there was no discrimination between recent and historical isolates as well as a fixed epidemiological pattern of grouping them. Nevertheless AFLP/HI-G could be an interesting alternative for Erysipelothrix species discrimination, even as PFGE has a good potential to diferenciate this genus according to serotypes.
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Studium genetické diverzity kolonií Pectinatella magnifica / Study of genetic diversity of colonies Pectinatella magnificaMORAVCOVÁ, Vendula January 2015 (has links)
Pectinatella magnifica is a colony of freshwater organisms, which are most often found on the submerged parts/branches of coastal plants, but also fixed to stones, growing at the bottom of ponds, or free - floating. These organisms can be found mostly in oligotrophic to mesotrophic waters, and appear to thrive in temperatures that reach 20°C during colonisation. They were first found and described in Philadelphia in 1851, by Joseph Leidy. Although Pectinatella magnifica originates from North America, it has now become an invasive species on the other continents. The first recorded occurrence in Europe was during the 1980s in Hamburg, where it was probably transported on ships' hulls. In the Czech Republic it was recorded for the first time in rivers Vltava and Labe in the first half of the 20 th century. The most common method of its propagation is through internal buds, called statoblasts, fitted with hooks that make it able to cling to any surface, and allow easy distribution over long distances and otherwise impossible terrain. This study uses AFLP analysis of statoblast DNA to analyse the genetic diversity within P. magnifica colonies themselves, changes over time, and between different sites within the Protected Landscape Area (PLA) and a Biosphere Reserve (BR) of Třeboňsko, namely ponds Veseli I, Staňkovský, Nový Kanclíř, Cep, Vlkov and Nový Lipnický.
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Caracterização fenotípica e genotípica de isolados de Arcobacter spp. provenientes de suínos / Phenotypic and Genotypic characterization of Arcobacter spp. strains from swineDébora Dirani Sena de Gobbi 11 December 2013 (has links)
Dentre as espécies conhecidas do gênero Arcobacter, as espécies A. butzleri, A. cryaerophilus e A. skirrowii são consideradas potecialmente zoonóticas, podendo ser transmitidas por alimentos de origem animal. O presente estudo teve como objetivos isolar e caracterizar fenotipica e genotipicamente cepas de Arcobacter spp. provenientes de carcaças de suínos e amostras de ambiente de abatedouro localizado no Estado de São Paulo. As cepas isoladas foram submetidas a reação em cadeia pela polimerase para a identificação e detecção de um grupo de genes de virulência. A concentração inibitória mínima frente a nove antimicrobianos usados para o controle da infecção pelo agente foi determinada e as cepas foram analisadas através do PFGE e pelo AFLP. Dentre as 30 carcaças avaliadas, 25 foram positivas para o agente e 70 cepas foram selecionadas e identificadas como Arcobacter spp. As espécies isoladas foram A. butzleri (n=61), A. cryaerophilus (n=7) e A. skirrowii (n=2). A frequência dos possíveis genes de virulência encontrada variou de 71,4% a 100% para os genes tlyA, pldA, cj1349, ciaB, cadF e mviN. Não foram detectados os genes hecA, hecB e irgA. O perfil de virulência ciaB/ cj1349/ mviN/ cadF/ pldA/ tlyA foi o mais frequente e detectado em 66% das cepas. Todas as cepas foram sensíveis à gentamicina e tetraciclina e 77,1% foram multirresistentes, dentre estas o perfil mais frequente foi de resistência a azitromicina/ florfenicol/ ácido nalidíxico/ telitromicina/ clindamicina Houve grande diversidade genotípica entre as cepas através do PFGE e do AFLP, e ambas a técnicas apresentaram o mesmo poder discriminatório na análise das cepas isoladas. / Among the known species of the genus Arcobacter, the species A. butzleri, A. cryaerophilus and A. skirrowii are considered potentially zoonotic and can be transmitted by food of animal origin. This study aimed to isolate and characterize phenotypically and genotypically strains of Arcobacter spp from swine carcasses and slaughterhouse environment samples located in the State of São Paulo. The isolated strains were subjected to polymerase chain reaction for identification and detection of a group of putative virulence genes. The minimum inhibitory concentration was determined against nine antimicrobials indicated for the control of infection by the agent and the strains were analyzed by PFGE and by AFLP. Among the 30 carcasses evaluated, 25 were positive for the agent and 70 strains were selected and identified as Arcobacter spp. The isolated species were A. butzleri (n = 61), A. cryaerophilus (n = 7) and A. skirrowii (n = 2). The frequency of virulence genes found ranged from 71.4 % to 100 % for genes tlyA , pldA , cj1349 , ciaB , cadF and mviN . The genes hecA, hecB and irgA were not detected. The virulence profile ciaB/ cj1349/ mviN/ cadF/ pldA/ tlyA was the most frequent and detected in 66 % of the strains. All strains were susceptible to gentamicin and tetracycline and 77.1% were multirresistant, among these the most common profile of resistance was azithromycin/ florfenicol/ nalidixic acid/ telithromycin/ clindamycin There were large genotypic diversity among strains by PFGE and AFLP and both techniques showed the same discriminatory power in the analysis of the isolated strains.
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Caracterização genotípica e fenotípica de cepas de Escherichia coli associadas à doença do edema em suínos / Genotypic and phenotypic characterization of E. coli associated to edema disease in swineVasco Tulio de Moura Gomes 30 January 2013 (has links)
A doença do edema afeta os leitões desmamados e é causada por cepas de Escherichia coli adaptadas ao hospedeiro e produtoras da toxina Stx2e. A doença do edema é caracterizada por edema de pálpebras, ataxia, pedalagem, dificuldade locomotora, e morte súbita. No presente estudo foram avaliadas 158 cepas de E. coli positivas para presença do gene codificador da toxina Stx2e isoladas de 62 animais provenientes de 13 granjas localizadas nos Estados do Rio Grande do Sul, Santa Catarina, Mato Grosso, Paraná, São Paulo, Goiás e Minas Gerais. As cepas foram submetidas a determinação do perfil de resistência, caracterização dos genes de virulência, determinação do grupo filogenético, expressão da toxina em cultivos de célula Vero, caracterização genotípica através da eletroforese em campo pulsado (PFGE) e polimorfismo do comprimento de fragmentos amplificados com uma única enzima (SE-AFLP). Dentre as 158 cepas stx2e+ foram identificadas 83,5% (132/158) apresentando resistência a três classes de antimicrobianos ou mais. Altos níveis de resistência forma identificados contra tetraciclina, sulfonamidas e florfenicol. A frequência dos genes de virulência associados a doença do edema como a fímbria F18, por exemplo, foi baixa em relação a outros estudos. Todas as 158 cepas testadas apresentaram a expressão da toxina e efeito citotóxico em células Vero. A caracterização dos grupos filogenéticos permitiu a distribuição das cepas nos quatro grupos descritos a seguir: grupo A 27,2% (43/158), grupo B1 3,8% (6/158), grupo B2 39,2% (62/158) e grupo D 29,8% (47/158). As cepas foram caracterizadas através da PFGE e do SE-AFLP e ambas as técnicas apresentaram altos índices discriminatórios (0,98 e 0,99 respectivamente). A associação mais frequente nas duas técnicas genotípicas foi observada em relação ao animal e a granja de origem. Apesar de pertencerem a um patotipo definido (STEC) e de serem altamente especializadas em relação ao hospedeiro, o suíno, foi observada uma grande variabilidade genética e de perfis de resistência entre as cepas de E. coli estudadas. / Edema disease affects weaning piglets and is caused by a host adapted Escherichia coli and producer of Stx2e toxin. The edema disease is characterized by swollen eyelids, ataxia, recumbence, convulsions, paralysis, or sudden death. In the present study were evaluated 158 E. coli strains Stx2e toxin gene positive isolated from 62 animals, from 13 swine herds located at Rio Grande do Sul, Santa Catarina, Mato Grosso, Paraná, São Paulo, Goiás and Minas Gerais States. Strains were submitted to resistance profile determination, virulence genes detection, phylogenetic group characterization, toxin expression in Vero cell culture, genotypic characterization through pulsed field gel electrophoresis (PFGE) and single enzyme amplified fragments length polymorphism (SEAFLP). Among the 158 strains stx2e+ were identified 83.5% (132/158) resistant to more than three or more classes of antimicrobials, High levels of resistance were found against tetracycline, sulfonamide and florfenicol. The frequency of virulence genes associated to edema disease as F18 fimbriae, for example, was low in relation to other studies. All 158 tested strains presented Stx2e toxin expression and cytotoxic effect in Vero cell culture. The characterization of phylogenetic groups permitted the distribution of strains in four groups described as follow: group A 27.2% (43/158), group B1 3.8% (6/158), group B2 39.2% (62/158) and group D 29.8% (47/158). The strains were characterized through PFGE and the SE-AFLP, and both techniques presented high discriminatory index (0.98 and 0.99 respectively). The association more frequently in both techniques was observed in relation to animal and herd origin. Despite to belong to one defined pathotype (STEC) and to be highly specialized in relation to host, the swine, it was observed a high variability of genetic and resistance profile among tested E. coli.
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Isolamento e caracterização de Campylobacter coli e Campylobacter jejuni em cortes de carne de frango e suíno comercializados na cidade de São Paulo / Isolation and characterization of Campylobacter coli and Campylobacter jejuni in chicken and pork meat cuts commercialized in the city of São PauloMaria Garcia Spindola 27 September 2017 (has links)
Atualmente, a campilobacteriose representa uma importante zoonose tanto em países desenvolvidos quanto em países em desenvolvimento. No Brasil, vários estudos relatam a alta frequência de suínos eliminando o agente nas fezes, porém, a contaminação da carne suína comercializada tem sido pouco avaliada, principalmente no que diz respeito à presença de Campylobacter spp. A incidência deste agente em cortes de carne de aves é mais descrita, porém ainda faltam estudos que esclareçam a epidemiologia da doença. Os objetivos principais do presente estudo foram avaliar a presença de Campylobacter spp. em cortes de carne de frangos e suínos vendidos em mercados municipais, açougues e mercados de pequeno porte distribuídos nas cinco regiões do município de São Paulo. Das 115 amostras de origem suína avaliadas sete se mostraram positivas ao isolamento de Campylobacter coli e, das 105 amostras de carne de frango, 31 estavam contaminadas por Campylobacter jejuni ou Campylobacter coli. Dentre as 38 amostras de carne de frango e suíno positivas foram selecionadas 60 estirpes, as quais foram caracterizadas quanto à espécie, utilizando a reação em cadeia pela polimerase e a espectrometria de massa MALDI-TOF, foram ainda avaliadas quanto ao perfil de resistência a antimicrobianos e foram submetidas a genotipagem pelo polimorfismo de comprimento de fragmentos amplificados (AFLP). A partir dos resultados obtidos seis estirpes foram selecionadas para realização do sequenciamento do genoma completo e a partir da análise dos genomas foram identificados os STs, os genes de resistência e genes de virulência. / Currently, Campylobacteriosis represents an important zoonosis in both developed and developing countries. In Brazil, several studies report a high frequency of pigs excreting the agent in the feces, but the contamination of marketed pork has been insufficiently evaluated, especially with regard to the presence of Campylobacter spp. The incidence of this agent in cuts of poultry meat is more detailed; however, there are still studies lacking that clarify the epidemiology of the disease. The main aims of the present study were to evaluate the presence of Campylobacter spp. in chicken and pork cuts sold in municipal markets, butchers and small markets distributed in the five regions of the city of São Paulo. Of the 115 pork samples evaluated, seven were Campylobacter coli isolation positive and 31 of the 105 chicken samples were contaminated with Campylobacter jejuni or Campylobacter coli. Of the 38 chicken and pork positive samples, 60 strains were selected, which were characterized by species using polymerase chain reaction and MALDI-TOF mass spectrometry. They were also assessed for antimicrobial resistance profile and were genotyped by amplified fragment length polymorphism (AFLP). From the results obtained six strains were selected to carry out the complete genome sequencing and from the genome analysis the STs, the resistance genes and the virulence genes were identified.
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Caracterização fenotípica e genotípica de amostras de Salmonella spp. isoladas de suínos / Phenotypic and genotypic characterization of Salmonella spp. strains isolated from pigsLuciane Tieko Shinya Zucon 27 June 2008 (has links)
Entre os microrganismos relevantes para a segurança alimentar, bactérias do gênero Salmonella tem se destacado como causadoras de toxinfecções, sendo motivo de preocupação constante para a cadeia de produção de aves e suínos. Os objetivos deste trabalho foram estudar a ocorrência de Salmonella spp. em suínos sadios ao abate e em animais apresentando sinais clínicos de salmonelose, tipificação dos isolados através da sorotipagem, polimorfismo do comprimento de fragmentos amplificados (AFLP) e eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE). Foram examinados 50 animais com sintomatologia sugestiva de salmonelose de 12 granjas dos Estados de São Paulo, Paraná e Rio Grande do Sul e analisadas amostras de fezes, linfonodos e suabes de carcaças de 124 animais de quatro frigoríficos do Estado de São Paulo. Dos suínos com sintomatologia clínica, 38% dos animais foram positivos para o isolamento de Salmonella spp., sendo selecionadas 45 cepas, classificadas como S.Typhimurium (29/45), S. Choleraesuis (9/45), S. Infantis (3/45) e S. enterica subsp. enterica (4/45). Dos 124 suínos sadios, 16,12% foram positivos para o agente, sendo isoladas 39 cepas que foram classificadas como S. London (11/39), S. Anatum (11/39), S. Typhimurium (8/39), S. Agona (2/39), S. Enteritidis (2/39) e S. enterica subsp. enterica (5/39). Através do AFLP, a caracterização genética dos isolados revelou índice discriminatório igual a 0,85 e gerou 12 perfis distintos. O índice discriminatório do PFGE foi 0,96 apresentando 31 padrões distintos. Ambas as técnicas possibilitaram uma boa correlação entre isolados, seus sorotipos e locais de isolamento, sugerindo grande potencial para sua aplicação na genotipagem de Salmonella spp. / Among relevant microorganisms to food security, Salmonella has been highlighted as a major cause of food borne diseases, being a constant concern for poultry and pig production chain. The goal of this study was to investigate the Salmonella spp incidence in healthy pigs at slaughter, as well as in pigs showing salmonellosis clinical signs, characterize strains by serotyping, Amplified fragment length polymorphism (AFLP) and Pulsed field gel electrophoresis (PFGE). Fifty animals, presenting salmonelosis suggestive clinical symptoms, from 12 swine herds from Sao Paulo, Parana and Rio Grande do Sul states were examined and clinical materials such as stool samples, lymph nodes and carcass swab from 124 animals from four Slaughterhouses in Sao Paulo state were analyzed. Among the pigs with clinical symptoms, 38% of the animals were positive for the Salmonella spp. isolation. Forty five strains were selected and classified as S.Typhimurium (29/45), S. Choleraesuis (9/45), S. Infantis (3/45) and S. enterica subsp. enterica (4/45). From the 124 healthy pigs studied, 16.12% were positive for the agent. Thirty nine strains were isolated and classified, by serotyping, as S. London (11/39), S. Anatum (11/39), S. Typhimurium (8/39), S. Agona (2/39), S. Enteritidis (2/39) and S. enterica subsp. enterica (5/39). Through AFLP, genetic characterization of isolates showed discriminatory index of 0.85 and generated 12 distinct profiles. The PFGE discriminatory index was 0.96, showing 31 distinct patterns. Both techniques allowed a good correlation between the isolates, its serotypes and isolation locations, suggesting great potential of its application in genotyping of Salmonella spp.
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