MELO, Priscila Bezerra dos Santos. Indução à embriogênese somática e identificação de marcadores ISSR em antúrio. 2016. 98 f. Dissertação (Mestrado em Fitotecnia)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Anderson Silva Pereira (anderson.pereiraaa@gmail.com) on 2017-01-09T18:32:24Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_pbsmelo.pdf: 1915586 bytes, checksum: ca8ba64498bc085612866056110e7aef (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-01-11T17:14:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_pbsmelo.pdf: 1915586 bytes, checksum: ca8ba64498bc085612866056110e7aef (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-11T17:14:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_pbsmelo.pdf: 1915586 bytes, checksum: ca8ba64498bc085612866056110e7aef (MD5) Previous issue date: 2016 / Anthurium is an important ornamental species for floriculture's agribusiness. Thus, it is very important to ensure the success of its cultivation. The use of biotechnology allows the development of effective techniques for in vitro propagation. One of these techniques is the somatic embryogenesis. However, beyond these efforts, another technique that can effectively contribute to the success of Anthurium cultivation, is the characterization of anthurium's cultivars, by means of molecular markers. Therefore, the study was divided into two experiments. Experiment 1: The objective was to establish an induction protocol for somatic embryogenesis for the anthurium's cultivars Jureia and Luau, using nodal segments as explants. It was studied the effect of the interaction among the factors cultivar, growth regulator type and concentration on oxidation (%) and formation of embryogenic calli (%). The scanning electron microscopy (SEM) was used to identify whether the structures formed from the explants showed embryogenic characteristics. The evaluations about oxidation showed that Jureia is the most sensitive cultivar, and that the medium added with NAA is more prone to oxidation. As for the formation of embryogenic calli, it was found that Luau has more embryogenic potential and it was established the following protocol for induction of somatic embryogenesis for the two studied cultivars: nodal segments must be maintained for 75 days, in the dark, in the medium ESA (Pierik 1976 modified) supplemented with 7.5 mM of NAA. Experiment 2: The objective was the selection of ISSR markers for molecular characterization of anthurium's cultivars Sublime, Luau, Jureia and Maré, using leaf samples of in vitro established plants, from indirect organogenesis, and samples of embryogenic calli. The DNA extraction was made, showing a genetic material of good quality. The PCR of the 18 ISSR markers was made and the reaction products were visualized by electrophoresis. The revealed fragments in the agarose gel were transformed into binary data [1- presence of band; 0 - absence of band], allowing the classification of the samples in terms of genetic distance in a dendrogram. It was found that all the ISSR used showed polymorphism, being effective to characterization of the anthurium's samples studied. Cultivar-specific markers were identified. It was found that Sublime is the cultivar genetically most stable and Maré the most unstable. These results provide new perspectives for the in vitro propagation, and are useful for breeding and protection of the studied anthurium's cultivars. / O antúrio é uma importante espécie ornamental para o agronegócio da floricultura. Assim, é importante garantir o sucesso de seu cultivo. O uso da biotecnologia permite o desenvolvimento de técnicas eficientes de propagação in vitro. Uma dessas técnicas é a embriogênese somática. Porém, além destes esforços, uma das técnicas que pode contribuir efetivamente para o sucesso do cultivo do antúrio é a caracterização das cultivares da espécie, por meio de marcadores moleculares. Assim, o estudo foi dividido em dois experimentos. Experimento 1: Objetivou-se estabelecer um protocolo de indução à embriogênese somática para as cultivares de antúrio Jureia e Luau, utilizando como explantes segmentos nodais. Estudou-se o efeito da interação entre os fatores cultivar, tipo e concentração do regulador de crescimento sobre a oxidação (%) e formação de calos embriogênicos (%). Utilizou-se microscopia eletrônica de varredura (MEV) para identificar se as estruturas formadas a partir dos explantes apresentavam características embriogênicas. Constatou-se que a cultivar Jureia é mais sensível e o meio adicionado de ANA mais propenso à oxidação. Quanto à formação de calos embriogênicos, constatou-se que a cultivar Luau tem maior potencial embriogênico e estabeleceu-se o seguinte protocolo de indução à embriogênese somática, para as duas cultivares estudadas: segmentos nodais devem permanecer 75 dias, no escuro, em meio ESA (Pierik 1976, modificado) suplementado com 7,5 μM de ANA. Experimento 2: Objetivou-se a seleção de marcadores ISSR para caracterização molecular das cultivares de antúrio Sublime, Luau, Jureia e Maré, a partir de amostras de folhas oriundas de plantas estabelecidas in vitro, obtidas de organogênese indireta, e de amostras de calos embriogênicos. Foi realizada a extração de DNA das amostras coletadas, revelando DNA de boa qualidade. Foi feita a PCR de18 marcadores ISSR e os produtos da reação foram visualizados por eletroforese. Os fragmentos revelados no gel de agarose foram transformados em dados binários [1– presença de banda; 0 – ausência de banda], possibilitando agrupar as amostras em termos de distância genética em um dendrograma. Constatou-se que os marcadores ISSR utilizados apresentaram polimorfismo, sendo eficientes para caracterizar as amostras de antúrio estudadas. Foram identificados marcadores cultivar-específicos. Sublime revelou-se como a cultivar geneticamente mais estável, e Maré, como a mais instável. Estes resultados proporcionam novas perspectivas para a propagação in vitro, bem como são úteis para o melhoramento genético e proteção da identidade genética das cultivares de antúrio estudadas.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2017-05-16T12:24:18Z No. of bitstreams: 1 Nathalia Bandeira Diniz.pdf: 1251377 bytes, checksum: 17e9e84beaf197df12618f59670f7ddd (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-16T12:24:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nathalia Bandeira Diniz.pdf: 1251377 bytes, checksum: 17e9e84beaf197df12618f59670f7ddd (MD5) Previous issue date: 2016-07-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The physiology and conservation of cut flowers, can be changed by the application of growth regulators such as gibberellins and polyamines. It is evident that both alone increased the shelf life of flowers, demonstrating the variability in responses to growth regulators flowers. However, studies with the combination of gibberellic acid (GA3) and polyamines (PAs) in tropical flowers are scarce. Thus the aim of this study was to evaluate the effect of gibberellic acid and Spermine (SPM) in physiology and conservation of anthurium flowers cv. Arizona. The rods Anthurium were harvested, transported, and selected immerged bases as well as their espádices sprayed. The pulsing or spray solution containing 144 μM GA3, Spm 2 μM and 144 μM GA3 Spm + 2 μM. The control corresponded to immersion or spraying in distilled water. After 24 hours, the solutions were replaced with distilled water, changed every 3 days. Samples of the stems and the spadix were collected every three days, and subjected to analysis: visual quality; fresh pasta; electrolyte leakage; total soluble protein; soluble carbohydrates; polyamines (Putescina, Spermine, Spermidine, Cadaverine Serotonin, Histamine, Tyramine and Dopamine); total phenolic compounds; enzymes were extracted and quantified superoxide dismutase, polyphenol oxidase and peroxidase. The experimental design was completely randomized in a factorial design, consisting of two application methods (pulsing and spraying) four concentrations of Gibberellic Acid and Spermine. The graphics were generated using the media and the deviations with software aid Sigma Plot version 12. The significant increase conservation is associated with lower physical and chemical changes, represented by fresh mass, electrolyte leakage, soluble phenols, higher levels Putrescine, Spermine, Spermidine and Cadaverine and serotonin, stability and total soluble proteins, and smaller increase in the activities of PPO, POD and SOD. Thus, spraying with GA3 and SPM combination at concentrations 144 μM and 2μM respectively folded storage time of 6 to 12 days. While pulsing 6 to 9 days of anthurium flowers cv. Arizona demonstrating that the application of direct plant growth regulators in bloom was more effective relative to solution in which the bases were submerged in the storage of flowers, since the spray have less barriers as well as smaller distance to the flower cells, may the regulators tested hit the target more efficiently. / A fisiologia e conservação de flores de corte, podem ser alteradas pela aplicação de fitorreguladores, como giberélinas e poliaminas. É evidenciado que ambos isoladamente aumentaram a vida útil de flores, demonstrando a variabilidade de respostas de flores aos fitorreguladores. Porém, estudos com a combinação de Ácido giberélico (GA3) e Poliaminas (PAs) em flores tropicais são escassos. Com isso o objetivo deste trabalho foi avaliar a ação de Ácido Giberélico e Espermina (SPM) na fisiologia e conservação de flores de Antúrio cv. Arizona. As hastes de Antúrio foram colhidas, transportadas, selecionadas e suas bases imersas, assim como, suas espádices pulverizadas. A solução de pulsing ou pulverização continham GA3 a 144 μM, Spm a 2 μM e GA3 a 144 μM + Spm a 2 μM. O controle correspondeu a imersão ou pulverização em água destilada. Após 24 horas, as soluções foram substituídas por água destilada e trocadas a cada 3 dias. Amostras das hastes e espádice foram coletadas a cada três dias. O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado em esquema fatorial, composto por dois métodos de aplicação (pulsing e pulverização) três concentrações de Ácido Giberélico e Espermina (GA3 a 144 μM, Spm a 2 μM e GA3 a 144 μM + Spm a 2 μM) mais o controle, com cinco dias de analise (0, 3, 6, 9 e 12). Os gráficos foram gerados usando-se as medias e os desvios com auxílio do software Sigma Plot versão 12. O aumento significativo da conservação está associado a menores alterações físico-químicas, representada pela massa fresca, extravasamento de eletrólitos, fenóis solúveis totais, maior níveis de Putrescina, Espermina, Espermidina, Cadaverina e Serotonina, estabilidade de proteínas solúveis totais, e menores incremento nas atividades das enzimas PPO, POD e SOD. Assim, a pulverização com a combinação GA3 e SPM nas concentrações 144 μM e 2μM respectivamente, dobrou o tempo de conservação de 6 para 12 dias. Enquanto pulsing de 6 para 9 dias das flores de Antúrio cv. Arizona, demonstrando que a aplicação dos fitorreguladores direto na flor foi mais eficaz em relação a solução, na qual as bases estavam submersas, na conservação das flores, uma vez que a pulverização possuem menos barreiras assim como menor, distância para as células florais, podendo os fitorreguladores testados atingir o alvo de forma mais eficiente.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-04-28T10:57:56Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 8375227 bytes, checksum: 55dfde271f45ab327a73b5c840bc894d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-28T10:57:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 8375227 bytes, checksum: 55dfde271f45ab327a73b5c840bc894d (MD5) Previous issue date: 2014-02-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O uso da biotecnologia, especialmente com a utilização de técnicas da cultura de tecidos, proporciona uma forma alternativa de propagação das plantas, além de ser importante ferramenta para o melhoramento e conservação dos recursos genéticos. As espécies desse estudo, bastão-do-imperador [Etlingera elatior cv. Porcelana (Zingiberaceae)] e antúrio [Anthurium andraeanum cv. Eidibel (Araceae)] têm elevada importância econômica na floricultura tropical mundial, sendo fundamentais o domínio e o aprimoramento de técnicas biotecnológicas aplicadas à propagação in vitro. Nesse tipo de propagação, de modo especial aplicada às ornamentais, prima-se pela otimização dos sistemas de propagação em larga escala. Na propagação in vitro convencional, o sistema de vedação dos frascos restringe, entre outros fatores, as trocas gasosas, além de dificultar a absorção de água e nutrientes, aumentando as perdas do material vegetal durante a aclimatização. No presente trabalho, para bastão-do-imperador, realizou-se a propagação fotoautotrófica associada ao enriquecimento da atmosfera dos frascos com CO2, com o intuito de rustificar as vitroplantas ainda em condições in vitro, com grandes benefícios à sobrevivência, com o aumento da tolerância aos estresses impostos às plantas na fase de aclimatização, aproximando-as daquelas produzidas em condições de campo. Para o antúrio, o desenvolvimento de técnicas eficientes de propagação in vitro proporcionou perspectivas novas e promissoras para o melhoramento do antúrio, capazes de ampliar a produção comercial e o abastecimento do mercado brasileiro e mundial. Dentre essas técnicas destaca-se a embriogênese somática, pois pode ser aplicada com sucesso na produção de plantas em larga escala, além de ser um modelo para estudos anatômicos, estruturais e moleculares envolvidos na aquisição de competência embriogênica e de grupos de genes especificamente expressos durante a embriogênese somática. O presente trabalho contribuiu para a geração de conhecimentos a cerca da propagação in vitro das espécies a partir das técnicas de propagação fotoautotrófica, em bastão-do-imperador, caracterizando as respostas morfofisiológicas das plantas submetidas a condições de crescimento heterotrófico, fotomixotrófico e fotoautotrófico; e da propagação in vitro do antúrio via embriogênse somática, abordando alterações estruturais e o acúmulo de reservas envolvidas durante a ontogênese dos calos embriogênicos, além de caracterizar e analisar a expressão do gene SERK nessa espécie. / The use of biotechnology, particularly with the use of tissue culture techniques, provides an alternative way of plant propagation, as well as being an important tool for breeding and genetic resources conservation. The species of this study, torch ginger [Etlingera elatior cv. Porcelana (Zingiberaceae)] and anthurium [Anthurium andraeanum cv. Eidibel (Araceae)] present a high economic importance in the global tropical floriculture, being fundamental the domain and enhancement of biotechnological techniques applied to in vitro propagation. This kind of propagation, especially applied to ornamentals, stands out for the optimization of large-scale propagation. In conventional in vitro propagation, the flasks sealing system restricts, among other things, gas exchange, and hinders water and nutrients absorption, increasing losses in the plant material during acclimatization. In the present study, with torch ginger, the photoautotrophic propagation was performed associated with CO2- enriched atmosphere flasks, with the aim of hardening the plantlets even in vitro, with great benefits to survival and increase tolerance to stresses imposed on plants during the acclimatization phase, approaching those produced in the field. To anthurium, the development of efficient in vitro propagation techniques provided new and promising perspectives for the breeding of this specie, able to expand commercial production and supply Brazilian and worldwide market. Among these techniques highlights the somatic embryogenesis, which can be successfully applied in plant production system for large- scale, besides being an ideal system for anatomical, structural and molecular studies involved in the acquisition of embryogenic competence and clusters of genes specifically expressed during somatic embryogenesis. This work contributed to the generation of knowledge about in vitro propagation of the species from photoautotrophic propagation techniques, in torch ginger, characterizing the morphophysiological responses of plants submitted to heterotrophic, photomixotrophic and photoautotrophic growth conditions; and in vitro propagation of anthurium via somatic embryogenesis, addressing structural changes and the accumulation of reserves involved during ontogeny of embryogenic callus, besides characterizing and analyze the expression of SERK gene in this species.