A agalaxia contagiosa é uma doença de notificação obrigatória que causa severas perdas econômicas para produção de ovinos e caprinos mundialmente. Apesar de seu impacto na produção animal, pouco se sabe sobre os fatores de virulência e patogenicidade do M. agalactiae (principal agente etiológico). Desta maneira, o presente estudo possuiu como objetivo a identificação, purificação e caracterização de proteínas antigênicas de M. agalactiae. Para tanto, quatro proteínas de superfície com potencial antigênico (WP_011949419.1, WP_011949418.1 (P40), WP_011949336.1, WP_011949770.1) foram selecionadas. Essas proteínas foram expressas em Escherichia coli e purificadas em coluna de níquel. As proteínas purificadas foram avaliadas quanto a antigenicidade em Western blotting utilizando soros de caprinos naturalmente infectados com M. agalactiae. Todas as proteínas expressas foram imunorreativas aos soros de caprinos naturalmente infectados, demonstrando que as proteínas utilizadas nesse estudo são possivelmente antigênicas e possuem epítopos acessíveis. / The Contagious agalactia is a notifiable disease that causes severe economic losses to sheep and goats worldwide. Despite its impact on animal production, little is known about the virulence factors and pathogenicity of M. agalactiae (main etiological agent). Thus, the present study identified, purified and characterized antigenic proteins of M. agalactiae. Therefore, four surface proteins with antigenic potential (WP_011949419.1, WP_011949418.1 (P40), WP_011949336.1, WP_011949770.1) were selected. These proteins were expressed in Escherichia coli and purified on nickel column. The purified proteins were assayed for antigenicity by Western blotting using goat sera naturally infected with M. agalactiae. All expressed proteins were immunoreactive with sera from naturally infected goats, demonstrating that the proteins used in this study are possibly antigenics and it have acessible epitopes.

A agalaxia contagiosa é uma doença de notificação obrigatória que causa severas perdas econômicas para produção de ovinos e caprinos mundialmente. Apesar de seu impacto na produção animal, pouco se sabe sobre os fatores de virulência e patogenicidade do M. agalactiae (principal agente etiológico). Desta maneira, o presente estudo possuiu como objetivo a identificação, purificação e caracterização de proteínas antigênicas de M. agalactiae. Para tanto, quatro proteínas de superfície com potencial antigênico (WP_011949419.1, WP_011949418.1 (P40), WP_011949336.1, WP_011949770.1) foram selecionadas. Essas proteínas foram expressas em Escherichia coli e purificadas em coluna de níquel. As proteínas purificadas foram avaliadas quanto a antigenicidade em Western blotting utilizando soros de caprinos naturalmente infectados com M. agalactiae. Todas as proteínas expressas foram imunorreativas aos soros de caprinos naturalmente infectados, demonstrando que as proteínas utilizadas nesse estudo são possivelmente antigênicas e possuem epítopos acessíveis. / The Contagious agalactia is a notifiable disease that causes severe economic losses to sheep and goats worldwide. Despite its impact on animal production, little is known about the virulence factors and pathogenicity of M. agalactiae (main etiological agent). Thus, the present study identified, purified and characterized antigenic proteins of M. agalactiae. Therefore, four surface proteins with antigenic potential (WP_011949419.1, WP_011949418.1 (P40), WP_011949336.1, WP_011949770.1) were selected. These proteins were expressed in Escherichia coli and purified on nickel column. The purified proteins were assayed for antigenicity by Western blotting using goat sera naturally infected with M. agalactiae. All expressed proteins were immunoreactive with sera from naturally infected goats, demonstrating that the proteins used in this study are possibly antigenics and it have acessible epitopes.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-07-29T12:33:02Z No. of bitstreams: 1 Ana Claudia Campos.pdf: 321055 bytes, checksum: 88970805d9ffc7abbb04f6a510d226df (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-29T12:33:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Claudia Campos.pdf: 321055 bytes, checksum: 88970805d9ffc7abbb04f6a510d226df (MD5) Previous issue date: 2008-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The contagious agalactia of ovine and caprine (CAOC) is characterized by a decline and subsequent failure of milk production, arthritis and keratoconjunctivitis causing economic losses in dairy goats and sheep herds. Classic diagnostic is performed by culture and identification of mycoplasmas species. The utilization only of this method to diagnostic has contribute for dissemination of infection and reduced efficiency of the controls measures because your necessity of long time to the diagnostic conclusion. The objective this study was performed and standardized an indirect ELISA using conjugate with protein-G (ELISA-G) and two types of obtained by growth of M. agalactiae antigen. Whole bacterial and sonicated culture was used as antigen to sensibility on microtitre plates. A total of 46 serum sample were obtained in infected goat herd with clinical signs in forty-five period and 40 samples in free herds of disease to standardization and application of ELISA test. The infection status was confirmed by culture of M. agalactiae from milk. Do not had statistical difference between positive and negative controls serum (P/N) when whole or sonicated antigen wereused. The sensibility of ELISA-Gt and ELISA-Gs were of 77,27% and 88,63%, respectively. Specificity were 95,24% for both ELISA. In conclusions, the indirect ELISA-Gt or ELISA-Gs should be utilized as tools for diagnostic of contagious agalactia in goats. / A Agalaxia Contagiosa dos Ovinos e Caprinos (ACOC) é uma enfermidade caracterizada clinicamente por mastite, agalaxia, artrite e ceratoconjuntivite, determinando grandes perdas econômicas em rebanhos ovinos e caprinos leiteiros. O diagnóstico clássico é feito pelo cultivo e isolamento dos micoplasmas envolvidos. A utilização dessa técnica como único método diagnóstico, contribui para a disseminação da infecção e dificulta a implantação de medidas eficazes de controle por requerer longo tempo para conclusão diagnóstica. Por isso, o objetivo deste trabalho foi desenvolver e padronizar um ELISA indireto utilizando a proteína G (ELISA-G) como conjugado e aplicação de dois tipos de antígenos produzidos a partir de M. agalactiae. Antígeno total e sonicado foram utilizados para sensibilizar as microplacas. A padronização da técnica foi realizada utilizando soros caprinos com e sem sinais clínicos de agalaxia contagiosa. Quarenta e seis soros caprinos coletados com intervalo de 45 dias, obtidos em rebanho infectado com sinais clínicos e 40 soros caprinos de rebanhos livres da infecção foram utilizados para avaliação da técnica. A presença de M. agalactiae no rebanho foi confirmada por cultivo de leite em meio Hayflick modificado. Não houve diferença significativa entre os valores da razão positivo/negativo (P/N) dos soros controles quando utilizado antígeno total ou sonicado. A sensibilidade relativa do ELISA-Gt e ELISA-Gs foi de 77,27% e 88,63%, respectivamente, enquanto que a especificidade foi de 95,24% para ambos. Pesquisa de anticorpos em rebanho com quadro clínico característico revelou aumento significativo dos percentuais de densidade óptica (DO) em soros caprinos, coletados com intervalo de 45 dias. Conclui-se que os ELISA podem ser úteis para identificação de rebanhos infectados por agalaxia contagiosa de pequenos ruminantes, com uma relativa vantagem para o ELISA-Gs.