Estudou-se a influencia do inseticida Permetrina, do herbicida Glifosato e do fungicida Mancozeb na atividade respiratória e amilolitica de dois solos de São Paulo (Gley Húmico e Latossolo Vermelho Escuro) através de radiorrespirometria. A Permetrina não apresentou efeito inibidor em ambos os solos estudados. No solo LVE com menor teor de matéria orgânica observou-se aumento da atividade amilolitica. O Glifosfato não apresentou efeito inibidor. No solo LVE a adição do agroquímico resultou em aumento temporário das atividades amiloliticas e respiratória. A adição do Mancozeb no solo GH causou estimulo temporário da atividade respiratória e amilolitica. Em campo a estimulação persistiu. No LVE a respiração foi estimulada, sendo temporária em campo. A atividade amilolitica foi inibida no laboratório, mas não em campo. Analise estatística dos resultados não permitiu determinar correlação entre dados de campo e laboratório. Concluiu-se que os agroquímicos utilizados neste trabalho, quando aplicados individualmente nestes solos, não provocam alterações drásticas na microbiota, e que, o efeito observado depende do tipo de solo / not available

Estudou-se a influencia do inseticida Permetrina, do herbicida Glifosato e do fungicida Mancozeb na atividade respiratória e amilolitica de dois solos de São Paulo (Gley Húmico e Latossolo Vermelho Escuro) através de radiorrespirometria. A Permetrina não apresentou efeito inibidor em ambos os solos estudados. No solo LVE com menor teor de matéria orgânica observou-se aumento da atividade amilolitica. O Glifosfato não apresentou efeito inibidor. No solo LVE a adição do agroquímico resultou em aumento temporário das atividades amiloliticas e respiratória. A adição do Mancozeb no solo GH causou estimulo temporário da atividade respiratória e amilolitica. Em campo a estimulação persistiu. No LVE a respiração foi estimulada, sendo temporária em campo. A atividade amilolitica foi inibida no laboratório, mas não em campo. Analise estatística dos resultados não permitiu determinar correlação entre dados de campo e laboratório. Concluiu-se que os agroquímicos utilizados neste trabalho, quando aplicados individualmente nestes solos, não provocam alterações drásticas na microbiota, e que, o efeito observado depende do tipo de solo / not available

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No. of bitstreams: 1 DISS_2015_Lucien Bissi da Freiria.pdf: 1226730 bytes, checksum: 0040e55b754aeb3bd6f406e77fec9270 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / CAPES / Foram realizados três experimentos, no Laboratório de Nutrição Animal da Universidade Federal de Mato Grosso, com objetivo de avaliar suas doses e combinações três enzimas exógenas (fibrolítica, amilolítica e proteolítica), sobre a produção de gás, parâmetros cinéticos e perfil da fermentação através da técnica de fermentação in vitro simulando dieta de confinamento e de forragem. No experimento 1, objetivou-se avaliar doses crescentes de três enzimas exógenas (fibrolíticas (FIB), 0; 0,6; 1,2; 1,8; 2,4 mg/mL de líquido incubado; amilolíticas (AMZ), 0; 0,05; 0,10; 0,15 e 0,20 mg/mL de líquido incubado, proteolíticas (PRO), 0; 0,05; 0,10; 0,15 e 0,20 mg/mL de líquido incubado) sobre a produção de gás acumulada, parâmetros cinéticos e perfil da fermentação através da técnica de fermentação in vitro utilizando como substrato uma dieta de confinamento. O líquido ruminal foi obtido de dois ovinos Santa Inês canulados no rúmen, alimentados com dieta com relação volumoso:concentrado (20:80). A produção de gás acumulada (PG) foi obtida em 96 h de incubação, mensurada em 18 horários. Após a incubação foi determinado o pH, degradabilidade da matéria seca (DMS, mg/g MS), digestibilidade in vitro da matéria orgânica (DMO, g/g MS incubada até 24h), energia metabolizável (EM, MJ/kg MS), fator de partição (FP96, mg DMS:mL gás), rendimento de gás (RG24, mL gás/g DMS), ácidos graxos de cadeia curta (AGCC, mmol/g MS), e produção de biomassa de proteína microbiana (PPM, mg/g MS). Para parâmetros cinéticos, as doses de FIB e AMZ reduziram (P<0,05) a latência, e a PG aumentou (P<0,05) com FIB em todos horários e para AMZ apenas nos horários iniciais. No perfil de fermentação somente a FIB incrementou (P<0,05) DMS, DMO, EM, RG24 e AGCC. A inclusão de PRO não promoveu modificações nos parâmetros avaliados. No entanto, é necessário pesquisas adicionais para recomendar a utilização de enzimas exógenas na alimentação de ruminantes. No experimento 2, avaliou-se as mesmas doses crescentes de três enzimas exógenas, sobre a PG, parâmetros cinéticos e perfil da fermentação através da técnica de produção de gás in vitro da Brachiaria brizantha cv. Marandu. Ao final da incubação determinou-se o pH, produção assintótica de gás (mL/g MS), taxa fracional de degradação ( h-1), lag time (h), DMO (g/g MS incubada por 24 h), EM (MJ/kg MS) e o desaparecimento da fibra insolúvel em detergente neutro (DFDN, mg/g MS). As doses de FIB e AMZ aumentaram (P<0,05) a produção assintótica de gás, com reduções na taxa fracional de degradação e lag time. Por outro lado, a enzima PRO não modificou a produção asintótica de gás, mas verificou-se efeito quadrático (P<0,05) para taxa fracional de degradação e lag time. Quanto ao perfil de fermentação, verificou-se que somente as doses de FIB incrementaram (P<0,05) a DMO, DFDN e EM. A inclusão de enzimas fibrolíticas tem o potencial de otimizar a utilização de forragens na alimentação de ruminantes. No experimento 3, objetivou-se avaliar oito combinações entre três enzimas exógenas (fibrolíticas (FIB) 2,4 mg/mL de liquido incubado; amilolíticas (AMZ), 0,10mg/mL de liquido incubado e proteolíticas (PRO), 0,10 mg/mL de liquido incubado, com as combinações CON (controle); FIB; AMZ; PRO; FIB+AMZ+PRO; FIB+AMZ; FIB +PRO; AMZ+PRO) sobre PG, parâmetros cinéticos e perfil da fermentação através da técnica de produção de gás in vitro simulando dieta de confinamento e de forragem. Nas dietas de confinamento e de forragem, a participação de enzimas fibrolíticas promoveu melhorias na PG, parâmetros cinéticos e perfil da fermentação, com ou sem a combinação de outras enzimas. Assim, a inclusão de enzimas fibrolíticas (2,4 mg/mL de liquido incubado) tem o potencial de otimizar a utilização de dieta de confinamento como também em sistemas que utilizam forragens na alimentação de ruminantes, de forma que a combinação entre as enzimas exógenas se mostrou inoportuna para dois sistemas de produção. / Three experiments were conducted, in Laboratório of Nutrição Animal in the Universidade Federal de Mato Grosso, to evaluate doses and combinations three exogenous enzymes (fibrolytic, amylolytic and proteolytic), on gas production, kinetic parameters and profile of fermentation using the technique of in vitro fermentation simulating feedlot and forage diet. In the experiment 1, this study evaluated the effects of three exogenous enzyme preparations (fibrolytic activity (FIB) 0, 0.6, 1.2, 1.8, and 2.4 mg/mL liquid incubated; amylolytic activity (AMZ) 0, 0.05, 0.10, 0.15, 0,20 mg/mL liquid incubated; and proteolytic activity (PRO) 0, 0.05, 0.10, 0.15 e 0.20 mg/mL) on the accumulated gas production, kinetic parameters, and fermentation profile using the technique of in vitro fermentation, using as substrate a feedlot diet. Ruminal liquid was obtained from two rumen-cannulated Santa Inês sheep which had been fed a diet with roughage:concentrate ratio of 20:80. The accumulated gas production (GP) was obtained during 96h of incubation, measured at 18 different times. After incubation, the study determined the pH, dry matter degradability (DMD, mg/g DM), organic matter in vitro digestibility (OMD, g/g DM incubated at 24h), metabolizable energy (ME, MJ/kg DM), partitioning factor (PF96, mg DMD:mL gás), gas yield (GY24, mL gas/g DMD), short chain fatty acids (SCFA, mmol/g DM) and microbial protein production (MCP, mg/g DM). For kinetic parameters, doses of FIB and AMZ reduced (P<0.05) Latency, and PG increased (P<0.05) at all times FIB and AMZ only in the early times. In the fermentation profile only the FIB increased (P<0.05) DMD, OMD, ME, GY24 and SCFA. The inclusion of PRO did not promote changes in the evaluated parameters. The inclusion of PRO did not promote improvements in the evaluated parameters. However, it is necessary additional searches to recommend the use of exogenous enzymes in feed for ruminants. In the experiment 2, to evaluate the same three increasing doses of exogenous enzymes, on the accumulated gas production, kinetic parameters, and fermentation profile using the technique of gas production in vitro in the Brachiaria brizantha cv. Marandu. After incubation determined the pH, asymptotic gas production (mL/g DM), fractional degradation rate ( h-1), lag time (h), OMD, EM, and the disappearance of the insoluble neutral detergent fiber (NDFD, mg/g DM). The levels of FIB and AMZ increase (P<0.05) the asymptotic gas production, with reductions in the fractional degradation rate and lag time. On the other hand, PRO enzyme did not change the asymptotic gas production, but there was a quadratic effect (P<0.05) for fractional degradation rate and lag time. Regarding the profile of fermentation, it was found that only the FIB dose increased (P<0.05) OMD, NDFD and ME. The inclusion of fibrolytic enzymes has the potential to optimize the use of forage in ruminant feed. However, it is necessary additional searches to recommend the use of exogenous enzymes in feed for ruminants. In the experiment 3, this study evaluated the effects eight combinations of three exogenous enzymes (fibrolytic activity (FIB) 2.4 mg/mL liquid incubated; amylolytic activity (AMZ) 0.10mg/mL liquid incubated; and proteolytic activity (PRO) 00.10mg/mL liquid incubated, with the combinations CON; FIB+AMZ+PRO; FIB+AMZ, FIB +PRO, AMZ+PRO, FIB, AMZ, PRO) on the accumulated gas production, kinetic parameters, and fermentation profile simulating feedlot diet and the forage. In diets feedlot and forage, the participation of fibrolytic enzymes promoted improvements in PG, kinetic parameters and profile of the fermentation, with or without the combination of other enzymes. Thus, the addition of fibrolytic enzymes (2.4 mg/ml incubated liquid) has the potential to optimize the use of diet as well as containment systems for use in ruminant feed fodder, so that a combination of exogenous enzymes proved intrusive for two production systems.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-05-12Bitstream added on 2014-06-13T19:55:58Z : No. of bitstreams: 1 puglia_al_me_jabo.pdf: 623951 bytes, checksum: 412280585efd51778c86c7f2dffec757 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A cana-de-açúcar e uma cultura importante para a economia do país, devido à sua alta eficiência na produção e acúmulo de sacarose. Entretanto, com a utilização crescente de cana crua tem se observado aumento de impurezas vegetais nos carregamentos, tais como folhas e pontas, ricas em amido, que interferem negativamente na produção de açúcar e álcool. Este trabalho teve por objetivo avaliar o desempenho de leveduras com atividade amilolítica na produção do álcool. Os testes foram feitos com três linhagens de leveduras amilolíticas, J07, J32 e Saccharomyces diastaticus, em combinação com uma levedura alcoogênica (Saccharomyces cerevisiae - CAT-01) em mosto preparado de caldo de cana da variedade SP81-3250, que apresentava elevado teor de amido. No vinho foram realizadas análises de açúcares redutores totais, teor alcoólico, glicerol, acidez sulfúrica e viabilidade celular. Os resultados revelaram que a combinação da CAT-01 com a linhagem J07 incrementou a produção de álcool. A levedura selvagem J32 não se constituiu boa fermentadora, podendo ser utilizada em combinação com outras linhagens de leveduras fermentadoras. / Sugarcane is a very important crop to the economy of Brazil, because of its high efficiency in producing and accumulating sucrose. However, the rising rate of green cane harvest has resulted in higher levels of plant impurities as leaves and tops, which are rich in starch and affect both sugar and ethanol production. This work was carried out to evaluate the performance of amylolytic yeasts for ethanol production. The amylolytic strains J07 and J32, both isolated from the fermentation process, and Saccharomyces diastaticus were used in combination with Saccharomyces cerevisiae in a high-starch must from the sugarcane variety SP81-3250. The levels of total reducing sugars, ethanol, glycerol, sulfuric acidity and cell viability were determined. Results showed that the combination of S. cerevisiae with J07 increases ethanol production. The native yeast J32 has shown to be not good for fermentation, and for this reason must be used in combination with high fermentation yield strains.

Neste trabalho, o gene da &#945;-amilase de Bacillus subtilis foi clonado em S. cerevisiae, por &#948;-integração. Foram construídos dois vetores: 1) o gene truncado da &#945;-amilase de B. subtilis (amyEt) com a sequência sinal própria, sob regulação do promotor e terminador ADH1 (&#948;AmyEt&#948;); 2) o gene da &#945;-amilase completo de B. subtilis (amyE), com a sequência sinal MF&#945; de S. cerevisiae, sob a regulação do promotor e terminador PGK (&#948;AmyE&#948;). Esses vetores foram empregados na transformação genética de linhagens S. cerevisiae, em co-transformação com o plasmídeo pAJ50, que permite a seleção positiva. Os clones transformantes cultivados em meio YPDA (0,5% amido) produziram halos de amilolise de diferentes tamanhos. Os que receberam o gene da &#945;-amilase completo sob a regulação de PGK (&#948;AmyE&#948;) apresentaram os melhores resultados para a hidrólise de amido. Nenhum clone teve o crescimento prejudicado em relação à linhagem controle selvagem. Estes resultados indicam que os novos vetores apresentam bom potencial para emprego na construção de linhagens industriais de S. cerevisiae. / At the present work, the &#945;-amylase gene from Bacillus subtilis was cloned in S. cerevisiae by &#948;-integration. We constructed two vectors: 1) a truncated &#945;-amylase gene of B. subtilis (amyEt) with its own signal sequence, under the regulation of the ADH1 promoter and terminator of S. cerevisiae (&#948;AmyEt&#948;), 2) a complete &#945;-amylase gene of B. subtilis (amyE), with the signal sequence of MF&#945; of S. cerevisiae under the regulation of PGK promoter and terminator (&#948;AmyE&#948;). These vectors were used to genetic transformation in S. cerevisiae strains, in co-transformation with pAJ50 plasmid , which allows positive selection. The transformant clones grown in YPDA (0.5% starch) produced amilolise halos of different sizes. Those which received the complete -amylase gene under the regulation of PGK (&#948;AmyE&#948;) showed the best results for starch hydrolysis. None of the clones had its growth capacity altered when compared to the wild type. These results indicate that these vectors have a good potential to be employed in industrial strains transformation of S. cerevisiae.

Neste trabalho, o gene da &#945;-amilase de Bacillus subtilis foi clonado em S. cerevisiae, por &#948;-integração. Foram construídos dois vetores: 1) o gene truncado da &#945;-amilase de B. subtilis (amyEt) com a sequência sinal própria, sob regulação do promotor e terminador ADH1 (&#948;AmyEt&#948;); 2) o gene da &#945;-amilase completo de B. subtilis (amyE), com a sequência sinal MF&#945; de S. cerevisiae, sob a regulação do promotor e terminador PGK (&#948;AmyE&#948;). Esses vetores foram empregados na transformação genética de linhagens S. cerevisiae, em co-transformação com o plasmídeo pAJ50, que permite a seleção positiva. Os clones transformantes cultivados em meio YPDA (0,5% amido) produziram halos de amilolise de diferentes tamanhos. Os que receberam o gene da &#945;-amilase completo sob a regulação de PGK (&#948;AmyE&#948;) apresentaram os melhores resultados para a hidrólise de amido. Nenhum clone teve o crescimento prejudicado em relação à linhagem controle selvagem. Estes resultados indicam que os novos vetores apresentam bom potencial para emprego na construção de linhagens industriais de S. cerevisiae. / At the present work, the &#945;-amylase gene from Bacillus subtilis was cloned in S. cerevisiae by &#948;-integration. We constructed two vectors: 1) a truncated &#945;-amylase gene of B. subtilis (amyEt) with its own signal sequence, under the regulation of the ADH1 promoter and terminator of S. cerevisiae (&#948;AmyEt&#948;), 2) a complete &#945;-amylase gene of B. subtilis (amyE), with the signal sequence of MF&#945; of S. cerevisiae under the regulation of PGK promoter and terminator (&#948;AmyE&#948;). These vectors were used to genetic transformation in S. cerevisiae strains, in co-transformation with pAJ50 plasmid , which allows positive selection. The transformant clones grown in YPDA (0.5% starch) produced amilolise halos of different sizes. Those which received the complete -amylase gene under the regulation of PGK (&#948;AmyE&#948;) showed the best results for starch hydrolysis. None of the clones had its growth capacity altered when compared to the wild type. These results indicate that these vectors have a good potential to be employed in industrial strains transformation of S. cerevisiae.