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Alterações moleculares resultantes da ação de oxidantes sobre o tocoferol, o calciferol e o colesterol : suas implicações na reatividade histoquimica adquirida por essas substancias

Alberto-Rincon, Maria do Carmo, 1953- 14 June 1985 (has links)
Orientador : Sineli Rita Silveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T01:31:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alberto-Rincon_MariadoCarmo_M.pdf: 4271206 bytes, checksum: ed39f57ac859239c67f72a24323acfa9 (MD5) Previous issue date: 1985 / Resumo: Os produtos resultantes da oxidação seletiva do acetato de DL alfa-tocoferol, do calciferol e do colesterol, por oxidantes diferentes, que constituíram a base para a padronização de três técnicas dotadas de especificidade histoquímica e que permitem a demonstração topoquímica dessas substâncias, foram estudados no presente. A análise dos produtos de oxidação, efetuada com base em resultados fornecidos pela espectrofotometria ultravioleta e infravermelha, pela espectometria de massa, permitiu estabelecer as seguintes conclusões: 1. A comparação entre os produtos dotados da mesma reatividade histoquímica, mas provenientes da oxidação seletiva do acetato de DL alfa-tocoferol pelo ácido perfórmico, do calciferol pelo permanganato de potássio em meio alcalino e do colesterol pelo ácido peracético mostra que substâncias quimicamente diversas, dotadas de grupos reativos diferentes, são responsáveis por essa reatividade. Essa reatividade, portanto, embora seja semelhante, é exibida por grupos reativos diferentes. 2. Os grupos reativos responsáveis pelas propriedades histoquímicas adquiridas pela oxidação seletiva de cada uma das substâncias usadas foram identificadas, sendo os seguintes: 1 ? grupo epóxido e grupos cetônicos ligados ao anel cíclico, encontrados no alfa-tocoferol oxidado pelo ácido perfórmico; 2 grupo carbonila e grupos hidroxilas presentes no calciferol oxidado pelo permanganato de potássio em meio alcalino; 3 grupos redutores oriundos do grupo triol, presente no produto de oxidação do colesterol pelo ácido peracético / Abstract: Not informed. / Mestrado / Mestre em Ciências Biológicas
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Ação da indometacina sobre o conteudo lipidico das celulas deciduais de camundongos : estudo histoquimico e morfometrico

Mello Neto, Julio de 23 July 2018 (has links)
Orientador: Maria do Carmo Alberto-Rincon / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-23T20:38:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MelloNeto_Juliode_M.pdf: 6097352 bytes, checksum: b14d67245f444831f3c75bf67798e5ea (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: A finalidade deste projeto foi analisar o comprometimento de gotículas lipídicas e dos fosfolípides como precursores de prostaglandina nas células deciduais. Para tanto, 40~1 de 25mg de indometacina solubilizado em óleo de gergelim foram injetados intraperitonealmente em fêmeas no quinto dia de gestação (DDG). Animais-controle receberam o mesmo volume de óleo de gergelim. Os animais foram sacrificados no sétimo DDG. As amostras foram subdivididas e parte delas foi fixada em solução de formalina contendo 3% de HgCI2 ou em formalina contendo CaCI2. Cortes de congelação foram processados para reação histoquímica para detecção de fosfolípides contendo colina (FCC) ou para Sudan Black. Outra parte dos sítios de implantação embrionária, foi fixada com glutaraldeído a 2% em tampão fosfato salina (PBS) O,lM, pH 7,4 , pós-fixado em tetróxido de ósmio a 1% sob tratamento em microondas e processados para inclusão em resmaepoxl. As análises morfométricas realizadas em sítios de implantação embrionária fixados em Bouin e corados com HE mostraram que o tamanho dos úteros tratados com indometacina é menor do que os não tratados. Ao microscópio óptico a reação decidual foi menos proeminente no endométrio dos animaIS tratados. A histoquímica para FCC mostrou forte reação nas células deciduais e menor intensidade nas células pré-deciduais. Resultado semelhante foi observado com a reação para Sudan Black. Quando comparadas as intensidades de reação dos animais não-tratados e tratados, estes mostraram reação mais intensa para FCC e para Sudan Black. As análises ultra-estruturais mostraram maior quantidade de "gotículas lipídicas no citoplasma de células deciduais dos animais tratados com indometacina do' que nos controles. Estes resultados sugerem efetiva ação da indometacina na reação decidual e alteração do metabolismo lipídico. O grande acúmulo de lípides nas células deciduais sugerem que o conteúdo lipídico poderia estar envolvido na biossíntese de prostaglandinas / Abstract: ln the aim to analyze the commitment of lipid droplets and their phopholipds contents in the decidual cells as prostaglandin precursors, it was i,!oculated intraperitoneal!>" 40lAL of 25mg indomethacin, a powerful inhibitor of prostaglandin-synthase, solubi!>,zed in. sesame oil, in the female mice on the fifth days of pregnancy. Controls animais received the same volume of sesame oil. Ali animais were sacrificed on the 7° dop. One group of embryo implantation sites. was collected and fixed in 3% HgCl2-formalin solution. Frozen sections (14lAm thick) were processed for phospholipids containing choline and Sudan Black histochemistry . Another group of lndomethacin treated and untreated animais were fixed with glutaraldehyde under - microwave treatment, postfixed, in OS04 (1%) and processed for usual epoxy resin embedding. The morphometric analysis showed the volume of lndomethacin treated uterus smaller than untreated one. At microscopic levei the decidual reaction was less proeminent in the endometrium of treated animal. TheP hosp holi pid-conta i n i n g-chol i ne and Sudan Black histochemistry showed strong reaction in fully differentiated decidual cel / Mestrado / Morfologia / Mestre em Ciências Biológicas
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Estudo histoquimico do musculo diafragma do coelho

Patrianova, Marcio Espindola 09 October 1999 (has links)
Orientador: Luiz Antonio de Lima Resende / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-28T16:24:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Patrianova_MarcioEspindola_M.pdf: 6728226 bytes, checksum: 481f31bf4f081e61bd5dbfc12d1cd72b (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: A histoquímica baseia-se em reações bem estabelecidas em química orgânica ou inorgânica, usadas para dar um produto visível à microscopia óptica. Este trabalho teve por objetivo estudo normativo do músculo diafragma de coelhas da raça NorfoIk inglesa. A porção costal do músculo diafragma foi estudada pela histoquímica, em diferentes reações, incluindo-se a reação do NADH-TR, com o objetivo de se determinar a distribuição histoquímica de fibras do tipo I, IIA e IIB. Dentre 1037 fibras estudadas, o porcentual de distribuição histoquímica observado foi de fibras tipo 1,57,3 %; tipo IIA, 19,2 %; tipo IIB, 23,4 %. Conforme o esperado, o músculo diafragma da coelha, por sua atividade contínua na respiração do animal, apresenta-se com grande proporção de fibras do tipo I, resistentes à fadiga / Abstract: The histochemistry came from well established organic and inorganic chemical reactions, used for observation of visible products on optic microscopie. This work had as objective the assestment of the normative histochemical data in the costal portion of the diaphragm muscle from Norfolk English rabbits. The muscle specimens were processed by different histochemial reactions, and the normal distribution of I, IIA and IIB muscle fibers were established from analysis of the NADH-TR reaction. From 1,037 muscle fibres counted, we found 57,3 % of the type I, 19,2 % of the type IIA and 23,4 % of the type IIB. These results are expected, because the diaphragm muscle has a continuous activity during all the life of the animals, and so, need a high proportion of the oxidative type I fibres, resistent to the fadigue / Mestrado / Biologia e Patologia Buco-Dental / Mestre em Odontologia
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Morfologia e histoquimica do epidismo do gerbilio, Meriones unguiculatus

Domeniconi, Raquel Fantin 04 August 2018 (has links)
Orientador: Antonio Antonio Orsi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T01:36:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Domeniconi_RaquelFantin_M.pdf: 9306658 bytes, checksum: d943b0e26a8450fb80497bdec52d7771 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: No epitélio epididimário do gerbilo (Meriones unguiculatus) foram caracterizadas quatro regiões distintas: segmento inicial (SI), cabeça, corpo e cauda, os quais são formados pelas células principais, basais, apicais, balo e claras em todas estas regiões estudadas, exceto no corpo epididimário. Células claras são encontradas no SI do epidídimo do gerbilo, porém não são observadas na mesma região epididimária do rato. O epitélio epididimário mostrou-se alto desde o SI até o corpo epididimário, sem diferenças significativas de altura epitelial entre os três segmentos. O epitélio epididimário mostrou-se mais baixo na cauda como conseqüência do grande diâmetro luminal desta região de estocagem de espermatozóides. Marcante basofilia núc1eo-citoplasmática das células P do corpo epididimário, delgado e retilineo, foi observado nesta espécie. As en7.ima., estudadas em geral mostraram forte expressividade nas regiões mais proximais do epidídimo. As reatividades da fosfatase alcalina e da ATPase foram fortes também na cauda do ducto epididimário. A SDH revelou baixa atividade em todas as regiões do epitélio, exceto no lúmen epididimário. As enzimas foram correlacionadas com papéis histofisiológicos, como endocitose, secreção, absorção e transporte ativo caracterizados ultraestruturalmente. Células claras são encontradas predominantemente, na cauda do epidídimo, possuindo um rico aparelho endocitótico. Células principais também foram relacionadas a processos endocitóticos bem como com secreção protéica. Células colunares escuras do corpo epididimário mostraram um "sistema endocitoplasmático" de pequenos canais formados pela coalescência de vesículas, aparentemente relacionadas com a absorção de água e endocitose de fase fluida / Abstract: Epididymidis epithelium of the gerbil (Meriones unguiculatus) was focused in four distinct regions e.g., initial segment, caput, corpus and cauda of the epididymis in which were characterized five cell types: principal, apical, basal, halo and clear cells. These cells were not will characterised on1y in the thin and straight epididymal corpus that showed columnar (principal) cells highly basophilic. Clear cells were viewed mainly in the initial segment and cauda epididymidis although they were not observed in rat's epididymidis initial segmento The epididymal epithelium since the caput until the corpus was high and showed low weight in the cauda epididymis. The lower epithelium at the caudal levei probably compensate the great luminal diameter noted in this region. Concerning at the oxidative enzymes studied, such as the aJkaline and acid phosphatases and ATPase, they showed intense reactivity in the proximal segments of the duct. A1kaline phosphatase and ATPase also revealed high activity in the cauda epididymidis, but SDH showed low reactivity throughout epididymal epithelium, in all the regions, except inside the tubular lumen at spermatozoa storage leveI. Enzymatic activities were correlated to functions of endocytosis, secretion, absorption and active transport of substances, characterised by ultrastructural observations and interpretations. Clear cells were the main cells related to phase fluid endocytosis a function also related to principal cells. Principal cells apparently were predominant1y reported to proteic secretion. Columnar dark cells of the corpus seemed to be related to active and passive absorption of water / Mestrado / Anatomia / Mestre em Biologia
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Laser terapia combinada a esponja de colágeno em um modelo de reparo ósseo

Oliveira, Lana Sarita De Souza 31 August 2015 (has links)
Submitted by Automação e Estatística (sst@bczm.ufrn.br) on 2018-08-03T12:06:26Z No. of bitstreams: 1 LanaSaritaDeSouzaOliveira_DISSERT.pdf: 2098247 bytes, checksum: 61e3f18e97a54dfa4dae474caf5cc5f6 (MD5) / Approved for entry into archive by clediane guedes (clediane@bczm.ufrn.br) on 2018-08-03T12:19:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 LanaSaritaDeSouzaOliveira_DISSERT.pdf: 2098247 bytes, checksum: 61e3f18e97a54dfa4dae474caf5cc5f6 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-03T12:19:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LanaSaritaDeSouzaOliveira_DISSERT.pdf: 2098247 bytes, checksum: 61e3f18e97a54dfa4dae474caf5cc5f6 (MD5) Previous issue date: 2015-08-31 / O presente estudo tem por objetivo avaliar o efeito do laser terapia combinados com arcabouço de esponja de colágeno na cicatrização de um defeito crítico na calvária de ratos. Metodologia: Foram utilizados 45 ratos Wistar, divididos em 5 grupos. O grupo G0: foi o grupo controle positivo (com defeito e sem tratamento); O grupo G1: foi o grupo tratado com esponja de colágeno; O grupo G2: foi o grupo tratado apenas com laser; O grupo G3: foi o grupo tratado com esponja de colágeno e laser; O grupo C é o grupo controle negativo: foi sem nenhum defeito ósseo e sem nenhum tratamento. O laser foi utilizado na dosagem de 120J/cm2 (potência de 50mW, tempo de exposição de 10 s), comprimento de onda de 780nm, aplicações realizadas em 4 pontos, após o procedimento e a cada 48hrs, duas vezes. Foram feitas avaliações através de raio x, lâminas histológicas e imunohistoquímica. Resultados: Os resultados histológicos e imunohistoquímicos apresentaram-se positivos para os grupos de 30 dias, com diferença significativa entre o grupo controle positivo (G0) e o grupo Colágeno mais Laser (G3). Conclusão: Observamos que a terapia de laser de baixa intensidade combinada ao arcabouço de colágeno apresentou resultados positivos para regeneração óssea no período de 30 dias. / Aim: The aim was to evaluate the effect of laser therapy combined with collagen sponge scaffold in the healing of a cranial critical defect in rats. Methods: Experimental study, prospective, in vivo. Forty five Wistar rats were divided into 5 groups. The G0 group was the positive control group ( with defective and no treatment); The group G1  with defective was treated with collagen sponge; the group G2  with defective was treated only with laser ; The G3 group with defective was the group treated with collagen and laser sponge; Group C  was the negative control group ( no bone defect and without  treatment). The laser was used at a dosage of 120J / cm2 (50 mW power, exposure time 10 sec), wavelength 780nm, applications performed on 4 points after the procedure, and every 48 h twice. The defect of 5mm was held in the skull, and after 21 and 30 days the evaluations were made by x-ray, histological slides and immunohistochemistry (RANK, OPG, TGF-β and FGF-2).  Results:  Through the radiographic findings the group had more radiopaque area was the G3 30 days. For histological analyzes the G3 30 days had more new bone formation, with less inflammatory infiltrate and large amount of osteoid. For immunohistochemical analysis were used only G3 blades 30 days and G0 30 days because there was a significant difference between these groups, and there was a higher markup OPG, indicating the reconstruction of bone tissue.  Conclusion: It was observed that the combined low-level laser therapy to the collagen scaffold showed positive results for bone regeneration within 30 days.
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Forma mucosa da Leishmaniose Tegumentar Americana : estudo histopatológico e imuno-histoquímico de casos do Hospital Universitário de Brasília

Peixoto, Marco Aurélio da Silva 05 February 2009 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2009. / Submitted by Thaíza da Silva Santos (thaiza28@hotmail.com) on 2010-03-07T17:17:10Z No. of bitstreams: 1 2009_MarcoAurelioSilvaPeixoto.pdf: 2637387 bytes, checksum: 1a76f8f7944669c1b032e4ab59d38fed (MD5) / Approved for entry into archive by Carolina Campos(carolinacamposmaia@gmail.com) on 2010-03-11T13:37:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_MarcoAurelioSilvaPeixoto.pdf: 2637387 bytes, checksum: 1a76f8f7944669c1b032e4ab59d38fed (MD5) / Made available in DSpace on 2010-03-11T13:37:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_MarcoAurelioSilvaPeixoto.pdf: 2637387 bytes, checksum: 1a76f8f7944669c1b032e4ab59d38fed (MD5) Previous issue date: 2009-02-05 / A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma doença parasitária endêmica, principalmente na região Centro-Oeste. A Leishmania é um parasita que através de seus antígenos secretados e não secretados desencadeiam, respectivamente, uma resposta imune predominantemente celular (inata e adquirida) e em menor proporção humoral. Na resposta inata participam o sistema complemento, polimorfonucleares, macrófagos e células natural killer numa resposta inicial. Desta resposta inicial, há produção de citocinas (IL-12 e INF-γ e TNF-α) que ativam linfócitos T CD4+ e T CD8+ para resposta imune celular adquirida. A IL-12 diferencia os linfócitos T CD4 numa resposta Th1, com produção de INF-γ, ativação de macrófagos e resolução da doença. Enquanto, a IL-4 tem efeito reverso direcionando para uma resposta Th2 com diminuição da ativação de macrófagos, prevenindo o dano tecidual e permitindo a persistência do parasita. Foram descritos casos de pacientes com a forma mucosa da LTA do Hospital Universitário de Brasília, analisando dados epidemiológicos, clínico-laboratoriais e correlacionando com os aspectos histopatológicos e imuno-histoquímico (CD45ro, CD4, CD8, CD20, CD15, CD68 e Bcl-2). Perfil mais freqüente dos pacientes: sexo masculino, com média de idade de 50 anos, da região Centro-Oeste, com queixa de obstrução nasal e lesão de mucosa nasal infiltrada com ulceração e perfuração de septo ao exame otorrinolaringológico. A maioria com exames laboratoriais (IFA, inoculação em hamster, cultura, esfregaço e intradermorreação de Montenegro) compatíveis com a doença, sendo que em 44,44% dos casos foi possível a identificação da Leishmania por algum método auxiliar. Na histopatologia, de maneira geral, encontrou-se um infiltrado inflamatório linfohistioplasmocitário, às vezes acompanhado de uma reação granulomatosa com ou sem necrose. As classes histopatológicas encontradas foram: REC (reação exsudativa celular), REN (reação exsudativa necrótica), RENG (reação exsudativa necrótico-granulomatosa) e REG (reação exsudativa granulomatosa), sendo a primeira a mais freqüente (66,67%). Essas classes são estatisticamente significantes (p<0,05) diferentes quando comparadas entre si em relação à quantidade de células positivas na imuno-histoquímica, exceto entre as classes REG e REN (p>0,05). Esse estudo atestou a aplicabilidade e a praticidade do programa UnBVision na análise quantitativa das células nas reações imuno-histoquímicas. Na imuno-histoquímica, os linfócitos T predominaram em relação aos linfócitos B, comprovando que a doença tem reação imune mais celular do que humoral, sendo que dentre os linfócitos T, prevaleceu os linfócitos T CD4+ em relação aos linfócitos T CD8+, exceto em único exemplo de caso REG. Houve expressão considerável de Bcl- 2 no infiltrado inflamatório. Grupos com contato prévio com o antimonial pentavalente e com presença de granulomas ou de Leishmania ao método histopatológico não tiveram significância estatística (p>0,05) para explicar a diferença de número de células positivas para todos os marcadores aplicados no estudo. Em estudos complementares, o uso da imuno-histoquímica para identificar as citocinas e marcadores pró e antiapoptóticos podem contribuir para melhores esclarecimentos da imunopatologia da doença. __________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The American Integumentary Leishmaniasis (AIL) is a parasitic endemic disease, mainly in the Center-West region. Leishmania is a parasite that through its secreted and not secreted antigens trigger, respectively, a predominantly cellular immune response (innate and acquired) and to a lesser extent humoral. In the innate response, complement system, neutrophils, macrophages and natural killer cells work in an initial response. In this initial response, there is production of cytokines (IL-12, INF-γ and TNF-α) that activate T CD4+ and T CD8+ cells for acquired cellular immune response. The IL-12 action differentiates CD4 T cell to Th1 response and production of INF-γ, activation of macrophages and resolution of the disease. While the IL-4 has reverse effect directing to Th2 response with decreased activation of macrophages, this reaction prevents tissue damage and allows the persistence of the parasite. In this study, we have described patients with the mucosal form of AIL, they were treated in the University Hospital of Brasilia, analyzing epidemiological, clinical and laboratory data and correlating with the histopathologic features and the following immunohistochemical antibodies: CD45RO, CD4, CD8, CD20, CD15, CD68 and Bcl-2. Most common profile of patients: male, mean age 50 years, from Center-West region, with complaint of nasal obstruction and injury of nasal mucosa infiltrated with septum ulceration and perforation detected in the otorhinolaryngologic examination. Most of them with laboratory tests (indirect immunofluorescence, inoculation in hamster, smear, culture and Montenegro Skin Test) compatible with the disease, and in 44.44% of the cases it was possible the identification of Leishmania by some auxiliary method. In histopathology, in general, there was an inflammatory infiltrate lynphohistioplasmocitary sometimes accompanied by a granulomatous reaction with or without necrosis. The histopathological grades found were: ECR (exudative cellular reaction), ENR (exudative necrotic reaction), NEGR (necrotic-exudative granulomatous reaction) and EGR (exudative granulomatous reaction), the first one was the most frequent (66.67%) These classes are statistically significant (p <0.05) different when compared to each other with the amount of positive cells in immunohistochemistry, except between ENR and EGR classes (p> 0.05). This study attested the applicability and practicality of the program UnBVision in quantitative analysis of cells in immunohistochemical reactions. In immunohistochemistry, the T cells were predominant on B cells, confirming that the disease as more cellular immune response than humoral, and in T cells, prevailed the CD4+ T on CD8+ T cells, except in only one instance case EGR. There was considerable expression of Bcl-2 in inflammatory infiltrate. In groups with previous contact with pentavalent antimony and presence of granulomas or Leishmania the histopathologic method were not statistically significant (p> 0.05) to explain the difference in the number of positive cells for all markers used in the study. In further studies, the use of immunohistochemistry to identify the cytokines and markers pro and antiapoptosis can contribute to better explanations of the immunopathology of disease.
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Expressão de marcadores de poptose e de Foxp3 nas diferentes formas clínicas da Leishmaniose Tegumentar Americana

Carneiro, Fabiana Pirani January 2009 (has links)
Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2009. / Submitted by Allan Wanick Motta (allan_wanick@hotmail.com) on 2010-03-19T18:35:46Z No. of bitstreams: 1 2009_FabianaPiraniCarneiro.pdf: 2841587 bytes, checksum: f2b36b2de50c8e23abfe95910cd4e445 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-05-19T05:11:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_FabianaPiraniCarneiro.pdf: 2841587 bytes, checksum: f2b36b2de50c8e23abfe95910cd4e445 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-19T05:11:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_FabianaPiraniCarneiro.pdf: 2841587 bytes, checksum: f2b36b2de50c8e23abfe95910cd4e445 (MD5) Previous issue date: 2009 / Considerando o papel importante da apoptose e da célula T reguladora (Treg) na modulação da resposta imune, o objetivo deste estudo foi avaliar a expressão de proteínas envolvidas na apoptose e a expressão do fator de transcrição Foxp3 (marcador da célula Treg) em amostras de biópsia das diferentes formas clínicas da LTA (leishmaniose tegumentar americana): leishmaniose cutânea localizada (LCL), leishmaniose disseminada (LD), leishmaniose recidiva cútis (LRC), leishmaniose cutâneo-mucosa (LCM) e a leishmaniose cutânea difusa (LCD). Essa expressão foi correlacionada com dados clínico-laboratoriais, alterações histológicas e tipos celulares constituintes do infiltrado inflamatório. Foi avaliada a expressão imunohistoquímica de marcadores para linfócito T (CD45RO, CD4 e CD8), linfócito B (CD20), neutrófilo (CD15), macrófago (CD68), célula de Langerhans (CD1a), dos marcadores da apoptose (Bcl-2, Bak, Bcl-X, FasL, caspase-3 ativa) e do marcador para célula T reguladora (Foxp3) em 95 amostras de biópsias que foram distribuídas de acordo com as formas clínicas apresentadas pelos pacientes: LCL (n=68), LD (n=3), LRC (n=1), LCM (n=16) e LCD (n=7). Células apoptóticas (positivas para caspase-3 ativa) foram identificadas em apenas 49.33% (37/75) das amostras avaliadas. A maior expressão de caspase-3 ativa foi observada na LCL e houve uma correlação positiva entre a expressão de caspase-3 ativa e a expressão de FasL (r=0,49; p=0,0009; n=43) nesta forma clínica. Estes dados sugerem que a via Fas/FasL seja mediadora da apoptose na LTA e importante na evolução clínica das lesões, já que a LCL é a forma clínica caracterizada pela resolução espontânea das lesões. Houve um desequilíbrio na expressão de membros pró e anti-apoptóticos da família Bcl-2 em macrófagos e granulomas epitelioides, que expressaram Bak, mas não Bcl-2 e Bcl-X. Nas formas amastigotas, a expressão de Bcl-X sugere a possível existência de uma proteína, semelhante à Bcl-X encontrada em organismos multicelulares, mas esse achado deve ser investigado por outros métodos. Células Foxp3+ foram observadas apenas em 39.5% (32/81) das amostras avaliadas. A LCD, apesar de apresentar um menor número de células CD4+, mostrou um número significativamente maior de células Foxp3+ quando comparada com a LCL (p<0,03) e estes resultados podem indicar que o maior número de células Treg na LCD possa estar associado com a hiporresponsividade observada nessa forma clínica. Além disso, a correlação positiva (r=0,6185, p=0,0001, n=64) entre a expressão de Foxp3 e caspase-3 ativa observada na LCL e LCM, sugere que a apoptose possa ser um possível mecanismo de ação das células Treg nestas formas clínicas. _____________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Considering the importance of apoptosis and regulatory T cell (Treg) in modulation of the immune response, our aim was to evaluate the expression of apoptosis-related proteins and Foxp3 (marker of regulatory T cell) in lesions of the different clinical forms of ATL (american tegumentary leishmaniasis): localized cutaneous leishmaniasis (LCL), disseminated leishmaniasis (DL), leishmaniasis recidiva cutis (LRC), mucocutaneous leishmaniasis (MCL) and diffuse cutaneous leishmaniasis (DCL). To better characterize this expression, we also performed an analysis of histopathological findings and an identification of cell types found in inflammatory infiltrate. We analyzed, by immunohistochemistry, the expression of markers of cell subtypes (CD45RO, CD4, CD8, CD20, CD68, CD15, CD1a), markers of apoptosis (Bcl-2, Bak, Bcl-X, active caspase-3 and FasL) and presence of Foxp3+ cells in 95 biopsy samples that were divided according to the different clinical presentations of ATL: LCL (n=68), MCL (n=16), DCL (n=7), DL (n=3), LRC (n=1). Apoptotic cells (active caspase-3+) were observed in 49.33% (37/75) of the samples and the number of positive cells was low in all clinical forms. Apoptotic (active caspase 3+) cells were more frequent in LCL and a significant positive correlation between the expression of active caspase-3 and FasL was observed in this clinical form. As LCL is the clinical presentation characterized by self-healing evolution, our data suggest the Fas/FasL pathway may be important in clinical evolution of the lesions in ATL. An unbalance in expression of pro-apoptotic and anti-apoptotic members of the Bcl-2 family was observed in vacuolated macrophages and granuloma that expressed Bak but not Bcl-X and Bcl-2. The expression of Bcl-X in amastigote forms suggests a possible existence of counterparts or homologues of the Bcl-X observed in multicellular organisms, but this finding must be investigated by other methods. Foxp3+ cells were observed in 39.5% (32/81) of the samples and the number of positive cells was low in all the clinical forms. DCL (diffuse cutaneous leishmaniasis), even presenting a significantly lower number of CD4+ T cells, showed a higher expression of Foxp3 when compared with LCL and this data suggests that increased number of Treg cells may be associated to the hyporesponsiveness observed in DCL. In LCL and MCL, the number of Foxp3+ cells correlated positively with the number of apoptotic cells (active caspase 3+ cells) indicating that the apoptosis may be a possible mechanism of action of Foxp3+ regulatory T cell in these clinical forms.
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Produção e purificação parcial de IgY anti-lectina de sementes de Canavalia brasiliensis (ConBr) (Leguminosae) em galinhas poedeiras / Production and partial purification of IgY anti- lectin of Canavalia brasiliensis seeds (ConBr) (Fabaceae) in laying hens

Correia Neto, Cornevile January 2015 (has links)
CORREIA NETO, Cornevile. Produção e purificação parcial de IgY anti-lectina de sementes de Canavalia brasiliensis (ConBr) (Leguminosae) em galinhas poedeiras. 2015. 72 f. Dissertação (mestrado em biotecnologia de recursos naturais)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2015. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-03-31T18:35:56Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_ccorreianeto.pdf: 1670684 bytes, checksum: 825c0b40271bc72b068773e82944d3c8 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-05-18T20:14:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_ccorreianeto.pdf: 1670684 bytes, checksum: 825c0b40271bc72b068773e82944d3c8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-18T20:14:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_ccorreianeto.pdf: 1670684 bytes, checksum: 825c0b40271bc72b068773e82944d3c8 (MD5) Previous issue date: 2015 / Lectins are a group of proteins present in various living organisms, particularly in plants and especially in Leguminosae seeds. Among this family, a species that stands out for having large amount of lectin in the seed is the Canavalia brasiliensis. One approach for the investigation of lectins on biological systems is the detection there of by techniques involving antibody. Such techniques may include from classical immunochemical assays (immunodiffusion, immunoelectrophoresis and rocketimunoeletroforese) to ELISA experiments and advanced microscopy techniques. In this sense, antibodies become biotechnological tools invaluable since they are capable of specifically recognizing epitopes of the target molecules. Immunoglobulins (Igs) are proteins present in high concentration in the blood plasma of mammals. They are vectors of humoral immunity, with the primary function to join the foreign antigens to the individual so as to neutralize them. In the case of poultry the main immunoglobulin class (IgYs) can be found not only in blood, but also in egg yolk. This fact enables fast and efficient purification of these molecules facilitating its use as biotechnological inputs. Thus, this study aimed to produce antibodies against the lectin extracted from Canavalia brasiliensis seed (ConBr) (Fabaceae) in laying hens, implementing production methodology of new biotechnological inputs for the study of lectins. For this laying hens were immunized with 200 or 400μg of lectin Canavalia brasiliensis (ConBr) for 15 weeks at 10-day intervals. Collected eggs from vaccinated birds had their isolated and precipitated yolk in 0-30% fraction with ammonium sulfate for partial purificaçãoo of IgYs. Confirmation of the presence of antibodies was made by immunodiffusion assays agarose gel. The fraction showed 0-30%, from the first week after the immunization, capable of recognizing ConBr IgYs. This profile appeared in all groups over the 15-week experiment. The production of specific IgYs against the lectin from Canavalia brasiliensis (ConBr) proved feasible and remained throughout the experiment, possibly in reasonable quantities. In this sense, IgYs produced in this work provide a powerful biotechnological tool to be made available for future studies. / As lectinas constituem um grupo de proteínas presentes em diversos organismos vivos, sobretudo em vegetais e especialmente em sementes de Leguminosae. Dentre essa família, uma espécie que se destaca por possuir grande quantidade de lectina na semente é a Canavalia brasiliensis. Uma das possíveis abordagens para a investigação de lectinas em sistemas biológicos é a detecção das mesmas através de técnicas que envolvam anticorpos. Tais técnicas podem incluir desde ensaios clássicos de imunoquímica (imunodifusão, imunoeletroforese e rocketimunoeletroforese), até experimentos de ELISA e técnicas avançadas de microscopia. Neste sentido, os anticopos tornam-se ferramentas biotecnológicas de grande valia uma vez que são capazes de reconhecer especificamente epítopos das moléculas alvo. As imunoglobulinas (Igs) são proteínas presentes em grande concentração no plasma sanguíneo de mamíferos. São os vetores da imunidade humoral, tendo como função principal unir-se aos antígenos estranhos ao indivíduo, de modo a neutralizá-los. No caso das aves a principal classe de imunoglobulinas (IgYs) pode ser encontrada não somente no sangue mas também nas gemas dos ovos. Esse fato permite purificação rápida e eficiente dessas moléculas facilitando seu uso como insumos biotecnológicos. Dessa forma, este trabalho teve por objetivo produzir anticorpos contra a lectina extraída da semente de Canavalia brasiliensis (ConBr) (Leguminosae) em galinhas poedeiras, implementando metodologia de produção de novos insumos biotecnológicos para o estudo de lectinas. Para tanto galinhas poedeiras foram imunizadas com 200 ou 400μg da lectina de Canavalia brasiliensis (ConBr) por 15 semanas em intervalos de 10 dias. Ovos coletados das aves imunizadas tiveram suas gemas isoladas e precipitadas na fração 0-30% com sulfato de amônio para a purificação parcial das IgYs. A confirmação da presença dos anticorpos foi feita por ensaios de imunodifusão em gel de agarose. A fração 0-30% apresentou, a partir da primeira semana após a imunização, as IgYs capazes de reconhecer ConBr. Esse perfil se apresentou em todos os grupos ao longo das 15 semanas de experimento. A produção das IgYs específicas contra a lectina de Canavalia brasiliensis (ConBr) se mostrou viável e permaneceu durante todo experimento, possivelmente em quantidades razoáveis. Neste sentido, as IgYs produzidas nesse trabalho constituem uma potente ferramenta biotecnológica a ser disponibilizada para estudos futuros.
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Press imprint smear : um método simples, rápido e de baixo custo no diagnóstico de Leishmaniose cutânea / Press imprint smear : A simple, quick and cheap method in the diagnosis of cutaneous leishmaniasis

Praciano, Claudênia Costa January 2014 (has links)
PRACIANO, Claudênia Costa. Press imprint smear : um método simples, rápido e de baixo custo no diagnóstico de Leishmaniose cutânea. 2014. 80 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-01-27T11:01:27Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_ccpraciano.pdf: 2009797 bytes, checksum: 917bc1b9cc42e4e9dfece1dd9427da86 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-01-27T11:22:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_ccpraciano.pdf: 2009797 bytes, checksum: 917bc1b9cc42e4e9dfece1dd9427da86 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-27T11:22:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_ccpraciano.pdf: 2009797 bytes, checksum: 917bc1b9cc42e4e9dfece1dd9427da86 (MD5) Previous issue date: 2014 / The cutaneous leishmaniasis (CL) is the most common form of leishmaniasis, with 1 million new cases per year. Presents a broad clinical spectrum, which may be confused with other diseases that affect the skin. Thus, it is of fundamental importance to rapid and accurate diagnosis of the disease. Parasitological diagnosis is the most used test in laboratory routine, however direct examination generally has low sensitivity. As a result, it becomes necessary to find alternative techniques for the diagnosis of leishmaniasis. This study compared the test press imprint smear with histological examination and immunohistochemistry, for the direct diagnosis of leishmaniasis. Patients with clinical suspicion of LC underwent a sampling from two samples of biopsies from the edge of the lesions, with a punch of 3 mm for the tests: press imprint smear, histological examination and immunohistochemistry. The latter was considered the gold standard test. The press imprint smear consisted in crushing the biopsy fragment between two glass plates under pressure so that the extract (juice) tissue spreads on the surface of the two blades. The smears were stained with Giemsa for the detection of amastigotes. Another fragment was fixed in 10% formalin. From this sample, a blade was used in histology, stained with hematoxylin-eosin, and one for the immunohistochemical test. In total, 78 patients were included with clinical and epidemiological diagnosis of LC. The press imprint smear technique and histologic examination were conducted on the sample of all patients. However, immunohistochemistry was performed in only 73 samples. Seventy-two (98,6%) were positive for leishmania in immunohistochemistry, with sensitivity of 98,6%; the press imprint smear was positive in 48 patients (61,5%), with sensitivity of 58,3%. In the histological examination were identified amastigotes in 35 patients (44,9%), with sensitivity of 45,8%. The press imprint smear was more sensitive than histological examination for the diagnosis of cutaneous leishmaniasis. In addition, a technique is inexpensive and easy to perform. / A leishmaniose cutânea (LC) é a forma mais comum da leishmaniose, com 1 milhão de novos casos por ano. Apresenta um amplo espectro clínico, podendo ser confundida com outras doenças que acometem a pele. Desse modo, é de fundamental importância o diagnóstico rápido e preciso da doença. O diagnóstico parasitológico é o mais utilizado na rotina laboratorial, entretanto o exame direto geralmente apresenta baixa sensibilidade. Em virtude disso, torna-se necessário buscar técnicas alternativas para o diagnóstico das leishmanioses. Neste trabalho, comparou-se o teste do press imprint smear com o exame histológico e a imuno-histoquímica, no diagnóstico direto de leishmaniose cutânea. Pacientes com suspeita clinica de LC foram submetidos à coleta de duas biópsias da borda das lesões, com punch de 3 mm, para a realização dos testes: press imprint smear, exame histológico e imuno-histoquímica. Este último foi considerado o teste padrão ouro. O press imprint smear consistiu em esmagar o fragmento de biópsia entre duas lâminas de vidro sob pressão, de tal modo que o extrato (suco) tissular se espalha na superfície das duas lâminas. Os esfregaços foram corados com Giemsa, para pesquisa de amastigotas. Outro fragmento foi fixado em formalina a 10%. Desta amostra, uma lâmina foi utilizada no exame histológico, corada com hematoxilina-eosina, e outra para o teste de imuno-histoquímica. Ao total, foram incluídos 78 pacientes com diagnóstico clinico-epidemiológico de LC. A técnica do press imprint smear e o exame histológico foram realizados na amostra de todos os pacientes. Entretanto, a imuno-histoquímica foi realizada em apenas 73 amostras. Setenta e dois (98,6%) foram positivos para Leishmania na imuno-histoquímica, com sensibilidade de 98,6%; o press imprint smear foi positivo em 48 pacientes (61,5%), com sensibilidade de 58,3%. No exame histológico foram identificadas amastigotas em 35 pacientes (44,9%), apresentando sensibilidade de 45,8%. Os resultados mostraram que o press imprint smear apresentou maior sensibilidade do que o exame histológico, para o diagnóstico da leishmaniose cutânea. Além disso, é uma técnica de baixo custo e fácil execução.
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Avaliação de glicosilação e beta1-integrina em carcinomas mamários: valor diagnóstico e prognóstico na progressão tumoral e status linfonodal

SANTOS, Petra Barros dos 27 February 2014 (has links)
Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-07-18T19:49:44Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) PETRA-BARROS-DOS-SANTOS_2014_TESE-V1.pdf certo.pdf: 4627249 bytes, checksum: 6c79cc3c6be74f0d0c7501dc9cde4dcf (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-18T19:49:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) PETRA-BARROS-DOS-SANTOS_2014_TESE-V1.pdf certo.pdf: 4627249 bytes, checksum: 6c79cc3c6be74f0d0c7501dc9cde4dcf (MD5) Previous issue date: 2014-02-27 / CAPES / O câncer de mama invasivo é associado a uma alta capacidade de promover metástase. A progressão do câncer de um estágio pré-maligno para o maligno, metástase e como as células do tumor podem interagir e se adaptar rapidamente com o microambiente tumoral é foco de investigação. As integrinas, glicoproteínas transmembrana, estão envolvidas nos processos de invasão e metástase assim como na adesão célula-célula e célula-matriz extracelular. Particularmente a β1-integrina está envolvida na proliferação e diferenciação de células no desenvolvimento de tecidos epiteliais. O aumento da sialilação (mediado por sialiltransferases; STs) e da ramificação β1,6 de oligossacarídeos (mediado pela enzima β1,6-N-acetilglicosaminiltransferase (MGAT5) tem sido associada com uma variedade de mudanças estruturais nos carboidratos de superfície celular e diretamente envolvidas na carcinogenese. Esta tese objetivou investigar a associação entre a expressão da β1-integrina na sobrevivência e metástase de 225 pacientes diagnosticados com carcinoma ductal invasivo de mama (CDI) utilizando técnica de microarranjos de tecidos (tissue microarrays - TMAs) e comparar com 67 pacientes diagnosticados com carcinoma ductal in situ (CDIS); avaliar a expressão da MGAT-5, assim como, a presença de ácidos siálicos (SA) α2,3 e α2,6 ligados. Os dados foram relacionados com marcadores imunohistoquímicos clássicos (RE, RP, Ki-67, HER-2 e P53), VEGF, MUC1 e com dados clínicohistopatológicos de cada paciente. O perfil de carboidratos das células neoplásicas foi avaliado empregando técnica de histoquímica com lectinas MAL-II (Lectina de Maackia amurensis,específica para o SA-α2,3), SNA (Lectina de Sambucus nigra, específica para o SA-α2,6) e L-Pha (Leucoaglutinina de Phaseolus vulgaris, específica para β1,6-N-acetilglicosamina). Os resultados demonstraram que a β1-integrina foi superexpressa em 32,8% dos casos de CDI e foi associada com a expressão de MGAT-5 (p=0.0001), HER-2 (p = 0.019), VEGF (p =0.011), assim como todas as lectinas utilizadas no trabalho e teve uma associação significativa com a ocorrência de metástase e morte (p=0.001, p=0.05, respectivamente). A análise de sobrevivência mostrou que a superexpressão desta proteína tem valor prognóstico (p= 0.002) na sobrevivência específica (número de meses após diagnóstico até a ocorrência da morte pela doença). Não houve associação quanto à expressão de β1-integrina e MGAT-5 (p= 0.559, p=0.07; respectivamente) entre os casos de CDI e CDIS. A presença de SA-α2,6 nos glicoconjugados das células neoplásicas verificada através da marcação com a lectina SNA, foi diferenciada entre os casos de CDI e CDIS (p=0.034, mais expressa em CDI) assim como na sobrevida específica das pacientes, tempo livre da doença e acometimento de linfonodos (p=0.026, p=0.041, p=0.048; respectivamente). SNA também se mostrou uma sonda eficiente, sendo sua marcação uma variável independente (Cox regression) associada com a baixa sobrevida das pacientes que expressam o SA-α2,6-ligado (p=0.004). Nossos resultados suportam o princípio de que a superexpressão da β1-integrina está associada com a agressividade do tumor além de poder ser considerada como alvo terapêutico e que a histoquímica com lectinas usando SNA se mostra uma ferramenta importante no auxílio do prognóstico da doença. / The invasive breast cancer is associated with a high ability to promote metastasis. The progression of a premalignant to a malignant stage, metastasis and how tumor cells can interact and adapt quickly to the tumor microenvironment is the focus of many research. Integrins, transmembrane glycoproteins are involved in invasion and metastasis process, as well as in cell- cell and cell-extracellular matrix adhesion. Particularly β1 integrin is involved in the proliferation and differentiation of cells of the epithelial tissues development. Increased sialylation (mediated by sialyltransferases; STs) and the β1,6 branching oligosaccharides (mediated by the enzyme β1,6-N-acetylglucosaminyltransferase, MGAT5) has been associated with a variety of structural changes in cell surface carbohydrates and directly involved on carcinogenesis. This thesis aimed to investigate the association between β1 integrin expression on survival and metastasis of 225 patients diagnosed with invasive ductal breast carcinoma (IDC) using tissue microarrays (TMAs) and compare with 67 patients diagnosed with ductal carcinoma in situ (DCIS); Evaluate the expression of MGAT5 expression, as well, the presence of α2,3 and α2,6-linked sialic acid (SA) were also evaluated. All data were related to classical immunohistochemical markers (ER, PR, Ki-67, HER-2 and p53), VEGF and MUC1 and the clinicopathologic features for each patient. The carbohydrate profile of neoplastic cells was evaluated using lectin histochemistry technique with MAL-II lectin (Maackia amurensis lectin, specific to α2,3-linked SA), SNA (Sambucus nigra lectin, specific for α2,6-linked SA) and PHA-L (Phaseolus vulgaris leucoagglutinating, specific for β1,6-N-acetylglucosamine). Results showed that the β1 integrin was overexpressed in 32.8% of the IDC cases and was related to the expression of MGAT5 (p=0.0001), HER-2 (p=0.019), VEGF (p=0.011) as well all lectins used in this work and had a significant association with the occurrence of metastasis and death (p=0.001, p=0.05, respectively). Survival analysis showed that overexpression of this protein has prognostic value (p=0.002) in specific survival (number of months from diagnosis until the occurrence of death by breast cancer). No association was found for β1 integrin and MGAT5 expression (p=0.559, p=0.07, respectively) between DCIS and IDC cases. The presence of α2,6-linked SA in cancer cells glycoconjugates, observed by SNA staining, was different between DCIS and IDC cases (p=0.034) as well the specific survival of patients, the disease free survival and lymph nodes committed (p=0.026, p=0.041, p=0.048, respectively). SNA also proved to be a efficient probe, it’s staining showed as an variable independent (Cox Regression) related with patients low survival that express the α2,6-linked SA (p=0.004). Our results support the principle that overexpression of β1 integrin is associated with tumor aggressiveness and it can be considered as a therapeutic target and lectin histochemistry technique, using SNA, shows as an important tool to aid the prognosis.

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