Orientador : Prof. Dr. Paulo Roberto Dalsenter / Coorientadora : Profª Drª Ana Cláudia Boareto da Costa Cesar / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa: Curitiba, 24/06/2016 / Inclui referências : f. 53-60 / Área de concentração / Resumo: O artesunato é um derivado da artemisinina, que tem origem da planta chinese Artemisia annua, usado no tratamento de malária falciparum. Seu uso não é indicado no primeiro trimestre de gestação devido a efeitos tóxicos para o embrião e feto demonstrados em estudos in vivo. Além disso, a artemisinina e alguns de seus derivados já apresentaram toxicidade reprodutiva. Os estrogênios estão envolvidos em processos fisiológicos e patológicos dos tratos reprodutores feminino e masculino. Ademais, alterações sexuais e reprodutivas podem estar relacionadas com a exposição a substâncias estrogênicas. Apesar de indícios de toxicidade reprodutiva do artesunato, nenhum trabalho verificou atividade estrogênica ou antiestrogênica desse fármaco. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito estrogênico e antiestrogênico do artesunato sobre o útero. Para este fim, foi realizado o teste uterotrófico em ratas imaturas, tratadas com artesunato isolado e associado ao estradiol. O artesunato foi testado em diferentes doses (6,25; 12,5; 25; 50 e 100 mg/kg), por via oral. A análise histomorfométrica das camadas uterinas (perimétrio, miométrio, endométrio e epitélio) foi realizada de forma cega manualmente e através do programa Image J®. Os resultados do teste uterotrófico demonstraram aumento uterino no grupo de ratas tratadas com artesunato na dose de 12,5 mg/kg, o que sugere estrogenicidade. Ademais, o tratamento com artesunato nas doses de 6,25 e 12,5 mg/kg combinado com estradiol aumentou a massa uterina quando ambos foram administrados pela mesma via (oral). A alteração da via de administração do estradiol (subcutânea) em associação com artesunato não apresentou diferença na massa uterina, sugerindo que o efeito estrogênico observado possa estar relacionado com a via de administração oral. Os animais tratados com as doses de 50 e 100 mg/kg de artesunato não apresentaram antagonismo quando associadas ao estradiol (na dose de 5?g/kg, s.c.), diferentemente do modulador de receptores estrogênicos, o tamoxifeno. Os resultados histomorfométricos foram coerentes com os testes uterotróficos, demonstrando que as fêmeas tratadas com artesunato na dose de 12.5 mg/kg tiveram as espessuras do endométrio e epitélio aumentadas. A associação de estradiol (por via oral) com artesunato na dose de 6,25 mg/kg aumentou a espessura do perimétrio, miométrio e endométrio. O grupo tratado com estradiol combinado ao artesunato na dose de 100 mg/kg apresentou redução do miométrio e endométrio. O tratamento por via subcutânea de estradiol na dose de 0,3 ?g/kg associada com artesunato nas doses 6,25; 12,5 e 25 mg/kg aumentou a espessura do perimétrio, miométrio e endométrio. Já a associação do estradiol, 1 ?g/kg, s.c., com artesunato em todas as doses, aumentou todas as camadas uterinas. Além do mais, as espessuras do miométrio, endométrio e epitélio foram aumentadas em todos os animais tratados com a associação de estradiol subcutâneo na dose de 5 ?g/kg. Deste modo, podemos concluir que o artesunato tem efeito estrogênico, e apresenta efeito modulador da resposta estrogênica mediada por baixas doses de estradiol, quando a administração de ambos se dá pela via oral. Palavras-chave: Artemisia annua. Artesunato. Estrogenicidade. Teste uterotrófico. / Abstract: Artesunate is a derivative of artemisinin, originates from the Chinese plant Artemisia annua, used for treatment of falciparum malaria. It is not indicated in the first trimester of pregnancy due toxic effects to the embryo and fetus demonstrated in vivo studies. Besides that, artemisinin and its derivatives have presented reproductive toxicity. Estrogenic compounds are involved with physiological and pathological processes female and male reproductive tracts. Sexual and reproductive changes may be related to exposure estrogenic compounds. Despite the evidence of reproductive toxicity of artesunate, none study found estrogenic or antiestrogenic activity of this drug. The aim of this study was to evaluate estrogenic and antiestrogenic effects of artesunate on the uterus. To this end, the uterotrophic test carried out with immature female rats. They were treated with artesunate isolated and combinated with estradiol. The doses tested of artesunate were 6.25, 12.5, 25, 50 and 100 mg/kg, orally. Histomorphometric analysis of uterine layers (perimetrium, myometrium, endometrium and epithelium) was performed blind and manually through the software Image J®. Results of uterotrophic test showed that the group of animals treated with artesunate at dose of 12.5 mg/kg had uterine weight gain, suggesting estrogenicity. Moreover, treatment with artesunate at the doses of 6.25 and 12.5 mg/kg estradiol increased the uterine weight when both were administered by the same route (oral). The change of estradiol administration (subcutaneous) in combination with artesunate showed no difference in uterine weight, suggesting that the estrogenic effect observed may be related to the oral route of administration. The animals treated with artesunate doses of 50 and 100 mg/kg showed no antagonism when combined with estradiol (5 ìg/kg, s.c.), unlike estrogen receptor modulator, tamoxifen. Histomorphometric results were consistent with the uterotrophic test, showing that animals treated with artesunate at a dose of 12.5 mg/kg had endometrial thickness and epithelium increased. The combination of estradiol with artesunate orally at a dose of 6.25 mg/kg perimetrium increased thickness, myometrium and endometrium. The group treated with estradiol combined with in artesunate 100 mg/kg decreased the myometrium and endometrium as compared to the group treated with oral estradiol. The treatment via subcutaneous estradiol (0.3 ìg/kg) associated with artesunate at the doses 6.25; 12.5 and 25 mg/kg increased the thickness of perimetrium, myometrium and endometrium. The combination of estradiol (1 ìg/kg, s.c.) and artesunate at all doses increased uterine layers. The thickness of the myometrium, endometrium and epithelium was increased in all animals treated with the combination of estradiol subcutaneously at dose of 5 ìg/kg. Thus, we can conclude that the artesunate has estrogenic effect and modulates estradiol response at low doses when the administration of both is oral. Key words: Artemisia annua. Artesunate. Estrogenicity. Uterotrophic test.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Neurociências, Florianópolis, 2007 / Made available in DSpace on 2012-10-23T13:24:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 270300.pdf: 602667 bytes, checksum: 80fd760352e0585d6912c44ade54ce6d (MD5) / Efeitos neurotóxicos do metilimercúrio sobre os parâmetros comportamentais (relacionados à locomoção) e bioquímicos (relacionados ao estresse oxidativo) em modelos experimentais com camundongos adultos. Susceptibilidade sexo-dependente e potencial efeito protetor dos estrógenos.

Em razão do constante aumento populacional, o nível de poluição no planeta tem crescido principalmente nos meios aquáticos. Parte destes contaminantes apresentam regulamentação, porém uma fração destes, chamados de “emergentes”, são constantemente lançados no ambiente sem nenhum controle além de não apresentarem regulamentação. Os hormônios sexuais fazem parte destes contaminantes emergentes e oferecem grande risco as diferentes formas de vida devido ao alto potencial em causar disrupção endócrina. Neste trabalho desenvolveu-se a metodologia analítica com o intuito de determinar e quantificar cinco hormônios sexuais, amplamente consumidos na reposição hormonal e contraceptivos. A determinação dos hormônios sexuais estrona (E1), β-estradiol (E2), estriol (E3), 17α-etinilestradiol (EE2) e progesterona foi realizada através da cromatografia a gás acoplada a espectrometria de massas com derivatização prévia. A derivatização dos estrógenos E1, E2, E3 e EE2 foi realizada com MSTFA-Imidazol, já a progesterona foi determinada na forma não derivatizada. Parâmetros como tempo e temperatura de derivatização, tipos de derivatizante e energia do impacto eletrônico no espectrômetro de massas, foram devidamente otimizados. A pré-concentração foi realizada por extração em fase sólida (SPE), utilizando cartuchos Oasis HLB e a validação do método foi conduzida pela avaliação dos parâmetros: linearidade, sensibilidade, seletividade, precisão, precisão intermediária, exatidão, limite de detecção e de quantificação. A amostragem de águas superficiais e efluente urbano foi realizada nos meses de agosto, setembro e outubro de 2012, nos Rios Gravataí e dos Sinos, no Arroio Dilúvio, e na estação piloto de tratamento de efluente urbano, pertencente ao Instituto de Pesquisas Hidráulicas (IPH/UFRGS). Os hormônios E1, E2 e E3 foram encontrados nas amostras em concentrações de 6,2 a 541,4 ng L-1, 29 a 46,2 ng L-1 e 37,5 a 716,8 ng L-1 respectivamente. No estudo preliminar de degradação do EE2 , foram avaliadas a fotólise direta em água purificada e indireta com utilização de íons nitrato nas concentrações 20 e 100 mg L-1, sendo as constantes da taxa de transformação 0,0128 min-1, 0,0175 min-1 e 0,0336 min-1 respectivamente. A fotodegradação também foi avaliada em diferentes matrizes: água purificada, efluente urbano e água da torneira, sendo as constantes da taxa de transformação 0,0451 min-1, 0,0227 min-1 e 0,0864 min-1 respectivamente. Os sistemas investigados seguem uma cinética de pseudo-primeira ordem. Este estudo serve de base para futuramente determinar possíveis produtos de transformação. / Due to the constant increase in population, the level of pollution on the planet has grown mainly in aquatic environments. Some of these contaminants present regulation but a fraction of these, called "emerging", besides being continuously released into the environment without any control, have no regulation. Sex hormones are part of these emerging contaminants and offer great risk the different ways of life due to their potential to cause endocrine disruption. In this work the development of analytical methodology was enhanced in order to determine and quantify five sex hormones, widely consumed in hormone replacement and contraceptives. The determination of compounds estrone (E1), β-estradiol (E2), estriol (E3), 17α-ethinylestradiol (EE2) and progesterone was performed by gas chromatography coupled with mass spectrometry with previous derivatization. Derivatization of estrogens E1, E2, E3 and EE2 was performed using MSTFA-Imidazole, while the progesterone was determined in the non-derivatized form. Parameters as temperature and time of derivatization, and types of derivatives , energy of electron impact on mass spectrometer, were properly optimized. The preconcentration was performed by solid phase extraction (SPE) using Oasis HLB cartridges. The method validation was carried out by evaluating the parameters: linearity, sensitivity, selectivity, precision, intermediate precision, accuracy, limit of detection and quantification. The sampling was performed in the months of August, September and October of 2012 in Gravataí and Sinos rivers, Dilúvio Stream and urban sewage in wastewater treatment pilot plant, which belongs to the Institute of Hydraulic Research (IPH / UFRGS ). The hormones E1, E2 and E3 were found in samples at concentrations from 6.2 to 541.4 ng L-1, from 29 to 46.2 ng L-1 and from 37.5 to 716.8 ng L-1 respectively. In the preliminary study of degradation of EE2, in purified water photolysis direct and indirect use of concentrations ions nitrate 20 and 100 mg L-1 were assessed, with transformation rate constants 0.0128 min-1, 0.0175 min-1 and 0.0336 min-1 respectively. The photodegradation in different matrices: purified water, urban wastewater and tap water also were assessed, with transformation rate constants 0.0451 min-1, 0.0227 min-1 and 0.0864 min-1 respectively. The systems investigated kinetics follow pseudo-first order. This study provides a basis to determine in the future possible transformation products.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Aqüicultura, Florianópolis, 2013 / Made available in DSpace on 2013-12-05T22:44:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 317597.pdf: 4081872 bytes, checksum: ffa4037c632740fd4461737001112393 (MD5) Previous issue date: 2013 / O robalo-flecha (Centropomus undecimalis) é um hermafrodita protândrico e um dos entraves para a reprodução em laboratório é a captura e manutenção das fêmeas. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de implantes do hormônio 17-? estradiol (E2) para induzir a mudança de sexo em machos adultos. Foram utilizados 39 peixes com peso inicial de 383 ± 83 g. Cada peixe foi marcado com um "transponder" e recebeu um implante. Foram testadas quatro dosagens (0,5; 1,0; 4,0 e 8,0 mg kg-1) de E2 em implantes EVAc mais um grupo controle. Os parâmetros avaliados foram: crescimento, sobrevivência, IGS, IHS, morfologia das gônadas e fígado e a dosagem de esteroides (T e E2) no plasma sanguíneo. A sobrevivência foi de 100 % no controle, 0,5 e 1,0 mg kg-1, de 57 % no 4 mg kg-1 e nenhum sobreviveu no 8 mg kg-1. O ganho de peso nos tratamentos controle e 0,5 mg kg-1 foi significativamente maior que 4 mg kg-1 e não diferiu de 1 mg kg-1. Todos os peixes tratados com E2 tiveram desenvolvimento dos ovários enquanto que os do controle continuaram machos. Com 15 dias, os níveis de E2 no plasma aumentaram diretamente com a dosagem de hormônio. Os níveis de T no controle foram maiores em todos os tempos amostrais em relação aos tratados com E2. Os resultados demonstram que a dosagem de 0,5 mg kg-1 de E2 em implantes EVAc é eficiente para induzir a mudança de sexo em machos do robalo flecha.

Orientador : Prof. Dr. Silvio Marques Zanata / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciencias Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 22/03/2011 / Inclui referências : f. 54-57 / Área de concentração / Resumo: O câncer de mama é um mal que acomete mais de 49.000 mulheres anualmente no Brasil. Na decisão terapêutica para esse tipo de tumor, é importante a definição de alguns parâmetros ligados a proteínas presentes ou não no carcinoma. Dentre essas proteínas, destaca-se o receptor ? de estrógeno (hER?). A detecção do receptor de estrógeno é feita através de imunohistoquímica e para essa técnica são usados anticorpos monoclonais anti hER?. Uma vez que o Brasil ainda é totalmente dependente da importação desse insumo, a obtenção de linhagens de hibridomas secretores desses anticorpos torna-se uma questão de soberania. No presente trabalho, foi elaborado todo o processo e ferramentas necessários para a obtenção dos hibridomas. Partindo-se do RNA total de células produtoras desse receptor, foi produzido cDNA a partir do qual o fragmento codificante para hER? foi clonado em plasmídeo para produção de proteína recombinante em sistema heterólogo em E. coli. Essa proteína foi fusionada a uma cauda de histidina que foi utilizada na sua purificação por cromatografia de afinidade a metal imobilizado. O peptídeo purificado foi utilizado como antígeno na imunização de camundongos Balb/C. Animais que apresentaram uma boa resposta imunológica frente ao antígeno de interesse foram eutanasiados e tiveram o seu baço removido para a realização dos ensaios de fusão. Os esplenócitos dissociados foram fusionados a células de linhagens de mieloma através da utilização de polietilenoglicol com o objetivo de se obter hibridomas secretores de anticorpos monoclonais de interesse. Durante o período do trabalho nenhum hibridoma estável foi obtido, no entanto foram desenvolvidas todas as ferramentas necessárias para a obtenção do insumo. Palavras-chave: hER?, receptor de estrógeno, anticorpos policlonais, anticorpos monoclonais, proteinas recombinantes. / Abstract: Breast cancer is a disease that affects more than 49,000 women annually in Brazil. To achieve a therapeutic decision for this type of tumor, it is important to define some parameters linked to proteins present or absent in the carcinoma. Among those proteins, the estrogen receptor ? (hER?) is highlighted. The detection of estrogen receptor ? is made by immunohistochemistry and, for this technique, monoclonal antibodies against hER? are used. Since Brazil is still completely dependent on imports of this material, obtaining hibridoma lines that produce those antibodies becomes an issue of sovereignty. In this study, the hole process and tools necessary to obtain those hybridomas was developed. Starting from the total RNA of cells that produce the receptor, cDNA was produced. The encoding sequence for hER? was cloned into a plasmid from which the recombinant protein was produced in heterologous system in E. coli. This protein was fused to a histidine tag that was used for its purification by Immobilized Metal Affinity Chromatography. The purified peptide was used as antigen to immunize Balb/C mice. Animals that showed a good immune response against the antigen of interest were euthanized and had their spleen removed for fusion assay. The dissociated splenocytes were fused to myeloma cell lines by using polyethyleneglycol in order to obtain hybridomas secreting monoclonal antibodies of interest. During the study, no stable hybridoma was obtained, however have been developed all the tools necessary to obtain the desired material. Key words: hER?, estrogen receptor, polyclonal antibodies, monoclonal antibodies, recombinant proteins.

Em razão do constante aumento populacional, o nível de poluição no planeta tem crescido principalmente nos meios aquáticos. Parte destes contaminantes apresentam regulamentação, porém uma fração destes, chamados de “emergentes”, são constantemente lançados no ambiente sem nenhum controle além de não apresentarem regulamentação. Os hormônios sexuais fazem parte destes contaminantes emergentes e oferecem grande risco as diferentes formas de vida devido ao alto potencial em causar disrupção endócrina. Neste trabalho desenvolveu-se a metodologia analítica com o intuito de determinar e quantificar cinco hormônios sexuais, amplamente consumidos na reposição hormonal e contraceptivos. A determinação dos hormônios sexuais estrona (E1), β-estradiol (E2), estriol (E3), 17α-etinilestradiol (EE2) e progesterona foi realizada através da cromatografia a gás acoplada a espectrometria de massas com derivatização prévia. A derivatização dos estrógenos E1, E2, E3 e EE2 foi realizada com MSTFA-Imidazol, já a progesterona foi determinada na forma não derivatizada. Parâmetros como tempo e temperatura de derivatização, tipos de derivatizante e energia do impacto eletrônico no espectrômetro de massas, foram devidamente otimizados. A pré-concentração foi realizada por extração em fase sólida (SPE), utilizando cartuchos Oasis HLB e a validação do método foi conduzida pela avaliação dos parâmetros: linearidade, sensibilidade, seletividade, precisão, precisão intermediária, exatidão, limite de detecção e de quantificação. A amostragem de águas superficiais e efluente urbano foi realizada nos meses de agosto, setembro e outubro de 2012, nos Rios Gravataí e dos Sinos, no Arroio Dilúvio, e na estação piloto de tratamento de efluente urbano, pertencente ao Instituto de Pesquisas Hidráulicas (IPH/UFRGS). Os hormônios E1, E2 e E3 foram encontrados nas amostras em concentrações de 6,2 a 541,4 ng L-1, 29 a 46,2 ng L-1 e 37,5 a 716,8 ng L-1 respectivamente. No estudo preliminar de degradação do EE2 , foram avaliadas a fotólise direta em água purificada e indireta com utilização de íons nitrato nas concentrações 20 e 100 mg L-1, sendo as constantes da taxa de transformação 0,0128 min-1, 0,0175 min-1 e 0,0336 min-1 respectivamente. A fotodegradação também foi avaliada em diferentes matrizes: água purificada, efluente urbano e água da torneira, sendo as constantes da taxa de transformação 0,0451 min-1, 0,0227 min-1 e 0,0864 min-1 respectivamente. Os sistemas investigados seguem uma cinética de pseudo-primeira ordem. Este estudo serve de base para futuramente determinar possíveis produtos de transformação. / Due to the constant increase in population, the level of pollution on the planet has grown mainly in aquatic environments. Some of these contaminants present regulation but a fraction of these, called "emerging", besides being continuously released into the environment without any control, have no regulation. Sex hormones are part of these emerging contaminants and offer great risk the different ways of life due to their potential to cause endocrine disruption. In this work the development of analytical methodology was enhanced in order to determine and quantify five sex hormones, widely consumed in hormone replacement and contraceptives. The determination of compounds estrone (E1), β-estradiol (E2), estriol (E3), 17α-ethinylestradiol (EE2) and progesterone was performed by gas chromatography coupled with mass spectrometry with previous derivatization. Derivatization of estrogens E1, E2, E3 and EE2 was performed using MSTFA-Imidazole, while the progesterone was determined in the non-derivatized form. Parameters as temperature and time of derivatization, and types of derivatives , energy of electron impact on mass spectrometer, were properly optimized. The preconcentration was performed by solid phase extraction (SPE) using Oasis HLB cartridges. The method validation was carried out by evaluating the parameters: linearity, sensitivity, selectivity, precision, intermediate precision, accuracy, limit of detection and quantification. The sampling was performed in the months of August, September and October of 2012 in Gravataí and Sinos rivers, Dilúvio Stream and urban sewage in wastewater treatment pilot plant, which belongs to the Institute of Hydraulic Research (IPH / UFRGS ). The hormones E1, E2 and E3 were found in samples at concentrations from 6.2 to 541.4 ng L-1, from 29 to 46.2 ng L-1 and from 37.5 to 716.8 ng L-1 respectively. In the preliminary study of degradation of EE2, in purified water photolysis direct and indirect use of concentrations ions nitrate 20 and 100 mg L-1 were assessed, with transformation rate constants 0.0128 min-1, 0.0175 min-1 and 0.0336 min-1 respectively. The photodegradation in different matrices: purified water, urban wastewater and tap water also were assessed, with transformation rate constants 0.0451 min-1, 0.0227 min-1 and 0.0864 min-1 respectively. The systems investigated kinetics follow pseudo-first order. This study provides a basis to determine in the future possible transformation products.

Em razão do constante aumento populacional, o nível de poluição no planeta tem crescido principalmente nos meios aquáticos. Parte destes contaminantes apresentam regulamentação, porém uma fração destes, chamados de “emergentes”, são constantemente lançados no ambiente sem nenhum controle além de não apresentarem regulamentação. Os hormônios sexuais fazem parte destes contaminantes emergentes e oferecem grande risco as diferentes formas de vida devido ao alto potencial em causar disrupção endócrina. Neste trabalho desenvolveu-se a metodologia analítica com o intuito de determinar e quantificar cinco hormônios sexuais, amplamente consumidos na reposição hormonal e contraceptivos. A determinação dos hormônios sexuais estrona (E1), β-estradiol (E2), estriol (E3), 17α-etinilestradiol (EE2) e progesterona foi realizada através da cromatografia a gás acoplada a espectrometria de massas com derivatização prévia. A derivatização dos estrógenos E1, E2, E3 e EE2 foi realizada com MSTFA-Imidazol, já a progesterona foi determinada na forma não derivatizada. Parâmetros como tempo e temperatura de derivatização, tipos de derivatizante e energia do impacto eletrônico no espectrômetro de massas, foram devidamente otimizados. A pré-concentração foi realizada por extração em fase sólida (SPE), utilizando cartuchos Oasis HLB e a validação do método foi conduzida pela avaliação dos parâmetros: linearidade, sensibilidade, seletividade, precisão, precisão intermediária, exatidão, limite de detecção e de quantificação. A amostragem de águas superficiais e efluente urbano foi realizada nos meses de agosto, setembro e outubro de 2012, nos Rios Gravataí e dos Sinos, no Arroio Dilúvio, e na estação piloto de tratamento de efluente urbano, pertencente ao Instituto de Pesquisas Hidráulicas (IPH/UFRGS). Os hormônios E1, E2 e E3 foram encontrados nas amostras em concentrações de 6,2 a 541,4 ng L-1, 29 a 46,2 ng L-1 e 37,5 a 716,8 ng L-1 respectivamente. No estudo preliminar de degradação do EE2 , foram avaliadas a fotólise direta em água purificada e indireta com utilização de íons nitrato nas concentrações 20 e 100 mg L-1, sendo as constantes da taxa de transformação 0,0128 min-1, 0,0175 min-1 e 0,0336 min-1 respectivamente. A fotodegradação também foi avaliada em diferentes matrizes: água purificada, efluente urbano e água da torneira, sendo as constantes da taxa de transformação 0,0451 min-1, 0,0227 min-1 e 0,0864 min-1 respectivamente. Os sistemas investigados seguem uma cinética de pseudo-primeira ordem. Este estudo serve de base para futuramente determinar possíveis produtos de transformação. / Due to the constant increase in population, the level of pollution on the planet has grown mainly in aquatic environments. Some of these contaminants present regulation but a fraction of these, called "emerging", besides being continuously released into the environment without any control, have no regulation. Sex hormones are part of these emerging contaminants and offer great risk the different ways of life due to their potential to cause endocrine disruption. In this work the development of analytical methodology was enhanced in order to determine and quantify five sex hormones, widely consumed in hormone replacement and contraceptives. The determination of compounds estrone (E1), β-estradiol (E2), estriol (E3), 17α-ethinylestradiol (EE2) and progesterone was performed by gas chromatography coupled with mass spectrometry with previous derivatization. Derivatization of estrogens E1, E2, E3 and EE2 was performed using MSTFA-Imidazole, while the progesterone was determined in the non-derivatized form. Parameters as temperature and time of derivatization, and types of derivatives , energy of electron impact on mass spectrometer, were properly optimized. The preconcentration was performed by solid phase extraction (SPE) using Oasis HLB cartridges. The method validation was carried out by evaluating the parameters: linearity, sensitivity, selectivity, precision, intermediate precision, accuracy, limit of detection and quantification. The sampling was performed in the months of August, September and October of 2012 in Gravataí and Sinos rivers, Dilúvio Stream and urban sewage in wastewater treatment pilot plant, which belongs to the Institute of Hydraulic Research (IPH / UFRGS ). The hormones E1, E2 and E3 were found in samples at concentrations from 6.2 to 541.4 ng L-1, from 29 to 46.2 ng L-1 and from 37.5 to 716.8 ng L-1 respectively. In the preliminary study of degradation of EE2, in purified water photolysis direct and indirect use of concentrations ions nitrate 20 and 100 mg L-1 were assessed, with transformation rate constants 0.0128 min-1, 0.0175 min-1 and 0.0336 min-1 respectively. The photodegradation in different matrices: purified water, urban wastewater and tap water also were assessed, with transformation rate constants 0.0451 min-1, 0.0227 min-1 and 0.0864 min-1 respectively. The systems investigated kinetics follow pseudo-first order. This study provides a basis to determine in the future possible transformation products.

A menopausa é marcada por um progressivo decréscimo nos níveis hormonais sexuais circulantes, sendo que esta tem sido associada a aumento dos riscos de eventos cardiovasculares. Uma vez que o estrogênio tem sido apontado como um possível antioxidante, buscou-se verificar o efeito da terapia estrogênica na função cardiovascular e sua correlação com o estresse oxidativo. Assim, este estudo foi realizado com ratas fêmeas Wistar castradas e com reposição hormonal, onde foram investigados os efeitos do estrogênio no estresse oxidativo cardíaco e sistêmico, a produção do ânion superóxido (O2 •-) em aorta, a produção do óxido nítrico (NO) avaliado pelos seus metabólitos: nitratos (NO3) e nitritos (NO2) teciduais e plasmáticos. Foram avaliados os parâmetros hemodinâmicos e o coração foi isolado e perfundido, para a realização de curvas de Starling e isquemia seguida da reperfusão. Três grupos experimentais foram estabelecidos: Controle (CO) foi realizado simulação ovariectomia + placebo; grupo Castrado (CS) foi realizada ovariectomia + placebo; Grupo Castrado+Hormônio (CH) foi realizada a ovariectomia e recebeu 17b-estradiol. O estradiol foi administrado intramuscular (IM), intraperitonealmente (IP) e implantado subcutaneamente (transdermal) (VT). A dose utilizada nas vias IM e IP foi de 40μg/Kg de peso, ou igual volume de placebo, durante sete dias; os pellets 0,25 mg/pellet durante 21 dias de liberação contínua. Os resultados da lipoperoxidação (LPO) avaliada por quimiluminescência (QL) e as substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), demonstraram que o grupo CH apresentou menor LPO que o grupo CS, e estes valores foram semelhantes ao grupo CO, estes valores foram semelhantes tanto no tecido cardíaco, nas três vias de administração, quanto sistêmico. Quanto às enzimas antioxidantes foi encontrado que o grupo CH apresentou aumentadas as atividades das enzimas SOD, GPX, GST e alta concentração da GSH, bem como na avaliação sistêmica em relação ao CS. Na avaliação dos metabólitos do NO observamos os níveis de nitrato tecidual e plasmático apresentam-se elevados no grupo CH, e nitrito está aumentado também no plasma neste grupo. Isto reforça a idéia de que o estrogênio induz a formação do NO. A produção do O2 •-, pelo método da lucigenina, avaliou a atividade da enzima NADH/NADPH oxidase em aorta isolada. A atividade da enzima estava aumenta no grupo CH. Os animais castrados que receberam reposição hormonal mostraram, não somente, maior formação do O2 •-, mas também níveis maiores de NO que os CS. Assim, não foram observadas diferenças na avaliação hemodinâmica. A curva de Starling não mostrou diferenças entre os grupos estudados. No processo de isquemia e reperfusão, o grupo CH recuperou-se melhor quando comparado com os demais grupos, os quais mostraram uma contratura isquêmica importante. Estes resultados demonstram claramente um papel benéfico da terapia estrogênica no insulto isquêmico cardíaco, sem alterar variáveis hemodinâmicas, sendo que estas respostas coincidem com uma redução do dano oxidativo e aumento das defesas antioxidantes. / Menopause is characterized by a progressive decrease on hormonal level and is usually associated with an increase in cardiovascular disfunctions. Given that estrogen has been considered as a possible antioxidant, this work deals with experimental evaluation of the effects of estrogen withdrawal and replacement therapy on myocardial and systemic oxidative stress. Superoxide anion production and nitric oxide (NO) metabolites (nitrate and nitrite) in plasma and cardiac tissue of female Wistar rats were investigated. Hemodynamic evaluations were performed in the whole animal and analysis of Starling curves and ischemia and reperfusion effects were studies in the isolated and perfused heart. Three experimental groups were established: a) Control (CO): ovariectomy was simulated and received placebo pellets; b) Castrated (CS): bilateral ovarietomy was done and received placebo pellets; c) Castrated + hormone (CH): ovariectomy was done and 17 b-estradiol pellets were implanted. 17 b-estradiol was given by three different ways: intramusculary (IM), intraperitoneal (IP) and transdermal (VT). In the IM and IP way, the estradiol dose utilized was 40 μg/Kg bodyweight or the same volume of placebo during seven days. In the VT, 0.25 mg pellets were implanted and hormone was released during 21 days. Lipid peroxidation (LPO) was evaluated by chemiluminescence (CL) and thiobarbituric acid reactive substance (TBARS). The CH group has shown lower myocardial as well as systemic LPO than CSl, and the last was not different from CO. In terms of antioxidant enzyme activities, in the CH group was found higher SOD, GPx, GST activities and higher GSH concentration in cardiac tissue as compared to the CS ones. In the NO/metabolites evaluation, cast+horm group presented higher plasma and tissue levels of nitrate. This data reinforces the idea that estrogen induces NO formation. Superoxide anion production was estimated through lucigenin method, which evaluates NADH/NADPH oxidase activity in isolated aorta. The activity of this enzyme was enhanced in the CH group. Since not only did the group animals that received hormone replacement show higher superoxide anion formation but also higher levels of NO than CS group, no significant hemodynamic changes were observed. Analysis of Starling curves did not show differences among the three groups studied. In terms of ischemia and reperfusion, the CH group has shown the best recovery as compared to the others while CS group exhibited an important ischemic contracture. The achieved results clearly indicate cardiovascular benefits when using estrogen therapy with the isquemic cardiac damages. Additionally, no major variations in the hemodynamics variables could be observed. These results also indicate that an increase in the antioxidants defenses led to a reduction in the oxidative stress.

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-01-26Bitstream added on 2015-03-03T12:06:55Z : No. of bitstreams: 1 000801925.pdf: 804255 bytes, checksum: e3e60fdbaf828a2858d03c5f609af9d2 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A próstata não é uma glândula exclusiva do sistema reprodutor masculino sendo encontrada em diversas fêmeas de mamíferos, incluindo humanos e roedores. A fisiologia prostática é regulada por hormônios esteroides, principalmente por andrógenos e estrógenos, os quais são essenciais durante a diferenciação, crescimento e manutenção da atividade secretora da glândula. No entanto, sensíveis interferências podem predispor a glândula a desenvolver lesões ao longo da vida. A proposta desse trabalho foi avaliar a próstata de fêmeas e machos de gerbilos adultos, expostos ao disruptor endócrino Bisfenol-A (BPA) associado à testosterona durante a puberdade até a fase adulta. Para isso, machos e fêmeas com um mês de idade receberam diariamente água com bisfenol-A nas concentrações de 40?g/kg/dia e 4000 ?g/kg/dia. A droga foi diluída na água e os animais foram tratados até completarem quatro meses de idade. Aos três meses e sete dias os animais dos grupos expostos ao BPA e andrógenos receberam doses subcutâneas de cipionato de testosterona (1 mg/kg/dia) diluído em óleo mineral por um período de 21 dias. As próstatas foram coletadas para análise estruturais, citoquímicas e imunohistoquímicas. Os resultados mostraram que as próstatas de machos e fêmeas dos grupos tratados com BPA apresentaram alta taxa de proliferação celular, focos inflamatórios e crescimento hiperplásico. Nas fêmeas ocorreu uma maior ativação do receptor estrogênico alpha (ER?), enquanto nos machos uma maior imunomarcação do receptor androgênico (AR). Deste modo, pode-se concluir que a exposição ao BPA, mesmo a níveis ambientais, causa alterações morfofisiológicas na próstata de gerbilos machos e fêmeas. Esses aspectos são de grande interesse visto que é cada vez maior o número de substâncias químicas relatadas na literatura 8 capazes de alterar e predispor a glândula prostática a desenvolver patologias na vida adulta ... / The prostate is not an exclusive gland of male reproductive system, being found in several females of other mammals, including rodents and humans. The prostatic physiology is regulated by steroids hormones, mainly by androgens and estrogens, which are essential during the differentiation, growing and maintenance of the gland secretory activity. However, sensible interferences may predispose this gland to developing lesions throughout the life. Thus, the propose of this work was to evaluate the prostate of adult male and female gerbils that were exposed to the endocrine disruptor bisphenol-A (BPA) and also associated with testosterone from puberty to adult phase. To this, male and female with one month old received water with BPA (40?g/kg/day and 400 ?g/kg/day) daily. The drug was diluted in water and the animals were treated until the fourth month of age. With three months and seven days the animals of some experimental groups exposed to BPA received subcutaneous injections of cypionate testosterone (1 mg/Kg/day) diluted in mineral oil during 21 days. Then, the prostates were collected for structural, cytochemical and immunohistochemical analysis. The results showed that the prostates of males and females of BPA-exposed groups had higher values of cell proliferating, inflammatory foci and hyperplasic growing. In the female it was observed a higher estrogen receptor alpha (ER?) activation, whereas in males we noted a higher immunomarking for androgen receptor (AR). Thus, the results have shown that the exposure to BPA, even in environmental dosages, promotes morphophysiological changes in both male and female gerbil prostate. These aspects are of great concern since it has been growing the number of chemical substances reported in literature 10 that have potential to alter and predispose the prostate gland to developing diseases in adult and senile life

A menopausa é marcada por um progressivo decréscimo nos níveis hormonais sexuais circulantes, sendo que esta tem sido associada a aumento dos riscos de eventos cardiovasculares. Uma vez que o estrogênio tem sido apontado como um possível antioxidante, buscou-se verificar o efeito da terapia estrogênica na função cardiovascular e sua correlação com o estresse oxidativo. Assim, este estudo foi realizado com ratas fêmeas Wistar castradas e com reposição hormonal, onde foram investigados os efeitos do estrogênio no estresse oxidativo cardíaco e sistêmico, a produção do ânion superóxido (O2 •-) em aorta, a produção do óxido nítrico (NO) avaliado pelos seus metabólitos: nitratos (NO3) e nitritos (NO2) teciduais e plasmáticos. Foram avaliados os parâmetros hemodinâmicos e o coração foi isolado e perfundido, para a realização de curvas de Starling e isquemia seguida da reperfusão. Três grupos experimentais foram estabelecidos: Controle (CO) foi realizado simulação ovariectomia + placebo; grupo Castrado (CS) foi realizada ovariectomia + placebo; Grupo Castrado+Hormônio (CH) foi realizada a ovariectomia e recebeu 17b-estradiol. O estradiol foi administrado intramuscular (IM), intraperitonealmente (IP) e implantado subcutaneamente (transdermal) (VT). A dose utilizada nas vias IM e IP foi de 40μg/Kg de peso, ou igual volume de placebo, durante sete dias; os pellets 0,25 mg/pellet durante 21 dias de liberação contínua. Os resultados da lipoperoxidação (LPO) avaliada por quimiluminescência (QL) e as substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), demonstraram que o grupo CH apresentou menor LPO que o grupo CS, e estes valores foram semelhantes ao grupo CO, estes valores foram semelhantes tanto no tecido cardíaco, nas três vias de administração, quanto sistêmico. Quanto às enzimas antioxidantes foi encontrado que o grupo CH apresentou aumentadas as atividades das enzimas SOD, GPX, GST e alta concentração da GSH, bem como na avaliação sistêmica em relação ao CS. Na avaliação dos metabólitos do NO observamos os níveis de nitrato tecidual e plasmático apresentam-se elevados no grupo CH, e nitrito está aumentado também no plasma neste grupo. Isto reforça a idéia de que o estrogênio induz a formação do NO. A produção do O2 •-, pelo método da lucigenina, avaliou a atividade da enzima NADH/NADPH oxidase em aorta isolada. A atividade da enzima estava aumenta no grupo CH. Os animais castrados que receberam reposição hormonal mostraram, não somente, maior formação do O2 •-, mas também níveis maiores de NO que os CS. Assim, não foram observadas diferenças na avaliação hemodinâmica. A curva de Starling não mostrou diferenças entre os grupos estudados. No processo de isquemia e reperfusão, o grupo CH recuperou-se melhor quando comparado com os demais grupos, os quais mostraram uma contratura isquêmica importante. Estes resultados demonstram claramente um papel benéfico da terapia estrogênica no insulto isquêmico cardíaco, sem alterar variáveis hemodinâmicas, sendo que estas respostas coincidem com uma redução do dano oxidativo e aumento das defesas antioxidantes. / Menopause is characterized by a progressive decrease on hormonal level and is usually associated with an increase in cardiovascular disfunctions. Given that estrogen has been considered as a possible antioxidant, this work deals with experimental evaluation of the effects of estrogen withdrawal and replacement therapy on myocardial and systemic oxidative stress. Superoxide anion production and nitric oxide (NO) metabolites (nitrate and nitrite) in plasma and cardiac tissue of female Wistar rats were investigated. Hemodynamic evaluations were performed in the whole animal and analysis of Starling curves and ischemia and reperfusion effects were studies in the isolated and perfused heart. Three experimental groups were established: a) Control (CO): ovariectomy was simulated and received placebo pellets; b) Castrated (CS): bilateral ovarietomy was done and received placebo pellets; c) Castrated + hormone (CH): ovariectomy was done and 17 b-estradiol pellets were implanted. 17 b-estradiol was given by three different ways: intramusculary (IM), intraperitoneal (IP) and transdermal (VT). In the IM and IP way, the estradiol dose utilized was 40 μg/Kg bodyweight or the same volume of placebo during seven days. In the VT, 0.25 mg pellets were implanted and hormone was released during 21 days. Lipid peroxidation (LPO) was evaluated by chemiluminescence (CL) and thiobarbituric acid reactive substance (TBARS). The CH group has shown lower myocardial as well as systemic LPO than CSl, and the last was not different from CO. In terms of antioxidant enzyme activities, in the CH group was found higher SOD, GPx, GST activities and higher GSH concentration in cardiac tissue as compared to the CS ones. In the NO/metabolites evaluation, cast+horm group presented higher plasma and tissue levels of nitrate. This data reinforces the idea that estrogen induces NO formation. Superoxide anion production was estimated through lucigenin method, which evaluates NADH/NADPH oxidase activity in isolated aorta. The activity of this enzyme was enhanced in the CH group. Since not only did the group animals that received hormone replacement show higher superoxide anion formation but also higher levels of NO than CS group, no significant hemodynamic changes were observed. Analysis of Starling curves did not show differences among the three groups studied. In terms of ischemia and reperfusion, the CH group has shown the best recovery as compared to the others while CS group exhibited an important ischemic contracture. The achieved results clearly indicate cardiovascular benefits when using estrogen therapy with the isquemic cardiac damages. Additionally, no major variations in the hemodynamics variables could be observed. These results also indicate that an increase in the antioxidants defenses led to a reduction in the oxidative stress.