Orientador: Maria Ligia Rodrigues Macedo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-06T16:03:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Coelho_MirelaBatista_D.pdf: 2076971 bytes, checksum: 2ad2d77c61af65420ba1c0a4c66e5571 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: As lectinas são um grupo de proteínas e/ou glicoproteínas que se ligam específica e reversivelmente a carboidratos. Estudos têm demonstrado que essas proteínas possuem importantes atividades biológicas como atividade inseticida contra insetos e respostas imunológicas e fisiológicas em animais. Neste trabalho, tivemos como objetivos comparar os efeitos da lectina de sementes de Annona coriacea (ACLEC), com massa molecular de aproximadamente 14 kDa, sobre o desenvolvimento dos lepidopteras Anagasta kuehniella e Corcyra cephalonica assim como o estudo dos índices nutricionais desses insetos, e investigar a habilidade dessa lectina em induzir a migração de leucócitos em camundongos e os mecanismos farmacológicos delineadores desse processo, utilizando peritonite como modelo experimental. Os resultados da atividade inseticida de ACLEC mostraram que a lectina não produziu efeitos significativos sobre a sobrevivência e o peso larval de Corcyra cephalonica alimentada em dieta contendo até 2,0% de ACLEC, porém, para Anagasta kuehniella, em uma dieta artificial contendo 1,5% e 1,0% de ACLEC produziu um LD50 e WD50, respectivamente. Os resultados dos experimentos do consumo alimentar dos insetos apresentaram apenas uma redução na eficiência de conversão do alimento ingerido (ECI) e do alimento digerido (ECD) em larvas de A. kuehniela. A presença de ACLEC (2,0%) na dieta alimentar em ambos os insetos não modificou a digestibilidade aproximada (AD), mas promoveu um aumento no custo metabólico (CM) e um aumento da atividade proteolítica nas fezes do lepidóptero A. kuehniella. Este mecanismo pode promover uma modificação no meio ambiente da membrana e consequente disrupção do mecanismo de reciclagem ede enzimas, idicando a possibilidade de utulizar esta lectinas como uma estratégia biotecnológica para o manejo de insetos. Para a análise da atividade proinflamatória de ACLEC, camundongos Swiss machos foram injetados intraperitonealmente com ACLEC (3-100 µg/cavidade), de 4 a 96 h e logo após a contagem de leucócitos no fuído do lavado peritoneal foi avaliado. ACLEC induziu uma acumulação de neutrófilos dose-dependente, alcançando a respsota máxima a 16 h após a injeção (aproximadamente um aumento de 40x para 30 µg/cavidade). Uma significante acumulação de células mononucleares foi observada a 72 h (aumento de 2,7x). O carboidrato manose aboliu o inlfuxo de neutrófilos, porém sacarose e glicose não tiveram efeito. Dexametasona, o inibidor de ciclooxigenase-2 celecoxibe e o antagonista do receptor PAF PCA4248 significantemente reduziram o influxo de neutrófilos induzido por ACLEC. O antagonista de taquicinina NK1 SR140333, o antagonista de taquicinina NK2 SR48968, o inibidor não seletivo de NO L-NAME, o inibidor seletivo de NOS Aminoguanidina e o inibidor de lipoxigenase AA861 todos falharam em modificar a resposta induzida por ACLEC. Em conclusão, ACLEC é capaz de atrair neutrófilos na cavidade peritoneal de camundongos por mecanismos envolvendo interações da lectinas com o reconhecimento específico de resíduos de manose presentes nas células, induzindo a liberação de mediadores derivados de COX-2 e PAF / Abstract: Lectins are a group of proteins and/or glycoproteins, which exhibit specific and reversible carbohydrate-binding activities. Studies have demonstrated that such proteins possess important biological activities including insecticide activity as well as immunological and physiological responses in animals. In this investigation, our aim was to compare the effects of lectin isolated of Annona coriacea (ACLEC) seeds, with a molecular mass of 14 kDa, on the development of Anagasta kuehiella and Corcyra cephalonica Lepidopteras, as well as the study of their nutritional index. Since plant lectins are known to present inflammatory activity, this study also sought to investigate the leukocyte migration induced by ACLEC, and inflammatory mediators involved in this phenomenon. The results of insecticide activity of ACLEC showed that the lectin did not produce significant effects on survival and weight of C. cephalonica on an artificial diet of 2,0% of ACLEC, however, for A. kuehniella,on an artificial diet containing 1.5% and 1.0% ACLEC, it produced a LD50 and WD50, respectively. The results from dietary utilization experiments carried out with caterpillars presented only a reduction in efficiency of conversion of ingested food (ECI) and digested food (ECD) in A. kuehniella. ACLEC in the diet did not modify the approximate digestibility (AD) of any insect, but an increase of CM (metabolic cost) and an increase of proteolytic activity in the faeces were observed in A. kuehniella. These results indicate that ACLEC possesses an insecticide effect only towards A. kuehniella larvae, possibly through the binding of lectin on chitin components of membrane peritrophic or glycosylated proteins in the insect midgut. This mechanism can promote a change in membrane environment with the consequent disruption of enzyme recycling mechanisms, indicating the possibility of using this lectin in a biotechnological strategy for insect management. To test proinflammatory activity of ACLEC, male Swiss mice were intraperitoneally injected with ACLEC (3-100 µg/cavity), and at 4 to 96 h thereafter the leukocyte counts in peritoneal washing fluid were evaluated. ACLEC induced a dose-dependent neutrophil accumulation, reaching maximal responses at 16 h after injection (approximately 40-fold increase for 30 µg/cavity). Significant accumulation of mononuclear cells was observed at 72 h (2.7-fold increase). The carbohydrate mannose nearly abolished the neutrophil influx, whereas sucrose and glucose had no effect. Dexamethasone, the cyclooxygenase-2 inhibitor celecoxib and the PAF receptor antagonist PCA4248 significantly reduced ACLEC-induced neutrophil influx. The tachykinin NK1 antagonist SR140333, the tachykinin NK2 antagonist SR48968, the non-selective NO inhibitor L-NAME, the selective inducible NOS inhibitor aminoguanidine and the lypoxygenase inhibitor AA861 all failed to modify the ACLEC-induced responses. In conclusion, ACLEC is able to attract neutrophils into the mice peritoneal cavity by mechanisms involving interactions of the lectin with cell-specific mannose recognition, leading to the release of COX-2-derived mediators and PAF / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Estudos anteriores dos alcalóides totais (AT) de Annona coriacea Mart. (Annonaceae) revelaram atividade antiprotozoária promissora. No presente trabalho, realizou-se o fracionamento biomonitorado dos AT de folha e selecionaram-se duas frações ativas (100% morte), frente às formas promastigotas de Leishmania (L.) chagasi in vitro, para a caracterização dos alcalóides, por CG-EM. Os AT bioativos de caule (100% morte) foram analisados sem fracionamento prévio. Em paralelo, efetuou-se amostragem de três exemplares de A. coriacea, analisados em conjunto, para o acompanhamento da variação do rendimento em AT e da atividade leishmanicida, por 12 meses. Nas frações bioativas de folha, foram caracterizados: estefarina (proaporfínico) e nornuciferina (noraporfínico) e nos AT de caule: pronuciferina (proaporfínico), asimilobina (noraporfínico) e boldina (aporfínico). A presença de boldina foi confirmada pela análise CG-EM do padrão, nas mesmas condições dos AT. Os resultados mostraram-se inéditos para a espécie e a ocorrência de pronuciferina e boldina constituiu o primeiro relato, no gênero Annona. Os dados referentes ao rendimento em AT (folha e caule) e à atividade antipromastigota in vitro indicaram comportamento, praticamente, constante dos parâmetros ao longo do ano. O óleo volátil de folha foi analisado, por CG-EM, tendo-se identificado 60 compostos, em mistura complexa de sesquiterpenos (76,7%) e monoterpenos (23,3%). O constituinte majoritário foi o sesquiterpeno biciclogermacreno (39,8%). O óleo volátil foi avaliado in vitro e apresentou atividade frente às formas promastigotas de quatro espécies de Leishmania e nas formas tripomastigotas de T. cruzi. A determinação e obtenção dos compostos bioativos motiva a continuidade da pesquisa. / Previous studies of total alkaloids (TA) from Annona coriacea Mart. (Annonaceae) have revealed potential antiprotozoal activity. In this study a bioguided fractionation of leaves TA was conducted and two fractions were active in vitro against Leishmania (L.) chagasi promastigotes (100% death) and selected in order to identify the alkaloid constituents, by GC-MS analysis. Stem bioactive TA (100% death) were also analyzed, without previous fractionation. Parallel to that, a sample of three combined specimens of A. coriacea (leaves and stem) was evaluated for the annual variation of TA production and the leishmanicide activity. Stefarine (proaporphine) and nornuciferine (noraporphine) were identified in the bioactive fractions of leaves while pronuciferine (proaporphine), asimilobine (noraporphine) and boldine (aporphine) were identified in stem TA. Boldine was confirmed by the GC-MS evaluation of the standard, under the same conditions of the TA. It was the first report of those alkaloids in this species and for pronuciferine and boldine occurrence in Annona genus. The TA yields (leaves and stem) and the in vitro antipromastigote activity remained almost unaltered throughout the year. The volatile oil of leaves was also analyzed by GC-MS. Sixty compounds were indentified in a complex mixture of sesquiterpenes (76.7%) and monoterpenes (23.3%). Byciclogermacrene was its major component (39.8%). The volatile oil was evaluated in vitro and was active against four species of Leishmania promastigotes and also against T. cruzi tripomastigotes. The identification of the bioactive constituents and their isolation are promising for further studies.

Estudos anteriores dos alcalóides totais (AT) de Annona coriacea Mart. (Annonaceae) revelaram atividade antiprotozoária promissora. No presente trabalho, realizou-se o fracionamento biomonitorado dos AT de folha e selecionaram-se duas frações ativas (100% morte), frente às formas promastigotas de Leishmania (L.) chagasi in vitro, para a caracterização dos alcalóides, por CG-EM. Os AT bioativos de caule (100% morte) foram analisados sem fracionamento prévio. Em paralelo, efetuou-se amostragem de três exemplares de A. coriacea, analisados em conjunto, para o acompanhamento da variação do rendimento em AT e da atividade leishmanicida, por 12 meses. Nas frações bioativas de folha, foram caracterizados: estefarina (proaporfínico) e nornuciferina (noraporfínico) e nos AT de caule: pronuciferina (proaporfínico), asimilobina (noraporfínico) e boldina (aporfínico). A presença de boldina foi confirmada pela análise CG-EM do padrão, nas mesmas condições dos AT. Os resultados mostraram-se inéditos para a espécie e a ocorrência de pronuciferina e boldina constituiu o primeiro relato, no gênero Annona. Os dados referentes ao rendimento em AT (folha e caule) e à atividade antipromastigota in vitro indicaram comportamento, praticamente, constante dos parâmetros ao longo do ano. O óleo volátil de folha foi analisado, por CG-EM, tendo-se identificado 60 compostos, em mistura complexa de sesquiterpenos (76,7%) e monoterpenos (23,3%). O constituinte majoritário foi o sesquiterpeno biciclogermacreno (39,8%). O óleo volátil foi avaliado in vitro e apresentou atividade frente às formas promastigotas de quatro espécies de Leishmania e nas formas tripomastigotas de T. cruzi. A determinação e obtenção dos compostos bioativos motiva a continuidade da pesquisa. / Previous studies of total alkaloids (TA) from Annona coriacea Mart. (Annonaceae) have revealed potential antiprotozoal activity. In this study a bioguided fractionation of leaves TA was conducted and two fractions were active in vitro against Leishmania (L.) chagasi promastigotes (100% death) and selected in order to identify the alkaloid constituents, by GC-MS analysis. Stem bioactive TA (100% death) were also analyzed, without previous fractionation. Parallel to that, a sample of three combined specimens of A. coriacea (leaves and stem) was evaluated for the annual variation of TA production and the leishmanicide activity. Stefarine (proaporphine) and nornuciferine (noraporphine) were identified in the bioactive fractions of leaves while pronuciferine (proaporphine), asimilobine (noraporphine) and boldine (aporphine) were identified in stem TA. Boldine was confirmed by the GC-MS evaluation of the standard, under the same conditions of the TA. It was the first report of those alkaloids in this species and for pronuciferine and boldine occurrence in Annona genus. The TA yields (leaves and stem) and the in vitro antipromastigote activity remained almost unaltered throughout the year. The volatile oil of leaves was also analyzed by GC-MS. Sixty compounds were indentified in a complex mixture of sesquiterpenes (76.7%) and monoterpenes (23.3%). Byciclogermacrene was its major component (39.8%). The volatile oil was evaluated in vitro and was active against four species of Leishmania promastigotes and also against T. cruzi tripomastigotes. The identification of the bioactive constituents and their isolation are promising for further studies.

Made available in DSpace on 2014-07-29T16:11:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao guilherme.pdf: 2090110 bytes, checksum: a1c991816c551ebd8ad069c1df1f9f72 (MD5) Previous issue date: 2008-09-25 / The araticum (Annona coriacea Mart.) is a typical fruit of the brazilian cerrado used popularly to overcome inflammatory processes. The family Annonaceae presents as the main constituents acetogenins, a class of substances with great cytotoxic and genotoxic potential, and cited as responsible for a disease similar to parkinson in a Caribbean population that used the fruit as much as food and for medicinal purposes. The aim of this study was to evaluate the putative activity of crude ethanolic extract of seeds of A. coriacea on the cerebral cortex of mice exposed at doses of 12.5, 25, 50 and 100 mg / kg, and evaluate its activity on different areas of the brain, the liver and kidneys. We used 30 adult male Swiss mice divided into groups control, solvent and treated (12.5, 25, 50 and 100 mg / kg). The extract was administered orally for four days. The target organs were extirpated, fixed in 70% ethanol (v / v) and processed for histological method - hematoxylin and eosin. The analysis of the slides was performed by image processing system for counting cells and other morphometric analysis. The morphological studies showed no significant changes to the brain in different areas, just as no changes were detected in the kidneys. On the other hand, was found a reduction on the frequency of cells per area of the liver, like as an reduction on the consumption of food, water and production of excreta. We conclude with this work a possible hepatotoxic activity induced by exposure to crude ethanol extract of seeds of A. Coriacea Mart., observed by the decrease in frequency of cells per area of the liver, correlated with reductions in consumption of food / water and production of excreta by animals. / O Araticum (Annona coriacea Mart.) é um fruto típico do cerrado brasileiro utilizado popularmente para remediar processos inflamatórios. A família Annonaceae apresenta como principais constituintes as acetogeninas, uma classe de substâncias com grande potencial citotóxico, genotóxico e ainda citado como o responsável por uma doença similar ao parkinsonismo em uma população caribenha que utilizava o fruto tanto como alimento quanto para fins medicinais. O objetivo deste estudo foi avaliar a putativa atividade do extrato bruto etanólico das sementes da A. coriacea sobre o córtex cerebral de camundongos expostos nas doses de 12,5; 25; 50 e 100 mg/kg, além de avaliar sua atividade sobre diferentes áreas do encéfalo, sobre o fígado e rins. Foram utilizados 30 camundongos Swiss machos adultos divididos em grupos controle, solvente e tratados (12,5; 25; 50 e 100 mg/kg). O extrato foi administrado por via oral durante quatro dias. Os órgãos-alvo foram extirpados, fixados em etanol 70% (v/v) e processados para método histológico - hematoxilina e eosina. A análise das lâminas foi executada via sistema de processamento de imagens para a contagem das células e demais análises morfométricas. Os estudos morfológicos não demonstraram alterações significativas para o cérebro em suas diferentes áreas, da mesma forma que não foram detectadas alterações nos rins. Por outro lado, foi detectado uma redução da freqüência de células por área do fígado, assim como verificamos uma diminiução no consumo de ração, água e produção de excreta. Concluimos com este trabalho uma possível atividade hepatotóxica induzida pela exposição ao extrato bruto etanólico das sementes da A. Coriacea Mart., observada pela diminuição da freqüência de células por área do fígado, correlacionado com reduções de consumo de ração/água e produção de excretas pelos animais.

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No. of bitstreams: 2 Dissertação - João Gabriel Moraes Junqueira - 2015.pdf: 5620624 bytes, checksum: b030b0a7744d9893a10756f4cef1821c (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-03-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / CHAPTER 01: CHEMICAL STUDY OF VOLATILE ORGANIC COMPOUNDS Annona coriacea Mart. AND Xylopia aromatica (Lam.) Mart (Annonaceae) - In this research was performed the study of the chemical profile of the volatile organic compounds (VOCs) of flowers and leaves of species Annona coriacea and Xylopia aromatica (Annonaceae) by means of extraction in vivo and in vitro, through the techniques headspace-solid phase microextraction (HS-SPME), hydrodistillation and characterization by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). By the analysis of the volatile fraction of flowers and leaves of A. coriacea it was observed different VOCs, according to the coatings utilized, since the selection of the fiber becomes one of the main factors for VOCs analysis in different vegetables parts. The chemical profile of the flowers of X. aromatica was obtained through HS-SPME, which compared the efficiency of in vivo and in vitro extractions, due to the higher number of VOCs present in the floral aroma. Once were obtained various chemical data, the multivariate analysis of the data was performed, which provided relevant information, contributing to the optimization of some conditions, such as selection of fiber, extraction time and extraction temperature yielded the characterization of the most number of VOCs. In this context, the conditions that presented the most promising results were: fibers CAR/PDMS and PA, extraction time equal the 60 min and extraction temperature of 29 °C. The essential oil of the flowers of X. aromatica was obtained by hydrodistillation and chemically characterized by GC-MS. The major compound present was the pentadecan-2-one (16.38%). The extraction techniques utilized were helpful, however there was qualitative and quantitative variation of VOCs, which is expected due to the extraction process be different. Thus, it is observed that depending on the objective of the survey or that searches for in the volatile fraction, it is necessary to use the technique to give the most promising results for the investigation held or in order to complement each other. In this way, the study of A. coriacea and X. aromatica contributed to the knowledge of the chemical profile of VOCs present in these species, seen from these investigations that the same can be applied in several industrial areas, for example cosmetic, food, among others. / CAPÍTULO 01: ESTUDO QUÍMICO DOS COMPOSTOS ORGÂNICOS VOLÁTEIS DE Annona coriacea Mart. E Xylopia aromatica (Lam.) Mart (Annonaceae) - Nesta pesquisa realizou-se o estudo do perfil químico dos compostos orgânicos voláteis (COVs) das flores e folhas das espécies Annona coriacea e Xylopia aromatica (Annonaceae), por meio da extração in vivo e in vitro, através das técnicas de headspace-microextração em fase sólida (HS-SPME), hidrodestilação e caracterização via cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG-EM). Pela análise da fração volátil das flores e folhas de A. coriacea observou-se COVs diferentes, de acordo com os revestimentos usados, visto que a seleção da fibra se torna um dos principais fatores para a análise de COVs em partes vegetais diferentes. O perfil químico das flores de X. aromatica foi obtido via HS-SPME, em que se comparou a eficiência das extrações in vivo e in vitro, em função do maior número de COVs presentes no aroma floral. Uma vez que foram obtidos vários dados químicos, foi realizada a análise multivariada dos mesmos, a qual forneceu informações relevantes, contribuindo para a otimização de algumas condições, tais como seleção da fibra, tempo de extração e temperatura de extração que rendessem a caracterização do maior número de COVs. Neste contexto, as condições que apresentaram os resultados mais promissores foram: fibras de CAR/PDMS e PA, tempo de extração igual a 60 min e temperatura de extração de 29 oC. O óleo essencial das flores de X. aromatica foi obtido por hidrodestilação e caracterizado quimicamente por CG-EM. O composto majoritário presente foi a pentadecan-2-ona (16,38%). As técnicas de extração utilizadas foram úteis, entretanto houve variação quali e quantitativa dos COVs, o que é esperado devido ao processo de extração ser diferente. Assim, observou-se que dependendo do objetivo da pesquisa ou do que se procura na fração volátil, faz-se necessária a utilização da técnica que dê os resultados mais promissores para a investigação realizada ou de forma que se complementem. Desta maneira, o estudo de A. coriacea e X. aromatica contribuiu para o conhecimento do perfil químico dos COVs presentes nestas espécies, visto que a partir destas investigações os mesmos podem ser aplicados em várias áreas industriais, por exemplo cosmético, alimentos, dentre outros.