Orientadora : Profª Drª Maria da Graça Bicalho / Co-orientador : Prof. Dr. Sandro Carvalho Santos / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética. Defesa: Curitiba, 25/03/2014 / Inclui referências / Área de concentração : Genética / Resumo: O papel de HLA-G em meio a mecanismos de imunotolerância vem sendo cada vez mais elucidado. A sua atuação na imunomodulação se extende desde a interface materno-fetal, a condições patológicas, assim como em transplantes de coração, rim, fígado e pâncreas. O HLA-G apresenta isoformas que podem ser expressas tanto ligadas a membrana celular, como solúveis (sHLA-G), podendo ser esta a forma detectada circulante no plasma. A secreção das moléculas HLA-G ocorre por meio de células que estão envolvidas nos mecanismos específicos de inibição da resposta imune. Polimorfismos genéticos também são observados no gene HLA-G influenciando a sua função biológica através da alteração dos níveis de transcrição gênica ou até alterando a afinidade de HLA-G com seus ligantes. Neste estudo foi investigado a influência de HLA-G no perfil imunológico de pacientes transplantados renais. No total 100 pacientes pertencentes ao HUEC (Hospital Univesitário Evangélico de Curitiba) foram genotipados para HLA-G e, dentre estes, 36 pacientes foram monitorados do pré ao pós-transplante com relação aos níveis de sHLA-G no plasma. A genotipagem foi realizada utilizando o kit para HLA-G da SBTcomercial (GenDx) e a quantificação utilizando o kit ELISA (Exbio, Praga, República Checa) para as isoformas mais abundantes: o sHLA-G1 e - G5. As freqüências alélicas observadas foram de acordo com o relatado previamente para as populações brasileiras, com exceção de seis alelos (G*01:01:15 , G*01:01:17 , G*01:01:20 , G*01:04:03, G*01:04:05 e G*01:08), que não tinham sido descritos anteriormente. Ainda, foram identificados dois novos alelos HLA-G, cada um compondo o genótipo heterozigoto de dois pascientes transplantados renais. Os níveis de sHLA-G quantificados apresentaram variação expressiva do pré ao pós-transplante entre os indivíduos transplantados sensibilizados comparados àqueles indivíduos dessensibilizados (tratados via protocolo de indução com ATG). Com os resultados deste estudo, esperamos melhor explicar o papel do HLA-G em relação ao aumento da sobrevida de aloenxertos, assim como auxiliar na exploração desta molécula como uma potencial biomarcadora positiva da resposta imune dos pacientes transplantados em relação aos protocolos de imunossupressão à que são submetidos. Palavras-chaves: Transplante renal. HLA-G. Imunotolerância. / Abstract: The role of HLA-G through the immune tolerance mechanisms has been increasingly elucidated. Its performance in immunomodulation extends from the maternal-fetal interface, in pathological conditions, as well as in heart, kidney, liver and pancreas transplants. HLA-G has isoforms that can be expressed and stays membrane bound or as a soluble (sHLA-G) isoform, which can be detected in the plasma of patients. The secretion of sHLA-G occurs through immune cells involved in the specific inhibition mechanisms of immune response. There are also genetic polymorphisms observed in HLA-G gene, which can influence its biological function by altering transcription levels of this gene or even altering the affinity of HLA-G with ligants. In this study we investigated the influence of HLA-G in immune profile from kidney transplant patients. In total of 100 patients belonging to HUEC were genotyped and, among these, 36 transplant patients were monitored from pre to post-transplant with respect to sHLA-G levels in plasma. Genotyping was performed using the commercial SBT kit for HLA-G (GenDx) and quantified using the ELISA kit (Exbio , Prague , Czech Republic) for the most abundant isoforms: sHLA-G1 and -G5. The allele frequencies were in accordance with previously studies reported for Brazilian populations, with the exception of six alleles (G*01:01:15 , G*01:01:17 , G*01:01:20 , G*01:04:03, G*01:04:05 e G*01:08), which had not been previously described. Furthermore, two new HLA-G alleles have been identified, each one composing the heterozygous genotype of two kidney transplant patients. The quantified levels of sHLA-G have had significant variations in the pre to post-transplant from sensitized individuals when compared with desensitized individuals (treated by an induction protocol using ATG). Thus with the results of this study, we hope to better explain the role of HLA-G in relation to the increased survival of allografts, as well as support in the exploration of this molecule as a positive potential marker of the transplant patients response to immunosuppression protocols. Key-words: Kidney transplant. HLA-G. Immunotolerance.

Orientadora : Profª Drª Maria da Graça Bicalho / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética. Defesa: Curitiba, 27/02/2012 / Inclui bibliografia / Resumo: O cancer cervical (CC) e o segundo cancer que mais afeta mulheres no mundo todo, ele progride a partir de lesoes no cervix uterino causadas pelo virus HPV, estas lesoes sao denominadas neoplasias intraepiteliais cervicais (NIC). As NICs são classificadas em lesao e baixo grau (NIC I) e lesoes de alto grau (NIC II e III). O desenvolvimento do CC depende da persistencia do virus no organismo e esta persistencia esta diretamente relacionada com a eficiencia da resposta imune contra as celulas infectadas. O antigeno leucocitario humano (HLA)-G e um gene HLA de classe I nao classico que apresenta um papel imunorregulatorio. Ele e capaz de inibir a resposta imune quando interage com receptores inibitorios presentes nas celulas Natural Killer e em Linfocitos T. A proteina HLA-G pode ser expressa na forma ligada a membrana celular, ou soluvel (sHLA-G). A expressao de HLA-G ja foi relacionada com diversas patologias e diferentes tipos de canceres como uma estrategia de escape do sistema imune. Neste estudo o objetivo foi investigar a associacao de polimorfismos do gene HLA-G e sua expressao soluvel com o desenvolvimento de lesoes cervicais. A amostra constitui de 100 mulheres diagnosticadas com NIC II, 101 NIC III, e 106 mulheres saudaveis, negativas para NIC. Foi feito a tipagem alelicas para o gene HLA-G e para o polimorfismo de 14 pb presente no exon 8 deste gene; alem disso foi realizada a quantificacao serica de sHLA-G. Nao foi registrada associacao entre a frequencia dos alelos identificados na amostra, ou do polimorfismo de 14 pb e a quantificacao de sHLA-G com predisposicao ou protecao ao desenvolvimento de lesoes cervicais. Tambem nao foi possivel definir associacoes entre os niveis sericos de sHLA-G com os alelos, ou com a presenca ou ausencia dos 14 pb. Palavras chave: HLA-G, sHLA-G, HPV, NIC e cancer cervical. / Abstract: Cervical cancer (CC) is the second cancer that most affects women worldwide, it progresses from lesions in the uterine cervix caused by HPV virus, these lesions are called cervical intraepithelial neoplasia (CIN). CINs are classified in low-grade (CIN I) and high-grade lesions (CIN II and III). The development of the CC depends on the persistence of the virus in the body and this persistence is directly related to the efficiency of the immune response against infected cells. Human leukocyte antigen (HLA)-G is an HLA class I non-classic that presents an immunoregulatory role. It is able to inhibit the immune response when interacting with inhibitory receptors present on natural killer cells and T lymphocytes The HLA-G protein can be expressed in the membrane bound form, or soluble (sHLA-G). The expression of HLA-G has been associated with several diseases and different types of cancers as a strategy to escape from the immune system. In this study the aim was to investigate the association of polymorphisms of the HLA-G gene and its soluble expression with the development of cervical lesions. The sample consisted of 100 women diagnosed with CIN II, 101 with CIN III, and 106 healthy women negative for CIN. Allele typing for the gene HLA-G and for the 14 bp polymorphism present in exon 8 of this gene was done, also serum sHLA-G was quantified. No association was recorded between the frequency of the alleles identified in the sample, or 14 bp polymorphism and quantification of sHLA-G with predisposition or protection to the development of cervical lesions. Nor was it possible to define associations between serum levels of sHLA-G with the alleles, or the presence or absence of 14 bp. Keywords: HLA-G, sHLA-G, HPV, NIC and cervical cancer.