Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-01-06T14:52:09Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EstudoExpressaoProteinas.pdf: 1580066 bytes, checksum: 8cad297a638ff7a8df5d3d48fcaf4a0c (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-01-10T14:13:45Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EstudoExpressaoProteinas.pdf: 1580066 bytes, checksum: 8cad297a638ff7a8df5d3d48fcaf4a0c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-10T14:13:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EstudoExpressaoProteinas.pdf: 1580066 bytes, checksum: 8cad297a638ff7a8df5d3d48fcaf4a0c (MD5) Previous issue date: 2015-11-10 / O câncer de pênis é uma doença rara em nações desenvolvidas, sendo mais comum em regiões em desenvolvimento figurando como um importante problema de saúde pública, por ter um caráter mutilante, que pode acarretar problemas psicológicos e sociais ao paciente acometido. O fator prognóstico mais importante do câncer de pênis é o comprometimento linfonodal e a presença de metástases à distância. Os pacientes que apresentam estas características raramente sobrevivem por cinco anos. Por outro lado, nos estadios iniciais da doença o prognóstico é bom, obtendo-se cura na maioria dos casos. Na busca por indicadores prognósticos mais confiáveis, inúmeros genes/proteínas associados à carcinogênese peniana têm sido avaliados vislumbrando um melhor entendimento deste processo, para que métodos mais precisos de diagnósticos identifiquem os pacientes com doenças mais agressivas e de modo mais confiável, e permitindo um tratamento primário mais eficaz e uma maior sobrevida. Algumas classes de marcadores epiteliais e mesenquimais têm sido utilizadas para determinar a presença de transição epitélio mesenquimal em tecidos neoplásicos. Essas classes abrangem proteínas de superfície como a E-caderina, e marcadores do citoesqueleto, como vimentina, β-catenina e fatores de transcrição como Snail, Slug e Twist1. Com este enfoque, realizamos um estudo retrospectivo, onde foram analisados um total de 109 pacientes do Hospital Ophir Loyola, no período de janeiro 2012 a novembro 2014. Foi investigada a expressão proteica do Twist1, Kai1 e E-caderina em tecidos de pênis com lesões benignas e malignas, buscando evidenciar o padrão de imunorreatividade destas, assim como correlacionar este padrão quanto às características de progressão e invasão do câncer de pênis bem como características clínico-patológicas deste tumor. Em relação a E-caderina, 48,6% dos pacientes com câncer de pênis apresentavam expressão reduzida ou ausente. Não houve associação da expressão diminuida da E-caderina com outros fatores clínicos ou patológicos, tendo este resultado significado estatistico A expressão aumentada do Twist1 também não esteve associada com fatores clínicos ou patológico, bem como o KAI1. Houve relação estatística entre diminuição de expressão E-caderina e Twist1. Obtivemos um resultado inconclusivo da entre a expressão diminuída de E-caderina e Kai1, e não houve significância estatística da análise entre as proteínas Twist1 e Kai1. / Penile neoplasms are a rare disease in developed nations and occur more in the development areas, which states as a major problem of public health by its mutilating features that may lead to social and psychological problems for the patient. The most important prognosis factor are the lymph node involvement and the presence of distance metastasis. Those patiens who have these features rarely survive for five years. By the other side, the prognosis is good at the initial phases and the cure is obtained in most of the cases. In the search for more reliable prognosis indicators, countless of gens and proteins associated with the penile carcinogenesis have been evaluated for a better understanding of the process, in order to achieve more accurate diagnosis methods to identify patients with aggressive disease, then submit them to a more efficient primarily treatment and a better survive rate. Some groups of epithelial and mesenchymal markers have been used to determinate the transition of mesenchymal epithelium in neoplasm tissues. Those groups include surface proteins like E-cadherin and cytoskeleton markers, as vimentin and β-catenin, and transcription factors, as Snail, Slug and Twist1. With this approach, we did a retrospective study which was analyzed 109 patients from Ophir Loyola Hospital, between January 2012 to November 2014. It was investigated the protein expression of Twist1, Kai1 and E-cadherin in penile tissues with benign and malign lesions to look for evidence of the immunoreactivity pattern and correlate that immunoreactivity pattern with the progression and invasion features of the penile neoplasms and other clinicopathological features of the studied tumor. In relation to E-cadherin, 48,6% of the patients had lower expression of this protein when compared to non-neoplasms tissues, this result showed statistical significance. But the association of the abnormal expression of E-cadherin with others clinicopathoogical factors was not found. The higher expression of Twist1 it was not associated with clinicopathological factors and the KAI1. There was statistical significance when we simultaneously compared the defective expression of E-cadherin and Kai1 and we obtained an inconclusive outcome about the association between them and there was not statistical significance among the analysis of the Twist1 e Kai1 proteins.

Orientador: Wilma De Grava Kempinas / Texto em português e inglês / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-20T10:45:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Perobelli_JulianaElaine_D.pdf: 9640563 bytes, checksum: dea242a152c4f569490c3cdf5d5010c1 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Os desreguladores endócrinos são agentes químicos capazes de agir como agonistas ou antagonistas dos hormônios endógenos, interferindo na homeostasia do organismo. Como o sistema endócrino tem papel crítico sobre o desenvolvimento e função do sistema genital, este pode ser considerado um alvo particularmente vulnerável a perturbações endócrinas. A literatura apresenta dados sobre a exposição aos antiandrogênicos durante a vida pré-natal e adulta e suas consequências sobre a função reprodutiva de machos. Entretanto, poucos estudos se atentaram para as consequências da privação androgênica durante a pré-puberdade sobre o sistema genital masculino. A pré-puberdade corresponde à fase em que o epidídimo, órgão reprodutor masculino responsável pela maturação e estocagem dos espermatozoides, passa por importantes mudanças morfofuncionais, além de consistir em período de maior susceptibilidade aos desreguladores endócrinos. O objetivo do presente estudo foi avaliar as possíveis consequências da privação de andrógenos durante a pré-puberdade sobre a morfofisiologia do sistema genital masculino de ratos púberes e adultos, com ênfase sobre o epidídimo e qualidade espermática. A escolha por um agente antiandrogênico foi devida à vasta exposição ambiental e ocupacional da população mundial a este grupo de contaminantes. Ratos machos da variedade Wistar foram alocados em: grupo flutamida (25mg/Kg/dia de flutamida, via oral, do dia pós natal 21 ao 44) e controle (óleo de milho, via oral, durante o mesmo período). Os animais foram avaliados aos 50 dias e 75 dias de idade. Foram analisados os níveis séricos dos hormônios sexuais (LH, FSH e testosterona), níveis de testosterona intratesticular, peso de órgãos, histologia testicular e epididimária, imunohistoquímica para marcação de receptor androgênico (AR), proteína espermática 22 (SP22), calmodulina (CALM) e Rab11A em tecido epididimário, além de marcação de CALM e Rab11A no testículo e western blot para AR no epidídimo. Avaliações adicionais foram realizadas nos animais de 75 dias, como comportamento sexual, fertilidade após acasalamento natural e inseminação artificial, motilidade e morfologia espermática, contagens espermáticas nos testículos e epidídimos, análise do perfil proteico de membrana espermática e contagem de células de Sertoli. No grupo tratado com flutamida, os animais púberes apresentaram redução do peso dos órgãos sexuais, relacionado à diminuição na testosterona sérica, além de alteração no padrão de imunomarcação para AR e CALM no epidídimo. Os demais parâmetros foram comparáveis entre os grupos experimentais. Nos animais de 75 dias de idade que receberam flutamida observou-se alteração no padrão de imunomarcação para AR, CALM e Rab11A no epidídimo, diminuição do potencial de fertilidade após inseminação artificial, comprometimento da motilidade espermática, diminuição do número de espermatozoides na cabeça/corpo e cauda do epidídimo, aceleração do trânsito espermático nestas regiões epididimárias e alteração na concentração de CALM e Rab11A na membrana espermática. Os demais parâmetros foram similares entre os grupos experimentais. Os resultados obtidos mostram que a privação de andrógenos durante a pré-puberdade causou alterações na qualidade dos espermatozóides prejudicando o potencial de fertilidade dos indivíduos na idade adulta. Tais resultados parecem estar associados a mudanças no perfil proteico da membrana dos espermatozoides e na expressão de determinadas proteínas no epitélio epididimário, sugerindo que o desenvolvimento pós-natal do epidídimo pode ter sido comprometido, acarretando danos funcionais permanentes ao órgão / Abstract: Endocrine disrupters are chemicals that can act as agonists or antagonists of endogenous hormones, interfering with the homeostasis of the organism. Since the endocrine system plays a critical role in the development and function of the male reproductive system, this is an especially vulnerable target of potential endocrine perturbations. The literature presents data on exposure to antiandrogens during the prenatal life and adulthood and its consequences on the male reproductive function. However, few studies have investigated the possible effects on the male reproductive system of rats after androgen deprivation during prepuberty. The prepubertal period comprehends the phase in which the epididymis, male reproductive organ responsible for the sperm maturation and storage, undergoes significant morphofunctional changes, besides being a period of more vulnerability to endocrine disrupters, possibly due to hormonal imprinting. The aim of this study was to evaluate the possible consequences of androgen deprivation during the prepuberty on morphophysiology of male reproductive system of pubertal and adult rats, focusing on the epididymis and sperm quality. The choice of an antiandrogen agent was due to extensive environmental and occupational exposure of the general population to this group of contaminants. For this purpose, Wistar male rats were divided into flutamide group (flutamide 25mg/Kg/day, orally, from postnatal day 21 to 44) and control group (corn oil, orally, during the same period). The animals were evaluated at 50 days and 75 days of age. At both ages it was evaluated the serum sexual hormone levels, intra-testicular testosterone levels, organ weights, testicular and epididymal histopathology, immunohistochemistry for androgen receptor (AR), sperm protein 22 (SP22), calmodulin (CALM) and Rab11A in epididymal tissue, besides immunostaining for CALM and Rab11A in the testis and Western blot for AR in the epididymis. Furthermore, additional parameters were assessed in 75-day-old animals, such as sexual behavior, fertility after natural mating and after artificial insemination, sperm motility and morphology, sperm counts in the testis and epididymis, proteomic of sperm membrane by bi-dimensional electrophoresis and Sertoli cells counts. Pubertal animals showed reduced reproductive organs weight, probably due to a decrease in serum testosterone and changes in the pattern of immunostaining for AR and CALM in the epididymis. The other parameters were comparable between the groups. In animals at 75 days old changes in the pattern of immunostaining for AR, CALM and Rab11A in the epididymis, decreased fertility potential after artificial insemination, impaired sperm motility, decrease in the sperm numbers in the caput/corpus and cauda epididymis, acceleration of sperm transit time through these epididymal regions, and modifications in three proteins of sperm membrane were observed. Other parameters were similar between the groups. The results show that androgen deprivation during prepuberty impairs sperm quality affecting the fertility potential of the animals at adulthood. These results seem to be related to the changes in protein profile of sperm membrane and protein expression in the epididymis, suggesting that the postnatal development of the epididymis may have been compromised, causing permanent damage to the organ function / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

A disfunção erétil (DE) tem alta prevalência entre hipertensos e tem sido considerada marcador precoce de risco cardiovascular. A presença e gravidade da DE bem como a resposta clínica aos inibidores da fosfodiesterase tipo 5 (PDE5) parecem depender da biodisponibilidade do óxido nítrico (NO) endotelial e da extensão da doença aterosclerótica. O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta clínica da vardenafila usada em dois regimes terapêuticos em hipertensos com DE vasculogênica e sem doença cardiovascular maior, correlacionando a gravidade da DE e a eficácia da vardenafila com dados antropométricos, laboratoriais, escore de risco cardiovascular e parâmetros vasculares funcionais e estruturais. A resposta clínica à vardenafila nos dois regimes foi avaliada conforme o percentual de respostas positivas à questão 3 do Perfil do Encontro Sexual (PES3). Os parâmetros vasculares considerados foram a espessura médio-intimal (EMI) da carótida comum, a dilatação mediada pelo fluxo (DMF) da artéria braquial e a dilatação nitrato-mediada (DNM). Foram incluídos 100 homens hipertensos com idade entre 50 e 70 anos, sendo 74 portadores de DE vasculogênica e 26 com função erétil normal que serviram de grupo controle. Nos pacientes com DE, o índice de massa corporal, relação cintura-quadril, EMI da carótida, níveis séricos de triglicerídeos, colesterol total e LDL foram significativamente maiores que no grupo controle. Após o uso de vardenafila on demand (fase 1), os pacientes com mais de 50% de respostas positivas ao PES3 ou 50% de respostas afirmativas e um incremento de 6 pontos ou mais em relação ao Índice Internacional de Função Erétil (IIEF-FE) basal e/ou resposta positiva a Questão de Avaliação Global (QAG), foram considerados respondedores. O escore do IIEF-FE basal se correlacionou negativamente com a EMI da carótida (r=-0,48, P<0,001) e com o escore de Framingham (r= -0,41, P<0,001) no grupo com DE. Houve forte correlação positiva entre a resposta clínica à vardenafila com a DMF (r= 0,70, P<0,001), que não se observou entre o sub-grupo de diabéticos. Os 35 pacientes considerados não-respondedores na fase 1 foram randomizados e, em desenho duplo-cego, receberam vardenafila ou placebo diariamente durante cinco semanas, podendo usar 10 mg de vardenafila uma hora antes da atividade sexual (fase2). Houve resposta clínica positiva em 38,8% dos que receberam a vardenafila na fase 2 e esta resposta se correlacionou com a frequência sexual (r= 0,68, P<0,01) e com o escore de Framingham (r= -0,65, P<0,01), com a EMI da carótida (r= -0,61, P=0,01) e com o LDL-colesterol (r= -0,64, P<0,01). A vardenafila foi bem tolerada em ambos os regimes terapêuticos. Concluímos que nessa amostra de hipertensos, a gravidade da DE foi relacionada a parâmetros vasculares estruturais (EMI), enquanto a resposta clínica à vardenafila on demand foi mais diretamente dependente da função vascular momentânea (DMF). Houve benefício na utilização de vardenafila diariamente com o objetivo de resgatar a eficácia do inibidor quanto à melhora do desempenho sexual. A falta de eficácia clínica ao inibidor da PDE5 em ambos os regimes terapêuticos pode servir como marcador clínico que identifica homens hipertensos com um risco cardiovascular aumentado. / Erectile dysfunction (ED) is a high prevalent disease in hypertensive subjects and has been considered an early cardiovascular risk marker. EDs presence and severity, as well as clinical response to phosfodiesterase type 5 (PDE5) inhibitors, vary according to nitric oxide (NO) availability and atherosclerosis extension. We investigated whether vasculogenic ED severity and clinical response to vardenafil used on demand or continuously were associated with structural and functional vascular changes in patients with uncomplicated hypertension. Our main efficacy criterion was per patient percentage of positive answers on Sexual Encounter Profile question 3(SEP3). Vascular parameters considered were intima-media thickness (IMT), flow-mediated dilation (FMD) on brachial artery and nitrate-mediated dilation. A total of 100 hypertensive men aging between 50 and 70 years were included. Among these patients, 74 had vasculogenic ED and 26 presented normal erectile function according to erectile domain of International Index of Erectile Function (IIEF-EF). Among those with ED, body mass index, waist-rip ratio, carotid IMT, triglycerides, total cholesterol and LDL-cholesterol were significantly higher than controls. After vardenafil on demand usage during phase 1, patients with more than 50% of positive answers on SEP3 or 50% and more than 6 points on IIEF basal score or positive answer to global evaliation question were considered responders. IIEF basal score correlated inversely with carotid IMT (r=-0.48, P<0.001) and with Framingham risk score (r= -0.41, P<0.001) in ED group. Clinical response to vardenafil strongly correlated with FMD (r= 0.70, P<0.001), except among diabetics. Non responders (n=35) on phase 1 were included on phase 2 when, after randomization, they received vardenafil 10 mg nightly or placebo during five weeks. Open vardenafil on demand were allowed one hour before sexual intercourse, and 38.8% of active group improved and became responders to vardenafil. Clinical response on phase 2 correlated with sexual frequency (r= 0.68, P<0.01), Framingham score (r= -0.65, P<0.01), carotid IMT (r= -0.61, P=0.01) and LDL-cholesterol (r= -0.64, P<0.01). We concluded that in hypertensive males with vasculogenic ED and no other clinical evidence of atherosclerosis, ED severity correlated with structural parameters (carotid IMT), while phosphodiesterase-5 effectiveness correlated with functional vascular aspects (brachial FMD). There were positive impact with continuous vardenafil on non responders to on demand regime and that could be an option to salvage strategy. Lack of PDE5 inhibitor efficacy in both therapeutic strategies could point out to higher cardiovascular risk and could be considered a useful clinical marker.

A disfunção erétil (DE) tem alta prevalência entre hipertensos e tem sido considerada marcador precoce de risco cardiovascular. A presença e gravidade da DE bem como a resposta clínica aos inibidores da fosfodiesterase tipo 5 (PDE5) parecem depender da biodisponibilidade do óxido nítrico (NO) endotelial e da extensão da doença aterosclerótica. O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta clínica da vardenafila usada em dois regimes terapêuticos em hipertensos com DE vasculogênica e sem doença cardiovascular maior, correlacionando a gravidade da DE e a eficácia da vardenafila com dados antropométricos, laboratoriais, escore de risco cardiovascular e parâmetros vasculares funcionais e estruturais. A resposta clínica à vardenafila nos dois regimes foi avaliada conforme o percentual de respostas positivas à questão 3 do Perfil do Encontro Sexual (PES3). Os parâmetros vasculares considerados foram a espessura médio-intimal (EMI) da carótida comum, a dilatação mediada pelo fluxo (DMF) da artéria braquial e a dilatação nitrato-mediada (DNM). Foram incluídos 100 homens hipertensos com idade entre 50 e 70 anos, sendo 74 portadores de DE vasculogênica e 26 com função erétil normal que serviram de grupo controle. Nos pacientes com DE, o índice de massa corporal, relação cintura-quadril, EMI da carótida, níveis séricos de triglicerídeos, colesterol total e LDL foram significativamente maiores que no grupo controle. Após o uso de vardenafila on demand (fase 1), os pacientes com mais de 50% de respostas positivas ao PES3 ou 50% de respostas afirmativas e um incremento de 6 pontos ou mais em relação ao Índice Internacional de Função Erétil (IIEF-FE) basal e/ou resposta positiva a Questão de Avaliação Global (QAG), foram considerados respondedores. O escore do IIEF-FE basal se correlacionou negativamente com a EMI da carótida (r=-0,48, P<0,001) e com o escore de Framingham (r= -0,41, P<0,001) no grupo com DE. Houve forte correlação positiva entre a resposta clínica à vardenafila com a DMF (r= 0,70, P<0,001), que não se observou entre o sub-grupo de diabéticos. Os 35 pacientes considerados não-respondedores na fase 1 foram randomizados e, em desenho duplo-cego, receberam vardenafila ou placebo diariamente durante cinco semanas, podendo usar 10 mg de vardenafila uma hora antes da atividade sexual (fase2). Houve resposta clínica positiva em 38,8% dos que receberam a vardenafila na fase 2 e esta resposta se correlacionou com a frequência sexual (r= 0,68, P<0,01) e com o escore de Framingham (r= -0,65, P<0,01), com a EMI da carótida (r= -0,61, P=0,01) e com o LDL-colesterol (r= -0,64, P<0,01). A vardenafila foi bem tolerada em ambos os regimes terapêuticos. Concluímos que nessa amostra de hipertensos, a gravidade da DE foi relacionada a parâmetros vasculares estruturais (EMI), enquanto a resposta clínica à vardenafila on demand foi mais diretamente dependente da função vascular momentânea (DMF). Houve benefício na utilização de vardenafila diariamente com o objetivo de resgatar a eficácia do inibidor quanto à melhora do desempenho sexual. A falta de eficácia clínica ao inibidor da PDE5 em ambos os regimes terapêuticos pode servir como marcador clínico que identifica homens hipertensos com um risco cardiovascular aumentado. / Erectile dysfunction (ED) is a high prevalent disease in hypertensive subjects and has been considered an early cardiovascular risk marker. EDs presence and severity, as well as clinical response to phosfodiesterase type 5 (PDE5) inhibitors, vary according to nitric oxide (NO) availability and atherosclerosis extension. We investigated whether vasculogenic ED severity and clinical response to vardenafil used on demand or continuously were associated with structural and functional vascular changes in patients with uncomplicated hypertension. Our main efficacy criterion was per patient percentage of positive answers on Sexual Encounter Profile question 3(SEP3). Vascular parameters considered were intima-media thickness (IMT), flow-mediated dilation (FMD) on brachial artery and nitrate-mediated dilation. A total of 100 hypertensive men aging between 50 and 70 years were included. Among these patients, 74 had vasculogenic ED and 26 presented normal erectile function according to erectile domain of International Index of Erectile Function (IIEF-EF). Among those with ED, body mass index, waist-rip ratio, carotid IMT, triglycerides, total cholesterol and LDL-cholesterol were significantly higher than controls. After vardenafil on demand usage during phase 1, patients with more than 50% of positive answers on SEP3 or 50% and more than 6 points on IIEF basal score or positive answer to global evaliation question were considered responders. IIEF basal score correlated inversely with carotid IMT (r=-0.48, P<0.001) and with Framingham risk score (r= -0.41, P<0.001) in ED group. Clinical response to vardenafil strongly correlated with FMD (r= 0.70, P<0.001), except among diabetics. Non responders (n=35) on phase 1 were included on phase 2 when, after randomization, they received vardenafil 10 mg nightly or placebo during five weeks. Open vardenafil on demand were allowed one hour before sexual intercourse, and 38.8% of active group improved and became responders to vardenafil. Clinical response on phase 2 correlated with sexual frequency (r= 0.68, P<0.01), Framingham score (r= -0.65, P<0.01), carotid IMT (r= -0.61, P=0.01) and LDL-cholesterol (r= -0.64, P<0.01). We concluded that in hypertensive males with vasculogenic ED and no other clinical evidence of atherosclerosis, ED severity correlated with structural parameters (carotid IMT), while phosphodiesterase-5 effectiveness correlated with functional vascular aspects (brachial FMD). There were positive impact with continuous vardenafil on non responders to on demand regime and that could be an option to salvage strategy. Lack of PDE5 inhibitor efficacy in both therapeutic strategies could point out to higher cardiovascular risk and could be considered a useful clinical marker.