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Desenvolvimento e avaliação de um teste ELISA indireto para o diagnóstico sorológico do mormo em equídeos

TELES, José Andreey Almeida 13 February 2012 (has links)
Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-06-08T14:30:49Z No. of bitstreams: 1 Jose Andreey Almeida Teles.pdf: 1056555 bytes, checksum: 1cd9d8325b9ce830ca450c9fea318bad (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-08T14:30:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jose Andreey Almeida Teles.pdf: 1056555 bytes, checksum: 1cd9d8325b9ce830ca450c9fea318bad (MD5) Previous issue date: 2012-02-13 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Glanders is an infectious-contagious disease of acute or chronic character which principally affects horses, causing enormous losses in the productive chain of this animal. To control the disease, the Ministry of Agriculture, Husbandry and Supply instituted mandatory sanitation measures in the entire national territory which include an official diagnosis through the complement fixation (CF) test, maleinization and sacrifice of the animals that are positive. Nowadays the kits used for the diagnosis of the disease are imported, making their routine application difficult and more expensive. The objective of this study was to standardize an indirect ELISA test, using the proteic extract of Burkholderia mallei isolated from a carrier horse in the state of Pernambuco. The samples were cultivated in 10% blood agar and incubated for 48h at 37ºC; later, one of the isolated colonies was characterized phenotypically and genotypically and immediately cultivated in brain heart infusion (BHI) for enrichment; then it was peaked (repicada) for the Dor-set Henley medium which was incubated at 37ºC under 60rpm for eight weeks. To standardize the test the Protein G Peroxidase Sigma Conjugate was used in the dilution of 1:90.000, with serums diluted in 1:100 and the antigen in 1:400. Sixty serums were used as negative controls, tested before the CF to determine the cutting point which was 0.042nm. After establishing the standardization, 300 samples were tested, of which 99% (297) were in agreement with the results obtained in the CF. At the end, of assay presented 100% sensibility and 98.2% specificity, with predictive (preditivo) positive and negative values of 97.7% and 100% respectively. The Kappa concordance test was 0.98 and the intra and interplac repeatability were 8.8% and 10.3% respectively. From the results obtained, it is possible to affirm that the indirect ELISA test can be used as an efficient diagnosis tool. However, more essays must be carried out to consolidate the reliability of this test. / O mormo é uma enfermidade infecto-contagiosa de caráter agudo ou crônico que acomete principalmente os equídeos, causando enormes prejuízos na cadeia produtiva do cavalo. Para controlar a enfermidade, o Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento instituiu medidas sanitárias obrigatórias em todo território nacional que incluem o diagnóstico oficial pela fixação do complemento (FC), maleinização e sacrifício dos animais positivos. Os kits atuais utilizados no diagnóstico da doença são importados, dificultando e encarecendo sua aplicação na rotina. Objetivou-se com este estudo padronizar um teste de ELISA indireto utilizando o extrato protéico de Burkholderia mallei isolada a partir de equídeo portador no estado de Pernambuco. As amostras foram cultivadas em ágar sangue 10%, incubada por 48h a 37ºC; posteriormente caracterizou-se fenotípica e genotipicamente uma das colônias isoladas, e em seguida a cultivou em BHI para enriquecimento; logo após, esta foi repicada para o meio Dor-set Henley o qual foi incubado a 37ºC sob 60rpm por oito semanas. Para padronização do teste utilizouse o conjugado Proteína G Peroxidase Sigma na diluição de 1:90.000, com soros diluídos em 1:100 e o antígeno em 1:400. Utilizou-se 60 soros como controle negativo testados frente à FC para determinação do ponto de corte o qual ficou em 0,042nm. Feitas as padronizações, foram testadas 300 amostras, onde 99% (297) foram concordantes com os resultados obtidos na FC. Ao final, o ensaio apresentou 100% de sensibilidade e 98,2% de especificidade, com valores preditivo positivo e negativo de 97,7% e 100% respectivamente. O teste de concordância kappa foi 0,98 e a repetibilidade intra e interplaca ficaram em 8,8% e 10,3% respectivamente. Diante dos resultados obtidos durante os ensaios, atesta-se que o teste de ELISA indireto pode ser utilizado como uma ferramenta de diagnóstico eficiente. Entretanto, mais ensaios devem ser realizados visando consolidar a confiabilidade do referido teste.
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Detecção dos agentes etiológicos da malária em símios resgatados em regiões de Mata Atlântica de São Paulo / Detection of etiological agents of malaria in monkeys rescued in Atlantic Forest regions of São Paulo

Yamasaki, Tasciane 28 April 2011 (has links)
Foram analisadas, para a detecção de plasmódios, 50 amostras de sangue de bugios (Alouatta guariba clamitans) resgatados de várias áreas circundadas pela Mata Atlântica, pertencentes à região metropolitana da cidade de São Paulo. Para tanto, 20 e 30 amostras das regiões de resgate norte e sul respectivamente, foram analisadas pelas técnicas de microscopia, análise molecular e sorologia. Apenas uma lâmina de animal proveniente da região sul foi positiva para Plasmodium sp. A fim de encontrar um consenso molecular (dois ou mais resultados idênticos em PCR), utilizamos três protocolos de PCR. A porcentagem de infecções por plasmódios, detectada por PCR foi de 13,3% (04/30) e 6.6% (02/30) para Plasmodium vivax e P. malariae respectivamente nos animais resgatados na região sul, enquanto que na região norte 25% (05/20) das amostras foram positivas apenas para Plasmodium vivax. As médias geométricas em imunofluorescência indireta (IFI) foram maiores para Plasmodium vivax, seguidas das médias para P. malariae e P. falciparum nas duas regiões. As porcentagens de positividade para anticorpos contra a proteína circumsporozoíta (CSP) foram 30% (9/30), 13,6% (3/22), 3,84% (1/26), 23% (7/30), 27,6% para Plasmodium vivax VK210, P. vivax VK247, P. vivax like, P. malariae/P. brasilianum e P. falciparum respectivamente em regiões ao sul e 10% (2/20), 30,8% (4/13), 11,1% (2/18), 15% (3/20), 33,3% (6/18) para P. vivax VK210, P. vivax VK247, P. vivax like, P. malariae/P. brasilianum e P. falciparum respectivamente em regiões ao norte. Com relação a positividade de anticorpos contra a proteína MSP-119, estas foram de 30% (9/30) para o sul e 10% (2/20) para o norte. Nenhuma amostra foi positiva para Pf- MSP119 / In order to detect Plasmodium, fifty blood samples of holler monkeys (Alouatta guariba clamitans), collected in areas surrounded by the Atlantic Forest and located in the metropolitan region of São Paulo city, were analysed. Thus, 20 and 30 samples from the northern and southern areas, respectivelly, were examined by microscopy techniques, molecular analysis and sorology. Only one animal slide from the Southern area was positive for Plasmodium sp. In order to achieve a molecular agreement (two or more identic results on PCR), three PCR protocols were applied. The percentage of Plasmodium infections detected by PCR was 13.3% (04/30) and 6.6% (02/30) for Plasmodium vivax and P. malariae, respectivelly, in animals collected in the Southern area. Meanwhile, in the Northern area, 25% (05/20) of the samples were exclusively positive for Plasmodium vivax. The geometric means titles in indirect immunofluorescence were higher for Plasmodium vivax followed by P. malariae and P. falciparum in both areas. Percentages of positive results for antibodies against circumsporozoite protein (CSP) were of 30% (9/30); 13.6% (3/22); 3.84% (1/26); 23% (7/30); 27.6% for Plasmodium vivax VK210, P.vivax VK247, P. vivax like, P.malariae/P.brasilianum and P. falciparum, respectively in Southern areas and 10% (2/20), 30.8% (4/13), 11.1% (2/18), 15% (3/20), 33.3% (6/18) for P. vivax VK210, P.vivax VK247, P. vivax like, P. malariae/P.brasilianum and P. falciparum, respectivelly, in Northern areas. Antibodies with positive results against MSP-119 protein were 30% (9/30) in the South and 10% (2/20) in the North. None of the samples were positive for Pf-MSP119
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Detecção dos agentes etiológicos da malária em símios resgatados em regiões de Mata Atlântica de São Paulo / Detection of etiological agents of malaria in monkeys rescued in Atlantic Forest regions of São Paulo

Tasciane Yamasaki 28 April 2011 (has links)
Foram analisadas, para a detecção de plasmódios, 50 amostras de sangue de bugios (Alouatta guariba clamitans) resgatados de várias áreas circundadas pela Mata Atlântica, pertencentes à região metropolitana da cidade de São Paulo. Para tanto, 20 e 30 amostras das regiões de resgate norte e sul respectivamente, foram analisadas pelas técnicas de microscopia, análise molecular e sorologia. Apenas uma lâmina de animal proveniente da região sul foi positiva para Plasmodium sp. A fim de encontrar um consenso molecular (dois ou mais resultados idênticos em PCR), utilizamos três protocolos de PCR. A porcentagem de infecções por plasmódios, detectada por PCR foi de 13,3% (04/30) e 6.6% (02/30) para Plasmodium vivax e P. malariae respectivamente nos animais resgatados na região sul, enquanto que na região norte 25% (05/20) das amostras foram positivas apenas para Plasmodium vivax. As médias geométricas em imunofluorescência indireta (IFI) foram maiores para Plasmodium vivax, seguidas das médias para P. malariae e P. falciparum nas duas regiões. As porcentagens de positividade para anticorpos contra a proteína circumsporozoíta (CSP) foram 30% (9/30), 13,6% (3/22), 3,84% (1/26), 23% (7/30), 27,6% para Plasmodium vivax VK210, P. vivax VK247, P. vivax like, P. malariae/P. brasilianum e P. falciparum respectivamente em regiões ao sul e 10% (2/20), 30,8% (4/13), 11,1% (2/18), 15% (3/20), 33,3% (6/18) para P. vivax VK210, P. vivax VK247, P. vivax like, P. malariae/P. brasilianum e P. falciparum respectivamente em regiões ao norte. Com relação a positividade de anticorpos contra a proteína MSP-119, estas foram de 30% (9/30) para o sul e 10% (2/20) para o norte. Nenhuma amostra foi positiva para Pf- MSP119 / In order to detect Plasmodium, fifty blood samples of holler monkeys (Alouatta guariba clamitans), collected in areas surrounded by the Atlantic Forest and located in the metropolitan region of São Paulo city, were analysed. Thus, 20 and 30 samples from the northern and southern areas, respectivelly, were examined by microscopy techniques, molecular analysis and sorology. Only one animal slide from the Southern area was positive for Plasmodium sp. In order to achieve a molecular agreement (two or more identic results on PCR), three PCR protocols were applied. The percentage of Plasmodium infections detected by PCR was 13.3% (04/30) and 6.6% (02/30) for Plasmodium vivax and P. malariae, respectivelly, in animals collected in the Southern area. Meanwhile, in the Northern area, 25% (05/20) of the samples were exclusively positive for Plasmodium vivax. The geometric means titles in indirect immunofluorescence were higher for Plasmodium vivax followed by P. malariae and P. falciparum in both areas. Percentages of positive results for antibodies against circumsporozoite protein (CSP) were of 30% (9/30); 13.6% (3/22); 3.84% (1/26); 23% (7/30); 27.6% for Plasmodium vivax VK210, P.vivax VK247, P. vivax like, P.malariae/P.brasilianum and P. falciparum, respectively in Southern areas and 10% (2/20), 30.8% (4/13), 11.1% (2/18), 15% (3/20), 33.3% (6/18) for P. vivax VK210, P.vivax VK247, P. vivax like, P. malariae/P.brasilianum and P. falciparum, respectivelly, in Northern areas. Antibodies with positive results against MSP-119 protein were 30% (9/30) in the South and 10% (2/20) in the North. None of the samples were positive for Pf-MSP119
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PREVALÊNCIA DE ANTICORPOS ANTI-Toxocara spp. EM CRIANÇAS ATENDIDAS EM DOIS SISTEMAS DE SAÚDE E FATORES DE RISCO ASSOCIADOS À TOXOCARÍASE, NO MUNICÍPIO DE PRESIDENTE PRUDENTE, SÃO PAULO / PREVALENCE OF ANTIBODIES ANTI-Toxocara spp. IN CHILDRENS ASSISTED BY TWO HELATH SYSTEMS, AND RISK FACTOR ASSOCIATED TO TOXOCARIASIS, IN PRESIDENTE PRUDENTE, SÃO PAULO, BRAZIL.

Leli, Flávia Noris Chagas 27 August 2009 (has links)
Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO COMPLETA_22_02_2010.pdf: 203018 bytes, checksum: 39a76f0e8ce3bb1f69c19ef1b6beda03 (MD5) Previous issue date: 2009-08-27 / Toxocariasis has been considered one of the most important helminthozoonosis worldwide. The purpose of this study was to evaluate the seroprevalence of anti-Toxocara antibodies and the risk and protective factors for toxocariasis in 252 children from two different socioeconomic classes. The seroprevalences of Toxocara infection in 126 children who received care from private health services (middle-class) and 126 children who received care from public health services (disadvantaged children) were 9.5% and 12.7%, respectively. The risk factors (RF) of toxocariasis were evaluated using bivariate analysis complemented by logistic regression. Toxocara seroprevalence was inversely proportional to family income. Being a female and belonging to a family whose monthly income was higher were considered protective factors. However, owning a cat was a RF for children from both the total population and each of the subgroups, whereas owning a dog was considered a RF for only the middle-class children. This study shows that epidemiological risk and protective factors of toxocariasis can influence distinctively different strata of a population. Thus, it is relevant to evaluate the risk and protective factors for different socioeconomic classes to design future investigations and programs to prevent the human infection of Toxocara spp. and other geohelminths. / A toxocaríase tem sido considerada como uma das mais prevalentes helmintozoonoses em todo o mundo. A finalidade deste estudo transversal foi avaliar a seroprevalência de anticorpos IgG para Toxacara canis em 253 crianças (0-15 anos) de Presidente Prudente, São Paulo, atendidas por dois sistemas de saúde diferentes, bem como os fatores de risco e de proteção associados à toxocaríase. A soropositividade em crianças assistidas por sistemas de saúde privados e públicos foram, respectivamente, 9,5% (12/126) e 12,5% (16/127). As análises do potencial de fatores de riscos e sua relação com toxocaríase foram avaliadas pela análise bivariada complementada pela regressão logística, com variáveis que apresentam valor de p<0,2. Observou-se que a frequência de anticorpos nas crianças inversamente proporcional à renda familiar. Ser criança do sexo feminino e de uma família cuja renda familiar era mais elevada foram considerados como fatores de proteção. Possuir gato foi um fator de risco para a população total e para os dois subgrupos estudados, enquanto que possuir cão foi considerado como fator de risco para as crianças atendidas pelo sistema privado. Esses dados mostram que os fatores de risco e de proteção podem ser diferentes a depender da classe social. Dessa forma, é relevante avaliar esses fatores em diferentes classes sócioeconômicas para a elaboração de programas de prevenção à infecção humana por Toxocara spp. e por outros geohelmintos
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PREVALÊNCIA DE ANTICORPOS ANTI-Toxocara spp. EM CRIANÇAS ATENDIDAS EM DOIS SISTEMAS DE SAÚDE E FATORES DE RISCO ASSOCIADOS À TOXOCARÍASE, NO MUNICÍPIO DE PRESIDENTE PRUDENTE, SÃO PAULO / PREVALENCE OF ANTIBODIES ANTI-Toxocara spp. IN CHILDRENS ASSISTED BY TWO HELATH SYSTEMS, AND RISK FACTOR ASSOCIATED TO TOXOCARIASIS, IN PRESIDENTE PRUDENTE, SÃO PAULO, BRAZIL.

Leli, Flávia Noris Chagas 27 August 2009 (has links)
Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO COMPLETA_22_02_2010.pdf: 203018 bytes, checksum: 39a76f0e8ce3bb1f69c19ef1b6beda03 (MD5) Previous issue date: 2009-08-27 / Toxocariasis has been considered one of the most important helminthozoonosis worldwide. The purpose of this study was to evaluate the seroprevalence of anti-Toxocara antibodies and the risk and protective factors for toxocariasis in 252 children from two different socioeconomic classes. The seroprevalences of Toxocara infection in 126 children who received care from private health services (middle-class) and 126 children who received care from public health services (disadvantaged children) were 9.5% and 12.7%, respectively. The risk factors (RF) of toxocariasis were evaluated using bivariate analysis complemented by logistic regression. Toxocara seroprevalence was inversely proportional to family income. Being a female and belonging to a family whose monthly income was higher were considered protective factors. However, owning a cat was a RF for children from both the total population and each of the subgroups, whereas owning a dog was considered a RF for only the middle-class children. This study shows that epidemiological risk and protective factors of toxocariasis can influence distinctively different strata of a population. Thus, it is relevant to evaluate the risk and protective factors for different socioeconomic classes to design future investigations and programs to prevent the human infection of Toxocara spp. and other geohelminths. / A toxocaríase tem sido considerada como uma das mais prevalentes helmintozoonoses em todo o mundo. A finalidade deste estudo transversal foi avaliar a seroprevalência de anticorpos IgG para Toxacara canis em 253 crianças (0-15 anos) de Presidente Prudente, São Paulo, atendidas por dois sistemas de saúde diferentes, bem como os fatores de risco e de proteção associados à toxocaríase. A soropositividade em crianças assistidas por sistemas de saúde privados e públicos foram, respectivamente, 9,5% (12/126) e 12,5% (16/127). As análises do potencial de fatores de riscos e sua relação com toxocaríase foram avaliadas pela análise bivariada complementada pela regressão logística, com variáveis que apresentam valor de p<0,2. Observou-se que a frequência de anticorpos nas crianças inversamente proporcional à renda familiar. Ser criança do sexo feminino e de uma família cuja renda familiar era mais elevada foram considerados como fatores de proteção. Possuir gato foi um fator de risco para a população total e para os dois subgrupos estudados, enquanto que possuir cão foi considerado como fator de risco para as crianças atendidas pelo sistema privado. Esses dados mostram que os fatores de risco e de proteção podem ser diferentes a depender da classe social. Dessa forma, é relevante avaliar esses fatores em diferentes classes sócioeconômicas para a elaboração de programas de prevenção à infecção humana por Toxocara spp. e por outros geohelmintos
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Detecção de Rickettsia spp. em ixodídeos e de anticorpos contra rickettsia spp. em equinos no estado de Santa Catarina, Brasil

Medeiros, Alessandra Pereira 08 October 2010 (has links)
Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA10MA065.pdf: 574095 bytes, checksum: 57eb26bddb6a6d197fe88cd5d25475f2 (MD5) Previous issue date: 2010-10-08 / The present study was intended to characterize Rickettsia spp. circulating in arthropod vectors in Santa Catarina, Brazil, utilizing to technical of Reaction of Chain of the Polimerase (PCR) and sequencing genetic and investigate the presence of antibodies against the spotted fever Rickettsiae group (SFRG) in horses. 288 arthropods were collected and taxonomically identified in the Laboratório de Parasitologia e Doenças Parasitárias do Centro de Ciências Agroveterinárias da Universidade do Estado de Santa Catarina (CAV/UDESC) and, subsequently prosecuted by the PCR and sequencing in the Laboratório de Doenças Parasitárias do Departamento de Medicina Preventiva e Saúde Animal (VPS) of the Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ) of the Universidade de São Paulo (USP). Amblyomma ovale, A. aureolatum, A. longirostre, Rhipicephalus sanguineus and Dermacentor nitens showed sequences homology with R. parkeri cepa Mata Atlântica e R. amblyommi cepa AL. Equine (150) serum samples were tested by indirect fluorescent antibody (IFA) using R. rickettsii, R. parkeri, R. amblyommi, R. rhipicephali, R. belli and R. felis antigen. Only two of the equine sera tested (1.33%) had conclusive results of antibody titers. Molecular detection of rickettsiae species potentially pathogenic to humans in arthropod vectors and the presence of seroreactivity to SFRG in horses show the risk of transmission of rickettsiosis in this area and the need to maintain continuous epidemiological surveillance for rickettsial diseases / O presente trabalho foi realizado com objetivo de investigar as espécies de Rickettsia spp. que ocorrem no estado de Santa Catarina, por meio de pesquisa em ixodídeos coletados de diversas espécies animais, utilizando a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e sequenciamento genético, e detectar anticorpos contra Rickettsia spp. em equinos, pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Os carrapatos coletados foram encaminhados para o Laboratório de Parasitologia e Doenças Parasitárias do Centro de Ciências Agroveterinárias da Universidade do Estado de Santa Catarina (CAV/UDESC) para identificação taxonômica e, posteriormente processados pela PCR e sequenciamento no Laboratório de Doenças Parasitárias do Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal (VPS) da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ) da Universidade de São Paulo (USP). Os carrapatos (n=288) foram analisados para os genes rickettsiais gltA, presente possivelmente em todas as espécies do gênero Rickettsia, e ompA, comum às rickettsias do grupo da febre maculosa. Para o gene gltA, 14 amostras foram positivas, infectando os vetores das espécies Rhipicephalus sanguineus, Amblyomma aureolatum, A. ovale, A. longirostre, A. tigrinum e Anocentor nitens. Nove amostras foram positivas para o gene ompA (A. aureolatum, A. ovale, A. longirostre, R. sanguineus). As amostras positivas para ompA foram sequenciadas. O resultado do sequenciamento indica que em Santa Catarina circulam os agentes Rickettsia parkeri cepa Mata Atlântica e Rickettsia amblyommii cepa AL. Além dos carrapatos, 150 amostras de sangue foram colhidas de equinos de duas mesorregiões de Santa Catarina (Serra Catarinense e Vale do Itajaí) para análise de anticorpos contra Rickettsia spp. Foram considerados positivos animais com RIFI &#8805;1:64. A soroprevalência para Rickettsia spp. observada em equinos do estado de Santa Catarina foi de 18,66%, ocorrendo reações cruzadas em todas as amostras para, no mínimo, duas das espécies testadas. Somente dois animais resultaram em um sorodiagnóstico conclusivo para R. bellii e R. rickettsii nas diluições máximas de 1:4096 e 1:512, respectivamente. Os resultados obtidos comprovam a importância do estudo da febre maculosa no estado de Santa Catarina e indicam a circulação de agentes da febre maculosa brasileira (FMB), tanto nos reservatórios como em seus vetores, e sugere que esta doença possa estar ocorrendo neste estado
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Elisa proteína-G para o diagnóstico de agalaxia contagiosa dos ovinos e caprinos

CAMPOS, Ana Claudia 27 February 2008 (has links)
Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-07-29T12:33:02Z No. of bitstreams: 1 Ana Claudia Campos.pdf: 321055 bytes, checksum: 88970805d9ffc7abbb04f6a510d226df (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-29T12:33:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Claudia Campos.pdf: 321055 bytes, checksum: 88970805d9ffc7abbb04f6a510d226df (MD5) Previous issue date: 2008-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The contagious agalactia of ovine and caprine (CAOC) is characterized by a decline and subsequent failure of milk production, arthritis and keratoconjunctivitis causing economic losses in dairy goats and sheep herds. Classic diagnostic is performed by culture and identification of mycoplasmas species. The utilization only of this method to diagnostic has contribute for dissemination of infection and reduced efficiency of the controls measures because your necessity of long time to the diagnostic conclusion. The objective this study was performed and standardized an indirect ELISA using conjugate with protein-G (ELISA-G) and two types of obtained by growth of M. agalactiae antigen. Whole bacterial and sonicated culture was used as antigen to sensibility on microtitre plates. A total of 46 serum sample were obtained in infected goat herd with clinical signs in forty-five period and 40 samples in free herds of disease to standardization and application of ELISA test. The infection status was confirmed by culture of M. agalactiae from milk. Do not had statistical difference between positive and negative controls serum (P/N) when whole or sonicated antigen wereused. The sensibility of ELISA-Gt and ELISA-Gs were of 77,27% and 88,63%, respectively. Specificity were 95,24% for both ELISA. In conclusions, the indirect ELISA-Gt or ELISA-Gs should be utilized as tools for diagnostic of contagious agalactia in goats. / A Agalaxia Contagiosa dos Ovinos e Caprinos (ACOC) é uma enfermidade caracterizada clinicamente por mastite, agalaxia, artrite e ceratoconjuntivite, determinando grandes perdas econômicas em rebanhos ovinos e caprinos leiteiros. O diagnóstico clássico é feito pelo cultivo e isolamento dos micoplasmas envolvidos. A utilização dessa técnica como único método diagnóstico, contribui para a disseminação da infecção e dificulta a implantação de medidas eficazes de controle por requerer longo tempo para conclusão diagnóstica. Por isso, o objetivo deste trabalho foi desenvolver e padronizar um ELISA indireto utilizando a proteína G (ELISA-G) como conjugado e aplicação de dois tipos de antígenos produzidos a partir de M. agalactiae. Antígeno total e sonicado foram utilizados para sensibilizar as microplacas. A padronização da técnica foi realizada utilizando soros caprinos com e sem sinais clínicos de agalaxia contagiosa. Quarenta e seis soros caprinos coletados com intervalo de 45 dias, obtidos em rebanho infectado com sinais clínicos e 40 soros caprinos de rebanhos livres da infecção foram utilizados para avaliação da técnica. A presença de M. agalactiae no rebanho foi confirmada por cultivo de leite em meio Hayflick modificado. Não houve diferença significativa entre os valores da razão positivo/negativo (P/N) dos soros controles quando utilizado antígeno total ou sonicado. A sensibilidade relativa do ELISA-Gt e ELISA-Gs foi de 77,27% e 88,63%, respectivamente, enquanto que a especificidade foi de 95,24% para ambos. Pesquisa de anticorpos em rebanho com quadro clínico característico revelou aumento significativo dos percentuais de densidade óptica (DO) em soros caprinos, coletados com intervalo de 45 dias. Conclui-se que os ELISA podem ser úteis para identificação de rebanhos infectados por agalaxia contagiosa de pequenos ruminantes, com uma relativa vantagem para o ELISA-Gs.
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Levantamento soroepidemiológico e isolamento do toxoplasma gondii em galinhas caipiras (Gallus gallus domesticus) no Estado do Espírito Santo, Brasil

Beltrame, Marcus Alexandre Vaillant 24 May 2010 (has links)
Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcus Alexandre Beltrame parte 1.pdf: 1849307 bytes, checksum: 3070da9250f42557e2a1f278080def13 (MD5) Previous issue date: 2010-05-24 / Introduction. The prevalence of Toxoplasma gondii infection in free-range chickens varies in different regions and we do not know the prevalence of this infection in free-range chickens in the state of Espirito Santo. Objective. To study the prevalence of infection by T. gondii in free-range chickens from different municipalities of the E. Santo, to try the isolation of the parasite from tissues of positive chickens and to search the knowledge on the parasite and the disease it produces among people living in the rural properties from which the samples were collected. Methods. Detection of anti-T. gondii in the serum of 510 chickens from rural areas of eight municipalities of E. Santo, using indirect hemagglutination (IHA) and modified agglutination test (MAT). Bioassay was conducted in mice by intra-peritoneal injection of macerated of thigh muscle, brain and heart from 64 positive chickens. Questionnaires were used to assess environmental conditions related to the protozoan in each farm and the knowledge of people on the parasite. Results. Anti-T. gondii antibodies were detected in 40.4% (95% CI: 36.1 to 44.7) by IHA and 38.8% (95% CI: 34.6 to 43) by MAT. Among the 64 chickens submitted to bioassay, the parasite was isolated from 48 (75%, 95% CI: 85.6 to 64.4), with mortality occurring from 10 through 31days after infection, and in two chickens presented seroconversion. Conclusions. (a) A high prevalence of anti-T. gondii antibodies with high frequency of parasite isolation from positive chickens, was observed in free range chickens in E. Santo;(b) The high mortality observed in mice used in the bioassay may be in relationship with the virulence of isolated strains; (c) There was good concordance (82%) between IHA and MAT, therefore IHA may indicated as a screening test for anti-T. gondii antibodies in chickens; (d) presence of cats in promiscuity with birds and other species occurred in 73% of the properties and (e) The questionnaire revealed ignorance of the people living in the visited farms about the protozoan, the disease it produces and its transmission mechanisms. / Introdução. A prevalência de infecção por Toxoplasma gondii em galinhas caipiras varia nas diferentes regiões e não se conhece a prevalência em galinhas caipiras no Estado do Espírito Santo. Objetivo. Estudar a prevalência da infecção por T. gondii em galinhas caipiras de municípios do E. Santo, tentar o isolamento do parasito nos tecidos de aves positivas e aplicar um questionário entre as pessoas que vivem nas propriedades nas quais as amostras foram tomadas, para verificar o conhecimento sobre o parasita e a doença que ele pode causar. Métodos. Pesquisa de anticorpos anti-T. gondii no soro de 510 galinhas de oito municípios do E. Santo, utilizando testes de hemaglutinação indireta (HAI) e aglutinação modificado (MAT). Em 64 aves soropositivas foi realizado o bioensaio em camundongos a partir de macerados do músculo da coxa, coração e encéfalo. Questionários foram aplicados para avaliar variáveis relacionadas a doença. Resultados. De 510 aves, foram soropositivas 40,4% (IC 95%: 36,1-44,7) no HAI e 38,8% (IC 95%: 34,6-43) no MAT. Das 64 galinhas submetidas ao bioensaio, isolou-se em 48 (75%; IC 95%: 85,6-64,4), com mortalidade ocorrendo entre 10 e 31dias após a infecção, e em duas houve soroconversão. Conclusões. (a) Detectou-se alta prevalência de anticorpos anti-T. gondii em galinhas caipiras no E. Santo, com grande freqüência de isolamento do protozoário; (b) A alta mortalidade dos camundongos utilizados no bioensaio pode estar relacionada com a virulência das cepas isoladas; (c) HAI teve concordância de 82% com o MAT, podendo ser indicado como teste de triagem para pesquisa de anticorpos anti-T. gondii em galinhas; (d) A presença de gatos soltos e em promiscuidade com as aves e demais espécies ocorreu em 73% das propriedades avaliadas; (e) O questionário aplicado revelou desconhecimento dos entrevistados sobre o protozoário, a doença que ele pode causar e seus meios de transmissão.
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Levantamento soroepidemiológico e isolamento do toxoplasma gondii em galinhas caipiras (Gallus gallus domesticus) no Estado do Espírito Santo, Brasil

Beltrame, Marcus Alexandre Vaillant 24 May 2010 (has links)
Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao de Marcus Alexandre Vaillant Beltrame.pdf: 2601197 bytes, checksum: 99d4aecebe83edfdd851f8015a17ae7a (MD5) Previous issue date: 2010-05-24 / Introdução. A prevalência de infecção por Toxoplasma gondii em galinhas caipiras varia nas diferentes regiões e não se conhece a prevalência em galinhas caipiras no Estado do Espírito Santo. Objetivo. Estudar a prevalência da infecção por T. gondii em galinhas caipiras de municípios do E. Santo, tentar o isolamento do parasito nos tecidos de aves positivas e aplicar um questionário entre as pessoas que vivem nas propriedades nas quais as amostras foram tomadas, para verificar o conhecimento sobre o parasita e a doença que ele pode causar. Métodos. Pesquisa de anticorpos anti-T. gondii no soro de 510 galinhas de oito municípios do E. Santo, utilizando testes de hemaglutinação indireta (HAI) e aglutinação modificado (MAT). Em 64 aves soropositivas foi realizado o bioensaio em camundongos a partir de macerados do músculo da coxa, coração e encéfalo. Questionários foram aplicados para avaliar variáveis relacionadas a doença. Resultados. De 510 aves, foram soropositivas 40,4% (IC 95%: 36,1-44,7) no HAI e 38,8% (IC 95%: 34,6-43) no MAT. Das 64 galinhas submetidas ao bioensaio, isolou-se em 48 (75%; IC 95%: 85,6-64,4), com mortalidade ocorrendo entre 10 e 31dias após a infecção, e em duas houve soroconversão. Conclusões. (a) Detectou-se alta prevalência de anticorpos anti-T. gondii em galinhas caipiras no E. Santo, com grande freqüência de isolamento do protozoário; (b) A alta mortalidade dos camundongos utilizados no bioensaio pode estar relacionada com a virulência das cepas isoladas; (c) HAI teve concordância de 82% com o MAT, podendo ser indicado como teste de triagem para pesquisa de anticorpos anti-T. gondii em galinhas; (d) A presença de gatos soltos e em promiscuidade com as aves e demais espécies ocorreu em 73% das propriedades avaliadas; (e) O questionário aplicado revelou desconhecimento dos entrevistados sobre o protozoário, a doença que ele pode causar e seus meios de transmissão / Introduction. The prevalence of Toxoplasma gondii infection in free-range chickens varies in different regions and we do not know the prevalence of this infection in free-range chickens in the state of Espirito Santo. Objective. To study the prevalence of infection by T. gondii in free-range chickens from different municipalities of the E. Santo, to try the isolation of the parasite from tissues of positive chickens and to search the knowledge on the parasite and the disease it produces among people living in the rural properties from which the samples were collected. Methods. Detection of anti-T. gondii in the serum of 510 chickens from rural areas of eight municipalities of E. Santo, using indirect hemagglutination (IHA) and modified agglutination test (MAT). Bioassay was conducted in mice by intra-peritoneal injection of macerated of thigh muscle, brain and heart from 64 positive chickens. Questionnaires were used to assess environmental conditions related to the protozoan in each farm and the knowledge of people on the parasite. Results. Anti-T. gondii antibodies were detected in 40.4% (95% CI: 36.1 to 44.7) by IHA and 38.8% (95% CI: 34.6 to 43) by MAT. Among the 64 chickens submitted to bioassay, the parasite was isolated from 48 (75%, 95% CI: 85.6 to 64.4), with mortality occurring from 10 through 31days after infection, and in two chickens presented seroconversion. Conclusions. (a) A high prevalence of anti-T. gondii antibodies with high frequency of parasite isolation from positive chickens, was observed in free range chickens in E. Santo;(b) The high mortality observed in mice used in the bioassay may be in relationship with the virulence of isolated strains; (c) There was good concordance (82%) between IHA and MAT, therefore IHA may indicated as a screening test for anti-T. gondii antibodies in chickens; (d) presence of cats in promiscuity with birds and other species occurred in 73% of the properties and (e) The questionnaire revealed ignorance of the people living in the visited farms about the protozoan, the disease it produces and its transmission mechanisms

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