CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Sementes de Centrolobium tomentosum Guill. ex Benth., pertencente à famÃlia Fabaceae, SubfamÃlia Papilionoideae, Tribo Dalbergieae, possuem uma lectina ligante à manose/glicose que aglutina eritrÃcitos de coelho nativos ou tratados com enzimas proteolÃticas. A lectina foi purificada por cromatografia de afinidade em Sepharose-manose, sendo posteriormente nomeada CTL. SDS-PAGE demonstrou que CTL possui um perfil eletroforÃtico composto por uma banda majoritÃria de massa molecular aparente de aproximadamente 28 kDa e duas bandas menores de massas de aproximadamente 14 e 12 kDa, tanto na presenÃa como na ausÃncia do agente redutor. A anÃlise por espectrometria de massa indicou que CTL possui massa molecular de 27.257  2 Da. A lectina de Centrolobium tomentosum apresenta elevada estabilidade tÃrmica, nÃo depende de cÃtions divalentes e mantÃm sua atividade hemaglutinante em uma ampla faixa de pH. CTL estimulou o crescimento microbiano e a formaÃÃo de biofilme experimental de duas espÃcies bacterianas do gÃnero Streptococcus, S.mitis e S. sobrinus. AlÃm disso, tambÃm demonstrou ser tÃxica para o microscrustÃceo Artemia sp. Esses resultados reforÃam a ideia da utilizaÃÃo de lectinas vegetais como ferramentas biotecnolÃgicas em estudos sobre os mecanismos de interaÃÃo proteÃna-carboidrato.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / O FÃsforo à um dos elementos essencial no corpo humano requerido pelas cÃlulas para o seu funcionamento; sendo o maior constituinte dos ossos do corpo humano, na forma de fosfato de cÃlcio. A determinaÃÃo de fÃsforo pode ser efetuada utilizando-se diferentes tÃcnicas tais como espectrofotometria de absorÃÃo molecular, cromatografia iÃnica, fosforescÃncia, espectrometria de emissÃo atÃmica, entre outras. Este trabalho tem como objetivo desenvolver uma metodologia para determinaÃÃo de fÃsforo em digeridos de amostras orgÃnicas por espectrometria de emissÃo Ãptica com plasma indutivamente acoplado. A metodologia desenvolvida estudou quatro linhas de emissÃo deste elemento e duas configuraÃÃes instrumentais, axial e radial. Somente os comprimentos de onda 213,617 e 214,914nm apresentaram sensibilidade adequada para o estudo. A faixa linear investigada foi de 50 a 300 mg.L-1 . A investigaÃÃo do efeito interferente foi realizado com os metais alcalinos (Na e K) e alcalinos terrosos (Ca e Mg) no sinal de fÃsforo. Mostrando-se aditiva para todos os metais estudados, com aumento do sinal em atà 50% para o potÃssio como interferente. Para resoluÃÃo desse efeito interferente investigou-se o aumento da potÃncia da radiaÃÃo do plasma gerado e uso de padrÃo interno. O uso do padrÃo interno mostrou-se mais adequado, no caso o Sc, com correÃÃes de 90 % de reduÃÃo da interferÃncia. A metodologia desenvolvida foi avaliada em amostras certificadas interlaboratoriais e os resultados obtidos foram compatÃveis com erros inferiores a 10%. O teor de fÃsforo foi determinado em amostras de banana submetidas a um tratamento de fertilizaÃÃo, sendo os valores obtidos na ordem de 765 e 1.167 mg.L-1 / The Phosphorus is an essential element for in body human required by cells for the operation; is the largest constituent of the bones of the human body in the form of calcium phosphate. The determination of phosphorus can be using different techniques is like Molecular Absorption Spectrophotometry, Ion Chromatography, Phosphorescence, Atomic Emission spectrometry, among others. This work has a goal to develop a methodology for determination of phosphorus in digest of organic samples by optical emission spectrometry with plasma inductive coupled. The methodology developed studies 4 lines of emission of this element and two instrumental settings, axial and radial. Only a wavelength 213.617 and 214.914nm had sensitivity suitable for the study. The linear range investigated was 50 to 300 mg. L-1. The investigation of the interference effect was studied by alkali metals (Na and K) and alkali earth (Ca and Mg) in the sign of phosphorus. The positive interference was obtained for all metals investigated with increase in the signal in up to 50% for potassium with interference. To resolve this effect interfering was investigated the increased power of radiation from the plasma generated and use of internal standard. The use of internal standard has been more appropriate, in case the Sc, with corrections of 90% reduction of interference. The methodology developed was evaluated in interlaboratory certified samples and the results were compatible with errors less than 10%. The content of phosphorus was determined in samples of banana subjected to a treatment of fertilization, and the values obtained in the order of 765 and 1.167mg.L-1

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Inibidores de proteases vegetais sÃo proteÃnas de baixa massa molecular, geralmente presentes em altas concentraÃÃes nos tecidos de armazenamento, particularmente em sementes de plantas pertencentes à famÃlia Fabaceae. Neste estudo, um inibidor de proteases pertencente à famÃlia Bowman-Birk (LzaBBI) foi purificado a partir do extrato salino de sementes de Luetzelburgia auriculata. ApÃs fervura desse extrato salino, o inibidor foi purificado por cromatografia de afinidade em matriz de anidrotripsina-Sepharose 4B, seguido de cromatografia em matriz de troca iÃnica (DEAE Sepharose) e cromatografia em fase reversa. Em condiÃÃes redutoras, ou nÃo, o LzaBBI apresentou massa molecular aparente de 17,3 kDa, e uma Ãnica cadeia polipeptÃdica. Sua sequÃncia NH2-terminal possui alta similaridade com inibidores do tipo Bowman-Birk de leguminosas. O LzaBBI permaneceu estÃvel apÃs fervura a 98 ÂC por 120 min, bem como apÃs incubado na faixa de pHs entre 2 a 11. AlÃm de possuir relevante estabilidade estrutural, de importÃncia para futuras aplicaÃÃes biotecnolÃgicas, apresentou efeito negativo no crescimento da bactÃria Staphylococcus aureus, quando em baixas concentraÃÃes. / Plant protease inhibitors are proteins of low molecular weight, usually present in high concentrations in storage tissues, particularly in seeds of species belong to the Fabaceae family. In this study, a Bowman-Birk protease inhibitor (LzaBBI) was purified from the saline extract of the Luetzelburgia auriculata seeds After boiling of this saline extract, the inhibitor was purified by affinity chromatography on Sepharose 4B-anhydrotrypsin, followed by ion exchange chromatography on DEAE Sepharose and reverse phase chromatography. Under reducing conditions or not, LzaBBI showed an apparent molecular mass of 17.3 kDa and a single polypeptide chain. The NH2-terminal sequencing of the LzaBBI showed high similarity with other Bowman-Birk inhibitors of legumes. LzaBBI remained stable after boiling at 98 ÂC for 120 min and also remained stable with trypsin inhibitory activity after incubation in pH buffers with pHs varying from 2 to 11. In addition to its relevant structural stability, of importance in future biotechnological applications, LzaBBI showed negative impact on the Staphylococcus aureus development when at low doses.