Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-09-02T18:10:15Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 577340 bytes, checksum: 019f4d91340efac9861eed0ddbc447f1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-02T18:10:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 577340 bytes, checksum: 019f4d91340efac9861eed0ddbc447f1 (MD5) Previous issue date: 2007-12-21 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Os determinantes de resistência aos antimicrobianos vancomicina e oxacilina foram investigados em 264 bactérias do gênero Staphylococcus originados de salame fermentado, de bovinos acometidos com mastite e de casos clínicos humanos. Todos os isolados foram sensíveis ao antibiótico vancomicina e não apresentaram o gene vanA. Dos 57 isolados de salame fermentado, houve um predomínio de CNS, estafilococos coagulase negativos , (89,5%) sobre Staphylococcus aureus (10,5%) e apenas um isolado apresentou-se resistente à oxacilina pelo método de difusão em disco e seu mecanismo de resistência foi proveniente da atividade da -lactamase de expectro extendido). Noventa e cinco isolados de mastite bovina foram submetidos ao teste de atividade da enzima coagulase, predominando a espécie de S. aureus (68,5%), sobre os CNS (32,5%) e ao teste de sensibilidade in vitro, obtendo-se 14 resistentes a oxacilina, sendo dois isolados apresentando o gene mecA e outros 11 atividade de ESBL, predominando este mecanismo de resistência. Dos espécimes clínicos, 52,7% foram CNS e 47,3% S. aureus constituindo 112 isolados, sendo 103 resistentes à oxacilina. Destes, 67 possuíam o gene mecA, 71 apresentaram atividade de ESBL e 40 isolados ambos os mecanismos de resistência. Entre os da espécie S. aureus, predominou a presença do gene mecA como o provável fator de resistência, enquanto nos isolados de CNS, a atividade de ESBL foi mais significativa como possível determinante de resistência. Cinco isolados de origem humana e um de leite mastítico não tiveram seu mecanismo de resistência elucidado, sugerindo ser linhagens MODSA (modified penicillin-binding protein S. aureus) ou outro mecanismo de resistência. Os resultados demonstraram a maior prevalência de resistência a antimicrobianos entre os isolados relacionados a espécimes clínicos humanos seguidos daqueles de vacas mastíticas, bem como a diversidade em possíveis mecanismos de resistência. / The determinants of antimicrobial resistance oxacillin and vancomycin were investigated on 264 Staphylococcus bacteria of the genus originated from fermented sausage, ill with bovine mastitis cases in humans. All isolates were sensitive to the antibiotic vancomycin and not had the vanA gene. Of the 57 isolates of fermented sausage, there was a predominance of CNS, coagulase negative staphylococci, (89.5%) on Staphylococcus aureus (10.5%) and only one isolated presented itself resistant to oxacillin by the disk diffusion method, and its mechanism of resistance was coming from the activity of the enzyme ESBL ( -lactamase-spectrum extended). Ninety-five isolates of bovine mastitis were submitted to the test of coagulase activity of the enzyme, most kinds of S. Aureus (68.5%) on the CNS (32.5%) and the test sensitivity in vitro, obtaining 14 resistant to oxacillin and two isolated presenting the mecA gene and 11 other activity of ESBL, mainly this mechanism of resistance. Two clinical specimens, were 52.7% and 47.3% CNS S. Aureus isolates constituting 112, and 103 resistant to oxacillin. Of these, 67 had the mecA gene, 71 showed activity of ESBL and 40 isolates both mechanisms of resistance. Among the species S. Aureus, the predominant presence of the mecA gene as the likely source of resistance, while in isolated from CNS, the activity of ESBL was more significant as a possible determinant of resistance. Five isolates of human origin and a milk mastítico not have its mechanism of resistance clear, suggesting strains be MODSA (modified penicillin-binding protein S. aureus) or other mechanism of resistance. The results showed a higher prevalence of resistance to antimicrobial among isolates related to human clinical specimens followed those of cows mastíticas, and the diversity in possible mechanisms of resistance.

O presente trabalho teve como objetivo isolar e identificar os microrganismos aeróbicos e a frequência de isolamento de Escherichia coli patogênica ao homem em fezes de cães sem sintomas de colibacilose e assim averiguar a participação do cão como fonte de infeção de colibacilose humana. No período de setembro de 2002 a outubro de 2004, foram coletadas 220 amostras de fezes de animais capturados pelos CCZ de Guarulhos, Cotia e Barueri, cidades do Estado de São Paulo. O método de coleta foi através de swabs estéreis profundamente ao intestino dos animais anestesiados, mantidos sob refrigeração e em caldo BHI. As bactérias foram isoladas por semeadura em Mac Conkey, ágar sangue e Sabouraud. Houve crescimento de microrganismos em 100% delas. Foram isolados os seguintes microrganismos: 120 (54,54%) estirpes de E. coli em cultura pura e 76 (34,54%) estirpes em associação com outros agentes, Proteus mirabilis (2,27%), Klebsiella pneumoniae (2,27%), dentre outros microrganismos. Deve-se ressaltar ainda o isolamento de leveduras (Candida albicans) em associação com outros agentes a partir de 05 (2,27%) amostras de swabs retais. Uma vez isoladas, seus genes de virulência foram detectados por PCR. De um total de 196 estirpes de E. coli isoladas, 123 (62,75%) apresentaram um ou mais dos fatores de virulência estudados. Dessas 196 estirpes, 16 (8,16%) foram positivas para afa, 54 (27,55%) foram positivas para sfa, 38 (19,38%) foram positivas para pap, 66 (33,67%) foram positivas para aer, 31 (15,81%) foram positivas para cnf, 13 (6,63%) foram positivas para hly, 01(0,51%) foi positiva para VT2 e nenhuma das linhagens foi positiva para LT, STa e STb. Os cães aparentemente sadios, sem sintomas de colibacilose, poderiam estar participando da cadeia epidemiológica como reservatórios de E. coli uropatogênica ao homem, pois os genes encontrados com maior número foram aer, sfa e pap presentes em infecções extraintestinais, mais especificamente infecções urinárias. Os cães podem participar como reservatório de estirpes de E. coli resistentes a antimicrobianos. Das amostras de E. coli testadas, 85,64% apresentaram resistência à Cefalotina e 0% de resistência à Norfloxacina. Há a necessidade de mais pesquisas sobre o modo de transmissão das E. coli patogênicas entre o cão e o homem e dos fatores de virulência uropatogênicos encontrados com maior frequência tais como aer, sfa e pap. / The objective of the present study was to isolate and identify aerobic microorganisms and the isolation frequency of E. coli pathogenic to man in faeces of dogs without colibacillosis symptoms and thus to verify the participation of dog as a source of human colibacillosis infection. In the period between September 2002 to October 2004, 220 samples of faeces were collected from animals captured by the CCZ of Guarulhos, Cotia and Barueri, cities in the São Paulo state. The collection method used was barren swabs deeply to the intestine of anesthetized animals, which were kept under refrigeration and in a BHI broth. The bacteria were isolated through sowing in Mac Conkey, agar blood and Sabouraud. In 100% of them there was microorganism growth. The following microorganisms were isolated: 120 (54.54%) E. coli lineages in pure culture and 76 (34.54% lineages in association with other agents, Proteus mirabilis (2,27%), Klebsiella pneumoniae (2.27%,) amongst other microorganisms. The isolation of yeasts (Candida Albicans) in association with other agents from 05 (2.27%) rectal samples swabs must be emphasized. Once isolated virulence genes were detected by PCR. Of a total of 196 isolated lineages of E.coli, 123 (62.75%) presented one or more of the studied virulence factors. Of these 196 lineages, 16 (8.16%) were positive for afa, 54 (27.55%) positive for sfa, 38 (19.38%) positive for pap, 66 (33.67%) positive for aer, 31 (15.81%) positive for caf, 13 (6.63%) positive for hly, 01 (0.51%) positive for VT2 and none of the lineages were positive for LT, Sta and STb. Apparently healthy dogs, without colibacillosis symptoms could be participating in the epidemiological chain as an E. coli reservoir uropathogenic to man, as the genes found with high frequency were aer, sfa and pap present in extraintestinal infections, more specifically urinary infections. The dogs can participate as a reservior of E. coli lineages resistant to antimicrobials. Of the E. coli samples tested, 85,64% presented resistance to Cefalotina and 0% resistance to Norfloxacina. More research is needed on how the transmission of pathogenic E. coli between the dog and man happens and also on the uropathogenic virulence factors found more frequently, such as aer, sfa and pap.

O presente trabalho teve como objetivo isolar e identificar os microrganismos aeróbicos e a frequência de isolamento de Escherichia coli patogênica ao homem em fezes de cães sem sintomas de colibacilose e assim averiguar a participação do cão como fonte de infeção de colibacilose humana. No período de setembro de 2002 a outubro de 2004, foram coletadas 220 amostras de fezes de animais capturados pelos CCZ de Guarulhos, Cotia e Barueri, cidades do Estado de São Paulo. O método de coleta foi através de swabs estéreis profundamente ao intestino dos animais anestesiados, mantidos sob refrigeração e em caldo BHI. As bactérias foram isoladas por semeadura em Mac Conkey, ágar sangue e Sabouraud. Houve crescimento de microrganismos em 100% delas. Foram isolados os seguintes microrganismos: 120 (54,54%) estirpes de E. coli em cultura pura e 76 (34,54%) estirpes em associação com outros agentes, Proteus mirabilis (2,27%), Klebsiella pneumoniae (2,27%), dentre outros microrganismos. Deve-se ressaltar ainda o isolamento de leveduras (Candida albicans) em associação com outros agentes a partir de 05 (2,27%) amostras de swabs retais. Uma vez isoladas, seus genes de virulência foram detectados por PCR. De um total de 196 estirpes de E. coli isoladas, 123 (62,75%) apresentaram um ou mais dos fatores de virulência estudados. Dessas 196 estirpes, 16 (8,16%) foram positivas para afa, 54 (27,55%) foram positivas para sfa, 38 (19,38%) foram positivas para pap, 66 (33,67%) foram positivas para aer, 31 (15,81%) foram positivas para cnf, 13 (6,63%) foram positivas para hly, 01(0,51%) foi positiva para VT2 e nenhuma das linhagens foi positiva para LT, STa e STb. Os cães aparentemente sadios, sem sintomas de colibacilose, poderiam estar participando da cadeia epidemiológica como reservatórios de E. coli uropatogênica ao homem, pois os genes encontrados com maior número foram aer, sfa e pap presentes em infecções extraintestinais, mais especificamente infecções urinárias. Os cães podem participar como reservatório de estirpes de E. coli resistentes a antimicrobianos. Das amostras de E. coli testadas, 85,64% apresentaram resistência à Cefalotina e 0% de resistência à Norfloxacina. Há a necessidade de mais pesquisas sobre o modo de transmissão das E. coli patogênicas entre o cão e o homem e dos fatores de virulência uropatogênicos encontrados com maior frequência tais como aer, sfa e pap. / The objective of the present study was to isolate and identify aerobic microorganisms and the isolation frequency of E. coli pathogenic to man in faeces of dogs without colibacillosis symptoms and thus to verify the participation of dog as a source of human colibacillosis infection. In the period between September 2002 to October 2004, 220 samples of faeces were collected from animals captured by the CCZ of Guarulhos, Cotia and Barueri, cities in the São Paulo state. The collection method used was barren swabs deeply to the intestine of anesthetized animals, which were kept under refrigeration and in a BHI broth. The bacteria were isolated through sowing in Mac Conkey, agar blood and Sabouraud. In 100% of them there was microorganism growth. The following microorganisms were isolated: 120 (54.54%) E. coli lineages in pure culture and 76 (34.54% lineages in association with other agents, Proteus mirabilis (2,27%), Klebsiella pneumoniae (2.27%,) amongst other microorganisms. The isolation of yeasts (Candida Albicans) in association with other agents from 05 (2.27%) rectal samples swabs must be emphasized. Once isolated virulence genes were detected by PCR. Of a total of 196 isolated lineages of E.coli, 123 (62.75%) presented one or more of the studied virulence factors. Of these 196 lineages, 16 (8.16%) were positive for afa, 54 (27.55%) positive for sfa, 38 (19.38%) positive for pap, 66 (33.67%) positive for aer, 31 (15.81%) positive for caf, 13 (6.63%) positive for hly, 01 (0.51%) positive for VT2 and none of the lineages were positive for LT, Sta and STb. Apparently healthy dogs, without colibacillosis symptoms could be participating in the epidemiological chain as an E. coli reservoir uropathogenic to man, as the genes found with high frequency were aer, sfa and pap present in extraintestinal infections, more specifically urinary infections. The dogs can participate as a reservior of E. coli lineages resistant to antimicrobials. Of the E. coli samples tested, 85,64% presented resistance to Cefalotina and 0% resistance to Norfloxacina. More research is needed on how the transmission of pathogenic E. coli between the dog and man happens and also on the uropathogenic virulence factors found more frequently, such as aer, sfa and pap.

Escherichia coli foi isolado de amostras de água de lastro, água de regiões portuárias e de bivalves. 49,6% (164/331) apresentaram múltipla resistência variando de 2 a 8 antibióticos. Dos sete fatores associados à virulência pesquisados: Toxina termoestável (ST), Toxina termolábil (LT), Adesão agregativa (EAEC), Fator de invasão (INV), Toxina Shiga-like I (stx-1), Toxina Shiga-like II (stx-2), e o gene intimina (eae): 4 isolados continham genes homólogos para EAEC, 3 para eae, 3 para ST e uma para stx-2. Um total de 80,0% (24/30), 72,3% (68/94) e 75,3% (55/73) dos isolados de E. coli de amostras de água de lastro, água de regiões portuárias e moluscos bivalves apresentaram plasmídeos, respectivamente. O método ERIC-PCR apresentou melhor desempenho para a análise de agrupamentos. Os isolados de E. coli, com as características encontradas, nos permitirá avaliar o perigo de sua presença no ambiente marinho costeiro e na água de lastro e programas de vigilância sanitária devem ser implementadas para proteger a saúde humana, animal e do ecossistema marinho. / Escherichia coli was isolated from ballast water, port areas water and bivalves samples. 49.6% (164/331) had multiple antibiotics resistant varied from 2 to 8 antibiotics. From seven virulence associated factors investigated: heat stable toxin (ST), heat labile toxin (LT), aggregative adhesion (EAEC), invasion factor (INV), Shiga-like I toxin (STx-1), Shiga-like II toxin (STx-2), and the gene that codify for intimin (eae): 4 isolates had homology to the EAEC, 3 for eae gene, 3 for ST and one for stx2. A total of 80.0% (24/30), 72.3% (68/94) and 75.3% (55/73) of E. coli isolates from ballast water, port area water and bivalves samples had plasmids, respectively. The ERIC-PCR was more efficiency to analyze the groups. The presence of E. coli isolates with the characteristics found will allow evaluate the hazard present at the coast area ecosystem and ballast water samples and sanitary surveillance programs must be implemented for human, animal and aquatic ecosystem health protection.

Escherichia coli foi isolado de amostras de água de lastro, água de regiões portuárias e de bivalves. 49,6% (164/331) apresentaram múltipla resistência variando de 2 a 8 antibióticos. Dos sete fatores associados à virulência pesquisados: Toxina termoestável (ST), Toxina termolábil (LT), Adesão agregativa (EAEC), Fator de invasão (INV), Toxina Shiga-like I (stx-1), Toxina Shiga-like II (stx-2), e o gene intimina (eae): 4 isolados continham genes homólogos para EAEC, 3 para eae, 3 para ST e uma para stx-2. Um total de 80,0% (24/30), 72,3% (68/94) e 75,3% (55/73) dos isolados de E. coli de amostras de água de lastro, água de regiões portuárias e moluscos bivalves apresentaram plasmídeos, respectivamente. O método ERIC-PCR apresentou melhor desempenho para a análise de agrupamentos. Os isolados de E. coli, com as características encontradas, nos permitirá avaliar o perigo de sua presença no ambiente marinho costeiro e na água de lastro e programas de vigilância sanitária devem ser implementadas para proteger a saúde humana, animal e do ecossistema marinho. / Escherichia coli was isolated from ballast water, port areas water and bivalves samples. 49.6% (164/331) had multiple antibiotics resistant varied from 2 to 8 antibiotics. From seven virulence associated factors investigated: heat stable toxin (ST), heat labile toxin (LT), aggregative adhesion (EAEC), invasion factor (INV), Shiga-like I toxin (STx-1), Shiga-like II toxin (STx-2), and the gene that codify for intimin (eae): 4 isolates had homology to the EAEC, 3 for eae gene, 3 for ST and one for stx2. A total of 80.0% (24/30), 72.3% (68/94) and 75.3% (55/73) of E. coli isolates from ballast water, port area water and bivalves samples had plasmids, respectively. The ERIC-PCR was more efficiency to analyze the groups. The presence of E. coli isolates with the characteristics found will allow evaluate the hazard present at the coast area ecosystem and ballast water samples and sanitary surveillance programs must be implemented for human, animal and aquatic ecosystem health protection.