O tempol (TP) tem se mostrado um eficiente protetor em modelos inflamatórios. Os mecanismos de proteção contra espécies reativas de oxigênio foi bastante estudado mas sua interação com espécies reativas de nitrogênio ainda permanece pouco explorada. Recentemente, propusemos que o TP re-direciona a nitração de fenol mediada por peroxintrito (PN)/CO2 para nitrosação, pela sua reação com o radical CO3•‾. O produto desta reação, o cátion oxamônio, oxidaria PN para O2 e •NO. Este último produziria uma espécie nitrosante (N2O3) pela reação com o radical derivado do PN, •NO2 [Bonini e col. (2002) Chem. Res. Tox. 15: 506]. Para examinar se este mecanismo poderia operar in vivo, estudamos os efeitos do TP na reatividade do PN/CO2 frente a albumina (BSA) e macrófagos. Os efeitos do TP se apresentaram dependentes de sua concentração e da concentração de Cys. Apesar do TP não se mostrar catalítico, ele inibiu a oxidação de Cys (20-50%) e nitração de Tyr (70-90%) da BSA e aumentou a nitrosação de Cys (200-400%). No caso dos macrófagos tratados com PN/CO2, o tempol também inibiu a nitração (90%) e aumentou a nitrosação (300%). Assim, em condições fisiológicas, concentrações sub-estequiométricas de TP seriam capazes de redirecionar a reatividade dos radicais derivados PN, de oxidação de Cys proteica e nitração de Tyr para nitrosação de Cys. Desta forma, o TP poderia inibir a injúria em inflamações. / Tempol has been shown to protect animals from oxidative stress conditions. Tempol\'s protective mechanisms against reactive oxygen species have been extensively studied but its interactions with reactive nitrogen species remain little explored. Recently, we proposed that tempol diverts peroxynitrite/CO2 mediated phenol nitration to nitrosation by reacting with CO3•‾ to produce tempol oxamonium cation that oxidizes peroxynitrite to O2 and •NO. The latter produces a nitrosating species by reacting with peroxynitrite-derived •NO2 [Bonini et al. (2002) Chem. Res. Toxicol. 15: 506]. To examine wether this mechanism operates in biological environments, we studied the effects of tempol on peroxynitrite/CO2 reactivity towards a protein, BSA, and cells, macrophages. Tempol\'s effects were dependent on its own and BSA-cys concentration. Although not a true catalyst, it inhibited BSA-cys oxydation (20-50%) and BSA-tyr nitration (70-90%) while increasing BSA-cys nitrosation (200-400%). In the case of macrophages treated with peroxynitrite/CO2, tempol also inhibited protein-tyr nitration (90%) and increased protein-cys nitrosation (300%). Then, under physiological conditions, a substoichiometric amount of tempol is able to divert peroxynitrite-derived radicais reactivity from protein-cys oxidation and protein-tyr nitration to protein-cys nitrosation. This may be the mechanism by wich tempol inhibits injury in inflammatory conditions.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-09-20T12:27:34Z No. of bitstreams: 1 suzanameiraribeiro.pdf: 1332777 bytes, checksum: b4c35efe19a33f78ca2cec41c685e844 (MD5) / Approved for entry into archive by Diamantino Mayra (mayra.diamantino@ufjf.edu.br) on 2016-09-26T20:24:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 suzanameiraribeiro.pdf: 1332777 bytes, checksum: b4c35efe19a33f78ca2cec41c685e844 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-26T20:24:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 suzanameiraribeiro.pdf: 1332777 bytes, checksum: b4c35efe19a33f78ca2cec41c685e844 (MD5) Previous issue date: 2010-06-12 / Doenças causadas por patógenos, incluindo bactérias e fungos podem gerar muitos problemas à saúde humana e à agricultura. Em cultivares economicamente importantes, tais patógenos podem contribuir para perdas significativas no rendimento da produção agrícola. Um fator agravante para esses dois cenários é o uso intensivo de compostos convencionais para combater esses patógenos, levando à seleção de microrganismos extremamente resistentes. Além disso, tais compostos podem trazer severas conseqüências ao meio ambiente bem como à saúde humana e animal. Desta forma, a busca por novos compostos capazes de controlar efetivamente bactérias e fungos patogênicos resistentes, têm sido prioritária. Por estas razões, este trabalho reporta o isolamento de uma nova proteína heterodimérica (Pa-AFP1) de sementes de Passiflora alata com propriedades antifúngicas. Pa-AFP1 foi purificada utilizando precipitação com sulfato de amônio 70-100%, subseqüente cromatografia de troca aniônica em Q-Sepharose e cromatografia de HPLC fase reversa em coluna C4. Análise da massa molecular por meio de gel Tricina-SDS-PAGE revelou uma massa molecular de aproximadamente 4.500 Da para a cadeia menor e cerca de 7.000 Da para cadeia maior totalizando um heterodímero com cerca de 11.500 Da. A massa da forma oligomérica também foi obtida por espectrometria de massa (11569. 63 Da). Análise da seqüência N-terminal mostrou alta identidade entre Pa-AFP1 e albuminas 2S, adicionando assim uma nova proteína à pequena lista de albuminas 2S com atividade antimicrobiana. Além disso, Pa-AFP1 foi capaz de inibir eficientemente o fungo filamentoso Colletotrichum gloeosporiodes, mas foi incapaz de inibir bactérias e fungos leveduriformes. Em suma, Pa-AFP1 poderá futuramente contribuir para o desenvolvimento de produtos biotecnológicos contra fungos fitopatogênicos. / Diseases caused by pathogens, including bacteria and fungi can generate many problems to human health and agriculture. In important economically cultivars, such pathogens may contribute to significant losses in yield of agricultural production. The aggravating factor for these two scenarios is the intensive use of conventional compounds to combat these pathogens, leading to selection of highly resistant microorganisms. Furthermore, these compounds can bring severe consequences to the environment, human and animal health. Thus the search for new compounds capable of effectively controlling bacteria and fungi resistant has been a priority. In this report a heterodimeric antifungal protein named Pa-AFP1, showing higher identity with the 2S albumin family, was purified by using 70-100% ammonium sulfate saturation and further purification steps such as anionic exchange Q-Sepharose chromatography associated with HPLC reversed-phase C4 chromatography. Analysis by Tricine-SDS-PAGE revealed two peptide molecular masses of approximately 4,500 Da and 7,000 Da, in the presence of β-mercapthoetanol, while by removing the reducing agent, a single protein with molecular mass of about 11,500 Da was obtained. Moreover, dimeric mass was confirmed by MALDI-TOF analyses (11,569.76 Da). The antifungal protein, named Pa-AFP1, efficiently inhibited the growth of filamentous fungi Colletotrichum gloeosporiodes, and was added to a short list of 2S albumins with antimicrobial properties. Otherwise, this same peptide showed no activity toward bacteria and yeasts. In summary, this compound could be used in the future to develop biotechnological products for the control of phytopathogenic fungi.

Objetivos: Estimar a concordância entre as práticas e as evidências disponíveis em uma unidade de terapia intensiva pediátrica. Métodos: Estudo retrospectivo de todos os pacientes internados durante 2001. As práticas foram classificadas em adequadas ou não-adequadas de acordo com recomendações. Esperava-se para as práticas recomendadas 90% de concordância, para as contra-indicadas, discordância de até 10% e para aquelas onde havia incertezas, 50%. Resultados: Foram selecionadas 114 publicações e avaliadas 253/275 internações (92%). O uso foi considerado apropriado para albumina em 47,6% (IC 95% 39% – 55%); dopamina <3mg/kg/min 87,9% (83% – 92%); sedação e analgesia 88,6% (87% – 90%); transfusões de concentrado de hemácias 95,2% (92% – 97%); profiliaxia de úlcera de estresse 89,7% (88% – 91%). / Objectives: Estimate the concordance between the practices and the evidence available in a pediatric intensive care unit. Methods: Retrospective study of all admitted patients during 2001. The practices were classified as adequate or non-adequate according to recommendations. It was expected 90% concordance for the recommended practices, while for non-adequate practices, discordance until 10% and for those where there was doubt, 50%. Results: 114 publications were selected and 253/275 admissions (92%) were evaluated. Use was considered appropriate for albumin in 47.6% (IC 95% 39% – 55%); dopamine <3mg/kg/min 87.9% (83% – 92%); sedation and analgesia 88.6% (87% – 90%); red blood cell transfusions 95.2% (92% – 97%); stress ulcer prophylaxis 89.7% (88% – 91%).

Objetivos: Estimar a concordância entre as práticas e as evidências disponíveis em uma unidade de terapia intensiva pediátrica. Métodos: Estudo retrospectivo de todos os pacientes internados durante 2001. As práticas foram classificadas em adequadas ou não-adequadas de acordo com recomendações. Esperava-se para as práticas recomendadas 90% de concordância, para as contra-indicadas, discordância de até 10% e para aquelas onde havia incertezas, 50%. Resultados: Foram selecionadas 114 publicações e avaliadas 253/275 internações (92%). O uso foi considerado apropriado para albumina em 47,6% (IC 95% 39% – 55%); dopamina <3mg/kg/min 87,9% (83% – 92%); sedação e analgesia 88,6% (87% – 90%); transfusões de concentrado de hemácias 95,2% (92% – 97%); profiliaxia de úlcera de estresse 89,7% (88% – 91%). / Objectives: Estimate the concordance between the practices and the evidence available in a pediatric intensive care unit. Methods: Retrospective study of all admitted patients during 2001. The practices were classified as adequate or non-adequate according to recommendations. It was expected 90% concordance for the recommended practices, while for non-adequate practices, discordance until 10% and for those where there was doubt, 50%. Results: 114 publications were selected and 253/275 admissions (92%) were evaluated. Use was considered appropriate for albumin in 47.6% (IC 95% 39% – 55%); dopamine <3mg/kg/min 87.9% (83% – 92%); sedation and analgesia 88.6% (87% – 90%); red blood cell transfusions 95.2% (92% – 97%); stress ulcer prophylaxis 89.7% (88% – 91%).