Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-03-05Bitstream added on 2014-06-13T21:06:09Z : No. of bitstreams: 1 calderon_c_dr_botfmvz.pdf: 668199 bytes, checksum: 39ff86991440908435624d410c3ad500 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O mastocitoma canino (MCT) é uma neoplasia maligna de grande importância na clínica oncológica devido ao seu comportamento biológico agressivo e alta freqüência. A COX-2 e a PGE2 têm sido associadas à promoção e progressão tumoral e seus principais mecanismos envolvem estímulos da angiogênese tumoral e a inibição da morte celular programada. O VEGF é um potente indutor da angiogênese e a caspase-3 tem um importante papel na via efetora da apoptose. Compreender o mecanismo pela qual a COX-2 pode estimular a progressão tumoral no mastocitoma, permite ampliar o conhecimento do comportamento biológico desta neoplasia e direcionar tratamentos mais eficazes. O presente trabalho fez um estudo retrospectivo em 24 casos de mastocitoma canino (MCT). As neoplasias foram classificadas de acordo com Patnaik et al. (1984) e a expressão da COX-2, PGE2, VEGF e caspase-3 foram avaliadas usando a técnica de imunoistoquímica. A expressão da COX-2 foi correlacionada à expressão do VEGF, PGE2 e caspase-3 nos diferentes graus histopatológicos. A imunomarcação da caspase-3 foi menor nos tumores indiferenciados comparados com os bem diferenciados. Comparando os dados da expressão da COX-2 com os demais marcadores foi observado a correlação positiva entre COX-2 e PGE2, COX-2 e VEGF nas graduações II e III. A correlação entre COX-2 e caspase-3 foi somente detectada no grau III. / The canine mast cell tumor (MCT) is a malignant neoplasia with great importance on the clinical practice due to its aggressive behavior and high frequency. The COX-2 and the PGE2 have been associated to the tumor initiation, promotion and progression, and its main mechanisms involve the stimuli of tumor angiogenesis and the inhibition of apoptosis. The VEGF is a powerful inductor of angiogenesis and the caspase-3 is responsible for most part of the apoptotic effects. The understanding of the mechanism by which the COX-2 stimulates the tumor progression in the mast tumor cells provides an extension through the biological behavior of this neoplasia and leads to a better and effective treatment. The present work was a retrospective study in 24 cases of MCT. The neoplasias were classified according to Patnaik et al. (1984) and the expression of COX-2, PGE2, VEGF and caspase-3 were evaluated using the immunohistochemistry technique. The expression of COX-2 was correlated to the expression of VEGF, PGE2 and caspase-3 in the different histopathologic grades. Caspase-3 immunolabeling was lower in the undifferentiated tumors compared to the more differentiated ones. Comparing the COX-2 expression data to the other markers it was observed a positive correlation between COX-2 and PGE2, COX-2 and VEGF in grade II and III. Correlation between COX-2 and caspase-3 was detected only on grade III. Keywords: COX-2, PGE2, VEGF, caspase-3, mast cell tumor.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-09-29 / Introdução: O carcinoma renal (CR) é relativamente raro comparado a outros cânceres. Um dos mais potentes mitógenos tumorais, o fator de crescimento endotelial vascular, VEGF, é regulado por inúmeras vias, particularmente Ras e Akt, que são alvo de inúmeros agentes terapêuticos, dentre eles o sorafenibe. Estas vias de sinalização têm importante papel no desenvolvimento e manutenção da resistência a múltiplas drogas (MDR). A Echinácea purpúrea é utilizada como tratamento alternativo para alguns tipos de câncer, sendo promissora para a terapêutica de CR. Objetivo: Analisar o efeito da Echinácea purpúrea (Ech) na viabilidade celular, apoptose, nas vias de sinalização Ras e Akt, bem como na angiogênese tumoral através do VEGF e potenciais alterações na resistência a múltiplas drogas. Métodos: O fitoterápico Ech, foi adicionado à cultura de células Caki-1 para posterior análise da viabilidade celular (Cristal Violeta), apoptose (Citometria de fluxo), liberação da enzima Lactato Desidrogenase – DHL (Bio 200) e expressão protéica do VEGF, Ras e Akt (Western blot) e expressão gênica MDR, MRP, LRP (PCR-RT). Os experimentos foram realizados após 24, 48 e 72 horas de tratamento. Os resultados foram analisados pelo teste Anova One Way, com p<0,001 vs CT (X ± EP vs CT). Resultados: Os grupos tratados com Ech demonstraram diminuição significante da viabilidade celular, dose e tempo dependentes comparado aos seus controles. Nós observamos um aumento significante na porcentagem de células apoptóticas no grupo de 72 horas comparado com o grupo controle: 4,7±0,4 vs. 7,6±0,7 (p<0,001), respectivamente. Também, observamos diminuição na expressão protéica (p<0,001) da Akt (0,301±0,02 vs. 0,193±0,009) e VEGF (0,729±0,01 vs. 0,439±0,01) em 48 horas, bem como com 24 horas na proteína Ras (0,484±0,05 vs. 0,289±0,02). Analisando a expressão gênica das proteínas de resistência a múltiplas drogas, Ech causou diminuição substancial de 100% para as proteínas MDR e MRP e decréscimo de 25% na proteína LRP, sugerindo importante efeito nestas proteínas. Conclusão: Baseado em nossos resultados, observamos que a Ech apresenta propriedades anti-oncogênica, uma vez que demonstrou atividade sobre a viabilidade e apoptose celular. Da mesma forma, Ech apresentou importante papel sobre as vias de sinalização Akt e Ras, sendo estas importantes mediadoras da progressão do ciclo celular e do processo apoptótico. Essas vias inibidas demonstraram importante papel na inibição do VEGF, assim como, na regulação da resistência a múltiplas drogas. / Introduction: The renal cell carcinoma (CR) is relatively rare compared to other cancers. One of the most potent tumor mitogen, vascular endothelial growth factor, VEGF is regulated by numerous pathways, especially Ras and Akt, which are targets of many therapeutic agents, among them sorafenib. These signaling pathways play an important role in the development and maintenance of the multidrug resistance (MDR). Echinacea purpurea is used as an alternative treatment for some cancers, and promising for the treatment of CR. Aim: Analyze the effect of Ech purpurea (Ech) on the cellular viability, apoptosis, Ras and Akt signaling pathway as well as tumor angiogenesis throughout VGEF and potential proteins alteration in the cellular resistance to drugs. Methods: Herbal echinacea were added to cell culture Caki-1 for subsequent analysis of cell viability (Crystal Violet), apoptosis (flow cytometry), release of the enzyme lactate dehydrogenase - LDH (Bio 200), protein expression of VEGF, Ras and Akt (Western blot ) and gene expression MDR, MRP, LRP (RT-PCR). The experiments were performed after 24, 48 and 72 hours of treatment. The results were analyzed by One Way ANOVA, p <0.001 vs CT (X ± SE vs CT). Results: Group treated with Ech demonstrated decrease in cell viability dose and time dependent compared to the control (IC50, 150mg/mL) from 0 to 300ug/mL (p<0.001). We observed a statistically significant increase of apoptotic cells for group 72 hours comparing with control group: 4.7±0.4 vs. 7.6±0.7 (p<0.001), respectively. Also, a decrease in protein expression (p<0.05) of the Akt (0.301±0.02 vs. 0.193±0.009) and VEGF (0.729±0.01 vs. 0.439±0.01) in 48 hours, as well as Ras in 24 hours (0.484±0.05 vs. 0.289±0.02) were obtained. By analyzing the genic expression of the proteins resistance to multiple drugs, Ech caused a substantial decrease of 100% for MDR and MRP with 25% decreases in LRP, suggesting an important effect in blunt the resistance protein to drugs. Conclusion: To our knowledge, the Ech has anti-oncogenic properties since it showed activity on the viability and apoptosis. Likewise, Ech has its role on the signaling pathways Akt and Ras, which are important mediators of cell cycle progression and apoptosis. These blunted pathways demonstrated an important role on VEGF inhibition, as well as in the regulation of multidrug resistance. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações