Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2016-08-29T15:42:49Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Patrícia Araújo Beck.pdf: 1348736 bytes, checksum: 03083b9a0a7fe03e4a73a0ac919621b0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-29T15:42:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Patrícia Araújo Beck.pdf: 1348736 bytes, checksum: 03083b9a0a7fe03e4a73a0ac919621b0 (MD5) / CNPQ;FIOCRUZ / O Rotavírus, pertencente à família Reoviridae, é o maior agente etiológico de diarréias agudas em bovinos. O vírus é não envelopado, de simetria icosaédrica e possui capsídeo duplo constituído pelas proteínas estruturais VP1, 2, 3, 4, 6 e 7. O objetivo deste trabalho foi a caracterização dos anticorpos monoclonais (AcM) produzidos contra Rotavírus bovino para sua aplicação como ferramenta de diagnóstico, utilizando as técnicas de Isotipificação, Dot-blot, Western-blot, Imunofluorescência indireta (IFI) e ensaio imunoenzimático (ELISA). A caracterização imunoquímica demonstrou que todos os AcM (1G5, 4F7, 1E12, 4F3 e 3C12) foram do isotipo IgG2a, com cadeia leve . Através da técnica de Dot-blot, os AcM 1G5, 4F7, 1E12, 4F3 detectaram antígenos do Rotavírus e apenas dois AcM (1E12 e 4F3) reconheceram proteínas virais pela técnica de Western-blot. Os cinco AcM reagiram positivamente na técnica de IFI e, também, foram capazes de detectar antígeno viral nas amostras fecais, pela técnica de ELISA de captura. Desta forma, foi possível identificar dois grupos de AcM: um formado pelo 4F7, 1E12 e 1G5 que tiveram resultados animadores para seu uso na detecção de antígeno viral em fezes, e outro pelos AcM 4F3 e 3C12, que podem ser usados para detectar antígeno viral em culturas de células através de IFI. Portanto, a caracterização imunoquímica dos AcM mostra o seu possível uso como ferramenta no diagnóstico das rotaviroses em bovinos.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T10:20:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 278471.pdf: 10142418 bytes, checksum: 81a2829aec816d6569139279ccf7dd18 (MD5) / Os primeiros anticorpos monoclonais (AcM) contra o vírus rábico foram produzidos por Wiktor e Koprowski em 1978 e, desde então, diversos outros foram produzidos e descritos. No entanto, apesar do grande número de AcM antirrábicos descritos na literatura, eles nem sempre são facilmente obtidos, principalmente porque a produção de AcM no Brasil é bastante limitada. Ademais, devido à grande diversidade de variantes de vírus rábico existentes no Brasil, torna-se importante produzir novos AcM que possam atender a interesses mais específicos. Assim, o objetivo do presente trabalho foi a produção e caracterização de AcM contra o vírus rábico. Para tanto, foram realizados cinco protocolos de imunização, nos quais camundongos Balb/c foram imunizados com os seguintes antígenos: (1) vacina antirrábica (VeroRab®, Aventis-Pasteur) para uso em humanos; (2) suspensão inativada de tecido de sistema nervoso central de camundongos infectados com vírus rábico selvagem isolado de um bovino naturalmente infectado por morcego hematófago em Passos de Torres/SC; (3) fragmento recombinante da glicoproteína do vírus rábico cepa ERA compreendendo os aminoácidos 179 a 281 (denominado rGERA179-281) seguido da inoculação de vírus rábico cepa PV na pata; (4) rGERA179-281 seguida por um reforço com a mesma proteína ou com vírus rábico cepa PV; (5) rGERA179-281 e vacina VeroRab®. Esplenócitos dos camundongos imunizados foram fusionados com células de mieloma da linhagem P3X63Ag8.653 utilizando polietilenoglicol 4000 e os hibridomas secretores de anticorpos antirrábicos foram triados por imunofluorescência indireta em células BHK-21 infectadas com vírus rábico. Diluições limitantes foram realizadas e sete clones estáveis foram obtidos, sendo denominados LIA 02 (fusão 1), 6H8 e 7B7 (fusão 2) e 3E6, 8D11, 9C7 e 8B6 (fusão 3). Nos dois últimos protocolos, não foram obtidos hibridomas secretores de anticorpos antirrábicos estáveis. Dentre os AcM, três foram caracterizados como IgG2a (6H8, 8D11 e 8B6), dois como IgM (7B7 e 9C7), um como IgG2b (LIA 02) e um como IgG3 (3E6), todos com cadeia leve kappa. Por ensaio de neutralização, foi verificado que o AcM 8D11 foi capaz de neutralizar o vírus rábico cepa PV in vitro. Além disso, o 7B7 reconheceu a rGERA179-281 e apenas o 8D11 não reconheceu o vírus presente na vacina VeroRab®, conforme demonstrado por ELISA. Os AcM também foram testados contra vírus rábico selvagem isolado de diferentes animais (bovinos, equinos, morcegos, cães e canídeos silvestres) e de humano (uma amostra) oriundas de diferentes regiões do Brasil. O AcM 6H8 reconheceu todas as amostras testadas. Os AcM LIA 02, 3E6 e 9C7 juntos também reconheceram todas elas. Assim, a partir dos resultados obtidos neste trabalho, novos estudos utilizando esses AcM como ferramentas biotecnológicas poderão ser desenvolvidos.

Os herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) e tipo 5 (BoHV-5) são responsáveis por uma série de patologias em bovinos. A diferenciação entre tipos e subtipos desses vírus é importante para a compreensão da epidemiologia das infecções associadas a eles, assim como para permitir a tomada de medidas de controle adequadas. No presente estudo foram efetuadas análises antigênicas utilizando anticorpos monoclonais (AcMs) preparados contra antígenos específicos de herpesvírus bovinos. Quarenta e cinco amostras virais foram examinadas com um painel de 36 AcMs previamente preparados, em testes de imunoperoxidase em monocamada. Quatro amostras virais, sendo três BoHV-1 e uma BoHV-5, não apresentaram reatividade frente a nenhum dos AcMs avaliados. Oito dos 36 AcMs reagiram com todas as demais 41 amostras de herpesvírus bovinos. Por outro lado, oito amostras virais (três BoHV-5 e cinco BoHV-1) reagiram com todos os AcMs testados. Um AcM foi capaz de diferenciar o subtipo “c” do BoHV- 5 das demais amostras. Os demais resultados obtidos sugerem que não há uma clara correlação entre tipos e subtipos genomicamente determinados de herpesvírus bovinos e os AcMs aqui avaliados. / Bovine herpesvirus 1(BoHV-1) and 5 (BoHV-5) are associated to different clinical conditions of cattle. The differentiation between types and subtypes of these viruses maybe important for a better understanding of the epidemiology of bovine herpesvirus infections, as well as to provide support for adequate control measures. In the present study, antigenic analyses were performed with monoclonal antibodies (Mabs) prepared to bovine herpesviruses specific antigens. Fourty five virus isolates/strains were examined with a panel of 36 previously prepared Mabs, immunoperoxidase monolayer assays. Four virus isolates, of which three BoHV-1 and one BoHV-5, did not react with any of the Mabs tested. Eight of the 36 Mabs reacted with all other 41 bovine herpeviruses. On the other hand, eight viruses (three BoHV-5 and five BoHV-1) reacted with all Mabs tested. One Mab was capable of distinguishing BoHV-5 subtype “c” from the other subtypes. Additional results revealed that no clearcut correlation could be established between bovine herpesviruses types and subtypes determinated by molecular methods and the Mabs here evaluated.

Orientador : Prof. Dr. Silvio Marques Zanata / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciencias Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 22/03/2011 / Inclui referências : f. 54-57 / Área de concentração / Resumo: O câncer de mama é um mal que acomete mais de 49.000 mulheres anualmente no Brasil. Na decisão terapêutica para esse tipo de tumor, é importante a definição de alguns parâmetros ligados a proteínas presentes ou não no carcinoma. Dentre essas proteínas, destaca-se o receptor ? de estrógeno (hER?). A detecção do receptor de estrógeno é feita através de imunohistoquímica e para essa técnica são usados anticorpos monoclonais anti hER?. Uma vez que o Brasil ainda é totalmente dependente da importação desse insumo, a obtenção de linhagens de hibridomas secretores desses anticorpos torna-se uma questão de soberania. No presente trabalho, foi elaborado todo o processo e ferramentas necessários para a obtenção dos hibridomas. Partindo-se do RNA total de células produtoras desse receptor, foi produzido cDNA a partir do qual o fragmento codificante para hER? foi clonado em plasmídeo para produção de proteína recombinante em sistema heterólogo em E. coli. Essa proteína foi fusionada a uma cauda de histidina que foi utilizada na sua purificação por cromatografia de afinidade a metal imobilizado. O peptídeo purificado foi utilizado como antígeno na imunização de camundongos Balb/C. Animais que apresentaram uma boa resposta imunológica frente ao antígeno de interesse foram eutanasiados e tiveram o seu baço removido para a realização dos ensaios de fusão. Os esplenócitos dissociados foram fusionados a células de linhagens de mieloma através da utilização de polietilenoglicol com o objetivo de se obter hibridomas secretores de anticorpos monoclonais de interesse. Durante o período do trabalho nenhum hibridoma estável foi obtido, no entanto foram desenvolvidas todas as ferramentas necessárias para a obtenção do insumo. Palavras-chave: hER?, receptor de estrógeno, anticorpos policlonais, anticorpos monoclonais, proteinas recombinantes. / Abstract: Breast cancer is a disease that affects more than 49,000 women annually in Brazil. To achieve a therapeutic decision for this type of tumor, it is important to define some parameters linked to proteins present or absent in the carcinoma. Among those proteins, the estrogen receptor ? (hER?) is highlighted. The detection of estrogen receptor ? is made by immunohistochemistry and, for this technique, monoclonal antibodies against hER? are used. Since Brazil is still completely dependent on imports of this material, obtaining hibridoma lines that produce those antibodies becomes an issue of sovereignty. In this study, the hole process and tools necessary to obtain those hybridomas was developed. Starting from the total RNA of cells that produce the receptor, cDNA was produced. The encoding sequence for hER? was cloned into a plasmid from which the recombinant protein was produced in heterologous system in E. coli. This protein was fused to a histidine tag that was used for its purification by Immobilized Metal Affinity Chromatography. The purified peptide was used as antigen to immunize Balb/C mice. Animals that showed a good immune response against the antigen of interest were euthanized and had their spleen removed for fusion assay. The dissociated splenocytes were fused to myeloma cell lines by using polyethyleneglycol in order to obtain hybridomas secreting monoclonal antibodies of interest. During the study, no stable hybridoma was obtained, however have been developed all the tools necessary to obtain the desired material. Key words: hER?, estrogen receptor, polyclonal antibodies, monoclonal antibodies, recombinant proteins.

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:10:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2001-06-05Bitstream added on 2014-11-10T11:57:21Z : No. of bitstreams: 1 000134804.pdf: 2170606 bytes, checksum: a9bb17090b4e19e238785aceaee3fa1d (MD5) / O presente estudo teve como objetivo a produção de um anticorpo monoclonalreativo com leveduras do gênero Candida. Esplenócitos de camundongosBALB/c previamente imunizados com Candidaforam fusionados in vitro comcélulas de mieloma Sp2-0Ag14 e os híbridos resultantes mantidos em cultura a37°C com 5% de C02. Os sobrenadantes das células em crescimento foram testados por ELISA para a produção de anticorpos. Os pontos positivos {0,29%)foram clonados para obter-se o anticorpo monoclonal e posteriormenteexpandidos in vivo emperitônio de camundongo. O anticorpo produzido peloclone foi purificado e isotipado. O anticorpo monoclonal foi denominado 76C e éuma lgMK. O 76C é dirigido para um epítopo de mananoproteína da paredecelular de Candida, cuja natureza ainda não foi completamente elucidada. Oanticorpo 76C foi analisado por DOT SLOT contra diferentes cepas de Candidareagindo positivamente com 87,5% das amostras testadas. O anticorpomonoclonal (76C) será uma ferramenta útil no estudo sorológico de pacientescom candidose invasiva. / The aim of this study was to obtain a reactive monoclonal antibody against Candida albicans. Spleen celIs of BALB/c mice previously immunized withCandida were fused in vitro with mielorna cells Sp2-0Ag14. The resultant hybridcells were kept in culture medium at 5% C02.The suspension growing cells were tested by ELISA to check the antibodies titer. The positive colonies were cloned to achieve the monoclonal antibody and further expanded in mice peritoneum. The antibody produced was purified and isotope. The monoclonal antibody was denominated 76C. The 76C was directed against mannoprotein molecules from Candida cell surface, which has not yet been completely investigated to find outlhe specific nature of epitope. The antibody 76C was analyzed by DOT BLOTagainst different Candida species and there were positives results in 87,5% of the tested samples_ The monoclonal antibody 76C will be a useful tool to investigate oligomannoside epitope from mannan and could be applied in sera diagnosis in invasive candidiasis and in studies of glicidic epitope.

Os herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) e tipo 5 (BoHV-5) são responsáveis por uma série de patologias em bovinos. A diferenciação entre tipos e subtipos desses vírus é importante para a compreensão da epidemiologia das infecções associadas a eles, assim como para permitir a tomada de medidas de controle adequadas. No presente estudo foram efetuadas análises antigênicas utilizando anticorpos monoclonais (AcMs) preparados contra antígenos específicos de herpesvírus bovinos. Quarenta e cinco amostras virais foram examinadas com um painel de 36 AcMs previamente preparados, em testes de imunoperoxidase em monocamada. Quatro amostras virais, sendo três BoHV-1 e uma BoHV-5, não apresentaram reatividade frente a nenhum dos AcMs avaliados. Oito dos 36 AcMs reagiram com todas as demais 41 amostras de herpesvírus bovinos. Por outro lado, oito amostras virais (três BoHV-5 e cinco BoHV-1) reagiram com todos os AcMs testados. Um AcM foi capaz de diferenciar o subtipo “c” do BoHV- 5 das demais amostras. Os demais resultados obtidos sugerem que não há uma clara correlação entre tipos e subtipos genomicamente determinados de herpesvírus bovinos e os AcMs aqui avaliados. / Bovine herpesvirus 1(BoHV-1) and 5 (BoHV-5) are associated to different clinical conditions of cattle. The differentiation between types and subtypes of these viruses maybe important for a better understanding of the epidemiology of bovine herpesvirus infections, as well as to provide support for adequate control measures. In the present study, antigenic analyses were performed with monoclonal antibodies (Mabs) prepared to bovine herpesviruses specific antigens. Fourty five virus isolates/strains were examined with a panel of 36 previously prepared Mabs, immunoperoxidase monolayer assays. Four virus isolates, of which three BoHV-1 and one BoHV-5, did not react with any of the Mabs tested. Eight of the 36 Mabs reacted with all other 41 bovine herpeviruses. On the other hand, eight viruses (three BoHV-5 and five BoHV-1) reacted with all Mabs tested. One Mab was capable of distinguishing BoHV-5 subtype “c” from the other subtypes. Additional results revealed that no clearcut correlation could be established between bovine herpesviruses types and subtypes determinated by molecular methods and the Mabs here evaluated.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2014. / Submitted by Camila Duarte (camiladias@bce.unb.br) on 2017-01-10T13:50:26Z No. of bitstreams: 1 2014_MaryaniAndressaGomesBezerra.pdf: 4392987 bytes, checksum: 2d620e2e34486b05d19113128ecd6494 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2017-01-17T13:50:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_MaryaniAndressaGomesBezerra.pdf: 4392987 bytes, checksum: 2d620e2e34486b05d19113128ecd6494 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-17T13:50:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_MaryaniAndressaGomesBezerra.pdf: 4392987 bytes, checksum: 2d620e2e34486b05d19113128ecd6494 (MD5) / O anticorpo anti-CD3 humano OKT3 foi utilizado por décadas na prevenção da rejeição aguda em transplantes, mas por acarretar o desenvolvimento de uma resposta imunogênica severa, seu uso foi descontinuado. A humanização desse anticorpo e a engenharia molecular de sua porção Fc têm sido instrumentos valiosos para desenvolvimento de uma nova geração de anticorpos anti-CD3 humano, os quais também vêm sendo considerados para o tratamento de doenças autoimunes. Os melhores candidatos deverão induzir a inativação de células T através de mecanismos não-líticos, promovendo apoptose, anergia e/ou expansão de células T regulatórias. Em nosso grupo, estamos trabalhando com anticorpos recombinantes anti-CD3 humanizados com potencial imunoregulatório. Nesse trabalho, buscamos aprofundar a caracterização das atividades ligante e efetora de versões humanizadas e quimera do anticorpo anti-CD3 humano na forma de FvFc e IgG. Todos os anticorpos recombinantes foram capazes de se ligar à superfície das células T CD4+ e CD8+. Somente os FvFcs recombinantes foram capazes de competir pela ligação à molécula CD3 com o anticorpo parental OKT3. As versões FvFc humanizadas apresentaram uma menor mitogenicidade em células T CD4+ e CD8+ comparadas à versão FvFc quimérica. Os FvFcs recombinantes induziram uma menor produção de citocinas inflamatórias comparada as do anticorpo OKT3. As versões FvFc R e FvFc M induziram o aumento da expressão de Fas nas populações CD4+ e CD8+ de forma dose-dependente, sendo a versão humanizada FvFc R a que revelou o maior aumento. Isso sugere que a humanização pode ter tornado o anticorpo anti-CD3 humano mais pró-apoptótico. A presença dos FvFcs recombinantes também aumentou o número de células positivas para alguns marcadores de células T regulatórias (CD25, GARP e CTLA-4) dentro das populações CD4+ e CD8+. A versão humanizada FvFc R foi a que revelou o maior aumento de células CD25+ GARP+, sugerindo a indução de um fenótipo imunoregulatório. Esses resultados mostram que anticorpos na forma de FvFc e a versão humanizada FvFc R do anticorpo anti-CD3 humano são promissoras em procedimentos onde um ambiente imunoregulatório é requerido. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The anti-human CD3 antibody OKT3 had been used for decades on acute transplant rejection prevention, but due to its severe immunogenic reaction, its use was discontinued. Antibody humanization and molecular engineering of the Fc portion have been valuable tools in the development of a new generation of anti-human CD3 antibodies, that have also been considered for the treatment of autoimmune diseases. Best candidates may induce T-cell inactivation through non-lytic mechanisms, promoting apoptosis, anergy and/or regulatory T cell expansion. Our group is working with humanized recombinant anti-CD3 antibodies with immunoregulatory potential. In this work, we pursued the binding and effector activities characterization of humanized and chimeric versions of the anti-human CD3 antibody, in FvFc and IgG formats. All recombinant antibodies were capable of bind to CD4+ and CD8+ T cells surface. Only recombinant FvFcs were able to compete to CD3 molecule with the parental antibody OKT3. The humanized FvFc versions showed low mitogenicity on CD4+ and CD8+ T compared to chimeric FvFc version. Recombinants FvFcs induced lower production of inflammatory cytokines compared to OKT3 antibody one. FvFc R and FvFc M versions induced the increase of Fas expression on CD4+ and CD8+ populations in a dose-dependent manner, being the humanized FvFc R version the one with the highest increase. This suggests that the humanization may have turned the anti-human CD3 FvFc R more pro-apoptotic. Recombinant FvFcs presence also increased the number of positive cells to some regulatory T cell markers (CD25, GARP e CTLA-4) inside CD4+ and CD8+ populations. The humanized FvFc R version was the one with the highest increase of CD25+ GARP+ cells, suggesting an immunoregulatory phenotype induction. These data shows that the FvFc molecules and the humanized FvFc R version are promising in procedures where an immunomodulatory environment is required.

Orientadora : Profª. Drª. Larissa M. Alvarenga / Coorientador : Profª. Drª. Andrea E. M. Stinghen e Profª. Drª. Juliana F. de Moura / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciencias Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 08/04/2016 / Inclui referências : f. 65-73 / Área de concentração: Patologia / Resumo: Os produtos finais de glicação avançada (AGEs) são um grupo heterogêneo de moléculas que se acumulam no plasma e tecidos em diversas condições clínicas, tais como envelhecimento, diabetes e falência renal. Evidências crescentes apontam tais moléculas como toxinas urêmicas as quais são efetoras no processo fisiopatológico de complicações vasculares e renais, em virtude de sua capacidade de modificar de forma irreversível as propriedades químicas e funcionais de uma série de moléculas, entre elas as proteínas. Existem atualmente mais de 20 tipos de AGEs descritos, metilglioxal, N-carboximetillisina (CML) e pentosidina os melhores caracterizados até o momento, e que servem como marcadores de acúmulo de AGEs em uma ampla gama de tecidos, sendo a CML o domínio antigênico mais abundante e melhor caracterizado. O presente estudo teve como objetivo produzir e caracterizar anticorpos monoclonais anti-CML para uso na confecção de ensaios que possam detectar e quantificar essa toxina em fluídos biológicos e aplicação desta ferramenta no entendimento das vias de sinalização envolvidas com a progressão da Doença Renal Crônica (DRC). Para tanto, três diferentes moléculas protéicas carreadoras foram modificadas por glicação: hemocianina de molusco (KLH), soro albumina bovina (BSA) e soro albumina humana (HSA); caracterizadas por eletroforese e espectrometria de massa. As moléculas glicadas foram usadas como imunógenos em camundongos Balb-c para produzir anticorpos policlonais e monoclonais epítopo-específico capazes de reconhecerem o domínio CML. Sete clones e quatorze subclones foram obtidos e testados frente ao CML e respectivos controles. Dentre os subclones, o anticorpo monoclonal mAb 2D6G2, foi selecionado com base nos ensaios de especificidade para melhor caracterização e empregado na detecção de CML. Para validação dos anticorpos produzidos foram utilizados soros de pacientes em diferentes estágios de DRC. Posteriormente, diferentes condições como variação nas concentrações de antígenos, anticorpos e diluições dos soros foram avaliadas a fim de padronizar um teste de ELISA competitivo capaz de detectar e quantificar CML em soro. Os resultados obtidos permitiram correlacionar concentração de CML nos soros com os diferentes estágios da doença. Além disso, o mAb 2D6G2, foi empregado em ensaios in vitro em células THP-1 com intuito de avaliar a interação de CML-HSA no ambiente celular. Nossos resultados demonstram a eficiência do anticorpo produzido, e abrem novas perspectivas para o emprego de tais anticorpos como bioferramenta na detecção, quantificação e entendimento dos mecanismos celulares e moleculares envolvidos na toxicidade urêmica relacionada a DRC. . Palavras chave: Doença renal crônica, toxinas urêmicas, AGEs, CML, anticorpo monoclonal. / Abstract: The advanced glycation end products (AGEs) are a heterogeneous group of molecules that accumulate in the plasma and tissues in several clinical conditions such as aging, diabetes and renal failure. These molecules have been show to act as uremic toxins and effectors in the pathophysiological vascular damage and renal complications, because of their ability to modify irreversibly chemical and functional properties of a number of molecules, among them proteins. Currently over 20 types of AGEs are described, including: methylglyoxal, N-carboxymethyllysine (CML) and, pentosidine, and they function as AGEs accumulation biomarkers widely used in several tissues, being CML the major antigenic domain. This work aimed the production and characterization anti-CML monoclonal antibodies for detection and quantification of this toxin in biological fluids. In addition this antibody may be used as a tool to investigate the signaling pathways involved in the CKD progression. Thus, three carrier proteins were modified by glycation: keyhole limpet hemocyanin (KLH), bovine serum albumin (BSA) and human serum albumin (HSA); characterized by gel electrophoresis and mass spectrometry. The glycated molecules were used in Balb-c as immunogens to have the production of epitope-specific polyclonal and monoclonal antibodies able to recognize CML. Fourteen hybridomas were obtained and tested against CML and their respective controls. Among the hybridomas, mAb 2D6G2 was selected based on specificity assays and employed for further CML toxin characterization and detection. Analysis of serum sample from patients who presented different CKD stages were used for validation of home-made antibody. Furthermore, different conditions of antigens and antibodies concentrations, and serum dilutions were evaluated to standardize a ELISA competitive test capable to detect and measure serum CML.The results allowed to correlate CML concentration in serum samples with the different CKD stages. Beside, mAb 2D6G2 was employed in vitro in order to assess CML-HSA interaction with THP-1 cells. These results demonstrate the efficiency of the antibody mAb 2D6G2, and our data open new avenues for the use antibodies as tools in the detection, quantification and understanding of the cellular and molecular mechanisms involved in uremic toxicity related to CKD. Key words: chronic kidney disease, uremic toxins, AGEs, CML, monoclonal antibody.

Os herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) e tipo 5 (BoHV-5) são responsáveis por uma série de patologias em bovinos. A diferenciação entre tipos e subtipos desses vírus é importante para a compreensão da epidemiologia das infecções associadas a eles, assim como para permitir a tomada de medidas de controle adequadas. No presente estudo foram efetuadas análises antigênicas utilizando anticorpos monoclonais (AcMs) preparados contra antígenos específicos de herpesvírus bovinos. Quarenta e cinco amostras virais foram examinadas com um painel de 36 AcMs previamente preparados, em testes de imunoperoxidase em monocamada. Quatro amostras virais, sendo três BoHV-1 e uma BoHV-5, não apresentaram reatividade frente a nenhum dos AcMs avaliados. Oito dos 36 AcMs reagiram com todas as demais 41 amostras de herpesvírus bovinos. Por outro lado, oito amostras virais (três BoHV-5 e cinco BoHV-1) reagiram com todos os AcMs testados. Um AcM foi capaz de diferenciar o subtipo “c” do BoHV- 5 das demais amostras. Os demais resultados obtidos sugerem que não há uma clara correlação entre tipos e subtipos genomicamente determinados de herpesvírus bovinos e os AcMs aqui avaliados. / Bovine herpesvirus 1(BoHV-1) and 5 (BoHV-5) are associated to different clinical conditions of cattle. The differentiation between types and subtypes of these viruses maybe important for a better understanding of the epidemiology of bovine herpesvirus infections, as well as to provide support for adequate control measures. In the present study, antigenic analyses were performed with monoclonal antibodies (Mabs) prepared to bovine herpesviruses specific antigens. Fourty five virus isolates/strains were examined with a panel of 36 previously prepared Mabs, immunoperoxidase monolayer assays. Four virus isolates, of which three BoHV-1 and one BoHV-5, did not react with any of the Mabs tested. Eight of the 36 Mabs reacted with all other 41 bovine herpeviruses. On the other hand, eight viruses (three BoHV-5 and five BoHV-1) reacted with all Mabs tested. One Mab was capable of distinguishing BoHV-5 subtype “c” from the other subtypes. Additional results revealed that no clearcut correlation could be established between bovine herpesviruses types and subtypes determinated by molecular methods and the Mabs here evaluated.

Orientador : Dagmar Ruth Stach-Machado / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-02T17:58:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dias_LeticiaChavesFerreira_M.pdf: 5578812 bytes, checksum: 7e4d14ddd6394f6091ef77195ec9d6c2 (MD5) Previous issue date: 2002 / Mestrado