Introducción: Los derrames pleurales (DP) son una patología común, aunque su fisiopatología no está del todo aclarada. El sistema de la angiogénesis se ha visto implicado en procesos inflamatorios y neplásicos, pero ha sido poco estudiado en el espacio pleural. Objetivos: 1) Analizar los niveles pleurales y plasmáticos de factores activadores e inhibidores de la angiogénesis en diferentes categorías de DP. 2) Estimar su asociación con los marcadores bioquímicos habituales, el recuento celular, los marcadores inflamatorios, el sistema de la fibrinolisis y el de las metaloproteinasas. 3) Estudiar su asociación con la presencia de complicaciones pleurales en los DP infecciosos. Pacientes y método: 21 pacientes de cada uno de los siguientes DP: empiema o paraneumónico complicado, paraneumónico no complicado, tuberculoso, neoplásico y trasudado. Se determinaron en sangre y pleura los marcadores bioquímicos habituales (glucosa, proteínas, ADA, LDH, pH), celularidad (leucocitos y recuento diferencial), marcadores inflamatorios (elastasa, IL-8, TNF-alfa), sistema de la fibrinolisis (activadores del plasminógeno u-PA, t-PA e inhibidores PAI-1, PAI-2), sistema de las metaloproteinasas (MMP-2, MMP-9 y sus inhibidores TIMP-1, TIMP-2) y sistema de la angiogénesis (activadores factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF total y libre), factor de crecimiento fibroblástico básico (b-FGF) e inhibidores endostatina y trombospondina-1 (TSP-1). Paquete estadístico: SPSS.Resultados: Los niveles de VEGF y b-FGF fueron más altos en los exudados que en los trasudados (p < 0.001) y en los empiemas y paraneumónicos complicados que en los no complicados (p < 0.001). La endostatina no mostró diferencias significativas en los diferentes grupos de DP excepto dentro de los paraneumónicos, donde los niveles fueron superiores en los no complicados que en los empiemas y paraneumónicos complicados (p = 0.002). La TSP-1 mostró niveles superiores en los exudados que en los trasudados y en los empiemas y paraneumónicos complicados que en los paraneumónicos no complicados (p < 0.001). En los exudados pleurales observamos una correlación positiva entre VEGF, b-FGF y TSP-1 y los niveles bajos de glucosa y de pH y los niveles altos de LDH, la IL-8, la elastasa y el TNF-alfa. En los exudados pleurales observamos una asociación positiva entre VEGF, b-FGF y TSP-1 y los PAIs y la MMP-9 y una asociación negativa con el t-PA y la MMP-2. Excepto para la TSP-1, los factores implicados en la angiogénesis presentaron niveles superiores en pleura que en plasma. Excepto para la endostatina en los DP paraneumónicos, no se evidenció correlación entre los niveles pleurales y plasmáticos de los factores implicados en la angiogénesis. Los DP paraneumónicos con cifras más altas de VEGF, b-FGF y TSP-1 presentaron mayor incidencia de paquipleuritis.Conclusiones: 1) Los DP exudados muestran valores más elevados de VEGF, b-FGF y TSP-1 que los trasudados, siendo el grupo de los empiemas y paraneumónicos complicados los que presentan los niveles más altos. Asimismo no existe correlación entre los niveles pleurales y plasmáticos, sugiriendo una respuesta compartimentalizada a nivel pleural. 2) En los exudados pleurales existe una correlación positiva entre VEGF, b-FGF y TSP-1 y los niveles bajos de glucosa y de pH, los niveles altos de LDH, los marcadores de inflamación, los PAIs y la MMP-9 y una correlación negativa con el t-PA y la MMP-2. 3) Los DP bacterianos paraneumónicos con cifras más altas de VEGF, b-FGF y de TSP-1 presentan mayor incidencia de paquipleuritis y podrían ser predictores de la presencia de complicaciones pleurales tardías. 4) Con este trabajo se aportan datos novedosos del papel de la angiogénesis en la fisiopatología de los DP exudados y de su asociación con la inflamación, el sistema de la fibrinolisis y la matriz extracelular. / Introduction: Pleural effusion is a common clinical entity, though its pathophysiology is still uncertain. The angiogenesis system has been implicated in inflammatory and neoplastic processes; nevertheless, it has been little studied in relation to the pleural space. Aims: 1) To analyze pleural and plasma levels of the activator and inhibitor factors of angiogenesis in the various types of pleural effusion; 2) To estimate the association of these factors with related biochemical markers, leukocyte count, inflammatory markers, fibrinolysis system parameters and metalloproteinases; and 3) To study the association between the angiogenesis factors and the presence of complications in infectious pleural effusions. Patients and method: Samples from 21 patients with each of the following etiological types of pleural effusion were studied: empyema or complicated parapneumonic, non-complicated parapneumonic, tuberculous, neoplastic and transudative effusions. Plasma and pleural fluid related biochemical markers (glucose, proteins, ADA, LDH, pH), cellularity (leukocyte count and differential count), inflammatory markers (elastase, IL-8, TNF-alpha), fibrinolysis system (plasminogen activators-PA, t-PA-and inhibitors-PAI-1, PAI-2), metalloproteinase system (MMP-2, MMP-9 and their inhibitors, TIMP-1, TIMP-2) and angiogenesis system (activators-total and free vascular endothelial growth factor (VEGF), basic fibroblastic growth factor (b-FGF)-and inhibitors-endostatin and thrombospondin-1 (TSP-1). Statistical package: SPSS.Results: VEGF and b-FGF were higher in exudates than in transudates (p<0.001) and in complicated parapneumonic patients and empyema than in non-complicated parapneumonic patients (p<0.001). Endostatin showed no significant differences in the various effusion groups, except the parapneumonic, where levels were higher in the non-complicated than in the empyema and complicated parapneumonic patients (p=0.002). TSP-1 showed higher levels in the exudates than in the transudates and in complicated parapneumonic effusions and empyema than in non-complicated parapneumonic effusions (p<0.001). In pleural exudates there was a positive correlation of VEGF, b-FGF and TSP-1 with low glucose and pH and high LDH, IL-8, elastin and TNF-alfa. Furthermore, VEGF, b-FGF and TSP-1 showed a positive association with PAIs and MMP-9 and a negative association with t-PA and MMP-2 in pleural exudates. With the exception of TSP-1, the factors implicated in angiogenesis presented higher levels in pleural fluid than in plasma. Except for endostatin in parapneumonic PE, there was no correlation between pleural and plasma levels of the angiogenesis factors. Parapneumonic PE, which showed highest values of VEGF, b-FGF and TSP-1 presented a higher incidence of pachypleuritis.Conclusions: 1) Exudative pleural effusions showed higher VEGF, b-FGF and TSP-1 values than transudative effusions, with the empyema and complicated parapneumonic groups displaying the highest values. There was no correlation between pleural and plasma concentrations, suggesting a compartmentalized response at the pleural level. 2) Exudates showed a positive correlation of VEGF, b-FGF and TSP-1 with low glucose and pH, and high LDH, inflammation markers, PAIs and MMP-9, and a negative correlation with t-PA and MMP-2. 3) Bacterial parapneumonic effusions with higher levels of VEGF, b-FGF and TSP-1 presented a higher incidence of pachypleuritis and could be predictors of late-onset pleural complications. 4) This study provides new data on the role of angiogenesis in the pathophysiology of exudative pleural effusions and on the association between angiogenesis and inflammation, the fibrinolysis system and the extracellular matrix.

Los objetivos de este estudio son: 1. Caracterización de la resistencia a la inhibición farmacológica de la angiogénesis: a. Caracterización de la resistencia a la inhibición selectiva de la vía VEGF/VEGFR2. b. Caracterización de la resistencia al tratamiento antiangiogénico con un inhibidor multidiana de receptores tirosina quinasa. 2. Caracterización del efecto antiangiogénico y sus consecuencias tras el tratamiento con un inhibidor de vías angiogénicas independientes de VEGF. 3. Estudio de las causas de la invasión tras recibir tratamiento antiangiogénico.

El péptido relacionado a la hormona paratiroidea (PTHrP) está involucrado en la iniciación y progresión de distintos tumores. El rol de PTHrP en células de cáncer colorrectal (CCR) fue abordado en estos últimos años por las Dras. Gentili y Calvo directora y co-directora, respectivamente, de esta Tesis y a partir de los antecedentes generados, en este Trabajo se propuso investigar los efectos de PTHrP en la angiogénesis y la transición epitelio- mesénquima (TEM) evaluando el comportamiento de las células tumorales y también su comunicación con su microambiente. Los resultados obtenidos revelan que PTHrP aumenta la expresión de los factores pro-angiogénicos VEGF, HIF-1α, MMP-7 y MMP-9 en las células Caco-2 y HCT116 de CCR y promueve la angiogénesis asociada al tumor a través de VEGF. Estos efectos son mediados por las vías PI3K/Akt y ERK1/2. Previo al inicio de este Trabajo de Tesis se había confirmado que PTHrP induce la activación de β-catenina en estas células de CCR, evento vinculado a la plasticidad celular, por lo que se procedió seguidamente a explorar si PTHrP modula el programa de la TEM. Se observó que en las células HCT116, PTHrP disminuye la expresión de los marcadores epiteliales CK-18 y E- cadherina y aumenta la expresión de N-cadherina y ZEB-1, proteínas asociadas a un estado mesenquimal. Además el péptido favorece cambios morfológicos asociados a este estado. El medio condicionado proveniente de las células endoteliales HMEC-1 tratadas con PTHrP (MCE) disminuye la expresión de E-cadherina en las células HCT116 y favorece también un fenotipo mesenquimal sugiriendo que estos MCEs podrían participar de la TEM en las células de CCR. En este Trabajo de Tesis se halló que PTHrP modula la expresión de SPARC, una proteína asociada al fenotipo agresivo de CCR, en las células HCT116. El tratamiento de las células HMEC-1 con PTHrP incrementa la expresión de esta proteína y su secreción al medio extracelular. Además, SPARC exógeno en las células tumorales acentúa el efecto de PTHrP en la disminución de la expresión de E-cadherina y en el incremento de la migración celular. También PTHrP induce cambios en la expresión de microARNs relevantes en la TEM. El péptido administrado a un modelo in vivo promueve cambios morfológicos y moleculares que validan lo observado in vitro. Finalmente mediante un análisis bioinformático en muestras de pacientes con CCR se observó que los marcadores modulados por PTHrP tanto in vitro como in vivo se vinculan con la progresión de la enfermedad. Los datos presentados en esta Tesis revelan los efectos de PTHrP en la modulación de la angiogénesis y la TEM del CCR y evidencian la importancia de los marcadores estudiados, provenientes del tumor y de su microambiente, en el desarrollo del fenotipo agresivo en los modelos experimentales de CCR empleados. Este trabajo se enmarca dentro de un proyecto global que pretende aportar conocimientos con el fin de orientar en la identificación de marcadores en muestras de pacientes de CCR con potencial valor pronóstico, predictivo y/o con aplicabilidad en el diagnóstico precoz de esta enfermedad. / Parathyroid hormone-related peptide (PTHrP) is involved in the initiation and progression of different tumors. The role of PTHrP in cells from colorectal cancer (CRC) has been addressed in the last years by Dr. Gentili and by Dr. Natalia Calvo director and co-director, respectively, of this Thesis and based on the background information generated, this Thesis work aimed to investigate the effects of PTHrP on angiogenesis and the epithelial- mesenchymal transition (EMT), evaluating the behavior of tumor cells and also their communication with tumor microenvironment. The results obtained reveal that PTHrP increases the expression of the pro-angiogenic factors VEGF, HIF-1α, MMP-7 and MMP-9 in Caco-2 and HCT116 cells from CRC and also promotes tumor-associated angiogenesis through VEGF. These effects are mediated by PI3K/Akt and ERK1/2 pathways. Before to start this Thesis, it had been confirmed that PTHrP induces the activation of β-catenin in these CRC cells, and since this event is linked to cell plasticity, then we explored whether PTHrP modulates the EMT program. We observed that in HCT116 cells, PTHrP decreases the expression of the epithelial markers CK-18 and E-cadherin and increases the expression of N-cadherin and ZEB-1, which are proteins associated with a mesenchymal state. In addition, the peptide favors morphological changes associated with this state. Conditioned medium from PTHrP-treated HMEC-1 endothelial cells (ECM) decreases E- cadherin expression in HCT116 cells and favors a mesenchymal phenotype, suggesting that these ECMs could participate in the EMT in CRC cells. In this Thesis Work it was found that in HCT116 cells PTHrP modulates the expression of SPARC, a protein associated with CRC aggressive phenotype. The treatment of HMEC-1 cells with PTHrP increases the expression of this protein and its secretion to the extracellular medium. Furthermore, exogenous SPARC treatment on tumor cells accentuates PTHrP effect on the downregulation of E-cadherin expression and in the increment of cell migration. PTHrP also induces changes in the expression of relevant microRNAs in EMT. The peptide administered to an in vivo model promotes morphological and molecular changes that validate the findings obtained in vitro. Finally, through a bioinformatic analysis in samples from CRC patients, we observed that the markers modulated by PTHrP both in vitro as in vivo are linked to the progression of the disease. The data showed in this Thesis reveal the effects of PTHrP in the modulation of the angiogenesis and EMT program of CRC and show the importance of the studied markers from the tumor and its microenvironment in development of the aggressive phenotype in the experimental models of CRC employed. This work is part of a global project that aims to provide knowledge to help in the identification of markers in samples from CRC patients as potential candidates to be used in the detection of CRC at early stages and/or with prognostic/predictive value of this disease.

Se estudiaron 136 carcinomas mamarios de perras y sus linfonódulos satélites. Se evaluaron la proliferación celular (mediante la marcación inmunohistoquímica del antígeno nuclear de proliferación celular) y la actividad angiogénica (mediante la inmunomarcación del receptor para el factor de crecimiento de endotelios vasculares 2 -VEGFR-2- y el recuento de microvasos). Se relacionaron ambos procesos y su repercusión en el estado del linfonódulo. Se estableció la asociación entre estas características y el tipo y grado histológicos, y la presencia de émbolos neoplásicos en los vasos tumorales. Para determinar su significación en el pronóstico, estos parámetros se relacionaron con el estado del linfonódulo (merced a la observación de cortes procesados mediante la técnica histopatológica de rutina y a la marcación inmunohistoquìmica de citoqueratinas) y con la supervivencia de un grupo de pacientes. Los tipos histológicos pudieron clasificarse en dos grupos teniendo en cuenta su comportamiento proliferativo, angiogénico e invasivo: uno constituido por carcinomas complejos, simples tubulares y de células escamosas, y el otro por carcinomas simples papilares, sólidos y anaplásicos y carcinosarcomas. A menor diferenciación histológica correspondieron mayores actividades proliferativa, invasiva y angiogénica. Con respecto a esta última, en neoplasias con mayor expresión del VEGFR-2, la densidad de microvasos y la proliferación fueron mayores. La mayor densidad de vasos favorece la invasión vascular. La presencia de émbolos, el grado histológico, el índice de proliferación, la expresión del VEGFR- 2 y la densidad de microvasos permitieron predecir la capacidad metastásica. El tipo histológico no se relacionó con la supervivencia de manera independiente. Los carcinosarcomas y los carcinomas simples anaplásicos presentaron mayor riesgo de metástasis que los carcinomas simples tubulares, complejos y de células escamosas. La probabilidad de supervivencia a 18 meses fue alta y estuvo influenciada por el estado del linfonódulo y la presencia de émbolos neoplásicos. / One hundred and thirty six canine mammary carcinomas and their satellite lymph nodes were studied. Proliferation and angiogenic activities were evaluated by means of immunohistochemical procedures. For the former, proliferating cell nuclear antigen was labelled. Vascular endothelial growth factor receptor-2 (VEGFR-2) expression and microvessel density were measured to estimate angiogenesis. Both processes were related and their influence on the status of the lymph nodes was investigated. An association was established between these characteristics and the histological type and grade, and the presence of neoplastic cells within tumor vessels. In order to determine their prognostic significance, these parameters were related to the lymph node status (defined after histopathological and immunohistochemical studies with anticytokeratin antibodies) and survival of a group of patients. According to their proliferative, angiogenic, and invasive behavior, histological types could be classified into two groups: one comprising complex, simple tubular, and squamous cell carcinomas, and the other comprising simple papillary, solid, and anaplastic carcinomas, and carcinosarcomas. A lower histological differentiation corresponded to higher proliferative, invasive, and angiogenic activities. Tumors with higher expression of VEGFR-2 exhibited more density of microvessels and higher proliferation rates. Vascular density favored vascular invasion. Metastatic potential could be predicted according to the presence of emboli, histological grade, proliferation index, expression of VEGFR-2, and density of microvessels. Independent correlation between histological type and survival was not found. Carcinosarcomas and simple anaplastic carcinomas presented a higher risk of metastasis than simple tubular, complex, or squamous cell carcinomas.Probability of survival at 18 months was high and was influenced by the status of the lymph node and the presence of neoplastic emboli.

El adenocarcinoma ductal pancreático (PDAC) es la quinta causa de muerte por cáncer en los países desarrollados y uno de los tumores humanos más agresivos. A pesar del papel clave de la angiogénesis -la formación de nuevos vasos a partir de otros preexistentes- en la progresión y metástasis de muchos tumores, su papel en PDAC ha sido poco caracterizado. El activador tisular del plasminógeno (tPA), una proteína multifuncional que regula numerosas funciones celulares, ejerce efectos proangiogénicos en modelos in vivo de PDAC, aunque no se han analizado los mecanismos moleculares responsables de estos efectos. Esta tesis trata de identificar el papel de tPA en la angiogénesis del PDAC, así como de descubrir los factores responsables de la sobreexpresión de tPA en cáncer de páncreas. En primer lugar, hemos demostrado que los efectos pro-angiogénicos de tPA pueden ser tanto directos como indirectos. Por un lado, aunque tPA no cambia los niveles de moléculas pro-angiogénicas como VEGF, TGF-b, IL-1 o IL-8 producidas por las células tumorales o endoteliales, sí que induce la sobreexpresión y activación de MMP-9, una metaloproteasa implicada en promover angiogénesis, sugiriendo por tanto que esta proteína puede mediar de forma indirecta los efectos proangiogénicos de tPA. Por otro lado, hemos encontrado que tPA, de forma independiente de su actividad catalítica, promueve directamente la proliferación, migración y tubulogénesis de las células endoteliales. Estos efectos son mediados por la activación en estas células de las rutas de señalización ERK1/2, AKT y JNK. Además, mediante siRNA o inhibidores químicos, hemos encontrado que Annexina A2, Galectina-1 y EGFR son necesarios para la activación de la señalización inducida por tPA en células endoteliales. Finalmente, hemos visto que citoquinas inflamatorias e hipoxia, dos eventos asociados a PDAC y además inductores de angiogénesis, dan lugar a un fuerte incremento de los niveles de tPA en células tumorales pancreáticos. Todos estos datos apoyan un mecanismo de retroalimentación positiva entre estímulos proangiogénicos presentes en las células tumorales y el estroma, y el incremento de la molécula proangiogénica tPA. / Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is the fifth leading cause of cancer death in the developed countries and one of the most aggressive human tumors. Despite the key contribution of angiogenesis – the growth of new vessels from pre-existing ones- to the progression and spread of many cancers, its role in PDAC has been poorly characterized. Tissue plasminogen activator (tPA), a multifunctional protein regulating a broad range of cellular functions, has been reported to exert pro-angiogenic effects in in vivo models of PDAC, although the underlying molecular mechanism has not been analyzed. This work aims to elucidate the role of tPA in the angiogenesis of PDAC as well as to identify the factors responsible for tPA increase in pancreatic cancer. First, we demonstrated that tPA pro-angiogenic effects are both indirect and direct. On the one hand, tPA does not change the levels of the pro-angiogenic molecules VEGF, TGF-b, IL-1 or IL-8 produced by pancreatic tumoral cells or endothelial cells, but it is involved in MMP-9 –a potent stimulator of angiogenesis- upregulation and activation in pancreatic and endothelial cells, suggesting that this matrix metalloproteinase can indirectly mediate tPA angiogenic effects. On the other hand, we found that tPA, in a catalytic-independent way, directly promotes endothelial cell proliferation, migration and tubulogenesis. These direct effects of tPA are mediated by activation of ERK1/2, AKT and JNK signaling pathways in endothelial cells. In addition, using siRNA technology or chemical inhibitors, we found that AnnexinA2, Galectin-1 and EGFR are required for tPA-mediated signaling activation in endothelium. Finally, we found that inflammatory cytokines and hypoxia, two hallmarks of PDAC and also angiogenic stimuli, lead to a sharp increase in tPA levels in pancreatic tumoral cells. These data support a feed-back loop between proangiogenic stimuli present in both tumoral and stromal cells and the increase of the proangiogenic molecule tPA.

Exocrine pancreatic cancer is the fifth leading cause of death from malignant disease in Western society and it is one of the most aggressive human tumors. Once diagnosed, the 12-month patient survival is less than 5%. More than 90% of human exocrine tumors are classified as "ductal adenocarcinomas" on the basis of their microscopic appearance. The plasminogen system plays a critical role in intravascular thrombolysis as well as in other biological processes that require cellular migration, such as angiogenesis, inflammatory reactions, tissue remodelling, and tumor progression. There are two types of plasminogen activators that catalyze plasmin generation from plasminogen: tissue-type (tPA) and urokinase-type (uPA). Activation of plasminogen to plasmin results in progressive degradation of fibrin and other extracellular matrix components and may also lead to activation of metalloproteases, latent growth factors, and proteolysis of membrane glycoproteins. All these processes may contribute to tumor development and metastasis. There is extensive evidence supporting the notion that the uPA system, including its receptor and plasminogen activator inhibitor PAI-1, can contribute to tumorigenesis in a variety of tissue types but there is less evidence for such a role regarding tPA and annexin A2 (AnxA2), a putative tPA receptor. Previous studies of our group have shown that tPA is commonly expressed in pancreas cancer tissues and cell lines and appears to be selectively associated with the neoplastic phenotype. Using neutralizing antibodies or chemical inhibitors leads to reduced in vitro tumor invasion. Our results support that - in the pancreas - the tPA system plays an important role in tumor development and/or progression whereas the uPA system may play a more dominant role in pancreatitis. More recent studies have shown that tPA stimulates cell proliferation and angiogenesis in exocrine pancreatic tumors. These results allow new approaches to improve the treatment of this disease, but to do so it is necessary to use of mouse models of disease. In attempt to explore the role of tPA and its receptor, annexin A2, in pancreatic tumorigenesis, we have taken advantage of two well established transgenic mouse models: Ela1-TAg (1-127) and Ela1-myc. In these mice, transgenes are targeted to acinar cells using the Elastase-1 enhancer/promoter. We have also analyzed the pancreas of Ela1-CCK2 and MT-TGFa transgenic mice, as models of acinar-ductal transdifferentiation and ductal complex formation. Our results show that expression of tPA is undetectable in the non-neoplastic pancreatic epithelium and in metaplastic ducts and in acinar tumors. By contrast, tPA is overexpressed in neoplastic pancreatic ducts. This pattern expression is in agreement with the results described in humans, indicating that mouse models of pancreatic cancer may be useful for the study of human pathology. On the other hand, AnxA2 is undetectable in acinar tumors but it is detected in the apical membrane of normal and metaplastic duct epithelium. In addition, AnxA2 is strongly expressed in ductal tumor cells where it shows a non-polarized distribution. These results suggest that different molecular events may participate in the activation of tPA and its receptor, AnxA2, in non-neoplastic ducts. In order to analyze the role of tPA in the progression of pancreatic tumors, we mated Ela1-TAg and Ela1-myc transgenic mice to tPA-deficient mice. The proportion of tumors displaying pure acinar differentiation or mixed acinar/ductal components was similar in both mouse strains, indicating that tPA is not required for in acinar-ductal transdifferentiation. However, it was observed an increased survival in hybrid mice Ela1-myc:tPA-/- supporting a critical role for tPA in the progression of pancreatic ductal tumors. To get insight into the mechanism by wich tPA participates in this process we have analyzed factors related to tumor progression: tumors arising in a tPA-/- genetic background show a lesser vessel density and proliferation rate than those arising in wild type mice. These results indicate that tPA could play a role in angiogenesis stimulation and cell proliferation and suggest that the increase in survival observed in Ela1-myc tPA-/- mice could be a consequence of the inhibition of tumor angiogenesis and cell proliferation. In addition, we have analyzed the differential gene expression between Ela1-myc and Ela1-myc tPA-/- mice by microarrays. This analysis has led to the identification of related genes with tumor progression and invasion that can be a target for the action of tPA, although more work is necessary to determined their role. Finally, we have studied the direct effects of the expression of tPA in the pancreas, by the generation of two transgenic mice which tPA expression is targeted to acinar cells, using the Elastase-1 enhancer/promoter (Ela1-tPA), or to ductal cells using the Citokeratin 19 promoter (CK19-tPA). The results in Ela1-tPA mice show that overexpression of tPA in acinar cells does not affect normal mouse development. The effects on the pancreas analysed are currently being analyzed in greater detail. Altogether, the data described here support the relevant role of tPA in pancreas cancer progression and indicate that mouse models of pancreatic cancer may be useful for the preclinical evaluation of drugs targeting the tPA system.