Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. CIPHARMA, Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Karine Ribeiro (karinelg.ribeiro@gmail.com) on 2015-10-15T18:02:49Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoAtividadeAnti-hiperuricêmica.pdf: 1203830 bytes, checksum: 71d1bf3a904fa9ba9d24ea46af0eab5e (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-11-04T17:15:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoAtividadeAnti-hiperuricêmica.pdf: 1203830 bytes, checksum: 71d1bf3a904fa9ba9d24ea46af0eab5e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-04T17:15:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoAtividadeAnti-hiperuricêmica.pdf: 1203830 bytes, checksum: 71d1bf3a904fa9ba9d24ea46af0eab5e (MD5) Previous issue date: 2014 / A artrite gotosa, ou gota, consiste num processo lento e reincidente de inflamação provocado pelo acúmulo e precipitação de cristais de urato nas articulações dando início à patologia provocando dor intensa, desconforto e debilidade física nos pacientes. A procura por novas opções de tratamento para a artrite gotosa vem aumentando consideravelmente e se justifica diante dos efeitos adversos e, muitas vezes inadequação do tratamento em uso clínico atualmente. A espécie Sparattosperma leucanthum, popularmente conhecida como “cinco-folhas”, pertencente ao pequeno gênero Sparattosperma é amplamente distribuída pelo Brasil, sendo considerada uma planta nativa. Poucos estudos relatam o estudo fitoquímico da espécie Sparattosperma leucanthum, apesar de ser utilizada na medicina popular brasileira para tratamento de inflamações, reumatismo e como depurativa do sangue. No presente trabalho os extratos acetato etílico, metanólico e aquoso de S. leucanthum foram avaliados quanto às suas atividades de inibição da enzima xantina oxidase e antioxidante in vitro, e atividades anti-hiperuricêmica e antiartrite gotosa in vivo. Para avaliar o efeito dos extratos sobre os níveis sanguíneos de ácido úrico, foi utilizado modelo de hiperuricemia induzida por oxonato de potássio em camundongos Swiss. Para o teste de atividade inibitória da enzima xantina oxidase in vitro, o extrato acetato etílico apresentou atividade significativa na concentração de 100 μg/mL. Nos ensaios in vivo, o extrato aquoso na dose de 125 mg/kg reduziu significativamente os níveis séricos de ácido úrico e também foi capaz de inibir a enzima xantina hepática (XOD). O extrato metanólico foi ativo quanto à avaliação da atividade anti-hiperuricêmica em todas as doses avaliadas, porém somente na dose de 500 mg/kg este extrato mostrou atividade sobre a XOD. O extrato acetato etílico reduziu os níveis séricos de ácido úrico de camundongos hiperuricêmicos nas doses de 125, 250 e 500 mg/kg, sendo que na dose de 250 mg/kg, este extrato mostrou-se mais ativo. Os extratos acetato etílico (125 e 250 mg/kg) e aquoso (500 mg/kg) apresentaram atividade anti-inflamatória significativa no modelo de edema de pata induzido por cristais de urato. No intuito de avaliar as atividades antioxidantes dos componentes dos extratos num amplo espectro de polaridade, foram realizados os experimentos in vitro com DPPH, ABTS e β-caroteno/ácido linoleico. Os extratos acetato etílico, metanólico e aquoso apresentaram expressiva atividade antioxidante, especialmente no teste com o sistema β-caroteno/ácido linoleico. A escolha do extrato acetato etílico para a realização do fracionamento cromatográfico e estudo fitoquímico 2 se deu pela análise dos resultados nos testes biológicos mais promissores e que possibilitariam chegar à obtenção das substâncias ativas. O fracionamento cromatográfico do extrato acetato etílico conduziu à obtenção de cinco substâncias com grau de pureza considerável. Para a elucidação estrutural, amostras destas substâncias foram enviadas para a obtenção de espectros de ressonância magnética nuclear. O presente trabalho possibilitou contribuir para um maior conhecimento do ponto de vista farmacológico da espécie S. leucanthum. Os resultados apresentados pelos extratos acetato etílico, metanólico e aquoso de Sparattosperma leucanthum, indicaram que estes extratos podem ser importantes matérias-primas para a elaboração de fitoterápicos com ações na hiperuricemia e gota. Os resultados corroboram o uso popular desta espécie vegetal para o tratamento da inflamação, como a artrite gotosa. ______________________________________________________________________ / ABSTRACT: Gouty arthritis, or gout, consists in a slowly and recidivist inflammation process caused by accumulation and precipitation of monosodium urate cristals on the joints, starting the pathology provoking intense pain, discomfort and physical weakness on the patient. The research for new treatment options to gouty arthritis has been growing considerably and it is justified by the side effects and, in many times, the inappropriateness of the current treatments in clinical medicine. The species Sparattosperma leucanthum, popularly known as “cinco-folhas”, which belongs to the small genera Sparattosperma is largely distributed on Brazil, and it has been recognized as a native plant. Just a few studies relate the phytochemical research of Sparattosperma leucanthum, although this species is used in Brazilian folk medicine to treat inflammation, rheumatism and as blood cleanser. In this work, the ethyl acetate, methanolic and aqueous extracts were evaluated for their inhibition activity of xanthine oxidaseand antioxidant activity in vitro, and antihyperuricemic and gouty antiartritic activities in vivo. In order to evaluate the effect of extracts on blood levels of uric acid, it was used an exoerimental model of hyperuricemia induced by potassium oxonate in mice. In the test of inhibitory activity of xanthine oxidase in vitro, ethyl acetate extract has presented significant activity at the concentration of 100 μg/mL. In the in vivo assays, the aqueous extract, at the dose of 125 mg/kg, reduced significantly the blood levels of uric acid and also was capable to inhibit the liver xanthine (XOD). The methanolic extract was active on the evaluation of antihyperuricemic activity at all the evaluated doses, however only at dose of 500 mg;kg this extract showed activity on XOD. The ethyl acetate extract reduced the blood levels of uric acid on hyperuricemic mice at the doses of 125, 250 and 500 mg/kg, and at the dose of 250 mg/kg, the ethyl acetate extract was more active. The ethyl acetate extract (125 and 250 mg/kg) and aqueous extract (500 mg/kg) howed significant anti-inflammatory activity on paw oedema model induced by MSU crystals. In order to evaluate the antioxidant activity of extract compounds in a wide range polarity, the in vitro experiments DPPH, ABTS and β-carotene/linoleic acid were performed. The ethyl acetate extract, methanolic extract and aqueous extract showed expressive antioxidant activities, especially on the test with β-carotene/linoleic acid system. The choice for the ethyl acetate extract to performing the chromatographic fractionation and phytochemical study was made by analyses of the most promising results on biological tests, that would allow the reaching the obtaining of active substances. The chromatographic fractionation of ethyl acetate extract conducted to the obtaining of five substances with considerable grade of purity. To structural elucidation, amounts from these substances were sent for obtaining of NMR spectra. The present study allowed to contribute to a better understanding of the pharmacological point of view of S. leucanthum species. The results presented by ethyl acetate, methanolic and aqueous extracts of Sparattosperma leucanthum, indicated that these extracts may be important raw materials for the preparation of herbal medicines with shares in hyperuricemia and gout. The results support the popular use of this plant species for the treatment of inflammation, such as gout.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Gout, or gouty arthritis, has been associated of a range of comorbidities as hypertension and kidney diseases. Some studies have indicated that certain antihypertensive drugs, such as angiotensin I-converting enzyme inhibitors (ACEi), increase the risk of gout. Notably, ACEi block the metabolism of several peptides, in particular bradykinin hydrolysis. Bradykinin is also a substrate for kininase I, which forms des-Arg-kinin B1R agonists. Therefore, ACE inhibition can activate the B1R pathway. Moreover, ACEi are allosteric enhancers of kinin receptors and B1R are linked to inflammatory cardiovascular diseases. However, despite the body of evidence demonstrating a clear contribution of the kinin system to the pathogenesis of some arthritic conditions, the role of the kinin B1 receptor in monosodium urate (MSU) crystals crystal-induced gout is currently unknown, especially in respect to ACEi. Thus, the aim of the present study was to verify the role of the bradykinin B1 receptors and the effect of ACEi on acute gout induced by MSU crystals in rodents. Painful (overt pain and allodynia) and inflammatory parameters (joint edema, leukocyte trafficking, interleukin-1β levels) of acute gout attacks were assessed several hours after intra-articular (IA) injection of MSU (1.25 or 0.5 mg/articulation) in the ankle of rats or mice, respectively. The role of B1R was investigated by pharmacological antagonism or gene deletion. In addition, B1R immunoreactivity on ankle tissue and sensory neurons, kininase I activity and des-Arg9-bradykinin synovial levels were also measured. Similar tools were used to investigate the effects of ACEi on low dose of MSU (0.0125 mg/articulation)-induced inflammation. Bouth, bradykinin B1R antagonism or gene deletion largely reduced all painful and inflammatory signs of gout. Furthermore, MSU increased not only the B1R expression in articular tissues, but also the content of the B1 agonist des-Arg9-bradykinin and the activity of the B1 agonist-forming enzyme kininase I. Finally, low dose of MSU crystals (which did not induced inflammation in control animals) was capable of causing signs of acute gout attacks in ACEi-treated animals, which was B1R-dependent. Concluding, bradykinin B1R activation contributes to acute gouty attacks, including the ones facilitated by ACEi. Thus, B1R is a potential therapeutic target for treatment and prophylaxis of gout, especially in patients taking ACEi. / A gota, ou artrite gotosa, está associada à ocorrência de diversas comorbidades como doenças renais e cardiovasculares. Alguns dos fármacos utilizados para o tratamento destas comorbidades podem ainda precipitar ataques agudos de gota. Um exemplo são os inibidores da enzima cininase II ou enzima conversora de angiotensina (iECA). Muitos dos efeitos cardioprotetores dos iECA são mediados pelos receptores B1 para cininas. Além disso, a inibição da ECA é capaz de bloquear a hidrólise da bradicinina, que por sua vez é também um substrato para a formação do agonista do receptor B1, des-Arg9-bradicinina, pela ação da enzima cininase I. Apesar dos estudos demonstrando o envolvimento do sistema das cininas na gota e do papel do receptor B1 na iniciação e manutenção da inflamação, não se conhece a relação do receptor B1 com a gota, especialmente durante a inibição da ECA. Assim, o presente estudo tem por objetivo verificar o papel do receptor B1 para cininas durante o ataque agudo de gota induzido por cristais de urato monossódico (MSU) em roedores, incluindo aqueles tratados com iECA. Para isso, a dor (alodínia ao toque e comportamento doloroso espontâneo) e alguns parâmetros inflamatórios (edema articular, concentração de proteínas, infiltração leucocitária, avaliação da cinética de leucócitos e níveis de interleucina-1β) causados pelo ataque agudo de gota foram avaliados em diferentes tempos após a injeção intra-articular (IA) de uma alta dose de MSU no tornozelo de roedores. O papel do receptor B1 foi investigado através de seu antagonismo farmacológico, pela utilização de roedores com deleção gênica do receptor e pela inibição da enzima cininase I. Ainda, a expressão do receptor B1 no tecido do tornozelo e neurônios sensoriais, atividade da enzima cininase I e os níveis de des-Arg9-bradicinina foram analisados no fluido sinovial dos roedores submetidos ao modelo de gota. Ferramentas semelhantes foram utilizadas para a investigação do envolvimento dos receptores B1 na inflamação causadas pela inibição da ECA em animais submetidos a injeção IA de uma baixa dose de MSU, que não apresentava efeito per se. Tanto o uso de antagonistas do receptor B1, como sua deleção gênica, foram capazes de reduzir a inflamação neste modelo de gota. Além disso, o MSU causou um aumento na expressão de receptores B1 na articulação, e também um aumento dos níveis do agonista B1, des-Arg9-bradicinina e da atividade da enzima cininase I. Por último, a baixa dose de MSU foi capaz de causar um ataque agudo de gota em animais pré-tratados com iECA, por um mecanismo que envolve a ativação de receptores B1. Concluímos que a ativação do receptor B1 contribui para o desenvolvimento do ataque agudo de gota, incluindo aqueles que são precipitados pelo tratamento com iECA. Assim, o B1 apresenta um potencial terapêutico para o tratamento e profilaxia da gota, especialmente em indivíduos que fazem uso de iECA.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Hyptis pectinata L. Poit. (Lamiaceae), widely known as Sambacaitá, is an example of a plant commonly used in folk Medicine; various biological effects are associated with its extracts, such as: analgesic, anti-inflammatory, and anti-microbial. Many studies in vivo and in vitro has assessed the effects promoted by the aqueous extract and essential oil of the leaves of the plant, whose chemical composition constitute their water soluble compounds and their volatile compounds, respectively. This study aimed at keeping on these studies, determining the chemical constituents and the acute toxicity of the sample of the aqueous extract and essential oil used to study the analgesic effect of these extracts in an acute articular inflammatory condition, similar to an episode of acute arthritis as in Gout. The phyto-chemical studies of aqueous extract identified the presence of alkaloid, tannin and flavonoid. The analysis of the constituents of the essential oil was made by gas chromatography and mass spectrometer, showing as main constituents: β- cariofilene and Germacrene-D. The evaluation of acute toxicity was represented by the establishment of DL50 in Swiss mice, obtained by the probits method, it was not possible to measure the DL50 of the aqueous extract due to its low toxicity, as for the essential oil, it was obtained a 1.1 g/kg DL50. The analgesic effect was studied using the sodium urate crystals induced arthritis model, in Wistar mice, as proposed by Coderre and Wall; the aqueous extract presented expressive analgesic effect with the 50 mg/kg doses, which was reverted by the opioid antagonist, naloxone (5 mg/kg). The essential oil did not present analgesic effect with the tested doses. The results showed that the aqueous extract has low toxicity and it presents analgesic effect in a rheumatic condition, similar to Gout arthritis, while the essential oil presents medium toxicity and it does not show analgesic effect in the proposed rheumatic condition. / A Hyptis pectinata L. Poit. (Lamiaceae), vulgarmente conhecida como sambacaitá, é um exemplo de planta comumente utilizada na medicina popular; diversos efeitos biológicos estão associados aos seus extratos, tais como analgésico, antiinflamatório e antimicrobiano. Vários estudos in vivo e in vitro têm avaliado estes efeitos promovidos pelo extrato aquoso e óleo essencial das folhas da planta, cujas composições químicas, constituem os seus compostos solúveis em água e os seus compostos voláteis respectivamente. Este trabalho objetivou dar continuidade a esses estudos, determinando os constituintes químicos e a toxicidade aguda da amostra de extrato aquoso e óleo essencial utilizados, para estudar o efeito antinociceptivo (analgésico) dos extratos citados, em uma condição inflamatória articular aguda, similar a um ataque de artrite aguda como o ocorrido na gota. Os estudos fitoquímicos do extrato aquoso identificaram a presença de alcalóides, taninos e flavonóides. A análise dos constituintes do óleo essencial se deu por cromatografia gasosa e espectrômetro de massa, revelando como principais constituintes: β-cariofileno e germacreno-D. A avaliação da toxicidade aguda foi representada pela determinação da DL50, em camundongos swiss, obtida pelo método dos probitos; não foi possível mensurar a DL50 do extrato aquoso, devido a sua baixa toxicidade, já o óleo essencial, obteve uma DL50 de 1,1 g/kg. O efeito antinociceptivo foi estudado usando o modelo de artrite induzida por cristais de urato de sódio, em ratos wistar, proposto por Coderre e Wall. O extrato aquoso apresentou efeito antinociceptivo significativo na dose de 50 mg/Kg, o qual foi revertido pelo antagonista opióide, naloxona (5mg/kg). O óleo essencial não apresentou efeito antinociceptivo nas doses testadas. Os resultados mostraram que o extrato aquoso possui baixa toxicidade e apresenta atividade antinociceptiva numa condição reumática, semelhante à artrite gotosa; enquanto o óleo essencial apresenta toxicidade média e não apresenta atividade antinociceptiva na condição reumática proposta.