Submitted by Emanoel Martins Filho (emanoelfilho@ufba.br) on 2016-09-12T21:19:34Z No. of bitstreams: 1 FRANCILENE_SILVA.pdf: 1429674 bytes, checksum: 57b0fa5ba9304cf5e6ba120a84768a4f (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barroso (pbarroso@ufba.br) on 2016-09-13T20:35:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 FRANCILENE_SILVA.pdf: 1429674 bytes, checksum: 57b0fa5ba9304cf5e6ba120a84768a4f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-13T20:35:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FRANCILENE_SILVA.pdf: 1429674 bytes, checksum: 57b0fa5ba9304cf5e6ba120a84768a4f (MD5) / CONS NAC DE DESENVOLVIMENTO CIENTIFICO E TECNOLOGICO - CAPES / Toxoplasma gondii é considerado uma das principais causas de aborto infeccioso em caprinos. Como coccídeo formador de cistos teciduais, constitui um problema de saúde pública, uma vez que pode ser transmitido ao homem através do consumo de carne e leite contaminados. O objetivo desse estudo foi investigar aspectos da resposta imune humoral e celular em caprinos infectados experimentalmente com cepas TOX 31 e RH de T. gondii. Comparou-se a eficiência dos métodos de ELISA indireto e Imunofluorescência Indireta (IFI) na detecção de anticorpos IgG específicos. Para avaliar a resposta imune celular, quantificou-se a concentração de IFN-gama nos sobrenadantes de cultura das células do sangue periférico. Ao todo foram utilizados 21 caprinos sem raça definida divididos em três grupos: um controle e dois grupos experimentais infectados com as cepas RH e TOX 31, respectivamente. A cinética da resposta imune humoral à infecção experimental foi avaliada através de anticorpos específicos. A comparação da proficiência entre o ELISA e o teste padrão ouro, IFI, apresentou sensibilidade de 70% e uma específicidade de 96,5%, demonstrando a boa eficiência do ELISA para detectar os verdadeiros negativos, isto é, diferenciar os animais infectados daqueles sem infecção. Em ambos os grupos de animais infectados observou-se uma rápida resposta imune humoral, com uma soroconversão para anticorpos da classe IgG no 15° dia, com níveis séricos máximos de anticorpos específicos aparecendo no sexagésimo dia após a infecção. Em relação a resposta imune celular, a estimulação “in vitro” com os antígenos contendo diferentes concentrações de proteína, induziram alta produção de IFN-gama nos animais infectados com ambas as cepas. Embora o antígeno nas três concentrações tenha estimulado a síntese e secreção dessa citocina em animais infectados, apenas as concentrações com 1 e 2 µg de antígeno do lisado total de T. gondii produziram resultados estatisticamente significativos. As células dos animais não infectados após estímulo antigênico frente às três diferentes concentrações apresentaram baixa produção de IFN-gama. O estudo histopatológico dos linfonodos submandibulares dos animais infectados com T. gondii apresentaram hiperplasia linfóide folicular discreta e hemorragia subcapsular, que coincidiu com os resultados sorológicos. / Toxoplasma gondii is considered one of the main causes of infectious abortions in goats. As coccidia forming tissue cysts, is a public health problem, since it can be transmitted to humans through the consumption of contaminated meat and milk. The aim of this study was to investigate aspects of the humoral and cellular immune response in infected goats experimentally with strains 31 and TOX T. gondii RH. It compared the efficiency of indirect ELISA and indirect immunofluorescence (IIF) on detection of specific IgG antibodies. To evaluate the cellular immune response was quantified the concentration of IFN-gamma in the culture supernatants of peripheral blood cells. Altogether we used 21 goats mongrel divided into three groups: one control and two experimental groups infected with the RH strain TOX and 31, respectively. The kinetics of humoral immune response to experimental infection was assessed using specific antibodies. Comparison between ELISA proficiency and gold standard test IFA showed a sensitivity of 70% and a specificity of 96.5%, showing good efficiency ELISA to detect true negatives, i.e., to differentiate infected animals from those without infection. In both groups of animals infected observed rapid humoral immune response, with seroconversion to IgG antibodies on day 15 with peak serum levels of specific antibodies appearing on the sixtieth day after infection. Regarding the immune response, stimulation "in vitro" with the antigens containing different protein concentrations induced a high production of IFN-gamma in animals infected with both strains. Although the antigen in three concentrations has stimulated the synthesis and secretion of this cytokine in infected animals, only concentrations at 1 and 2 ug total of antigen T. gondii lysate produced statistically significant results. The animal cells uninfected after antigenic stimulus front at three different concentrations showed low production of IFN-gamma. Histopathological study of the submandibular lymph nodes of animals infected with T. gondii had mild follicular lymphoid hyperplasia and subcapsular hemorrhage, which coincided with the serological results.

Submitted by Emanoel Martins Filho (emanoelfilho@ufba.br) on 2016-09-13T00:53:42Z No. of bitstreams: 1 Rogerio_Fernando.pdf: 1011706 bytes, checksum: ec29e66873bd428e74520f5f059408bb (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barroso (pbarroso@ufba.br) on 2016-09-13T20:36:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Rogerio_Fernando.pdf: 1011706 bytes, checksum: ec29e66873bd428e74520f5f059408bb (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-13T20:36:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rogerio_Fernando.pdf: 1011706 bytes, checksum: ec29e66873bd428e74520f5f059408bb (MD5) / CONS NAC DE DESENVOLVIMENTO CIENTIFICO E TECNOLOGICO - CAPES / Toxoplasma gondii é um protozoário coccídeo formador de cistos teciduais, que tem como hospedeiros definitivos os felídeos, e como hospedeiros intermediários mamíferos e aves. É um parasito disseminado em todos os continentes, que infecta aproximadamente um terço da população humana e pode causar encefalite fatal em pacientes imunodeficientes. Nos animais, tem relevância principalmente em pequenos ruminantes, por causar abortos e outras alterações reprodutivas. Quirópteros podem se infectar com T. gondii e atuarem como fonte de infecção para animais silvestres, domésticos e o homem. No Brasil, ocorre uma alta variabilidade genética do parasito, que pode ser explicada pela grande variedade de hospedeiros no ambiente silvestre. Objetivou-se com este estudo determinar a frequência de infecção em quirópteros de vida livre no estado da Bahia por T. gondii e realizar o isolamento in vivo do protozoário a partir desses animais. Foram utilizadas 124 amostras, provenientes de 97 indivíduos de sete espécies de morcegos, capturados entre os anos de 2008 e 2015, sendo encontrados dois indivíduos positivos por meio da PCR de tecidos, correspondendo a 2,06% de positividade. Nenhum isolamento foi realizado uma vez que os tecidos disponíveis para bioensaio apresentaram-se negativos na PCR / Toxoplasma gondii is a cyst-forming protozoan coccidia, which has felids as definitive hosts, and mammals and birds as intermediate hosts. It’s distributed in all continents and infects about a third of the human population. T. gondii can cause fatal encephalitis in immunodeficient patients. In animals, it’s relevant mainly in small ruminants, for causing abortions and other reproductive abnormalities. Bats can become infected with T. gondii and act as a source of infection for wild and domestic animals and man. In Brazil, there is a high genetic variability of the parasite, which can be explained by the great variety of hosts in the wild environment. The objective of this study was to determine the frequency of free-living bats infection in Bahia by T. gondii and perform in vivo isolation of the parasite from these animals. A total of 124 samples were used from 97 individuals of seven species of bats, caught between the years 2008 and 2015. Two animals were positive by tissue PCR, corresponding to 2.06% of positivity. No isolation was achieved once the tissue available for bioassay showed to be negative by PCR.

Submitted by Rosivalda Pereira (mrs.pereira@ufma.br) on 2017-08-22T17:51:47Z No. of bitstreams: 1 ZulmiraBatista.pdf: 174359 bytes, checksum: ad9eb8a6efe853246b6a9973287c6342 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-22T17:51:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ZulmiraBatista.pdf: 174359 bytes, checksum: ad9eb8a6efe853246b6a9973287c6342 (MD5) Previous issue date: 2014-06-30 / Fundação de Amparo à Pesquisa e ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Maranhão (FAPEMA) / Visceral leishmaniasis (VL) is a anthropozoonosis worldwide distribution that affects humans, canines and marsupials. The disease is caused by different species of protozoa of the genus Leishmania and is transmitted by the bite of sand flies insects. The dog has been appointed as the main host and reservoir of LV, being probably the most important natural reservoir related to human cases. Moreover, it has a key role in the expansion of the disease in endemic areas. This study aimed to evaluate the cytokine profile, hematological and biochemical dogs with Leishmania infantum and treated with dry extract of Morinda citrifolia. For this study, nine dogs of both sexes and various breeds were used. Screening of animals was given through the ELISA / S7® testing and detection of parasites in blood smears. Animals used in the studies were all symptoms. To conduct the survey EDTA blood for complete blood count and blood without EDTA to carry out the biochemical and cytokines were collected. Tissue was also harvested in ear for conducting histopathological and immunohistochemical examinations. The following clinical variables was evaluated: hypertrophy of popliteal lymph nodes, skin changes, onychogryphosis, cachexia and eye injuries. Regarding clinical signs was observed that 78% had lymphadenopathy, 67% had skin lesions; 55% had hepatosplenomegaly, 44% had been slimming 33% presence of ocular lesions. While determining the hematologic values was statistically significant (p ≤ 0.05) in the values of MCV and platelet count. For the evaluation of the biochemical significance was (p = 0.05) for serum ALT, AST, urea and creatinine. Regarding cytokine assay no significant statistical result. The histopathological examination demonstrated decreased inflammation. And the examination of immunohistochemical not demosntrated presence of the parasite. Thus, it appears that studies of the differences in the cytokine profile in dogs presenting the most diverse forms of symptoms of CVL are inconclusive, since the results are contradictory. / A leishmaniose visceral (LV) é uma antropozoonose de distribuição mundial, que acomete o homem, canídeos e marsupiais. A doença é causada por diferentes espécies de protozoários do gênero Leishmania e é transmitida pela picada de insetos flebotomíneos. O cão vem sendo apontado como principal hospedeiro e reservatório da LV, sendo provavelmente o mais importante reservatório natural relacionado aos casos humanos. Além disso, tem um papel fundamental na expansão da doença em áreas endêmicas. O presente trabalho teve como objetivo avaliar o perfil de citocinas, hematológico e bioquímico de cães portadores de Leishmania infantum e tratados com extrato seco de Morinda citrifolia. Para este estudo foram utilizados nove cães, de ambos os sexos e raças variadas. A triagem dos animais deu-se através do teste de ELISA/S7® e pesquisa do parasito em esfregaços sanguíneos. Os animais utilizados na pesquisas eram todos sintomáticos. Para realização da pesquisa foram colhidos sangue com EDTA para realização do hemograma e sangue sem EDTA para realização das dosagens bioquímicas e de citocinas. Foi colhido fragmento da pele da orelha para realização de exames histopatológicos e imunohistoquímicos. Foram avaliadas as seguintes variáveis clínicas: hipertrofia de linfonodos poplíteos, alterações cutâneas, onicogrifose, caquexia e lesões oculares. Quanto aos sinais clínicos observou-se que 78% apresentavam linfoadenopatia, 67% apresentavam alterações cutâneas; 55% apresentavam hepatoesplenomegalia, 44 % apresentavam estado de emagrecimento 33% presença de lesões oculares. Ao se verificar os valores hematológicos houve significado estatístico (p≤0,05) nos valores do VGM e contagem de plaquetas. Para a avaliação das provas bioquímicas houve significado estatístico (p≤0,05) para a dosagem de ALT, AST, ureia e creatinina. Em relação a dosagem de citocinas não houve resultado estatístico significante. O exame histopatológico demostrou diminuição do processo inflamatório. E o exame de imunohistoquímica não demonstrou presença do parasito. Dessa maneira, verificou-se que os estudos das diferenças no perfil de citocinas em cães que apresentavam as mais diversas formas de sintomas da LVC são inconclusivos, visto que os resultados encontrados são contraditórios.

Submitted by Emanoel Martins Filho (emanoelfilho@ufba.br) on 2016-09-13T01:29:53Z No. of bitstreams: 1 Carlos_Jose.pdf: 1542832 bytes, checksum: 5aa9be2cd715ccd9ddd9ede563b3fe9e (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barroso (pbarroso@ufba.br) on 2016-09-13T20:32:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Carlos_Jose.pdf: 1542832 bytes, checksum: 5aa9be2cd715ccd9ddd9ede563b3fe9e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-13T20:32:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carlos_Jose.pdf: 1542832 bytes, checksum: 5aa9be2cd715ccd9ddd9ede563b3fe9e (MD5) / CONS NAC DE DESENVOLVIMENTO CIENTIFICO E TECNOLOGICO - Programa TWAS/CNPq / Diversos são os parasitos intestinais capazes de acometer cães e gatos, e destacam-se aqueles capazes de causar impacto na saúde pública por tratar-se de zoonoses. Dentre eles, o Toxocara canis e o Toxocara cati, agentes causadores das toxocaríases canina e felina respectivamente que são responsáveis pelas síndromes larva migrans visceral e ocular do homem. Os animais domésticos integram o ciclo evolutivo como hospedeiros definitivos criando focos de transmissão em ambientes comuns ao lazer humano. As infecções podem produzir uma gama de sinais clínicos que variam desde um quadro subclínico até a morte do animal. O propósito do presente estudo foi desenvolver um método de ensaio imunoenzimático de ELISA indireto com especificidade ótima para o diagnóstico de toxocaríase em cães, determinada pela absorção de imunoglobulinas que reagem cruzadamente com antígenos associados a outras parasitoses. Foram selecionados 140 cães em condições de risco de infecção para determinação da soroprevalência de toxocaríase através do ensaio imunoenzimático indireto (ELISA). Os resultados do ELISA foram comparados à frequência parasitária obtida por exames coprológicos pela técnica de Willes-Molay e Sedimentação espontânea. Para realização do ELISA indireto, padronizou-se o teste com antígeno excretório-secretório de T. canis, produzido a partir de larvas dos parasitos. Durante o desenvolvimento do método ELISA, foi incluída uma etapa em que amostras de soro foram absorvidas em antígenos de Ascaris lumbricoides, Trichuris sp., Ancylostoma caninum e Dipylidium caninum para minimizar a reatividade cruzada e aumentar a especificidade do teste. A análise parasitológica evidenciou 70,7% de amostras fecais positivas, distribuídas como infecções individuais por Trichuris sp em 28,57%, Ancilostomídeos em 9,29%, T. canis em 1,43%, Cystoisospora em 0,7%, além de infecções mistas. As condições ideais para realização da sorologia foram padronizadas, absorvendo as amostras com 4 mg/ml de antígeno somático dos demais parasitos, sensibilização com 3 µg/mL de Antígeno excretório/secretório de T. canis, diluições dos soros e anticorpo secundário em 1:1000 e 1:2000 respectivamente. A soroprevalência foi determinada em 61,4% (86/140), utilizando o ponto de corte de 0,275. A sensibilidade do teste ELISA foi determinada em 100% e a especificidade em 94,44%. Evidenciou-se, portanto, uma baixa positividade do exame parasitológico contrapondo-se à alta soropositividade de detecção de animais com toxocaríase. Assim, o ELISA desenvolvido no presente estudo contribui para atender ao necessário desenvolvimento de novos testes diagnósticos específicos, capazes de diagnosticar principalmente os animais em estágios subclínicos, devido ao impacto que podem acarretar à saúde pública. Concluímos que os exames sorológicos devem ser empregados para complementar o diagnóstico parasitário canino e principalmente auxiliar na elaboração de medidas profiláticas. / There are several intestinal parasites able to affect dogs and cats, and stand out from those capable of causing public health impact because it is of zoonoses. Among them, T. canis and T. cati, causative agents of canine and feline toxocariases respectively, are responsible for the larva migrans syndromes visceral and ocular of humans. Domestic animals are part of the life cycle as definitive hosts becoming transmission focuses for the common human leisure environments. Infections can produce a range of clinical signs ranging from subclinical conditions to the death of the animal. The purpose of this study was to develop an ELISA immunoenzymatic assay method with good specificity for the diagnosis of toxocariasis in dogs, determined by the absorption of immunoglobulins which cross-react with antigens associated with other parasites. One hundred and forty dogs were selected in places with infection risk conditions to determine the seroprevalence of toxocariasis by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). The ELISA results were compared to parasitic frequency obtained by stool tests by Willes-Molay technique and spontaneous sedimentation. To perform the ELISA, standardization was performed by using excretory-secretory products of T. canis larvae as antigen. During the development of the ELISA, a step was included, in which serum samples were adsorbed with somatic antigens of Ascaris lumbricoides, Trichuris sp., Dipylidium caninum, Ancylostoma caninum to minimize cross-reactivity and increase the specificity of the test. The parasitological analysis resulted in 70.7% positive fecal samples, distributed as individual infections by Trichuris sp in 28.57%, Hookworms in 9.29%, T. canis in 1.43%, Cystoisospora 0.7%, and mixed infections (30, 7%). The optimum ELISA conditions were standardized as absorbing samples with 4 mg / mL of somatic antigen of other parasites; sensitizing wells with 3 µg/mL of Ag-E/S Toxocara and diluting sera and secondary antibody at 1: 1,000 and 1: 2,000 respectively. The seroprevalence was determined in 61.4% (86/140), using a cutoff value of 0.275. The sensitivity of the ELISA was of 100% and specificity of 94.44%. The different results between ELISA and parasitological tests obtained in the present study reflects the need for development of new specific tests able to diagnose mainly animals at subclinical stages due to the impact that may lead to public health. Therefore, the ELISA test that was developed in this work contributes as an useful method to complement the diagnosis of canine worm infections, so that to primarily assist in developing preventive measures.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2015-12-18T09:46:49Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 926264 bytes, checksum: 416b10a79cd9725bb4a42f91379a81ee (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-18T09:46:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 926264 bytes, checksum: 416b10a79cd9725bb4a42f91379a81ee (MD5) Previous issue date: 2015-08-14 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superio / As duas espécies de Mycoplasma mais prevalentes na indústria suinícola são Mycoplasma hyopneumoniae e Mycoplasma hyorhinis. Estes patógenos podem causar perdas econômicas significativas para os produtores e para a indústria. Variabilidade genética tem sido observada em cepas de M. hyopneumoniae usando diferentes técnicas de tipificação. Já a diversidade genética de M. hyorhinis tem sido o foco de um número limitado de estudos nos últimos anos. Mycoplasma apresentam numerosas regiões repetitivas (VNTR) no seu genoma, e essas regiões repetitivas são conhecidos por serem sítios ativos para recombinação genética. Isso trouxe em evidencia a hipótese de que a análise em multilocus de repetições em Tandem de número variável (MLVA) seria uma técnica adequada para investigar a variação genética em Mycoplasma. Portanto, o objetivo principal desta dissertação foi investigar a distribuição não aleatória dos genótipos de diferentes localizações geográfica usando análise em multilocus de repetições em Tandem de número variável (MLVA) para tipificar M. hyopneumoniae e M. hyorhinis avançando o conhecimento sobre a diversidade genética e epidemiologia desses agentes. Quando o foco foi o estudo da diversidade genética de M. hyopneumoniae, um elevado número de tipos de MLVA parecem circular entre rebanhos de suínos com uma distribuição não aleatória dos tipos de MLVA entre regiões. Um único tipo comum não foi identificado entre as amostras obtidas a partir de todas as regiões em estudo. Do mesmo modo, foi observada a diversidade genética de M. hyorhinis, com uma variação limitada em um dos VNTRs alvo. Um ponto relevante observado neste estudo foi a identificação de diferentes tipos de MLVA no mesmo animal em diferentes tipos de amostras, o que sugere que o animal foi colonizado por diferentes cepas. Com foco na indústria de suínos do Brasil, uma das mais importantes do mundo, um estudo específico observou uma elevada diversidade de cepas de M. hyopneumoniae em circulação no país. A comparação entre o número de repetições em tandem (TR) no P97 RR1 e RR3 P146 mostrou uma correlação negativa significativa o que pode sugerir um possível mecanismo compensatório que permitiria a bactéria manter sua capacidade de aderência completa mesmo após a redução da TR em RR1-P97. Em conclusão, a identificação da heterogeneidade genética de M. hyopneumoniae e M. hyorhinis ajudará investigações epidemiológicas ou de surtos locais e ajudará conceber estratégias de controle futuras, bem como servir como uma ferramenta potencial para o estudo da biologia evolutiva da espécie. / The two most prevalent Mycoplasmas species present in the swine industry are Mycoplasma hyopneumoniae and Mycoplasma hyorhinis. These pathogens can cause significant economic losses for producers and for the industry. Genetic variability has been observed in M. hyopneumoniae using different techniques and heterogeneity of M. hyorhinis has been the focus of a limited number of studies in the past years. The fact that Mycoplasma genomes contain numerous repetitive regions (VNTR) within their DNA and that they are known to be active sites for genetic recombination has prompted the hypothesis that Multiple locus variable number tandem repeat analysis (MLVA) would be an appropriate technique to investigate genetic variation in Mycoplasma. Therefore, the main goal of this dissertation was to investigate the non random distribution of genotypes from different geographical location using multiple locus variable tandem repeat analysis (MLVA) to type M. hyopneumoniae and M. hyorhinis and advance the knowledge on the genetic diversity and the epidemiology of these pathogens.When the M. hyopneumoniae study was taken in account, a high number of M. hyopneumoniae MLVA types appear to circulate among swine herds with a non-random distribution of the MLVA types among regions, also a common type was not identified among samples obtained from all regions in this study. Likewise, heterogeneity of M. hyorhinis was observed, with limited variation in one of the target VNTR in the M. hyorhinis study. A relevant point observed in this study was that different MLVA types were identified in the same animal in different sample types, which suggests that the pig was colonized with different strains. With a focus on Brazil pig industry, one of the most important in the world, a specific study observed a high heterogeneity of M. hyopneumoniae strains circulating in the country, and the comparison between the number of tandem repeats (TR) in RR1 P97 and RR3 P146 showed a significant negative correlation that may suggest a possible compensatory mechanism that would allow the bacterium to keep its full adhesion capacity even after reduction of TR in RR1-P97. In conclusion, the identification of the genetic heterogeneity of M. hyopneumoniae and M. hyorhinis will assist local epidemiological or outbreak investigations, design future control strategies as well as serve as a potential tool to study the evolutionary biology of this species.

Submitted by Amauri Alves (amauri.alves@ufv.br) on 2015-11-04T12:14:30Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 583903 bytes, checksum: 2502ab1ef4041967c288e1621742e282 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-04T12:14:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 583903 bytes, checksum: 2502ab1ef4041967c288e1621742e282 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Neste estudo foram analisadas 100 amostras de sangue de cães com trombocitopenia importante (plaquetas < 100.000/μL), oriundas da rotina laboratorial de atendimento do Hospital Veterinário da Universidade Federal de Viçosa (UFV), Viçosa, Minas Gerais. Todas as amostras de sangue foram submetidas ao analisador hematológico automático, à confecção de esfregaços sanguíneos de sangue total, à capa de leucócitos e à técnica de centrifugação por gradiente de densidade. Além disto, as amostras foram submetidas à extração de DNA e posteriormente à reação em cadeia da polimerase (PCR), para o diagnóstico molecular de Ehrlichia spp., Hepatozoon sp., Babesia spp., Anaplasma spp. e Leishmania spp. Os resultados da PCR confirmaram amostras positivas para Ehrlichia spp. (69%), Hepatozoon sp. (25%), Babesia spp. (16%) e Anaplasma platys (4%), com alguns animais apresentando até três patógenos em coinfecção. Verificou-se ainda estreita relação entre a ocorrência da trombocitopenia e erliquiose e a alta frequência de coinfecções. A centrifugação por gradiente de densidade mostrou-se bastante sensível na identificação do Hepatozoon canis, com resultados superiores aos das técnicas tradicionais (esfregaço sanguíneo e capa de leucócitos) e concordância substancial com a PCR. Foram observadas diferenças significativas nos parâmetros sanguíneos entre os animais com e sem hematozoários, como a presença de desvio nuclear de neutrófilos à esquerda maior nos animais positivos para Babesia spp. e alterações no volume plaquetário médio e PDWc nos animais com erliquiose. No sequenciamento realizado, identificou-se a presença de várias espécies, incluindo Ehrlichia canis, Ehrlichia chaffeensis, Hepatozoon canis, Babesia canis vogeli, Anaplasma platys, Anaplasma phagocytophilum e Rangelia vitalii, sendo os patógenos Ehrlichia chaffeensis e Anaplasma phagocytophilum relacionados a infecções em humanos. / In this study we analyzed blood samples from 100 dogs with important thrombocytopenia (Platelets < 100.000/μL), of the routine care of the Veterinary Hospital from Universidade Federal de Viçosa (UFV). All Samples were processed on automated hematology analyzer and subjected to analysis of their blood smears, buffy coat, and the density gradient centrifugation technique. In addition, samples were subjected to procedure for DNA extraction and subsequent polymerase chain reaction (PCR) to Ehrlichia spp., Hepatozoon sp., Babesia spp., Anaplasma spp. and Leishmania spp. The PCR results confirmed positive samples to Ehrlichia spp. (69%), Hepatozoon sp. (25%), Babesia spp. (16%) and Anaplasma platys (4%), with some animals having up to three concomitant pathogens. We also found a close relationship between the occurrence of thrombocytopenia and ehrlichiosis and the high frequency of coinfection. The density gradient centrifugation showed to be more sensitive at detecting Hepatozoon canis than traditional tecniques (blood smears, buffy coat) and the results are in agreement to those by PCR. Significant differences were observed in blood parameters between animals with and without hemoparasite, such as presence of a nuclear deviation of neutrophils on the left bigger in positive animals for Babesia spp. and changes in mean platelet volume and PDWc in animals with ehrlichiosis. In the sequencing performed we identified the presence of several species, including Ehrlichia canis, Ehrlichia chaffeensis, Hepatozoon canis, Babesia canis vogeli, Anaplasma platys, Anaplasma phagocytophilum and Rangelia vitalii, being the Anaplasma phagocytophilum and Ehrlichia chaffeensis related pathogens infections in humans.

Poucos são os estudos acerca da saúde de onças-pintadas em vida livre. Visando obter melhores parâmetros para avaliação clínica desta espécie ameaçada de extinção, foram realizados exame clínico, hemograma, perfil bioquímico e acompanhamento de 10 onças-pintadas da região de Corumbá, no Pantanal do Mato Grosso do Sul. Além disso, buscando obter informações sobre o possível papel da espécie como suscetível, hospedeira ou sentinela de patógenos de importância em saúde pública e animal, amostras destas 10 onças foram testadas através de métodos sorológicos para verificar contato com vírus rábico, Rickettsia spp. e Ehrlichia canis. As amostras das onças e os carrapatos que as parasitavam no momento das capturas foram testados por reação em cadeia pela polimerase para a família Anaplasmataceae e os gêneros Rickettsia, Borrelia, Coxiella, Hepatozoon e Babesia. Este é o primeiro estudo a relatar os valores de hemograma e perfil bioquímico de uma população de onças-pintadas de vida livre. Dois animais, assintomáticos, apresentaram baixo título sorológico para o vírus da raiva, sugerindo contato da espécie com este patógeno. Todas as onças capturadas foram consideradas soropositivas para Rickettsia spp., e Rickettsia parkeri foi sequenciada a partir de um Amblyomma triste que estava parasitando um dos animais. Foi descoberta uma possível nova espécie do gênero Ehrlichia através do sequenciamento de DNA obtido de um Amblyomma triste e um Amblyomma cajenense que estavam parasitando onças. Quatro onças-pintadas foram consideradas soropositivas para Ehrlichia canis, possivelmente uma reação cruzada com esta outra espécie. Todas as onças-pintadas avaliadas neste estudo apresentaram DNA de Cytauxzoon sp., com 98% de similaridade a C. felis, em amostras sanguíneas. Todas as onças avaliadas neste estudo apresentaram DNA de Hepatozoon sp., com 98% de similaridade a H. felis, em amostras sanguíneas. As onças apresentavam boas condições de saúde geral. / Few studies have been conducted to investigate the health of free-ranging jaguars. In order to obtain better parameters for clinical evaluation of this endangered species, clinical exams, hemogram, biochemical tests and ecological monitoring were done for 10 jaguars in the Pantanal region - Corumbá City, Mato Grosso do Sul State. This project also evaluated the possible role of this species as susceptible, host or sentinel for pathogens of public and/or animal health importance, testing samples from these animals by serological methods to rabies virus, Rickettsia spp. and Ehrlichia canis. All samples and all ticks collected from the jaguars were also tested by polymerase chain reaction to the Anaplasmataceae family and the genera Rickettsia, Borrelia, Coxiella, Hepatozoon and Babesia. This is the first report of hemograms and biochemical profile of a free-ranging jaguar population. Two asymptomatic animals presented low seropositivity for rabies virus, suggesting contact with this pathogen. All jaguars were considered seropositive for Rickettsia spp., and Rickettsia parkeri was sequenced from an Amblyomma triste that was parasitizing one of the animals. A possible new species of the genus Ehrlichia has been identified by DNA sequencing obtained from an Amblyomma triste and an Amblyomma cajenense that were parasitizing jaguars. Four jaguars were considered seropositive for Ehrlichia canis, possibly a cross-reaction with this other species. All jaguars evaluated in this study presented DNA fragments of Cytauxzoon sp., 98% similarity to C. felis in blood samples. In addition, all jaguars presented DNA fragments of Hepatozoon sp., 98% similarity to H. felis in blood samples. In general, these jaguars presented good health.

Poucos são os estudos acerca da saúde de onças-pintadas em vida livre. Visando obter melhores parâmetros para avaliação clínica desta espécie ameaçada de extinção, foram realizados exame clínico, hemograma, perfil bioquímico e acompanhamento de 10 onças-pintadas da região de Corumbá, no Pantanal do Mato Grosso do Sul. Além disso, buscando obter informações sobre o possível papel da espécie como suscetível, hospedeira ou sentinela de patógenos de importância em saúde pública e animal, amostras destas 10 onças foram testadas através de métodos sorológicos para verificar contato com vírus rábico, Rickettsia spp. e Ehrlichia canis. As amostras das onças e os carrapatos que as parasitavam no momento das capturas foram testados por reação em cadeia pela polimerase para a família Anaplasmataceae e os gêneros Rickettsia, Borrelia, Coxiella, Hepatozoon e Babesia. Este é o primeiro estudo a relatar os valores de hemograma e perfil bioquímico de uma população de onças-pintadas de vida livre. Dois animais, assintomáticos, apresentaram baixo título sorológico para o vírus da raiva, sugerindo contato da espécie com este patógeno. Todas as onças capturadas foram consideradas soropositivas para Rickettsia spp., e Rickettsia parkeri foi sequenciada a partir de um Amblyomma triste que estava parasitando um dos animais. Foi descoberta uma possível nova espécie do gênero Ehrlichia através do sequenciamento de DNA obtido de um Amblyomma triste e um Amblyomma cajenense que estavam parasitando onças. Quatro onças-pintadas foram consideradas soropositivas para Ehrlichia canis, possivelmente uma reação cruzada com esta outra espécie. Todas as onças-pintadas avaliadas neste estudo apresentaram DNA de Cytauxzoon sp., com 98% de similaridade a C. felis, em amostras sanguíneas. Todas as onças avaliadas neste estudo apresentaram DNA de Hepatozoon sp., com 98% de similaridade a H. felis, em amostras sanguíneas. As onças apresentavam boas condições de saúde geral. / Few studies have been conducted to investigate the health of free-ranging jaguars. In order to obtain better parameters for clinical evaluation of this endangered species, clinical exams, hemogram, biochemical tests and ecological monitoring were done for 10 jaguars in the Pantanal region - Corumbá City, Mato Grosso do Sul State. This project also evaluated the possible role of this species as susceptible, host or sentinel for pathogens of public and/or animal health importance, testing samples from these animals by serological methods to rabies virus, Rickettsia spp. and Ehrlichia canis. All samples and all ticks collected from the jaguars were also tested by polymerase chain reaction to the Anaplasmataceae family and the genera Rickettsia, Borrelia, Coxiella, Hepatozoon and Babesia. This is the first report of hemograms and biochemical profile of a free-ranging jaguar population. Two asymptomatic animals presented low seropositivity for rabies virus, suggesting contact with this pathogen. All jaguars were considered seropositive for Rickettsia spp., and Rickettsia parkeri was sequenced from an Amblyomma triste that was parasitizing one of the animals. A possible new species of the genus Ehrlichia has been identified by DNA sequencing obtained from an Amblyomma triste and an Amblyomma cajenense that were parasitizing jaguars. Four jaguars were considered seropositive for Ehrlichia canis, possibly a cross-reaction with this other species. All jaguars evaluated in this study presented DNA fragments of Cytauxzoon sp., 98% similarity to C. felis in blood samples. In addition, all jaguars presented DNA fragments of Hepatozoon sp., 98% similarity to H. felis in blood samples. In general, these jaguars presented good health.

A fragmentação de habitats e o aumento da proximidade entre as comunidades humanas, animais domésticos e silvestres podem ser responsáveis pelo aparecimento de doenças emergentes, disseminação de patógenos e alterações nos padrões epidemiológicos das doenças. Declínios populacionais em felinos silvestres devido a doenças já foram relatados, porém, pouco se conhece sobre o potencial papel dos patógenos nas populações de onça-pintada. Este estudo teve por objetivo pesquisar a presença de patógenos nas populações de onça-pintada e animais domésticos das regiões do Parque Nacional das Emas-PNE, Parque Estadual do Cantão-PEC e Pantanal sul mato-grossense, e identificar possíveis associações nos diagnósticos encontrados. Entre fevereiro de 2000 e janeiro de 2010, foram coletadas amostras biológicas de 31 onças-pintadas, 1246 bovinos, 179 cães e 36 gatos. Foram realizados diagnósticos sorológicos para brucelas lisas (AAT), Leptospira spp. (SAM), Toxoplasma gondii (MAT; RIFI), vírus da raiva (RFFIT), vírus da cinomose (SN), FIV e FeLV (SnapTM); e diagnósticos moleculares para Babesia spp., Hepatozoon spp., Cytauxzoon spp., Mycoplasma haemofelis, &#39;Candidatus Mycoplasma haemominutum&#39; e &#39;Candidatus Mycoplasma turicensis&#39;. Amostras de fezes de onças-pintadas foram analisadas para Giardia intestinalis, Cryptosporidium spp., protozoários da Família Sarcocystidae e Mycobacterium spp. O monitoramento das onças-pintadas, através do radiotransmissor, permitiu o mapeamento da ocorrência dos patógenos. As populações de bovinos das três áreas apresentaram alta exposição à B. abortus, mas apenas uma onça-pintada do PNE foi exposta à brucela lisa. Os sorovares mais prováveis de Leptospira spp. identificados em onças-pintadas do PNE e Pantanal foram distintos dos encontrados nos animais domésticos. As onças-pintadas, cães e gatos das três áreas foram altamente expostos ao T. gondii. Onças-pintadas do PNE e Pantanal foram expostas ao vírus da raiva, assim como as onças-pintadas do Pantanal e os cães das três áreas foram expostos ao vírus da cinomose. Dois gatos do entorno do PEC foram soropositivos para FeLV, mas nenhuma onça-pintada foi exposta ao agente ou ao FIV. Cães do entorno do PNE e do PEC foram positivos para Babesia spp., enquanto todas onças-pintadas foram negativas para o hemoparasita. Todas as onças-pintadas do Pantanal e PNE, e três de quatro onças do PEC foram positivas para Hepatozoon spp. e Cytauxzoon felis, sendo que cães e gatos também foram expostos ao Hepatozoon spp., mas não ao Cytauxzoon spp. As onças-pintadas das três áreas apresentaram alta exposição ao &#39;Candidatus Mycoplasma haemominutum&#39;, e alguns indivíduos do Pantanal e PEC foram positivos para o Mycoplasma haemofelis e &#39;Candidatus Mycoplasma turicensis&#39;. Poucos gatos foram positivos para os hemoplasmas felinos. Não houve evidências de exposição ao Mycobacterium bovis, e a presença de Cryptosporidium spp. e Giardia intestinalis foi detectada em onças do PNE. De acordo com os resultados, a cinomose e a raiva podem ser consideradas potenciais ameaças às populações de onça-pintada; a brucelose e a leptospirose podem ter sido transmitidas por animais domésticos; e, provavelmente as onças-pintadas possuem papel importante na manutenção do T. gondii, Cytauxzoon felis, Hepatozoon spp. e &#39;Candidatus Mycoplasma haemominutum&#39; no ambiente. Esses dados são relevantes e devem ser considerados na elaboração de estratégias para a conservação de onça-pintada na natureza. / Habitat fragmentation and the increasing proximity between humans, domestic and wild animals can be responsible for emerging and re-emerging diseases, dissemination of pathogens and alterations in host-pathogen relationships. Declines in wild felids due to disease have recently been reported; however, little is known about their potential role in wild jaguar populations. This study aimed to investigate the presence of pathogens in jaguar populations and domestic animals in the regions of Emas National Park (ENP), Cantão State Park (CSP) and the Pantanal of Mato Grosso do Sul, and to identify possible associations in the obtained diagnoses. Between February 2000 and January 2010, biological samples were collected from 31 jaguars, 1246 cattle, 179 dogs and 36 cats. Serological surveys for smooth Brucella (RBT), Leptospira spp. (MAT), Toxoplasma gondii (MAT; IFAT), rabies virus (RFFIT), distemper virus (SN), FIV and FeLV (SnapTM), and molecular tests for Babesia spp., Hepatozoon spp., Cytauxzoon spp., Mycoplasma haemofelis, &#39;Candidatus Mycoplasma haemominutum&#39; and &#39;Candidatus Mycoplasma turicensis&#39; were performed. Jaguar scats were analyzed for Giardia intestinalis, Cryptosporidium spp., protozoas of the Sarcocystidae Familiy and Mycobacterium spp. Monitoring of jaguars through radio-transmitter provided pathogen occurrence maps. Cattle populations from all sites were highly exposed to B. abortus, but only one jaguar from ENP was exposed to smooth Brucella. The most detectable serotypes of Leptospira spp. identified in jaguars from ENP and the Pantanal were distinct from those found in the domestic animals. Jaguars, dogs and cats in the three areas were highly exposed to T. gondii. Jaguars from ENP and the Pantantal were exposed to rabies, and jaguars from the Pantanal and dogs from the three areas were exposed to distemper virus. Two cats from the surroundings of CSP were seropositive for FeLV, but no jaguars were exposed to this agent or to FIV. Dogs from the surroundings of ENP and CSP were positive for Babesia spp., while all jaguars were negative for the hemoparasite. All jaguars from the Pantanal and ENP and three of four jaguars from the CSP were positive for Hepatozoon spp. and Cytauxzoon felis. Dogs and cats were also exposed to Hepatozoon spp., but not to Cytauxzoon spp. The jaguars from the three areas were highly exposed to &#39;Candidatus Mycoplasma haemominutum&#39;, and some individuals from the Pantanal and CSP were positive for Mycoplasma haemofelis and &#39;Candidatus Mycoplasma turicensis&#39;. Few domestic cats were positive for feline hemoplasms. There were no evidences of exposure to Mycobacterium bovis, but Cryptosporidium spp. and Giardia intestinalis were detected in jaguars from ENP. According to the results, distemper and rabies should be considered potential threats to jaguar populations; brucellosis and leptospirosis could have been transmitted by domestic animals; and jaguars probably play an important role in the maintenance of T. gondii, Cytauxzoon felis, Hepatozoon spp. and &#39;Candidatus Mycoplasma haemominutum&#39; in nature. These data should be taken into account when elaborating conservation strategies for jaguars in the wild.

A fragmentação de habitats e o aumento da proximidade entre as comunidades humanas, animais domésticos e silvestres podem ser responsáveis pelo aparecimento de doenças emergentes, disseminação de patógenos e alterações nos padrões epidemiológicos das doenças. Declínios populacionais em felinos silvestres devido a doenças já foram relatados, porém, pouco se conhece sobre o potencial papel dos patógenos nas populações de onça-pintada. Este estudo teve por objetivo pesquisar a presença de patógenos nas populações de onça-pintada e animais domésticos das regiões do Parque Nacional das Emas-PNE, Parque Estadual do Cantão-PEC e Pantanal sul mato-grossense, e identificar possíveis associações nos diagnósticos encontrados. Entre fevereiro de 2000 e janeiro de 2010, foram coletadas amostras biológicas de 31 onças-pintadas, 1246 bovinos, 179 cães e 36 gatos. Foram realizados diagnósticos sorológicos para brucelas lisas (AAT), Leptospira spp. (SAM), Toxoplasma gondii (MAT; RIFI), vírus da raiva (RFFIT), vírus da cinomose (SN), FIV e FeLV (SnapTM); e diagnósticos moleculares para Babesia spp., Hepatozoon spp., Cytauxzoon spp., Mycoplasma haemofelis, &#39;Candidatus Mycoplasma haemominutum&#39; e &#39;Candidatus Mycoplasma turicensis&#39;. Amostras de fezes de onças-pintadas foram analisadas para Giardia intestinalis, Cryptosporidium spp., protozoários da Família Sarcocystidae e Mycobacterium spp. O monitoramento das onças-pintadas, através do radiotransmissor, permitiu o mapeamento da ocorrência dos patógenos. As populações de bovinos das três áreas apresentaram alta exposição à B. abortus, mas apenas uma onça-pintada do PNE foi exposta à brucela lisa. Os sorovares mais prováveis de Leptospira spp. identificados em onças-pintadas do PNE e Pantanal foram distintos dos encontrados nos animais domésticos. As onças-pintadas, cães e gatos das três áreas foram altamente expostos ao T. gondii. Onças-pintadas do PNE e Pantanal foram expostas ao vírus da raiva, assim como as onças-pintadas do Pantanal e os cães das três áreas foram expostos ao vírus da cinomose. Dois gatos do entorno do PEC foram soropositivos para FeLV, mas nenhuma onça-pintada foi exposta ao agente ou ao FIV. Cães do entorno do PNE e do PEC foram positivos para Babesia spp., enquanto todas onças-pintadas foram negativas para o hemoparasita. Todas as onças-pintadas do Pantanal e PNE, e três de quatro onças do PEC foram positivas para Hepatozoon spp. e Cytauxzoon felis, sendo que cães e gatos também foram expostos ao Hepatozoon spp., mas não ao Cytauxzoon spp. As onças-pintadas das três áreas apresentaram alta exposição ao &#39;Candidatus Mycoplasma haemominutum&#39;, e alguns indivíduos do Pantanal e PEC foram positivos para o Mycoplasma haemofelis e &#39;Candidatus Mycoplasma turicensis&#39;. Poucos gatos foram positivos para os hemoplasmas felinos. Não houve evidências de exposição ao Mycobacterium bovis, e a presença de Cryptosporidium spp. e Giardia intestinalis foi detectada em onças do PNE. De acordo com os resultados, a cinomose e a raiva podem ser consideradas potenciais ameaças às populações de onça-pintada; a brucelose e a leptospirose podem ter sido transmitidas por animais domésticos; e, provavelmente as onças-pintadas possuem papel importante na manutenção do T. gondii, Cytauxzoon felis, Hepatozoon spp. e &#39;Candidatus Mycoplasma haemominutum&#39; no ambiente. Esses dados são relevantes e devem ser considerados na elaboração de estratégias para a conservação de onça-pintada na natureza. / Habitat fragmentation and the increasing proximity between humans, domestic and wild animals can be responsible for emerging and re-emerging diseases, dissemination of pathogens and alterations in host-pathogen relationships. Declines in wild felids due to disease have recently been reported; however, little is known about their potential role in wild jaguar populations. This study aimed to investigate the presence of pathogens in jaguar populations and domestic animals in the regions of Emas National Park (ENP), Cantão State Park (CSP) and the Pantanal of Mato Grosso do Sul, and to identify possible associations in the obtained diagnoses. Between February 2000 and January 2010, biological samples were collected from 31 jaguars, 1246 cattle, 179 dogs and 36 cats. Serological surveys for smooth Brucella (RBT), Leptospira spp. (MAT), Toxoplasma gondii (MAT; IFAT), rabies virus (RFFIT), distemper virus (SN), FIV and FeLV (SnapTM), and molecular tests for Babesia spp., Hepatozoon spp., Cytauxzoon spp., Mycoplasma haemofelis, &#39;Candidatus Mycoplasma haemominutum&#39; and &#39;Candidatus Mycoplasma turicensis&#39; were performed. Jaguar scats were analyzed for Giardia intestinalis, Cryptosporidium spp., protozoas of the Sarcocystidae Familiy and Mycobacterium spp. Monitoring of jaguars through radio-transmitter provided pathogen occurrence maps. Cattle populations from all sites were highly exposed to B. abortus, but only one jaguar from ENP was exposed to smooth Brucella. The most detectable serotypes of Leptospira spp. identified in jaguars from ENP and the Pantanal were distinct from those found in the domestic animals. Jaguars, dogs and cats in the three areas were highly exposed to T. gondii. Jaguars from ENP and the Pantantal were exposed to rabies, and jaguars from the Pantanal and dogs from the three areas were exposed to distemper virus. Two cats from the surroundings of CSP were seropositive for FeLV, but no jaguars were exposed to this agent or to FIV. Dogs from the surroundings of ENP and CSP were positive for Babesia spp., while all jaguars were negative for the hemoparasite. All jaguars from the Pantanal and ENP and three of four jaguars from the CSP were positive for Hepatozoon spp. and Cytauxzoon felis. Dogs and cats were also exposed to Hepatozoon spp., but not to Cytauxzoon spp. The jaguars from the three areas were highly exposed to &#39;Candidatus Mycoplasma haemominutum&#39;, and some individuals from the Pantanal and CSP were positive for Mycoplasma haemofelis and &#39;Candidatus Mycoplasma turicensis&#39;. Few domestic cats were positive for feline hemoplasms. There were no evidences of exposure to Mycobacterium bovis, but Cryptosporidium spp. and Giardia intestinalis were detected in jaguars from ENP. According to the results, distemper and rabies should be considered potential threats to jaguar populations; brucellosis and leptospirosis could have been transmitted by domestic animals; and jaguars probably play an important role in the maintenance of T. gondii, Cytauxzoon felis, Hepatozoon spp. and &#39;Candidatus Mycoplasma haemominutum&#39; in nature. These data should be taken into account when elaborating conservation strategies for jaguars in the wild.