Animais de companhia têm sido apontados como reservatórios de bactérias gram-negativas resistentes a antibióticos utilizados em medicina humana e veterinária. O objetivo deste estudo foi investigar a prevalência da resistência mediada por plasmídeos em bactérias Gram-negativas isoladas de animais de companhia no Brasil e na França, elucidando o papel potencial desses animais como portadores assintomáticos. Amostras de DNA extraídas de quatro coleções de bactérias Gram-negativas produtoras de ESBL foram analisadas por tipagem e sub-tipagem baseados em PCR, análise do polimorfismo de comprimento de fragmentos de restrição (RFLP), dimensionamento baseado em PFGE de nuclease S1 e hibridação Southern blot. Adicionalmente, isolados de Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae e Enterobacter cloacae foram caracterizados por PFGE (Pulsed-field Gel Electrophoresis) e Multilocus Sequence Typing, agrupamento filogenético e tipagem de O25b. A presença de plasmídeos IncH12 (~600-kb) e IncFIB (~210-290-kp) carregando genes blaCTX-M-15 e blaCTX-M-9, foi confirmada entre cepas de E. coli isoladas de animais brasileiros, enquanto uma predominância de plasmídeos IncI1 (~200 kb) pertencentes ao complexo clonal (CC) CC12 contendo o gene blaCMY-2 foi observado entre linhagens de E. coli, em filogrupos de baixa virulência A e B1. A presença de plasmídeos do tipo IncHI2 (~ 600kb) carregando o gene blaCTX-M-15 foi confirmada em cepas de E. cloacae ST927 isoladas de fezes e saliva de cães assintomáticos no Brasil. Entre os animais franceses com infecções, os isolados de E. coli pertencentes ao filogrupo A, B1 e B2 apresentaram tamanho de plasmídeo IncF de ~210-290 kb, carregando principalmente genes blaCTX-M-15, além da presença de plasmídeo IncI1 carregando em sua maioria genes blaCTX-M-1, blaCTX-M-9 e blaCMY-2. Em animais franceses saudáveis, além das associações blaCTX-M-15/IncI1, blaCTX-M-1/IncFIB, blaCTX-M-14/IncF e da presença de blaCMY-2 e blaTEM-52b (não tipáveis), foi identificada uma cepa de E. coli carregando um plasmídeo IncL (~60kb) contendo o gene blaOXA-48, sendo esta a primeira descrição desse gene em animais na França. Além disso, os genes blaCTX-M-15, blaCTX-M-2 e blaCTX-M-9 foram localizados no cromossomo em cepas brasileiras e francesas, como observado por Southern blot e Sequenciamento de Nova Geração (NGS). Em resumo, em ambos os países, a prevalência de cepas positivas para a resistência tipo ESBL é grande. Os animais de companhia podem ter um papel importante na disseminação dos genes AmpC e ESBL mediados por plasmídeos. / Companion animals can be reservoirs of Gram-negative bacteria resistant to antibiotics used in human and veterinary medicine. The aim of this study was to investigate the genetic context of plasmid-mediated resistance in Gram-negative bacteria isolated from companion animals in Brazil and France, elucidating the potential role of these animals as asymptomatic carriers. DNA samples, extracted from a collection of ESBL-producing Gram-negative bacteria, were analyzed by PCR-based typing and sub-typing schemes, restriction fragment length polymorphism analysis, S1 nuclease PFGE-based sizing and Southern blot hybridization. Additionally, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, and Enterobacter cloacae isolates were characterized by PFGE (Pulsed-field Gel Electrophoresis), Multilocus Sequence Typing, phylogenetic grouping and O25b typing. Presence of IncH12 (~600-kb) and IncFIB (~210-290-kp) plasmids carrying blaCTX-M-15 and blaCTX-M-9, respectively, was confirmed among E. coli strains isolated from Brazilian pets, whereas predominance of IncI1 plasmids (~200 kb) belonging to the clonal complex (CC) CC12 and carrying blaCMY-2 gene was observed among E. coli strains of low-virulence phylogrups A and B1. The presence of IncHI2-type (~ 600-kb) plasmids carrying blaCTX-M-15 gene was confirmed in E. cloacae strains ST927 isolated from feces and saliva from asymptomatic dogs in Brazil. Among French diseased companion animals, E. coli isolates belonging to phylogroup A, B1 and B2 were found carrying IncF-type plasmid with size of ~210-290-kb, which harbored mainly blaCTX-M-15 genes. In addition, presence of IncI1 plasmids carrying blaCTX-M-1, blaCTX-M-9 and blaCMY-2 genes was identified. In healthy French animals, besides associations blaCTX-M-15/IncI1, blaCTX-M-1/IncFIB, blaCTX-M-14/IncF, and the presence of blaCMY-2 and blaTEM-52b (non-typable), it was observed an E. coli strain carrying an IncL plasmid (~ 60kbp) containing the blaOXA-48 gene, representing the first description of this gene in a French dog. In addition, blaCTX-M-15, blaCTX-M-2 and blaCTX-M-9 genes were located on the chromosome in Brazilian and French strains, as observed by Southern Blot and New Generation Sequencing (NGS) analysis. In summary, in both countries, the prevalence of positive strains for ESBL-type resistance in cats and dogs is high. Companion animals may play an important role in the dissemination of the plasmid mediated AmpC and ESBL genes.

O presente estudo visou determinar a prevalência de bactérias Gram-negativas produtoras de produzem b-lactamases de amplo espectro (ESBL) e resistência adquirida a quinolonas mediada por plasmídeos (PMQR) em animais de estimação, investigando o potencial papel destes hospedeiros como portadores assintomáticos. Em 2012, foram coletadas 216 amostras (fezes e saliva) de 108 animais de companhia (29 gatos e 79 cães) abrigados em casas de família, um centro de acolhimento de animais abandonados, e no Centro de Controle de Zoonoses da Cidade de São Paulo. Do total de cepas estudadas, 85% apresentaram fenótipo sugestivo de PMQR; enquanto que 62% dos isolados exibiram um fenótipo característico e sugestivo para produção de ESBL, sendo na sua maioria identificadas como E. coli. Dentre os isolados, 14 carregaram variantes do gene blaCTX-M, 9 foram positivos para o gene blaTEM, e 6 foram positivos para blaSHV. Em relação às cepas resistentes às Q/FQ, 56% (n= 43) foram positivas para a presença do gene qnr, o qual foi identificado em 11 espécies diferentes. Os resultados apresentados demostram que animais de companhia podem ser portadores assintomáticos de cepas produtoras de ESBL e PMQR. / The present study aimed to determine the prevalence of Gram-negative bacteria producing b-lactamases producing broad-spectrum (ESBL) and acquired resistance to quinolones mediated by plasmids (PMQR) in pets, investigating the potential role of these hosts as asymptomatic carriers. In 2012, 216 samples (feces and saliva) of 108 companion animals (29 cats and 79 dogs) housed in shelters or a Zoonosis Control Center were collected from São Paulo city. Of the total strains studied, 85% had a phenotype suggestive for PMQR; while 62 % of the isolates exhibited a characteristic phenotype and suggestive for ESBL-producing genes, with the most identified as E. coli. Among the isolates, 14 carried variants blaCTX -M gene 9 were positive for blaTEM gene, and 6 were positive for blaSHV. Regarding resistant Q/FQ isolates, 56% (n = 43) were positive for the presence of qnr gene, which was identified on 11 different species. The results presented demonstrate that pets can be asymptomatic carriers of ESBL producing strains and PMQR.

O presente estudo visou determinar a prevalência de bactérias Gram-negativas produtoras de produzem b-lactamases de amplo espectro (ESBL) e resistência adquirida a quinolonas mediada por plasmídeos (PMQR) em animais de estimação, investigando o potencial papel destes hospedeiros como portadores assintomáticos. Em 2012, foram coletadas 216 amostras (fezes e saliva) de 108 animais de companhia (29 gatos e 79 cães) abrigados em casas de família, um centro de acolhimento de animais abandonados, e no Centro de Controle de Zoonoses da Cidade de São Paulo. Do total de cepas estudadas, 85% apresentaram fenótipo sugestivo de PMQR; enquanto que 62% dos isolados exibiram um fenótipo característico e sugestivo para produção de ESBL, sendo na sua maioria identificadas como E. coli. Dentre os isolados, 14 carregaram variantes do gene blaCTX-M, 9 foram positivos para o gene blaTEM, e 6 foram positivos para blaSHV. Em relação às cepas resistentes às Q/FQ, 56% (n= 43) foram positivas para a presença do gene qnr, o qual foi identificado em 11 espécies diferentes. Os resultados apresentados demostram que animais de companhia podem ser portadores assintomáticos de cepas produtoras de ESBL e PMQR. / The present study aimed to determine the prevalence of Gram-negative bacteria producing b-lactamases producing broad-spectrum (ESBL) and acquired resistance to quinolones mediated by plasmids (PMQR) in pets, investigating the potential role of these hosts as asymptomatic carriers. In 2012, 216 samples (feces and saliva) of 108 companion animals (29 cats and 79 dogs) housed in shelters or a Zoonosis Control Center were collected from São Paulo city. Of the total strains studied, 85% had a phenotype suggestive for PMQR; while 62 % of the isolates exhibited a characteristic phenotype and suggestive for ESBL-producing genes, with the most identified as E. coli. Among the isolates, 14 carried variants blaCTX -M gene 9 were positive for blaTEM gene, and 6 were positive for blaSHV. Regarding resistant Q/FQ isolates, 56% (n = 43) were positive for the presence of qnr gene, which was identified on 11 different species. The results presented demonstrate that pets can be asymptomatic carriers of ESBL producing strains and PMQR.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:38:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_michele_berselli.pdf: 980013 bytes, checksum: 0d98a25eadb457de46dc88fa48733545 (MD5) Previous issue date: 2011-02-22 / Blood vascular tumors (hemagioma and hemangiosarcomas) are common neoplasms in dogs and cats, although their frequency of diagnosis is lower than others neoplasms and may reach the skin or organ systems. The hemangioma is a benign, although it can cause organ dysfunction when reaching systemic organs. The hemangiosarcoma represents a serious problem, because their malignant nature is considered one of the soft tissue sarcomas of worse prognosis causing sudden death. In this sense, the objective was to identify the incidence, prognostic parameters and time and survival rate of pets suffering from hemangiomas and hemangiosarcomas. We conducted a survey of cases of hemangiomas and hemangiosarcomas in dogs and cats diagnosed at the Regional Diagnostic Laboratory, Federal University of Pelotas, during the period 1998 to 2010. We retrieved 53 samples from biopsies and/or necropsies. Of the total cases studied, 20 animals with neoplasms were monitored over a period of two years. In this study, we used histopathological parameters, invasion, survival time and location as criteria for assessing prognosis. Histological parameters were evaluated as histological arrangement, cell morphology, mitotic rate, peritumoral lymphoplasmocytic infiltrate, necrosis, hemorrhage, and invasion to adjacent tissues were compared with histological grade and survival of affected animals. The neoplasms affecting skin in 60% of samples. Hemangiosarcomas were much more common than hemangiomas. When histological parameters were compared, we observed that the location was statistically significant when compared to the morphology (p = 0.0001), as well as the amount of bleeding (p = 0.0001) and invasion (p = 0.029). Other parameters showed no relation with the histologic grade and/or survival, thus, are not considered predictive prognostic factors. In this study, the survival rate for dogs with cutaneous hemangiomas and hemangiosarcomas was 90.91% while patients with systemic tumors was 41.67% in two years. From the results, we conclude that the intensity and location of invasion are important prognostic factors predictive for hemangiosarcomas in dogs and cats. Other parameters showed no relation with the histologic grade and/or survival, thus, are not considered predictive prognostic factors. The time and survival rate were lower for cats and dogs suffering from visceral hemangiosarcomas and the prognosis is generally unfavorable. / Tumores vasculares sanguíneos (hemangiomas e hemangiossarcomas) são neoplasmas comuns em caninos e felinos, no entanto sua freqüência de diagnóstico é menor que de outros neoplasmas e podem atingir a pele ou órgãos sistêmicos. O hemangioma é um neoplasma benigno, embora possa causar disfunção orgânica quando atinge órgãos sistêmicos. O hemangiossarcoma representa um problema sério, devido sua natureza maligna é considerado um dos sarcomas de tecidos moles de pior prognóstico causando morte súbita. Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi identificar a incidência, parâmetros prognósticos e o tempo e estimativa de sobrevida de animais de companhia portadores de hemangiomas e hemangiossarcomas. Foi realizado um levantamento dos casos de hemangiomas e hemangiossarcomas em cães e gatos diagnosticados no Laboratório Regional de Diagnóstico da Universidade Federal de Pelotas, durante o período de 1998 a 2010. Foram recuperadas 53 amostras provenientes de biopsias e/ou necropsias. Do total de casos estudados, 20 animais portadores dos neoplasmas foram acompanhados durante um período de dois anos. Neste estudo, utilizaram-se os parâmetros histomorfológicos, invasividade, localização e tempo de sobrevida como critérios de avaliação prognóstica. Os parâmetros histológicos avaliados como: arranjo histológico, morfologia celular, índice mitótico, infiltrado linfoplasmacítico peritumoral, necrose, hemorragia e invasão para tecidos adjacentes foram confrontados com o grau histológico e com a sobrevida dos animais acometidos. Os neoplasmas atingiram a pele em 60% das amostras. Hemangiossarcomas foram bem mais freqüentes que hemangiomas. Quando os parâmetros histológicos foram confrontados, observou-se que a localização foi estatisticamente significativa quando comparada à morfologia (p= 0,0001), assim como a quantidade de hemorragia (p=0,0001) e invasão (p= 0,029). Os demais parâmetros avaliados não mostraram relação com o grau histológico e/ou com a sobrevida, dessa forma, não são considerados fatores prognósticos preditivos. No presente estudo, a estimativa de sobrevida para animais portadores de hemangiomas e hemangiossarcomas cutâneos foi de 90,91% enquanto que para portadores de tumores sistêmicos foi de 41,67% em dois anos. A partir dos resultados obtidos, conclui-se que a intensidade de invasão e localização são fatores prognósticos preditivos importantes para hemangiosarcomas em cães e gatos. Os demais parâmetros avaliados não mostraram relação com o grau histológico e/ou com a sobrevida, dessa forma, não são considerados fatores prognósticos preditivos. O tempo e a estimativa de sobrevida foram baixos para cães e gatos portadores de hemangiossarcomas viscerais e o prognóstico é, de um modo geral, desfavorável.

Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The extrusion of the intervertebral disc is the most common cause of neurological disorders in dogs. Extrusion (Hansen type I) or protrusion (Hansen type II) of the disc may occur and consequent compression of the spinal cord and / or nerve roots. The objective of this thesis was, in a first step, to carry out a retrospective study for the epidemiological survey of the disease and to evaluate dogs in different degrees of neurological dysfunction after surgical decompression of the spinal cord. In article 1, of the 110 dogs with thoracolumbar DDIV submitted to surgical decompression, 74 (67.3%) improved clinical signs, 54 (49.1%) considered satisfactory and 20 (18.2%) were partially satisfactory. In article 2, of the 17 dogs with extrusion (Hansen type I) of thoracolumbar intervertebral disc without perception to deep pain (PDP) submitted to clinical treatment, nine (52.9%) presented satisfactory functional recovery, one (5.9%) satisfactory recovery without pain (Spinal walk) and seven (41.2%) were unsatisfactory. Of the 20 dogs submitted to surgical treatment, 10 (50%) presented satisfactory functional recovery, three (15%) satisfactory recovery without deep pain (spinal gait) and seven (35%) were unsatisfactory. There was no significant difference in functional recovery between dogs undergoing clinical or surgical treatment. In view of the results, the surgical treatment promotes a satisfactory functional recovery in the most of dogs with thoracolumbar disc extrusion, being the percentage of relapse in animals submitted to this type of therapy low. The functional clinical recovery in dogs with paraplegic thoracolumbar intervertebral disc extrusion and without perception to deep pain over 48 hours can occur independently of the treatment instituted. Other studies are needed with more cases to reinforce the evidence found. / A extrusão do disco intervertebral é uma das causas mais comuns de alterações neurológicas em cães, sendo provocada pela degeneração do disco intervertebral. Pode ocorrer extrusão (Hansen tipo I) ou protrusão (Hansen tipo II) do disco e consequente compressão da medula espinhal e/ou raízes nervosas. O objetivo desta tese foi, em uma primeira etapa, realizar um estudo retrospectivo para levantamento epidemiológico da doença e avaliar clinicamente os cães submetidos a descompressão cirúrgica da medula espinhal em diferentes graus de disfunção neurológica. Na segunda etapa avaliou, mediante estudo prospectivo, a recuperação funcional de cães paraplégicos e sem percepção à dor profunda por mais de 48 horas em decorrência de extrusão de disco intervertebral toracolombar (Hansen tipo I) submetidos ao tratamento clínico ou cirúrgico. No artigo 1, dos 110 cães com DDIV toracolombar submetidos a descompressão cirúrgica, 74 (67,3%) tiveram melhora dos sinais clínicos, sendo 54 (49,1%) considerados satisfatórios e 20 (18,2%) parcialmente satisfatórios. No artigo 2, dos 17 cães com extrusão (Hansen tipo I) de disco intervertebral toracolombar sem percepção à dor profunda (PDP) submetidos ao tratamento clínico, nove (52,9%) apresentaram recuperação funcional satisfatória, um (5,9%) recuperação satisfatória sem dor profunda (andar espinhal) e sete (41,2%) insatisfatória. Já, dos 20 cães submetidos ao tratamento cirúrgico, 10 (50%) apresentaram recuperação funcional satisfatória, três (15%) recuperação satisfatória sem dor profunda (andar espinhal) e sete (35%) insatisfatória. Não houve diferença significativa em relação a recuperação funcional entre em cães submetidos ao tratamento clínico ou cirúrgico. Diante dos resultados, o tratamento cirúrgico promove recuperação funcional satisfatória na maioria dos cães com extrusão de disco toracolombar, sendo baixo o percentual de recidiva em animais submetidos a este tipo de terapia. A recuperação clínica funcional em cães com extrusão de disco intervertebral toracolombar paraplégicos e sem percepção à dor profunda superior a 48 horas pode ocorrer independente do tratamento instituído. Outros estudos são necessários com maior número de casos para reforçar as evidências encontradas.