Objetivou-se, principalmente, conhecer a paridade, desenvolvimento ovariano e a razão de sobrevivência dessas populações. As coletas foram realizadas na Fazenda Experimental do Instituto Agronômico de Campinas e em sítio próximo, denominado Barra do Capinzal. Ambos situados no município de Pariquera-Açu, Estado de São Paulo. De maneira concomitante, as capturas foram feitas nos ambientes extradomiciliar e domiciliar, mediante o emprego da isca humana e armadilha tipo Shannon. Focalizou-se o complexo Anopheles albitarsis, populações prováveis A e B, por ocasião do período crepuscular vespertino. As dissecções foram feitas utilizando-se da técnica de Polovodova. Para a avaliação do desenvolvimento folicular, adotou se o critério de Christophers e Mer e o conceito baseado na Escola Clássica. Das 4.170 fêmeas dissecadas, 90,2 por cento foram da população B e 9,8 por cento da população A. Quanto à paridade, o resultado global revelou que o grupo das nulíparas foi predominante, com aproximadamente 70,0 por cento . A uniparidade com aproximadamente 25,0 por cento , a biparidade com aproximadamente 2,5 por cento e o grupo com 3 e 4 dilatações foi inferior a 1,0 por cento . Quanto ao desenvolvimento folicular, a proporção de fêmeas com os folículos desenvolvidos além da fase II de Christophers e Mer, foi muito pequena, variando de 1,4 a 4,0 por cento . Isso sugeriu a possibilidade da existência de concordância gonotrófica, para as duas supostas populações, nos dois ambientes. A melhor estimativa para a razão de sobrevivência foi de 0,5339 ± 0,047 e 0,5301 ± 0,056 para a população A e de 0,5566 ± 0,015 e 0,3151 ± 0,015 para a população B. No laboratório, procurou-se observar a duração do ciclo gonotrófico e a razão de sobrevivência mediante o acompanhamento diário de coorte de 121 fêmeas, sendo 40 da população A e 81 da população B. A duração do ciclo gonotrófico variou de 2,5 a 3,5 dias para a população A e 2 a 3 dias para a população B e a estimativa da sobrevivência diária variou de 0,35 a 0,79 para a população A e de 0,70 a 0,81 para a população B. Com esses resultados pretendeu-se contribuir para possível estimativa do potencial de transmissão malárica, eventualmente existente na região ou no local. / The basic purpose of the work to determine the parity, the ovarian development and the survivorship rates of these populations. Collection in the field was carried out at Experimental Farm of the \"Instituto Agronômico de Campinas\", and in a locality in the vicinity of \"Barra do Capinzal\", both situated in the Pariquera-Açu Municipality, State of São Paulo, Brazil. Concurrent field collections were also made in extradomiciliary and domiciliary environments using human bait and Shannon traps. Special attention was given to the Anopheles albitarsis complex, with A and B population, in the crepuscular sunset period. Dissections were made according to Polovodova\'s (1949) technique. The method adopted to determine the follicular development was that of Christophers and Mer and the concept was based on the classic school. From 4,170 females dissected, 90.2 per cent were of population B and 9.8 per cent of population A. The overall results concerning the parity showed the nulliparous group to be predominant with 70.0 per cent , uniparous with 25.0 per cent , biparous 2.5 per cent , and the group with three and four dilatations was lower than 1.0 per cent . In relation to the follicular development, the proportion of female above phase 11 of Christophers and Mer, was very small, 1.4 to 4.0 per cent . This suggests that gonotrophic concordance may occur for the two population in both environments. The best estimate for the survivorship rate was 0.5339 ± 0.047 and 0.5301 ± 0.056 to the population A, and 0.5566 ± 0.015 and 0.3151 ±-0.015 to the population B. A study in the laboratory was also carried out to observe the duration of the gonotrophic cycle and the survival rate by daily observation of a cohort of 121 females, 40 of population A and 81 of population B. The duration of the gonotrophic cycle varied from 2.5 to 3.5 days for the population A and from 2 to 3 days for the population B and the estimated daily survival rate was 0.35 to 0.79 to the population A and 0.70 to 0.81 to the population B. With these results, it is intended to contribute for possible estimate of malarian transmission potential, eventually existent in the region or in the local.

Objetivou-se, principalmente, conhecer a paridade, desenvolvimento ovariano e a razão de sobrevivência dessas populações. As coletas foram realizadas na Fazenda Experimental do Instituto Agronômico de Campinas e em sítio próximo, denominado Barra do Capinzal. Ambos situados no município de Pariquera-Açu, Estado de São Paulo. De maneira concomitante, as capturas foram feitas nos ambientes extradomiciliar e domiciliar, mediante o emprego da isca humana e armadilha tipo Shannon. Focalizou-se o complexo Anopheles albitarsis, populações prováveis A e B, por ocasião do período crepuscular vespertino. As dissecções foram feitas utilizando-se da técnica de Polovodova. Para a avaliação do desenvolvimento folicular, adotou se o critério de Christophers e Mer e o conceito baseado na Escola Clássica. Das 4.170 fêmeas dissecadas, 90,2 por cento foram da população B e 9,8 por cento da população A. Quanto à paridade, o resultado global revelou que o grupo das nulíparas foi predominante, com aproximadamente 70,0 por cento . A uniparidade com aproximadamente 25,0 por cento , a biparidade com aproximadamente 2,5 por cento e o grupo com 3 e 4 dilatações foi inferior a 1,0 por cento . Quanto ao desenvolvimento folicular, a proporção de fêmeas com os folículos desenvolvidos além da fase II de Christophers e Mer, foi muito pequena, variando de 1,4 a 4,0 por cento . Isso sugeriu a possibilidade da existência de concordância gonotrófica, para as duas supostas populações, nos dois ambientes. A melhor estimativa para a razão de sobrevivência foi de 0,5339 ± 0,047 e 0,5301 ± 0,056 para a população A e de 0,5566 ± 0,015 e 0,3151 ± 0,015 para a população B. No laboratório, procurou-se observar a duração do ciclo gonotrófico e a razão de sobrevivência mediante o acompanhamento diário de coorte de 121 fêmeas, sendo 40 da população A e 81 da população B. A duração do ciclo gonotrófico variou de 2,5 a 3,5 dias para a população A e 2 a 3 dias para a população B e a estimativa da sobrevivência diária variou de 0,35 a 0,79 para a população A e de 0,70 a 0,81 para a população B. Com esses resultados pretendeu-se contribuir para possível estimativa do potencial de transmissão malárica, eventualmente existente na região ou no local. / The basic purpose of the work to determine the parity, the ovarian development and the survivorship rates of these populations. Collection in the field was carried out at Experimental Farm of the \"Instituto Agronômico de Campinas\", and in a locality in the vicinity of \"Barra do Capinzal\", both situated in the Pariquera-Açu Municipality, State of São Paulo, Brazil. Concurrent field collections were also made in extradomiciliary and domiciliary environments using human bait and Shannon traps. Special attention was given to the Anopheles albitarsis complex, with A and B population, in the crepuscular sunset period. Dissections were made according to Polovodova\'s (1949) technique. The method adopted to determine the follicular development was that of Christophers and Mer and the concept was based on the classic school. From 4,170 females dissected, 90.2 per cent were of population B and 9.8 per cent of population A. The overall results concerning the parity showed the nulliparous group to be predominant with 70.0 per cent , uniparous with 25.0 per cent , biparous 2.5 per cent , and the group with three and four dilatations was lower than 1.0 per cent . In relation to the follicular development, the proportion of female above phase 11 of Christophers and Mer, was very small, 1.4 to 4.0 per cent . This suggests that gonotrophic concordance may occur for the two population in both environments. The best estimate for the survivorship rate was 0.5339 ± 0.047 and 0.5301 ± 0.056 to the population A, and 0.5566 ± 0.015 and 0.3151 ±-0.015 to the population B. A study in the laboratory was also carried out to observe the duration of the gonotrophic cycle and the survival rate by daily observation of a cohort of 121 females, 40 of population A and 81 of population B. The duration of the gonotrophic cycle varied from 2.5 to 3.5 days for the population A and from 2 to 3 days for the population B and the estimated daily survival rate was 0.35 to 0.79 to the population A and 0.70 to 0.81 to the population B. With these results, it is intended to contribute for possible estimate of malarian transmission potential, eventually existent in the region or in the local.

A malária é uma doença grave, cujos vetores são mosquitos do gênero Anopheles. Esse gênero é composto por cerca de 500 espécies e aproximadamente 45 são responsáveis pela transmissão do parasito em todo o mundo. Alguns destes vetores são componentes de complexo de espécies crípticas como Complexo Albitarsis e Complexo Triannulatus. O Complexo Albitarsis é formado por quatro espécies: An. albitarsis s.s, An. albitarsis B, An. marajoara e An. deaneorum. O Complexo Triannulatus é composto por três espécies: An. triannulatus, An. halophylus e An. triannulatus C. Algumas técnicas moleculares são utilizadas para auxiliar na distinção destas espécies crípticas. Dessa forma, DNA de An. albitarsis s.l e An. triannulatus s.l., capturados na Usina de Porto Primavera, foram amplificados para ITS2 e para o gene ND4 do DNAmt. Todas as amostras foram submetidas à técnica de RFLP. Algumas amostras foram seqüenciadas diretamente ou clonadas para posterior seqüenciamento a fim de se confirmar a espécie. Das amostras do Complexo Albitarsis, 62,85% foram identificadas como An. deaneorum para ITS2-RFLP. As restantes foram amplificadas para ND4-RFLP e foram identificadas como An. albitarsis s.s. Observou-se, no entanto, que as amostras do Complexo Albitarsis não exibiram similaridade total com as depositadas no GeneBank sendo que para ITS2-PCR estas foram identificadas como An. albitarsis s.s. e An. deaneorum, enquanto que para o gene ND4 todas foram identificadas como An. albitarsis B. O ITS2-RFLP para o An. triannulatus s.l demonstrou polimorfismos entre as espécies. No seqüenciamento, estas amostras foram similares àquelas depositadas no GeneBank. O emprego de marcadores moleculares podem, em parte, auxiliar na distinção de espécies crípticas, porém outros marcadores devem ser avaliados a fim de se elucidar a identificação do Complexo Albitarsis. / Malaria is a severe disease whose vectors are mosquitoes belonging to the genus Anopheles. This genus contains 500 species of which approximately 45 are responsible for the worldwide transmission of these parasites. Some of these vectors belong to cryptic species such as those of the Albitarsis and Triannulatus Complex. The Albitarsis Complex is composed of four species: An. albitarsis s.s., An. albitarsis B, An. marajoara and An. deaneorum. The Triannulatus Complex contains three species: An. triannulatus, An. halophylus and An. triannulatus C. We used molecular techniques to differentiate these cryptic species. Thus, DNA of An. albitarsis s.l and An. triannulatus s.l, captured at the Porto Primavera Dam had their ITS2 and their mtDNA, ND4 genes amplified. All samples were analyzed by the RFLP technique. Some samples were directly sequenced while others were cloned for subsequent sequencing for species confirmation. Within the Albitarsis Complex, 62.85% were identified as An. deaneorum by RFLP-ITS2. The remaining were amplified by RFLP-ND4 and identified as An. albitarsis s.s. However the results of sequencing of the samples of the Albitarsis Complex did not overlap entirely with those deposited in the GeneBank since those amplified by RFLP-ITS2 were identified as An. albitarsis s.s. and An. deaneorum while those obtained by RFLP-ND4 were identified as An. albitarsis B. Also RFLP-ITS2 of A. triannulatus s.l. contained polymorphic regions among different species. By sequencing, these samples were similar to those deposited in the GeneBank. The use of molecular markers did, in some instances help to distinguish species within cryptic complexes, however other markers need to be evaluated to elucidate further identification of the Albitarsis Complex.

A malária é uma doença grave, cujos vetores são mosquitos do gênero Anopheles. Esse gênero é composto por cerca de 500 espécies e aproximadamente 45 são responsáveis pela transmissão do parasito em todo o mundo. Alguns destes vetores são componentes de complexo de espécies crípticas como Complexo Albitarsis e Complexo Triannulatus. O Complexo Albitarsis é formado por quatro espécies: An. albitarsis s.s, An. albitarsis B, An. marajoara e An. deaneorum. O Complexo Triannulatus é composto por três espécies: An. triannulatus, An. halophylus e An. triannulatus C. Algumas técnicas moleculares são utilizadas para auxiliar na distinção destas espécies crípticas. Dessa forma, DNA de An. albitarsis s.l e An. triannulatus s.l., capturados na Usina de Porto Primavera, foram amplificados para ITS2 e para o gene ND4 do DNAmt. Todas as amostras foram submetidas à técnica de RFLP. Algumas amostras foram seqüenciadas diretamente ou clonadas para posterior seqüenciamento a fim de se confirmar a espécie. Das amostras do Complexo Albitarsis, 62,85% foram identificadas como An. deaneorum para ITS2-RFLP. As restantes foram amplificadas para ND4-RFLP e foram identificadas como An. albitarsis s.s. Observou-se, no entanto, que as amostras do Complexo Albitarsis não exibiram similaridade total com as depositadas no GeneBank sendo que para ITS2-PCR estas foram identificadas como An. albitarsis s.s. e An. deaneorum, enquanto que para o gene ND4 todas foram identificadas como An. albitarsis B. O ITS2-RFLP para o An. triannulatus s.l demonstrou polimorfismos entre as espécies. No seqüenciamento, estas amostras foram similares àquelas depositadas no GeneBank. O emprego de marcadores moleculares podem, em parte, auxiliar na distinção de espécies crípticas, porém outros marcadores devem ser avaliados a fim de se elucidar a identificação do Complexo Albitarsis. / Malaria is a severe disease whose vectors are mosquitoes belonging to the genus Anopheles. This genus contains 500 species of which approximately 45 are responsible for the worldwide transmission of these parasites. Some of these vectors belong to cryptic species such as those of the Albitarsis and Triannulatus Complex. The Albitarsis Complex is composed of four species: An. albitarsis s.s., An. albitarsis B, An. marajoara and An. deaneorum. The Triannulatus Complex contains three species: An. triannulatus, An. halophylus and An. triannulatus C. We used molecular techniques to differentiate these cryptic species. Thus, DNA of An. albitarsis s.l and An. triannulatus s.l, captured at the Porto Primavera Dam had their ITS2 and their mtDNA, ND4 genes amplified. All samples were analyzed by the RFLP technique. Some samples were directly sequenced while others were cloned for subsequent sequencing for species confirmation. Within the Albitarsis Complex, 62.85% were identified as An. deaneorum by RFLP-ITS2. The remaining were amplified by RFLP-ND4 and identified as An. albitarsis s.s. However the results of sequencing of the samples of the Albitarsis Complex did not overlap entirely with those deposited in the GeneBank since those amplified by RFLP-ITS2 were identified as An. albitarsis s.s. and An. deaneorum while those obtained by RFLP-ND4 were identified as An. albitarsis B. Also RFLP-ITS2 of A. triannulatus s.l. contained polymorphic regions among different species. By sequencing, these samples were similar to those deposited in the GeneBank. The use of molecular markers did, in some instances help to distinguish species within cryptic complexes, however other markers need to be evaluated to elucidate further identification of the Albitarsis Complex.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-02-07T14:01:20Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_IdentificacaoMolecularEspecies.pdf: 3577435 bytes, checksum: 1ec06b9895715025d7c02ddfc1768072 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2014-02-12T13:49:08Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_IdentificacaoMolecularEspecies.pdf: 3577435 bytes, checksum: 1ec06b9895715025d7c02ddfc1768072 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-12T13:49:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_IdentificacaoMolecularEspecies.pdf: 3577435 bytes, checksum: 1ec06b9895715025d7c02ddfc1768072 (MD5) Previous issue date: 2010 / Anofelinos membros de complexos de espécies crípticas podem exibir diferenças comportamentais, de susceptibilidade a infecção malárica, e resistência a inseticidas. Assim, a identificação de espécies vetoras tem relevância epidemiológica, o que nem sempre é possível por critérios morfológicos. Métodos alternativos têm sido empregados para tal, como os que analisam regiões altamente conservadas do DNA ribossômico, variável entre as espécies, conhecidas como espaçadoras internas transcritas (ITS). Considera-se atualmente que o complexo Anopheles c seja composto por seis espécies: An. albitarsis s.s., An. oryzalimnetes, An. albitarsis F, An. marajoara, An. deaneorum, e An. janconnae. Destas, pelo menos as três últimas são incriminadas como vetores de malária na Amazônia brasileira. O objetivo deste estudo foi realizar identificação molecular de espécies do complexo An. albitarsis, por análise da seqüências do ITS2 do rDNA, com vistas a analisar sua importância na transmissão de malária nos municípios de Macapá, Amapá e Peixe-Boi, Pará, inclusive investigando pela primeira vez a ocorrência do An. albitarsis F nestas duas áreas epidemiologicamente distintas: a primeira com histórico de alto risco de transmissão de malária e a segunda não. O estudo foi realizado entre janeiro de 2009 e abril de 2010, e consistiu de capturas de anofelinos de 12 horas de duração (ecostofase) no peridomicílio. Todas as fêmeas coletadas foram morfologicamente identificadas e apenas os An. albitarsis s.l. tiveram cabeça e tórax separadas para análise da infecção natural por ELISA; ovários para análise de paridade e patas, asas e carcaça para identificação molecular. Em Macapá foram realizadas seis coletas, obtendo-se um total de 584 anofelinos, sendo 366 An. albitarsis s.l. (62,7%), 167 An. darlingi (28,6%), 33 An. triannulatus s.l (5,6%), 15 An. braziliensis (2,6%) e 3 An. nuneztovari (0,5%). Pela PCR foi possível visualizar a banda específica de An. marajoara em 320 espécimes dos An. albitarsis s.l testados. Do restante, 33 foram negativos e 13 amplificaram um fragmento de ~490 pb nos iniciadores empregados, não permitindo chegar ao diagnóstico específico. O An. marajoara apresentou características biológicas e comportamentais que ratificam sua importância epidemiológica na transmissão de malária em Macapá, tais como: ser a espécie mais prevalente, com maior proporção de fêmeas paridas (73,0%), e portanto com maiores chances de se infectarem com o plasmódio, ocorrer tanto na estação menos quanto na mais chuvosa, e apresentar atividade hematofágica durante toda a ecostofase, alem disso, foi encontrado naturalmente infectado por P. vivax e P. falciparum (taxa de infecção natural de 3,1%). Em Peixe-Boi, foram capturados 43 anofelinos: An. triannulatus s.l (20 espécimes, 46,5 %), An. albitarsis s.l. (13: 30,2 %), An. darlingi (8: 18,6%), e An. nuneztovari (2: 4,7%). Todos os An. albitarsis s.l. coletados foram identificados pela ITS2 como An. oryzalimnetes. Nenhum deles foi encontrado infectado pelos plasmódios testados, e a maioria das fêmeas era parida (84,6%). São necessários levantamentos entomológicos sistemáticos que analisem a importância deste anofelino na transmissão de malária na cidade. O An. albitarsis F não foi encontrado nas duas áreas estudadas. Nossos resultados contribuem para o entendimento da epidemiologia da malária na região Amazônica brasileira. / Members of Anopheles cryptic species complexes may exhibit behavioral differences among them, the susceptibility to malaria infection, and resistance to insecticides, thus, the specific identification has epidemiological relevance, which is not always possible by morphological criteria. Alternative methods have been employed such as those that analyze highly conserved regions of ribosomal DNA, which varies among species, known as internal transcribed spacer (ITS). Anopheles albitarsis complex is currently composed of six species: An. albitarsis s.s., An. oryzalimnetes, An. albitarsis F, An. marajoara, An. deaneorum and An. janconnae. At least the last three are incriminated as malaria parasite vectors in the Brazilian Amazon. The aim of this study was to perform molecular identification of An. albitarsis complex species, for analysis of ITS2 rDNA sequences, in order to assess their importance in malaria transmission in the cities of Macapá, Amapa and Peixe-Boi, Para, including investigating the first time the occurrence of An. Albitarsis F in two epidemiologically distinct areas: the first with a history of high risk of malaria transmission and the second not (Peixe-Boi). All-night human landing catches of mosquitoes were carried out in the peridomestic environment, from January 2009 and April 2010. The females collected were morphologically identified and only An. albitarsis s.l. was dissected: head and thorax were separated for analysis of natural infection by ELISA; ovaries for parity analysis and the carcass, legs and wings for molecular identification. In Macapá were collected 584 mosquitoes: 366 An. albitarsis s.l. (62.7%), 167 An. darlingi (28.6%), 33 An. triannulatus s.l. (5.6%), 15 An. braziliensis (2.6%) and 3 An. nuneztovari (0.5%). It was possible to visualize the specific band An. marajoara in 320 specimens of An. albitarsis s.l. tested. Of the remainder, 33 were negative and 13 amplified a fragment of ~ 490pb, not allowing to reach the specific diagnosis. The An. marajoara specimens showed biological and behavioral characteristics that confirm their epidemiological importance in malaria transmission in Macapa, such as being the most prevalent species, with a higher proportion of parous females (73.0%), and therefore with the greatest chances of infected with Plasmodium, occur in both seasons (dry and wet), presenting biting activity in all hours worked, moreover, was found infected by P.vivax and P. falciparum (natural infection rate of 3.1%). In Peixe-Boi, were captured 43 anophelines: An. triannulatus s.l. (20 specimens, 46.5%), An. albitarsis s.l. (13, 30.2%) An. darlingi (8, 18.6%), and An. nuneztovari (2, 4.7%). All An. albitarsis s.l. collected were identified by ITS2 as An. oryzalimnetes. None was found infected by Plasmodium, and the vast majority was parous females (84.6%). Systematic entomological surveys are needed to analyse the importance of An. oryzalimnetes in malaria transmission in the city. The An. albitarsis F was not found in the two areas studied. Our results contribute to our understanding of the epidemiology of malaria in the Brazilian Amazon region.