A hipótese de \"manipulação comportamental\" supõe que um parasito pode alterar o comportamento de seu hospedeiro visando aumentar a probabilidade de completar seu ciclo evolutivo. Tais alterações aumentariam a taxa de transmissão hospedeirohospedeiro, assegurando ao parasito ou a seus propágulos o encontro de novo hospedeiro. A possibilidade de infecções parasitárias provocarem mudanças comportamentais em seus hospedeiros e a elevada frequência com que o acometimento de seres humanos por larvas de Toxocara e cistos de Toxoplasma ocorre, têm chamado à atenção de pesquisadores interessados no estudo das relações hospedeiro-parasita. Na infecção por Toxoplasma gondii e Toxocara canis, cistos e larvas estão presentes em diversos locais anatômicos incluindo musculatura, coração, pulmões, olhos e cérebro. A presença de parasitos no cérebro dá oportunidade de manipulação do comportamento do hospedeiro. Entretanto, não se sabe qual ou quais mecanismos estão envolvidos no processo de manipulação do comportamento. Os objetivos do presente estudo foram verificar alterações na ansiedade, medo, memória e aprendizagem de Rattus norvegicus experimentalmente infectados por Toxocara canis e/ou Toxoplasma gondii em dois períodos após infecção, bem como a localização das larvas e cistos e presença de placas beta amiloide ( A) na região do hipocampo no tecido cerebral desses roedores corado pela técnica de Hematoxilina e Eosina (HE), e Vermelho de Congo, respectivamente. Foram utilizadas 40 exemplares fêmeas da espécie Rattus norvegicus, com seis a oito semanas. Os animais foram divididos em quatro grupos: Toxocara - 10 ratos infectados com 300 ovos de Toxocara canis, Toxoplasma -10 ratos infectados com 10 cistos de Toxoplasma gondii, Infecção dupla - 10 ratos infectados com 300 ovos de Toxocara canis e 10 cistos de Toxoplasma gondii, e controle - 10 ratos sem infecção. Nos dias 40, 41, 70 e 71 após a infecção, os animais dos grupos infectados e controle foram submetidos à avaliação no Labirinto em Cruz Elevado e Campo aberto. Aos 120 após infecção foi feita avaliação da memória, aprendizado e aversão a urina de gato dos animais no Labirinto de Barnes. No final das análises comportamentais os animais foram levados a eutanásia para retirada do cérebro e confecção dos cortes histológicos preparados em HE e Vermelho de Congo. Os resultados mostraram efeito ansiolítico para ambas as infecções, principalmente para Toxoplasma gondii. Não houve comprometimento da memória e aprendizado no LB, porém os animais infectados por Toxocara canis ou Toxoplasma gondii apresentaram menor tempo para encontrar a toca com urina e entrar nela. A leitura dos cortes histológicos corados com HE mostraram larvas de Toxocara canis e cistos de Toxoplasma gondii em regiões do sistema nervoso central dos animais relacionadas com memória e aprendizado. As lâminas coradas com Vermelho de Congo apresentaram placas beta amiloides ( A) em metade dos animais infectados por Toxoplasma gondii. Conclui-se que a infecção por ambos os parasitos apresenta efeito ansiolítico quando ocorre infecção única. Quando a Infecção ocorre concomitantemente há modulação no comportamento. Além disso, ratas infectadas com infecção única apresentam-se menos aversivas à urina de gatos. / The hypothesis of \"behavioral manipulation\" states that a parasite can change the behavior of its host specifically to improve the chances of completing its life cycle. It means the increase of transmission host to host and ensures that the parasite or their propagules are released in appropriate place increasing their survival . The possibility of parasitic infections to cause behavioral changes in their hosts and the high frequency which the involvement of humans by larvae of Toxocara and Toxoplasma cysts occur , have called the attention of researchers interested in the study of host/parasite relationships. In human beings Toxoplasma gondii cysts and Toxocara canis larvae infections are present in various anatomical sites including muscles, heart, lungs, eyes and brain. The presence of parasites in brain gives opportunity of manipulation of the host behavior. However, the mechanisms involved in the behavior changes are still unclear. The aims of this study were to assess changes in anxiety, fear, memory and learning, as well as the larvae, cysts and the presence of beta amyloid plaques (A) in the hippocampus region of the brain tissue of the Rattus norvegicus exper imentally infected with Toxocara canis and/or Toxoplasma gondii, in two stages of infection, satained with hematoxyl in/eosin (HE) and Red Congo techniques, respectively. Eighty female Rattus norvegicus species, aged six to eight weeks-old were used. The animals were divided into four groups: Toxocara - 10 rats infected with 300 Toxocara canis eggs, Toxoplasma - 10 rats infected with 10 cysts of Toxoplasma gondii, double infection - 10 mice infected with 300 Toxocara canis eggs and 10 Toxoplasma gondii cysts, and control - 10 rats without infection. In the days 40, 41, 70 and 71 after infection, the infected animals and that belonging to the control group were evaluated in the Elevated plus-maze (EPM) and Open- field (OF). At 120 days after infection the memory and learning evaluation and aversion to cat urine by the rats were assessed in the Barnes maze. At the end of the behavioral analysis the animals were euthanized to remove the brain and preparation of histological sect ions stained by Hematox yl in/Eosin (HE) and Congo Red. The results showed anxiolytic effect for both infections, especially for Toxoplasma gondii. There was no impairment of memory and learning in LB, but the animals infected by Toxocara canis or Toxoplasma gondii spentless time to find the bur row with urine and entering it. The reading of the histological sections stained with HE showed larvae of Toxocara canis and Toxoplasma gondii cysts in regions of the central nervous system of animals related to memory and learning. The slides stained with Congo Red showed A-plate for the majority of animals infected by Toxoplasma gondii. It is concluded in the single infection, to both parasites, produced anxiolytic effect. When infections occur concomitantly there was a modulating effect in rats\' behavior. In addition, rats infected with single infection presents less aversive urine cats.

Submitted by Maykon Nascimento (maykon.albani@hotmail.com) on 2016-04-15T19:11:23Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao Ledilma Ines.pdf: 2171201 bytes, checksum: 95ebb511ca89cc579bb420c77754726c (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barros (patricia.barros@ufes.br) on 2017-05-03T14:29:54Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacao Ledilma Ines.pdf: 2171201 bytes, checksum: 95ebb511ca89cc579bb420c77754726c (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-03T14:29:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao Ledilma Ines.pdf: 2171201 bytes, checksum: 95ebb511ca89cc579bb420c77754726c (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Introduction: There are few experimental studies on ocular toxocariasis and it was recently revealed that gerbils infected with T. canis show frequent and early ocular lesions. Objectives: To follow the evolution of ocular lesions in gerbils using binocular indirect ophthalmoscopy (BIO) after oral inoculation with T. canis for 38 days. Methods: After oral inoculation of 100 embryonated eggs of T. canis, thirty six gerbils (Meriones unguiculatus) were observed with BIO in the 3rd ,10th ,17th ,24th ,31th and 38th days. Eight animals were inoculated and sacrificed after two weeks for histopathological investigation, along the ones observed after 38 days. Results: Spontaneous lesions like white spots and peripherical atrophic holes, asteroid hyalosis, coloboma and diffuse retinal pigment epithelial atrophy were noticed before the inoculation. After the inoculation the most frequent lesions were: retinal (focal and either superficial or with white centers), choroidal and vitreous hemorrhages, seen after the third day, but showing signs of receding after the 17th day. Exsudative lesions and vasculitis appeared later. DUSN and severe vitreous opacity with exsudative retinal detachment were seen once. Posterior pole and peripherical granulomas were not observed. Focal retinal pigment epithelial changes were frequent. Migrating larvae observations were rare, but its traces were more frequent. The histopathological investigation supported the BIO observations and revealed focal episcleritis, iridociclitis and dacrioadenitis, with neutrophilic and eosinophilic exsudates. Eosinophilic granuloma in the adipose tissue outside the ocular globe was also reported. Conclusion: The results show the gerbil model for ocular toxocariasis after oral inoculation with T. canis, although not showing the typical lesions of human toxocariasis, specially the pseudotumorals seen as posterior pole or peripherical granulomas, can be very useful for experimental investigations of ocular toxocariasis, due to its frequency and early lesions. / Introdução: Existem poucos estudos experimentais sobre toxocariase ocular e recentemente demonstrou-se que o gerbilo infectado com T. canis mostra freqüentes e precoces lesões oculares. Objetivos: Avaliar a evolução de lesões oculares pela oftalmoscopia binocular indireta (OBI) em gerbilos infectados com T. canis, até 38 dias após a infecção. Métodos: Trinta e seis gerbilos (Meriones unguiculatus) inoculados por via oral, com 100 ovos larvados de T. canis foram submetidos a OBI aos 3 ,10 ,17 ,24 ,31 e 38 dias após o inóculo. Oito animais foram inoculados e sacrificados duas semanas após para estudo histopatológico, juntamente com os examinados após o 38o dia. Resultados: Lesões espontâneas tipo manchas brancas e buracos atróficos periféricos, hialose asteróide, coloboma e rarefações difusas do epitélio pigmentar foram observadas antes do inóculo. Nos animais inoculados as lesões mais freqüentes foram hemorragias retinianas focais, ou superficiais ou com centro branco, hemorragias de coróide, hemorragias vítreas, vistas a partir do terceiro dia, mas com sinais de regressão a partir do 17o dia de observação. Lesões exsudativas e vasculites apresentaram aparecimento mais tardio. DUSN e opacidade vítrea intensa com descolamento exsudativo de retina foram observadas cada uma em um animal. Não foram observados granulomas de pólo posterior ou periférico. Alterações focais do epitélio pigmentar da retina foram freqüentes. Larvas móveis foram raras, mas traços de trajeto de larva foram mais freqüentes. O estudo histológico confirmou as observações da OBI e demonstrou episclerite, iridociclite e dacrioadenite focais, com exsudatos de neutrófilos e esosinófilos. Granuloma com eosinófilos no tecido adiposo peri-ocular também foi visto. Conclusão: Os resultados confirmam que o modelo de toxocaríase ocular no gerbilo após inoculação do T. canis, embora não apresente as lesões típicas da toxocaríase humana, especialmente as pseudotumorais, representadas por granulomas de pólo posterior ou periférico, pode ser muito útil para estudos experimentais da toxocaríase ocular, devido a freqüência e a precocidade das lesões.

A hipótese de \"manipulação comportamental\" supõe que um parasito pode alterar o comportamento de seu hospedeiro visando aumentar a probabilidade de completar seu ciclo evolutivo. Tais alterações aumentariam a taxa de transmissão hospedeirohospedeiro, assegurando ao parasito ou a seus propágulos o encontro de novo hospedeiro. A possibilidade de infecções parasitárias provocarem mudanças comportamentais em seus hospedeiros e a elevada frequência com que o acometimento de seres humanos por larvas de Toxocara e cistos de Toxoplasma ocorre, têm chamado à atenção de pesquisadores interessados no estudo das relações hospedeiro-parasita. Na infecção por Toxoplasma gondii e Toxocara canis, cistos e larvas estão presentes em diversos locais anatômicos incluindo musculatura, coração, pulmões, olhos e cérebro. A presença de parasitos no cérebro dá oportunidade de manipulação do comportamento do hospedeiro. Entretanto, não se sabe qual ou quais mecanismos estão envolvidos no processo de manipulação do comportamento. Os objetivos do presente estudo foram verificar alterações na ansiedade, medo, memória e aprendizagem de Rattus norvegicus experimentalmente infectados por Toxocara canis e/ou Toxoplasma gondii em dois períodos após infecção, bem como a localização das larvas e cistos e presença de placas beta amiloide ( A) na região do hipocampo no tecido cerebral desses roedores corado pela técnica de Hematoxilina e Eosina (HE), e Vermelho de Congo, respectivamente. Foram utilizadas 40 exemplares fêmeas da espécie Rattus norvegicus, com seis a oito semanas. Os animais foram divididos em quatro grupos: Toxocara - 10 ratos infectados com 300 ovos de Toxocara canis, Toxoplasma -10 ratos infectados com 10 cistos de Toxoplasma gondii, Infecção dupla - 10 ratos infectados com 300 ovos de Toxocara canis e 10 cistos de Toxoplasma gondii, e controle - 10 ratos sem infecção. Nos dias 40, 41, 70 e 71 após a infecção, os animais dos grupos infectados e controle foram submetidos à avaliação no Labirinto em Cruz Elevado e Campo aberto. Aos 120 após infecção foi feita avaliação da memória, aprendizado e aversão a urina de gato dos animais no Labirinto de Barnes. No final das análises comportamentais os animais foram levados a eutanásia para retirada do cérebro e confecção dos cortes histológicos preparados em HE e Vermelho de Congo. Os resultados mostraram efeito ansiolítico para ambas as infecções, principalmente para Toxoplasma gondii. Não houve comprometimento da memória e aprendizado no LB, porém os animais infectados por Toxocara canis ou Toxoplasma gondii apresentaram menor tempo para encontrar a toca com urina e entrar nela. A leitura dos cortes histológicos corados com HE mostraram larvas de Toxocara canis e cistos de Toxoplasma gondii em regiões do sistema nervoso central dos animais relacionadas com memória e aprendizado. As lâminas coradas com Vermelho de Congo apresentaram placas beta amiloides ( A) em metade dos animais infectados por Toxoplasma gondii. Conclui-se que a infecção por ambos os parasitos apresenta efeito ansiolítico quando ocorre infecção única. Quando a Infecção ocorre concomitantemente há modulação no comportamento. Além disso, ratas infectadas com infecção única apresentam-se menos aversivas à urina de gatos. / The hypothesis of \"behavioral manipulation\" states that a parasite can change the behavior of its host specifically to improve the chances of completing its life cycle. It means the increase of transmission host to host and ensures that the parasite or their propagules are released in appropriate place increasing their survival . The possibility of parasitic infections to cause behavioral changes in their hosts and the high frequency which the involvement of humans by larvae of Toxocara and Toxoplasma cysts occur , have called the attention of researchers interested in the study of host/parasite relationships. In human beings Toxoplasma gondii cysts and Toxocara canis larvae infections are present in various anatomical sites including muscles, heart, lungs, eyes and brain. The presence of parasites in brain gives opportunity of manipulation of the host behavior. However, the mechanisms involved in the behavior changes are still unclear. The aims of this study were to assess changes in anxiety, fear, memory and learning, as well as the larvae, cysts and the presence of beta amyloid plaques (A) in the hippocampus region of the brain tissue of the Rattus norvegicus exper imentally infected with Toxocara canis and/or Toxoplasma gondii, in two stages of infection, satained with hematoxyl in/eosin (HE) and Red Congo techniques, respectively. Eighty female Rattus norvegicus species, aged six to eight weeks-old were used. The animals were divided into four groups: Toxocara - 10 rats infected with 300 Toxocara canis eggs, Toxoplasma - 10 rats infected with 10 cysts of Toxoplasma gondii, double infection - 10 mice infected with 300 Toxocara canis eggs and 10 Toxoplasma gondii cysts, and control - 10 rats without infection. In the days 40, 41, 70 and 71 after infection, the infected animals and that belonging to the control group were evaluated in the Elevated plus-maze (EPM) and Open- field (OF). At 120 days after infection the memory and learning evaluation and aversion to cat urine by the rats were assessed in the Barnes maze. At the end of the behavioral analysis the animals were euthanized to remove the brain and preparation of histological sect ions stained by Hematox yl in/Eosin (HE) and Congo Red. The results showed anxiolytic effect for both infections, especially for Toxoplasma gondii. There was no impairment of memory and learning in LB, but the animals infected by Toxocara canis or Toxoplasma gondii spentless time to find the bur row with urine and entering it. The reading of the histological sections stained with HE showed larvae of Toxocara canis and Toxoplasma gondii cysts in regions of the central nervous system of animals related to memory and learning. The slides stained with Congo Red showed A-plate for the majority of animals infected by Toxoplasma gondii. It is concluded in the single infection, to both parasites, produced anxiolytic effect. When infections occur concomitantly there was a modulating effect in rats\' behavior. In addition, rats infected with single infection presents less aversive urine cats.

O sorodiagnóstico da toxocaríase humana é geralmente baseado na detecção de anticorpos IgG anti-Toxocara spp. em amostras de soro pelo teste ELISA utilizando os antígenos de excreção-secreção de larvas de T. canis (TES). No entanto, observa-se uma ocorrência de reatividade cruzada com outras helmintíases nas áreas endémicas de poliparasitismo. Vários estudos têm mostrado que as glicanas presentes nos antígenos dos helmintos podem ser as responsáveis pela reatividade cruzada. Neste estudo, avaliamos o efeito da deglicosilação dos antígenos TES na sensibilidade e especificidade dos testes de ELISA e Western-blotting para detecção de anticorpos IgG, IgM e IgE. Para a deglicosilação dos antígenos TES, estes foram tratados com diferentes concentrações de hidróxido de sódio (NaOH) ou metaperiodato de sódio (NaIO4) e foram testados 58 amostras de soro de pacientes com toxocaríase visceral, 75 amostras de soros de pacientes com outras helmintíases, e 95 amostras de soro de indivíduos saudáveis. Nossos resultados mostraram que os antígenos TES foram totalmente deglicosilados com NaOH 100mM por 4 horas a 37°C (dTES), enquanto que o tratamento com NaIO4 não gerou bons resultados. A sensibilidade e especificidade dos antígenos TES e dTES na detecção de anticorpos IgG pelo teste de ELISA foi de 100%, com menor reatividade cruzada (5,3%) para os antígenos dTES, se comparada com os antígenos TES (13,3%). Todos os pacientes com toxocaríase mostraram anticorpos IgG contra as cinco frações dos antígenos TES (32, 45, 55, 70 e 120 kDa) e contra a única fração de 26kDa dos antígenos dTES, com sensibilidades e especificidades de 100% para ambos os antígenos. A reatividade cruzada, observada com as frações de 70 kDa, 55 kDa e 32 kDa dos antígenos TES, foi eliminada totalmente quando utilizaram-se os antígenos dTES. A detecção de anticorpos IgM pelo teste de ELISA mostrou reatividade inespecífica nos três grupos estudados, com sensibilidades de 39,7% e 34,5% e especificidades de 95,8% e 96,8%, para os antígenos TES e dTES, respectivamente, porém com ocorrência de reatividade cruzada de 24% e 28% para ambos os antígenos. Os três grupos estudados apresentaram reatividade contra quase todas as frações dos antígenos TES e dTES. A detecção de anticorpos IgE apresentou sensibilidades de 63,79% e 62,07% e uma especificidade de 100%, e uma reatividade cruzada de 26,6% e 53,3% para ambos os antígenos. A maioria dos pacientes com toxocaríase (74,1%) mostraram anticorpos contra as frações de 32, 55 e 70 kDa, em quanto que não houve reatividade nos pacientes com outras helmintíases ou nos indivíduos saudáveis. Estes resultados mostraram que a deglicosilação dos antígenos TES permite reduzir a ocorrência de reatividade cruzada nos pacientes com outras helmintíases, elevando o valor diagnóstico da detecção de anticorpos IgG. No entanto, este procedimento não permite melhorar a sensibilidade e especificidade na detecção de anticorpos IgM e não permite elevar a sensibilidade na detecção de anticorpos IgE pelo teste de ELISA. Por outro lado, os resultados discordantes na especificidade do Western-blotting para a detecção de anticorpos IgG, IgM e IgE sugerem a presença de epítopos conformacionais presentes no estado nativo dos antígenos TES que estariam implicados na reação cruzada observada no teste de ELISA / Serodiagnosis of human toxocariasis is usually based on the detection of anti-Toxocara spp. IgG antibodies in serum samples by ELISA test using T.canis larvae excretory-secretory (TES) antigens. However, a cross-reactivity occurrence is observed in endemic areas of polyparasitism. Many studies have shown that the glycan structures, present in helminth antigens, can be the responsible for the cross-reactivity. In this study, we evaluated the deglycosylation of the TES antigens on the sensitivity and specificity of both the ELISA and Western-blotting for the detection of IgG, IgM, and IgE antibodies. For the deglycosylation of the TES antigens, they were treated with different concentrations of sodium hydroxide (NaOH) or sodium metaperiodate (NaIO4), and 58 serum samples of 58 patients with visceral toxocariasis, 75 serum samples of patients with other helminth infections, and 95 serum samples of healthy individuals. Our results show that the TES antigens were totally deglycosylated with 100 mM NaOH for 4 hours at 37°C (dTES), whereas not good results were obtained with sodium metaperiodate. The sensitivity and specificity of both TES and dTES antigens were 100% in detecting IgG antibodies by ELISA; the cross-reactivity observed with TES antigens (13.3%) was reduced (5.3%) when dTES antigens were used. All toxocariasis patients showed IgG antibodies against the five fractions of TES antigens (32, 45, 55, 70, and 120 kDa), but also with the 26-kDa single fraction of dTES antigens, with sensitivities and specificities of 100% for both antigens. The occurrence of cross-reactivity, observed mainly with the 32-, 55-, and 70 kDa fractions of the TES antigens, was totally eliminated when the dTES antigens were used. The detection of IgM antibodies by ELISA test showed unspecific reactivity in all studied groups, with sensitivities of 39.7% and 34.5%, and specificities of 95.8% and 96.8% for both antigens; the occurrence of cross-reactivity for both antigens were 24% and 28%, respectively. All studied groups have IgM antibodies against almost all fractions of TES antigens and the single fraction of dTES. The detection of IgE antibodies by ELISA test showed sensitivities of 63.8% and 62%, specificities of 100%, and occurrence of reactivity of 26.6% and 53.3% for TES and dTES antigens, respectively. The majority of the toxocariasis patients (74.1%) showed IgE antibodies against the 32-, 55-, and 70 kDa fractions of the TES antigens, whereas there was not reactivity in sera from patients with other helminth infections or healthy individuals. These results showed that the deglycosylation of the TES antigens reduces the occurrence of cross-reactivity in patients with other helminth infections, increasing the diagnostic value for the detection of IgG antibodies. However, this procedure does not improve the sensitivity nor reduces the occurrence of cross-reactivity in the detection of IgM antibodies. Likewise, this procedure does not improve the sensitivity in the detection of IgE antibodies by the ELISA test. On the other hand, the high specificity obtained in the detection of IgG, IgM, and IgE by Western-blotting suggest that conformational epitopes of the TES antigens may also be the responsible for the cross-reactivity in the ELISA test

Submitted by Emanoel Martins Filho (emanoelfilho@ufba.br) on 2016-09-13T01:29:53Z No. of bitstreams: 1 Carlos_Jose.pdf: 1542832 bytes, checksum: 5aa9be2cd715ccd9ddd9ede563b3fe9e (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barroso (pbarroso@ufba.br) on 2016-09-13T20:32:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Carlos_Jose.pdf: 1542832 bytes, checksum: 5aa9be2cd715ccd9ddd9ede563b3fe9e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-13T20:32:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carlos_Jose.pdf: 1542832 bytes, checksum: 5aa9be2cd715ccd9ddd9ede563b3fe9e (MD5) / CONS NAC DE DESENVOLVIMENTO CIENTIFICO E TECNOLOGICO - Programa TWAS/CNPq / Diversos são os parasitos intestinais capazes de acometer cães e gatos, e destacam-se aqueles capazes de causar impacto na saúde pública por tratar-se de zoonoses. Dentre eles, o Toxocara canis e o Toxocara cati, agentes causadores das toxocaríases canina e felina respectivamente que são responsáveis pelas síndromes larva migrans visceral e ocular do homem. Os animais domésticos integram o ciclo evolutivo como hospedeiros definitivos criando focos de transmissão em ambientes comuns ao lazer humano. As infecções podem produzir uma gama de sinais clínicos que variam desde um quadro subclínico até a morte do animal. O propósito do presente estudo foi desenvolver um método de ensaio imunoenzimático de ELISA indireto com especificidade ótima para o diagnóstico de toxocaríase em cães, determinada pela absorção de imunoglobulinas que reagem cruzadamente com antígenos associados a outras parasitoses. Foram selecionados 140 cães em condições de risco de infecção para determinação da soroprevalência de toxocaríase através do ensaio imunoenzimático indireto (ELISA). Os resultados do ELISA foram comparados à frequência parasitária obtida por exames coprológicos pela técnica de Willes-Molay e Sedimentação espontânea. Para realização do ELISA indireto, padronizou-se o teste com antígeno excretório-secretório de T. canis, produzido a partir de larvas dos parasitos. Durante o desenvolvimento do método ELISA, foi incluída uma etapa em que amostras de soro foram absorvidas em antígenos de Ascaris lumbricoides, Trichuris sp., Ancylostoma caninum e Dipylidium caninum para minimizar a reatividade cruzada e aumentar a especificidade do teste. A análise parasitológica evidenciou 70,7% de amostras fecais positivas, distribuídas como infecções individuais por Trichuris sp em 28,57%, Ancilostomídeos em 9,29%, T. canis em 1,43%, Cystoisospora em 0,7%, além de infecções mistas. As condições ideais para realização da sorologia foram padronizadas, absorvendo as amostras com 4 mg/ml de antígeno somático dos demais parasitos, sensibilização com 3 µg/mL de Antígeno excretório/secretório de T. canis, diluições dos soros e anticorpo secundário em 1:1000 e 1:2000 respectivamente. A soroprevalência foi determinada em 61,4% (86/140), utilizando o ponto de corte de 0,275. A sensibilidade do teste ELISA foi determinada em 100% e a especificidade em 94,44%. Evidenciou-se, portanto, uma baixa positividade do exame parasitológico contrapondo-se à alta soropositividade de detecção de animais com toxocaríase. Assim, o ELISA desenvolvido no presente estudo contribui para atender ao necessário desenvolvimento de novos testes diagnósticos específicos, capazes de diagnosticar principalmente os animais em estágios subclínicos, devido ao impacto que podem acarretar à saúde pública. Concluímos que os exames sorológicos devem ser empregados para complementar o diagnóstico parasitário canino e principalmente auxiliar na elaboração de medidas profiláticas. / There are several intestinal parasites able to affect dogs and cats, and stand out from those capable of causing public health impact because it is of zoonoses. Among them, T. canis and T. cati, causative agents of canine and feline toxocariases respectively, are responsible for the larva migrans syndromes visceral and ocular of humans. Domestic animals are part of the life cycle as definitive hosts becoming transmission focuses for the common human leisure environments. Infections can produce a range of clinical signs ranging from subclinical conditions to the death of the animal. The purpose of this study was to develop an ELISA immunoenzymatic assay method with good specificity for the diagnosis of toxocariasis in dogs, determined by the absorption of immunoglobulins which cross-react with antigens associated with other parasites. One hundred and forty dogs were selected in places with infection risk conditions to determine the seroprevalence of toxocariasis by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). The ELISA results were compared to parasitic frequency obtained by stool tests by Willes-Molay technique and spontaneous sedimentation. To perform the ELISA, standardization was performed by using excretory-secretory products of T. canis larvae as antigen. During the development of the ELISA, a step was included, in which serum samples were adsorbed with somatic antigens of Ascaris lumbricoides, Trichuris sp., Dipylidium caninum, Ancylostoma caninum to minimize cross-reactivity and increase the specificity of the test. The parasitological analysis resulted in 70.7% positive fecal samples, distributed as individual infections by Trichuris sp in 28.57%, Hookworms in 9.29%, T. canis in 1.43%, Cystoisospora 0.7%, and mixed infections (30, 7%). The optimum ELISA conditions were standardized as absorbing samples with 4 mg / mL of somatic antigen of other parasites; sensitizing wells with 3 µg/mL of Ag-E/S Toxocara and diluting sera and secondary antibody at 1: 1,000 and 1: 2,000 respectively. The seroprevalence was determined in 61.4% (86/140), using a cutoff value of 0.275. The sensitivity of the ELISA was of 100% and specificity of 94.44%. The different results between ELISA and parasitological tests obtained in the present study reflects the need for development of new specific tests able to diagnose mainly animals at subclinical stages due to the impact that may lead to public health. Therefore, the ELISA test that was developed in this work contributes as an useful method to complement the diagnosis of canine worm infections, so that to primarily assist in developing preventive measures.

O sorodiagnóstico da toxocaríase humana é geralmente baseado na detecção de anticorpos IgG anti-Toxocara spp. em amostras de soro pelo teste ELISA utilizando os antígenos de excreção-secreção de larvas de T. canis (TES). No entanto, observa-se uma ocorrência de reatividade cruzada com outras helmintíases nas áreas endémicas de poliparasitismo. Vários estudos têm mostrado que as glicanas presentes nos antígenos dos helmintos podem ser as responsáveis pela reatividade cruzada. Neste estudo, avaliamos o efeito da deglicosilação dos antígenos TES na sensibilidade e especificidade dos testes de ELISA e Western-blotting para detecção de anticorpos IgG, IgM e IgE. Para a deglicosilação dos antígenos TES, estes foram tratados com diferentes concentrações de hidróxido de sódio (NaOH) ou metaperiodato de sódio (NaIO4) e foram testados 58 amostras de soro de pacientes com toxocaríase visceral, 75 amostras de soros de pacientes com outras helmintíases, e 95 amostras de soro de indivíduos saudáveis. Nossos resultados mostraram que os antígenos TES foram totalmente deglicosilados com NaOH 100mM por 4 horas a 37°C (dTES), enquanto que o tratamento com NaIO4 não gerou bons resultados. A sensibilidade e especificidade dos antígenos TES e dTES na detecção de anticorpos IgG pelo teste de ELISA foi de 100%, com menor reatividade cruzada (5,3%) para os antígenos dTES, se comparada com os antígenos TES (13,3%). Todos os pacientes com toxocaríase mostraram anticorpos IgG contra as cinco frações dos antígenos TES (32, 45, 55, 70 e 120 kDa) e contra a única fração de 26kDa dos antígenos dTES, com sensibilidades e especificidades de 100% para ambos os antígenos. A reatividade cruzada, observada com as frações de 70 kDa, 55 kDa e 32 kDa dos antígenos TES, foi eliminada totalmente quando utilizaram-se os antígenos dTES. A detecção de anticorpos IgM pelo teste de ELISA mostrou reatividade inespecífica nos três grupos estudados, com sensibilidades de 39,7% e 34,5% e especificidades de 95,8% e 96,8%, para os antígenos TES e dTES, respectivamente, porém com ocorrência de reatividade cruzada de 24% e 28% para ambos os antígenos. Os três grupos estudados apresentaram reatividade contra quase todas as frações dos antígenos TES e dTES. A detecção de anticorpos IgE apresentou sensibilidades de 63,79% e 62,07% e uma especificidade de 100%, e uma reatividade cruzada de 26,6% e 53,3% para ambos os antígenos. A maioria dos pacientes com toxocaríase (74,1%) mostraram anticorpos contra as frações de 32, 55 e 70 kDa, em quanto que não houve reatividade nos pacientes com outras helmintíases ou nos indivíduos saudáveis. Estes resultados mostraram que a deglicosilação dos antígenos TES permite reduzir a ocorrência de reatividade cruzada nos pacientes com outras helmintíases, elevando o valor diagnóstico da detecção de anticorpos IgG. No entanto, este procedimento não permite melhorar a sensibilidade e especificidade na detecção de anticorpos IgM e não permite elevar a sensibilidade na detecção de anticorpos IgE pelo teste de ELISA. Por outro lado, os resultados discordantes na especificidade do Western-blotting para a detecção de anticorpos IgG, IgM e IgE sugerem a presença de epítopos conformacionais presentes no estado nativo dos antígenos TES que estariam implicados na reação cruzada observada no teste de ELISA / Serodiagnosis of human toxocariasis is usually based on the detection of anti-Toxocara spp. IgG antibodies in serum samples by ELISA test using T.canis larvae excretory-secretory (TES) antigens. However, a cross-reactivity occurrence is observed in endemic areas of polyparasitism. Many studies have shown that the glycan structures, present in helminth antigens, can be the responsible for the cross-reactivity. In this study, we evaluated the deglycosylation of the TES antigens on the sensitivity and specificity of both the ELISA and Western-blotting for the detection of IgG, IgM, and IgE antibodies. For the deglycosylation of the TES antigens, they were treated with different concentrations of sodium hydroxide (NaOH) or sodium metaperiodate (NaIO4), and 58 serum samples of 58 patients with visceral toxocariasis, 75 serum samples of patients with other helminth infections, and 95 serum samples of healthy individuals. Our results show that the TES antigens were totally deglycosylated with 100 mM NaOH for 4 hours at 37°C (dTES), whereas not good results were obtained with sodium metaperiodate. The sensitivity and specificity of both TES and dTES antigens were 100% in detecting IgG antibodies by ELISA; the cross-reactivity observed with TES antigens (13.3%) was reduced (5.3%) when dTES antigens were used. All toxocariasis patients showed IgG antibodies against the five fractions of TES antigens (32, 45, 55, 70, and 120 kDa), but also with the 26-kDa single fraction of dTES antigens, with sensitivities and specificities of 100% for both antigens. The occurrence of cross-reactivity, observed mainly with the 32-, 55-, and 70 kDa fractions of the TES antigens, was totally eliminated when the dTES antigens were used. The detection of IgM antibodies by ELISA test showed unspecific reactivity in all studied groups, with sensitivities of 39.7% and 34.5%, and specificities of 95.8% and 96.8% for both antigens; the occurrence of cross-reactivity for both antigens were 24% and 28%, respectively. All studied groups have IgM antibodies against almost all fractions of TES antigens and the single fraction of dTES. The detection of IgE antibodies by ELISA test showed sensitivities of 63.8% and 62%, specificities of 100%, and occurrence of reactivity of 26.6% and 53.3% for TES and dTES antigens, respectively. The majority of the toxocariasis patients (74.1%) showed IgE antibodies against the 32-, 55-, and 70 kDa fractions of the TES antigens, whereas there was not reactivity in sera from patients with other helminth infections or healthy individuals. These results showed that the deglycosylation of the TES antigens reduces the occurrence of cross-reactivity in patients with other helminth infections, increasing the diagnostic value for the detection of IgG antibodies. However, this procedure does not improve the sensitivity nor reduces the occurrence of cross-reactivity in the detection of IgM antibodies. Likewise, this procedure does not improve the sensitivity in the detection of IgE antibodies by the ELISA test. On the other hand, the high specificity obtained in the detection of IgG, IgM, and IgE by Western-blotting suggest that conformational epitopes of the TES antigens may also be the responsible for the cross-reactivity in the ELISA test

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_fernando_maia_filho.pdf: 887775 bytes, checksum: 3c3975ac6a38b09b73992b6becd71cd9 (MD5) Previous issue date: 2012-03-08 / The high prevalence of Toxocara canis in dogs, associated with environmental contamination and the resistance of eggs in the soil increase the exposure of humans front of the parasite. Moreover, the difficulties of implementation of control measures and disinfection, allied to the problems inherent to chemical control, justifying the need for alternative measures that assist in controlling parasitoses transmitted by the soil. Among these measures, we highlight the use of nematophagous fungi.This study had the objective of valuating the activity of in vitro ovicide of isolated fungi based on soil collected in public places in the city of Pelotas, RS, Brazil. Samples of soil from ten localities were sowed in agar water 2% with antibiotics and incubated at 25ºC for 21 days. The ovicide activity of the fungal isolates obtained was tested in vitro in five repetitions for each analyzed insulator. An mL of an embryonated egg suspension of Toxocara canis (103 eggs) was poured over the fungal cultures grown in agar water for 10 days. At intervals of 7, 14 and 21 days, 100 eggs were removed from each plaque and evaluated in optical microscopy. Acremonium spp., Aspergillus spp., Bipolaris spp., Fusarium spp., Gliocladium spp., Mucor spp. and Trichoderma spp. were isolated from the soil. In this order, a significant ovicidal type 3 effect was observed in Trichoderma spp., Fusarium complex solani and Acremonium spp.. Trichoderma spp. presented an ovicidal effect on the 14th day of fungus-egg interaction. The other fungal genera tested presented a type 2 effect. The results obtained showed the presence of nematophagous fungi parasites of eggs in soil in the Southern region of Brazil and demonstrated the ovicidal activity of Trichoderma spp. and Fusarium complex solani on T. canis eggs. / As altas prevalências de Toxocara canis em cães associada à frequente contaminação ambiental e a resistência dos ovos no solo, incrementam a exposição do homem à este parasito. Além disso, as dificuldades de implantação de medidas de controle e desinfecção, aliadas aos problemas inerentes ao controle químico, justificam a necessidade de medidas alternativas que auxiliem no controle das parasitoses transmitidas pelo solo. Dentre essas medidas, destaca-se a utilização de fungos nematófagos. O presente estudo objetivou avaliar a atividade ovicida in vitro de fungos isolados a partir de solos coletados em áreas públicas do município de Pelotas, RS, Brasil. Amostras de solo de dez locais foram semeadas em agar água 2% com antibióticos e incubadas a 25ºC por 21 dias. A atividade ovicida dos isolados fúngicos obtidos foi testada in vitro, em cinco repetições para cada isolado analisado. Um mL de uma suspensão de ovos embrionados de Toxocara canis (103 ovos) foi vertido sobre as culturas fúngicas crescidas em agar água por 10 dias. Em intervalos de 7, 14 e 21 dias, 100 ovos eram retirados de cada placa e avaliados em microscopia óptica. A partir do solo foram isolados Acremonium spp., Aspergillus spp., Bipolaris spp., Fusarium spp., Gliocladium spp, Mucor spp.e Trichoderma spp. Nesta ordem, efeito ovicida tipo 3 significativo foi observado em Trichoderma spp., Fusarium complexo solani e Acremonium spp.. Trichoderma spp apresentou efeito ovicida ao 14º dia de interação fungo-ovo. Os demais gêneros fúngicos testados apresentaram efeito tipo 2. Os resultados obtidos demonstram a presença de fungos nematófagos parasitos de ovos em solos da região sul do Brasil e evidenciam a atividade ovicida do gênero Trichoderma spp. e Fusarium complexo solani sobre ovos de T. canis.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_luciana_farias_de_avila.pdf: 694216 bytes, checksum: 2cf9fb771df7dbb6ec1fe2e6a686b706 (MD5) Previous issue date: 2013-11-29 / Human toxocariasis is a zoonotic disease with high prevalence in developing countries and it has been considered one of the most prevalent helminthiasis in Latin America. Probiotics modulate the immune response, which open up a new perspective of their use for prevention and treatment of parasitic diseases. To study the possible mechanisms of action mediated by the probiotic Saccharomyces boulardii, the aim of this study was to evaluate its immunomodulatory effect in Toxocara canis experimentally infected mice. Initially an in vitro test was performed to assess the existence of harmful effect of probiotic on T. canis. Next, was evaluated the modulation of the immune response of Swiss mice supplemented with S. boulardii and experimentally infected by T. canis. To this end the expressions of IL- 12, IL-17, IL-10, IL-4 and IFNγ cytokines in spleen cells from mice at 24 and 48h post- infection were studied by quantitative polymerase chain reaction (qPCR). The results indicate that the probiotic has no direct effect on parasites larvae, suggesting that is necessary the contact of S. boulardii with the intestinal mucosa of the host to the development of its protective effect. Furthermore S. boulardii promoted reduction of approximately 40% of the number of T. canis larvae recovered. Supplementation with S. boulardii modulated by increasing the expression of IL-12 (7 times), IL-17 (42 times) after 24h of infection and IFNγ (43 times), in uninfected mice. Splenic expression modulation of IL-10 was reduced by half in 48h of infection supplemented mice, and the IL-4 expression showed no difference between groups under the studied conditions. Modulation of innate immunity observed in S. boulardii supplemented mice suggests the elevation of IL-12 and IL-17 as one of the mechanisms involved in the resistance by this probiotic to T. canis infection. / A toxocaríase humana é uma zoonose negligenciada com alta prevalência em países em desenvolvimento, sendo considerada uma das helmintoses mais prevalentes na América Latina. Probióticos modulam a resposta imune, o que permite uma nova perspectiva de sua utilização na prevenção e no tratamento de doenças parasitárias. Para estudar possíveis mecanismos da ação probiotica mediada por Saccharomyces boulardii, o objetivo deste estudo foi avaliar seu efeito imunomodulador em camundongos experimentalmente infectados por Toxocara canis. Inicialmente foi realizado um teste in vitro para avaliar a existência de ação nociva do probiótico sobre T. canis. A seguir, foi avaliada a modulação da resposta imune de camundongos Swiss suplementados com S. boulardii e infectados experimentalmente por T. canis. Para tal foram estudadas as expressões das citocinas IL-12, IL-17, IL-10, IL-4 e IFNγ em esplenócitos de camundongos com 24 e 48h pós-infecção, pelo método quantitativo da reação em cadeia da polimerase (qPCR). Os resultados obtidos revelam que o probiótico não possui ação direta sobre as larvas do parasito, sugerindo que se faz necessário o contato de S. boulardii com a mucosa intestinal do hospedeiro para o desenvolvimento de seu efeito protetor. Além disso, foi evidenciado que S. boulardii promoveu redução de aproximadamente 40% no número de larvas de T. canis recuperadas. A suplementação com S. boulardii promoveu modulação aumentando a expressão das citocinas IL-12 (7 vezes), IL-17 (42 vezes) após 24h da infecção e IFNγ (43 vezes), nos camundongos não infectados. A modulação da expressão esplênica de IL-10 foi reduzida à metade nos camundongos suplementados após 48h de infecção, e a expressão de IL-4 não mostrou diferença entre os grupos nas condições estudadas. A modulação da imunidade inata, observada em camundongos suplementados com S. boulardii, sugere a elevação da expressão de IL-12 e IL-17 como um dos mecanismos envolvidos por este probiótico na resistência à infecção por T. canis.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO COMPLETA_22_02_2010.pdf: 203018 bytes, checksum: 39a76f0e8ce3bb1f69c19ef1b6beda03 (MD5) Previous issue date: 2009-08-27 / Toxocariasis has been considered one of the most important helminthozoonosis worldwide. The purpose of this study was to evaluate the seroprevalence of anti-Toxocara antibodies and the risk and protective factors for toxocariasis in 252 children from two different socioeconomic classes. The seroprevalences of Toxocara infection in 126 children who received care from private health services (middle-class) and 126 children who received care from public health services (disadvantaged children) were 9.5% and 12.7%, respectively. The risk factors (RF) of toxocariasis were evaluated using bivariate analysis complemented by logistic regression. Toxocara seroprevalence was inversely proportional to family income. Being a female and belonging to a family whose monthly income was higher were considered protective factors. However, owning a cat was a RF for children from both the total population and each of the subgroups, whereas owning a dog was considered a RF for only the middle-class children. This study shows that epidemiological risk and protective factors of toxocariasis can influence distinctively different strata of a population. Thus, it is relevant to evaluate the risk and protective factors for different socioeconomic classes to design future investigations and programs to prevent the human infection of Toxocara spp. and other geohelminths. / A toxocaríase tem sido considerada como uma das mais prevalentes helmintozoonoses em todo o mundo. A finalidade deste estudo transversal foi avaliar a seroprevalência de anticorpos IgG para Toxacara canis em 253 crianças (0-15 anos) de Presidente Prudente, São Paulo, atendidas por dois sistemas de saúde diferentes, bem como os fatores de risco e de proteção associados à toxocaríase. A soropositividade em crianças assistidas por sistemas de saúde privados e públicos foram, respectivamente, 9,5% (12/126) e 12,5% (16/127). As análises do potencial de fatores de riscos e sua relação com toxocaríase foram avaliadas pela análise bivariada complementada pela regressão logística, com variáveis que apresentam valor de p<0,2. Observou-se que a frequência de anticorpos nas crianças inversamente proporcional à renda familiar. Ser criança do sexo feminino e de uma família cuja renda familiar era mais elevada foram considerados como fatores de proteção. Possuir gato foi um fator de risco para a população total e para os dois subgrupos estudados, enquanto que possuir cão foi considerado como fator de risco para as crianças atendidas pelo sistema privado. Esses dados mostram que os fatores de risco e de proteção podem ser diferentes a depender da classe social. Dessa forma, é relevante avaliar esses fatores em diferentes classes sócioeconômicas para a elaboração de programas de prevenção à infecção humana por Toxocara spp. e por outros geohelmintos

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao.pdf: 208468 bytes, checksum: 9493c81d791b19a0b7ecb64fc69e95f8 (MD5) Previous issue date: 2010-06-21 / With the aim of studying the changes promoted by larvae of Toxocara canis on the cardiac enzymes creatine kinase (CK), creatine kinase MB fraction (CK-MB) and lactate dehydrogenase (LDH) from rats three months old, according to load infective and time, two groups were formed with 24 animals, 12 males and 12 females per group. The animals received 250 (Group I) and 1000 (Group II) eggs larvae of T. canis, orally. Another group, consisting of 12 animals, six of each sex served as controls. On day seven, 15, 30, 60, 120 and 180 post-infection was performed in each moment, the euthanasia of four animals from each of the two experimental groups and control group. Blood samples were collected by puncturing the caudal vena cava. The peaks of enzyme activity measured in animals infected with 250 eggs preceded those of animals that received 1000 eggs. It can be concluded that the lower the infective load faster is to increase the activity of enzymes used as markers and cardiac changes are more precocious in other tissues as compared to the heart muscle. / Com o objetivo de estudar as alterações promovidas por larvas de Toxocara canis sobre as enzimas cardíacas creatinoquinase (CK), creatinoquinase fração MB (CK-MB) e lactato desidrogenase (LDH) de ratos Wistar de três meses de idade, em função da carga infectante e do tempo, foram formados dois grupos com 24 animais, 12 machos e 12 fêmeas por grupo. Os animais receberam 250 (Grupo I) e 1000 (Grupo II) ovos larvados de T. canis, por via oral. Outro grupo, constituído por 12 animais, seis de cada sexo, serviu como controle. Nos dias sete, 15, 30, 60, 120 e 180 pós-infecção, foi realizada, em cada momento, a eutanásia de quatro animais de cada um dos grupos experimentais e dois do grupo controle. Amostras de sangue foram colhidas por punção da veia cava caudal. Os picos de atividade das enzimas avaliadas nos animais infectados com 250 ovos antecederam aqueles dos animais que receberam 1000 ovos. Pode-se concluir que quanto menor a carga infectante mais rápida é a elevação de atividade das enzimas utilizadas como marcadores cardíacos e as alterações são mais precoces em outros tecidos, quando comparadas à musculatura cardíaca.