Orientador: Renée Laufer Amorim / Banca: Noeme Sousa Rocha / Banca: Raimundo Alberto Tostes / Resumo: As hepatites crônicas são comumente encontradas em muitas raças de cães na prática veterinária e independentemente da causa evoluem para um quadro de fibrose e conseqüentemente cirrose. Nos homens os quadros de hepatites crônicas e cirrose podem evoluir para lesões displásicas e conseqüentemente neoplásicas. Esta evolução do processo, como ocorre nos homens, não é bem definida nos cães. Alguns autores acreditam que possa ocorrer uma progressão das hepatites crônicas caninas para carcinomas hepatocelulares. Marcadores imunoistoquímicos são utilizados com o objetivo de avaliar o potencial pré-neoplásico das hepatites crônicas caninas. No presente trabalho, os marcadores imunoistoquímicos PCNA, caspase-3 e p53 foram utilizados com vistas a nos fornecer informações sobre a proliferação e apoptose dos hepatócitos e possíveis alterações genéticas que induzam a carcinogênese hepática. Os resultados obtidos mostram que as hepatites crônicas nos cães expressam estes marcadores em maior quantidade que o tecido hepático normal e de maneira mais próxima às lesões hepáticas neoplásicas o que permite afirmar que estas lesões têm potencial de sofrer alterações neoplásicas. / Abstract: Chronic hepatitis is usually found in several breeds of dogs in veterinary practice, and independently of the cause it progress to a stage of fibrosis and consequently cirrhosis. In men chronic hepatitis and cirrhosis may progress to dysplasic and neoplasic lesions. The evolution of this process, as occurs in men is not well established in dogs. Some authors believe that the progression of chronic canine hepatitis for hepatocellular carcinomas can occur. Some immunohistochemical markers can be used to assess the pre-malignant potential of the canine chronic hepatitis. In this study, the immunohistochemical markers PCNA, caspase-3 and p53 were used to give information about the proliferation and apoptosis index of the hepatocytes and the possible genetic alterations that can lead the hepatic carcinogenesis. Results show that the expression of these markers are higher in chronic canine hepatitis than in normal hepatic tissue and closer to the expression in the hepatocellular carcinomas, which allows us to confirm that these lesions have the potential of undergoing neoplasic alterations. / Mestre

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2010. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-05-11T13:08:21Z No. of bitstreams: 1 2010_RitadeCassiaAzevedoMartins.pdf: 2140108 bytes, checksum: 0280485e80cc03ce75b799fefa7fe5c1 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-05-11T13:09:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_RitadeCassiaAzevedoMartins.pdf: 2140108 bytes, checksum: 0280485e80cc03ce75b799fefa7fe5c1 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-11T13:09:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_RitadeCassiaAzevedoMartins.pdf: 2140108 bytes, checksum: 0280485e80cc03ce75b799fefa7fe5c1 (MD5) / Introdução: Os genes do HLA-DQ2 (DQA1*0501 e DQB1*0201) são encontrados de 80% a 100% dos casos de doença celíaca (DC). Nos casos DQ2 negativos, pode-se encontrar o HLA-DQ8, que está associado ao haplótipo DR4 (DRB1*04). Objetivos: Determinar a freqüência de DC entre parentes de celíacos e dos genes do HLA-DQ2 e DRB1*04 entre pacientes celíacos e seus parentes. Métodos: Foram realizados testes sorológicos em 207 parentes de primeiro grau de 90 pacientes celíacos para a determinação da presença de anticorpos IgA anti-transglutaminase (IgA-tTG) e IgA anti-endomísio (IgA-EMA). Os parentes com resultados positivos foram submetidos à biópsia intestinal. Tanto nos pacientes celíacos, como em seus parentes, foi determinada a freqüência dos alelos HLA-DQA1*0501, DQB1*0201 e DRB1*04 por meio de reação em cadeia de polimerase (PCR – Polymerase Chain Reaction). Resultados: Quatorze (6,7%) novos casos de DC foram identificados entre os 207 parentes investigados e todos eles apresentaram os alelos predisponentes HLA-DQ2 (DQA1*0501 e DQB1*0201) e/ou DRB1*04/DQ8, seja isoladamente ou em associação. Entre os pacientes celíacos, o HLA-DQ2 estava presente seja isoladamente ou em conjunto com a DRB1*04, em 86,6% dos casos. Os demais casos apresentaram pelo menos um dos alelos pesquisados e apenas um deles não apresentou nenhum dos alelos predisponentes. Já no grupo de parentes de celíacos, pelo menos um dos alelos de risco foi encontrado em 94,6% e o HLA-DQ2 foi encontrado sozinho ou em conjunto com o alelo DRB1*04 em 57,4%. Onze (5,3%) dos parentes de celíacos não apresentaram nenhum dos alelos predisponentes para DC. Conclusão: As freqüências encontradas no estudo da presença dos alelos HLA predisponentes para DC e do rastreamento sorológico são semelhantes às descritas em estudos já realizados entre parentes de celíacos. A determinação dos genes de susceptibilidade à DC entre parentes de celíacos é útil na exclusão de indivíduos a serem acompanhados por meio de testes sorológicos, e nos casos em que há dúvidas em relação ao diagnóstico da doença. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Introduction: HLA-DQ2 genes (DQA1*0501 and DQB1*0201) can be found from 80% to 100% cases of celiac disease (CD). In HLA-DQ2 negative patients, it is possible to find the HLA-DQ8, which is associated with haplotype DR4 (DRB1*04). Objectives: To determine the frequency of CD among celiac patients' relatives and, as well, DQ2 genes and HLA-DRB1*04 among celiac patients and relatives. Methods: Serologic tests were performed in 207 first-degree relatives of 90 celiac patients in order to determine the presence of IgA anti-transglutaminase (IgA-tTG) and IgA anti-transglutaminase (IgA-EMA). Relatives with positive results underwent intestinal biopsy. It was determined the frequency of HLA-DQA1*0501, DQB1*0201 and DRB1*04 by polymerase chain reaction (PCR - Polymerase Chain Reaction) both in celiac patients and their relatives. Results: Fourteen (6.7%) new cases of CD were identified among 207 relatives investigated and all of them had predisposing alleles HLA-DQ2 (DQA1*0501 and DQB1*0201) and/or DRB1*04/DQ8, either alone or in combination. Among patients with celiac disease, HLA-DQ2 was present either alone or in combination with DRB1*04 in 86.6% of the studied cases. The remaining patientes had, at least, one of the alleles studied. Only one of them did not present any of the predisposing alleles. Within the group of celiac patients' relatives, at least one risk allele was found in 94.6%, and HLA-DQ2 was found alone or in combination with the allele DRB1*04 in 57.4%. Eleven (5.3%) relatives have not shown any predisposing alleles to DC. Conclusion: Frequencies found are similar to those described in studies already carried out among relatives of celiac patients. The determination of susceptibility genes for CD among relatives of celiac patients is useful for excluding individuals to be accompanied by serological tests, and where exist doubts about the diagnosis.

Orientador : Angelo Pires do Prado / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-15T21:44:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_HeribertoDiasda_D.pdf: 1998388 bytes, checksum: d3fb731c986172490ee36446a3259b70 (MD5) Previous issue date: 1992 / Doutorado / Genetica / Doutor em Ciências Biológicas

Orientador : Hebe Myrina Laghi de Souza / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-17T08:33:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_AdalgisaSoaresde_M.pdf: 1395631 bytes, checksum: 7740e8a14c733dace93a03bd8af19c42 (MD5) Previous issue date: 1992 / Mestrado / Genetica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador : Wanderley Dias da Silveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-18T07:56:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sperandio_Vanessa_M.pdf: 5909936 bytes, checksum: 1f6ae24fce68b96ed6d2512dbf6c5f70 (MD5) Previous issue date: 1993 / Mestrado / Genetica / Mestre em Ciências Biológicas

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-07-29Bitstream added on 2014-06-13T18:43:18Z : No. of bitstreams: 1 bertonha_fb_me_botib.pdf: 504598 bytes, checksum: 9ed1f9c804559ef99cf5530f8969c8f2 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Os carcinomas de células escamosas de cabeça e pescoço (CCECP) constituem 90% de todos os cânceres de cabeça e pescoço e estão associados a altas taxas de mortalidade, devido ao seu alto potencial infiltrativo. Este é o sexto tumor mais incidente na população Brasileira. Pouca atenção tem sido dada a fatores hereditários envolvidos em sua etiologia, mas estudos iniciais revelaram que os carcinomas orais tendem a se agregar em famílias. Evidências adicionais são fornecidas pela ocorrência de múltiplos tumores primários em pacientes com CCECP, pela associação com história familial, aparecimento precoce da doença e por membros afetados sem hábitos tabagista e etilista. Em estudos prévios do grupo foi descrita uma associação entre a perda de 22q e história familial de câncer em pacientes com CCECP, após análise citogenética, análise de LOH e PCR quantitativa em tempo real. O gene PHF21B (PHD finger protein 21B), mapeado em 22q13.31, codifica uma proteína reguladora transcricional e foi selecionado como um gene candidato associado a predisposição familial em CCECP. Os resultados da PCR quantitativa em tempo real mostraram associação estatisticamente significativa com relação à perda de seqüências do gene e história familial de câncer em parentes de 1º grau (P<0,0001). Estes dados sugerem que o PHF21B é um gene supressor tumoral candidato envolvido com história familial em carcinomas de cabeça e pescoço. Para investigar a inativação de um gene supressor tumoral (Knudson, 1971), foram selecionados 13 pacientes com CCECP que mostravam história familial positiva de câncer e outros 14 casos sem história familial. Foram considerados como critério para história familial positiva: parentes de primeiro e segundo graus com câncer; não-fumantes e não-consumidores de álcool; idade igual ou inferior a 56 anos quando do diagnóstico... / Head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC) represents 90% of all cancers and are associated with high mortality, due to high infiltrative potential. This tumor is the sixth most incident in the Brazilian population. Little attention have been given to hereditary factors involved in their etiology, but early studies showed that oral carcinomas tend to aggregate themselves in families. Additional evidences are provided for primary multiple tumors occurrence in HNSCC patients, to family history association, early disease development and no tobacco and alcohol consumptions. Previously we described an association between 22q loss and cancer family history in HNSCC patients by cytogenetics, LOH and real time PCR analysis. The PHF21B gene (PHD finger protein 21B), mapped at 22q13.31, codifies a transcriptional regulatory protein and was selected as a putative gene associated with HNSCC familial predisposition. The real time PCR results showed statistical significant association related to gene loss and first degree family history (P<0,0001). This data suggests that PHF21B is a tumor suppressor gene candidate involved in HNSCC family history. To investigate the tumor suppressor gene inactivation (Knudson, 1971), were selected 13 HNSCC patients that had positive cancer family history and other 14 without HNSCC family history. It was considered for positive family history: first and second relatives with cancer; no tobacco and alcohol users; age 56 or less at diagnosis. Investigation analysis was performed by direct sequencing at exons: 7, 8 and 9. These exons were selected for its relation to PHD zinc-finger domain, responsible for PHF21B protein function. No mutations or significative variations were found in these exons. The SNPs (single nucleotide polymorphisms) analysis in gene extension showed a reduced SNPs number in exonic regions, however 16 SNPs were found at 3´UTR region... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Silvia Regina Rogatto / Banca: Benedito Mauro Rossi / Banca: Ivan de Godoy Maia / Resumo: Os carcinomas de células escamosas de cabeça e pescoço (CCECP) constituem 90% de todos os cânceres de cabeça e pescoço e estão associados a altas taxas de mortalidade, devido ao seu alto potencial infiltrativo. Este é o sexto tumor mais incidente na população Brasileira. Pouca atenção tem sido dada a fatores hereditários envolvidos em sua etiologia, mas estudos iniciais revelaram que os carcinomas orais tendem a se agregar em famílias. Evidências adicionais são fornecidas pela ocorrência de múltiplos tumores primários em pacientes com CCECP, pela associação com história familial, aparecimento precoce da doença e por membros afetados sem hábitos tabagista e etilista. Em estudos prévios do grupo foi descrita uma associação entre a perda de 22q e história familial de câncer em pacientes com CCECP, após análise citogenética, análise de LOH e PCR quantitativa em tempo real. O gene PHF21B (PHD finger protein 21B), mapeado em 22q13.31, codifica uma proteína reguladora transcricional e foi selecionado como um gene candidato associado a predisposição familial em CCECP. Os resultados da PCR quantitativa em tempo real mostraram associação estatisticamente significativa com relação à perda de seqüências do gene e história familial de câncer em parentes de 1º grau (P<0,0001). Estes dados sugerem que o PHF21B é um gene supressor tumoral candidato envolvido com história familial em carcinomas de cabeça e pescoço. Para investigar a inativação de um gene supressor tumoral (Knudson, 1971), foram selecionados 13 pacientes com CCECP que mostravam história familial positiva de câncer e outros 14 casos sem história familial. Foram considerados como critério para história familial positiva: parentes de primeiro e segundo graus com câncer; não-fumantes e não-consumidores de álcool; idade igual ou inferior a 56 anos quando do diagnóstico... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC) represents 90% of all cancers and are associated with high mortality, due to high infiltrative potential. This tumor is the sixth most incident in the Brazilian population. Little attention have been given to hereditary factors involved in their etiology, but early studies showed that oral carcinomas tend to aggregate themselves in families. Additional evidences are provided for primary multiple tumors occurrence in HNSCC patients, to family history association, early disease development and no tobacco and alcohol consumptions. Previously we described an association between 22q loss and cancer family history in HNSCC patients by cytogenetics, LOH and real time PCR analysis. The PHF21B gene (PHD finger protein 21B), mapped at 22q13.31, codifies a transcriptional regulatory protein and was selected as a putative gene associated with HNSCC familial predisposition. The real time PCR results showed statistical significant association related to gene loss and first degree family history (P<0,0001). This data suggests that PHF21B is a tumor suppressor gene candidate involved in HNSCC family history. To investigate the tumor suppressor gene inactivation (Knudson, 1971), were selected 13 HNSCC patients that had positive cancer family history and other 14 without HNSCC family history. It was considered for positive family history: first and second relatives with cancer; no tobacco and alcohol users; age 56 or less at diagnosis. Investigation analysis was performed by direct sequencing at exons: 7, 8 and 9. These exons were selected for its relation to PHD zinc-finger domain, responsible for PHF21B protein function. No mutations or significative variations were found in these exons. The SNPs (single nucleotide polymorphisms) analysis in gene extension showed a reduced SNPs number in exonic regions, however 16 SNPs were found at 3'UTR region... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

El virus Dengue (VDEN) es el responsable de más de 50-100 millones de casos anualmente en el mundo. La infección del dengue es causada por cuatro serotipos (VDEN-1, VDEN-2, VDEN-3 y VDEN-4) y el espectro de la enfermedad varía desde una fiebre indiferenciada, fiebre hemorrágica por dengue (FHD), síndrome de shock por dengue, y muerte. Información epidemiológica liga el desarrollo de FHD con una infección secundaria y además sugiere que ciertas cepas son más virulentas que otras. En 2001, aparecieron los primeros casos de FHD asociados con VDEN-2 en la costa del Perú. En el 2010 ocurrió un brote en Iquitos con casos severos convirtiéndose en el más largo en la historia de la región. Sin embargo estudios orientados en determinar el origen distribución y diversidad genética de cepas peruanas de VDEN-2 durante los diez últimos años no han sido realizados. Para atender este vacío de conocimiento en la epidemiología del VDEN-2 en Perú, extractos de ARN de 30 aislamientos virales en células C6/36 (Aedes albopictus) fueron procesados por RT-PCR. Secuencias del gen de la envoltura (E) fueron determinadas y comparadas con muestras globales de VDEN-2. El análisis filogenético reveló la circulación de dos genotipos en Perú: Americano (hasta el 2000) y Americano/Asiático (2000- 2010). Adicionalmente se identificaron cepas variantes del genotipo Americano/Asiático distribuidos en dos clados principales (1 y 2) que ingresaron al Perú por la costa norte (Ecuador) y por la selva (Brasil o Bolivia). Con el aparente incremento de la virulencia relacionada a cepas Americano/Asiático del clado 2, nuestros resultados soportan la necesidad de un continuo monitoreo de cepas emergentes de nuevos variantes o genotipos de dengue que podrían estar asociados a casos severos de la enfermedad. Palabras claves: Arbovirus, Dengue 2, Americano/Asiático y relación filogenética.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-19Bitstream added on 2014-06-13T20:33:39Z : No. of bitstreams: 1 perez_am_me_botib.pdf: 10680809 bytes, checksum: b87b752e56e77d065385e0c67b7da6a0 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente trabalho teve por objetivo mapear os domínios de interação da proteína LaRbp38 (RNA binding protein 38 KD) de Leishmania amazonensis com ácidos nucléicos e a identificação de proteínas parceiras que formassem possíveis complexos com ela nos telômeros do parasita. LaRbp38 é uma proteína exclusiva de protozoários tripanosomatídeos, entre os quais estão os agentes etiológicos da leishmaniose, uma doença endêmica presente em diversas regiões do Brasil. Novos casos da doença vêm aumentando progressivamente, principalmente entre indivíduos imunocomprometidos e por isso a Organização Mundial da Saúde tem incentivado a busca de novos alvos para desenvolver drogas que eliminem eficazmente o parasita. LaRbp38 é uma proteína codificada por um gene nuclear, que parece exercer diferentes funções nas maquinarias de replicação nuclear e mitocondrial. Foi primeiramente descrita como proteína estabilizadora de RNA mitocondrial e parece estar envolvida com a replicação de DNA mitocondrial. Em Leishmania, LaRbp38 também interage in vivo com DNA mitocondrial, com seqüências ricas em GT e com DNA telomérico simples e dupla fita. A análise estrutural da proteína não indica a presença de nenhum domínio canônico de interação a ácidos nucléicos. Para dar inicio aos experimentos, a primeira estratégia foi desenhar mutantes delecionais da proteína de L. amazonensis (LaRbp38) de forma que cada um representa uma sobreposição do outro. Cada mutante, nomeados mut1, mut2, mut3, mut4 e mut5, foram subclonados em vetor de expressão bacteriano para produção de polipeptídios recombinantes. Em seguida os polipeptídios foram purificados e testados em western blotting, que mostra tanto LaRbp38 quantos os 5 mutantes sendo reconhecidas pelo soro antLLaRbp38. Ensaios in vitro de interação proteína-DNA (EMSA), usando DNA telomérico simples fita Te11, dupla fita... / Recent results demonstrated that Rbp38 is a protein exclusively expressed in trypanosomatid parasites, which includes the genus Leishmania. Rbp38 is a multifunctional protein exerting functions in the kinetoplast, such as the stabilization of mitochondrial RNAs and in the nucleus, as a protein that binds in vivo kDNA, the double-stranded (LaTel) and the G-rich telomeric DNAs (Tel1). The trypanosomatid Rbp38 does not share sequénce or functional/structural similarities with any other protein deposited in the public data bank. The present work has the aim of mapping the boundaries of the DNA-binding domain of LaRBP38, since using the available in silico tools, we were not able to define any known nucleic acid binding domain in this protein. Therefore, we constructed truncated overlapping mutants of LaRbp38 in order to map the boundaries of its DNA binding domain. These mutant proteins were expressed in a bacterial system and were produced in high amounts as shown by SDS-PAGE and Western blotting analyses. Electrophoretic mobility shift assays (EMSA) were done in order to test the ability of each mutant to bind in vitro the G-rich telomeric DNA, double-stranded telomeric DNA and kDNA. EMSA and competition assays confirmed that LaRbp38 has at least one DNA binding domain (DBD), centrally located, between amino acid residues 141 and 235. This DBD, interacts with distinct affinities with ali DNAs tested. Our results suggested that this binding domain has at least two extensions one towards the N-terminus of mut2 (aa 95 and 141), which showed binding affinity to LaTel and kDNA and other towards the C-terminus of mut3 (aa 235 to283) that strongly interacted with kDNA. However, we can not discard that others parts of the protein may also contribute to these interactions. Other controversial point about LaRbp38 is whether this protein has nuclear and mitochrondrial subcelular localization... (Completo abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-03Bitstream added on 2014-06-13T20:38:40Z : No. of bitstreams: 1 dores_cb_me_botfmvz.pdf: 3161670 bytes, checksum: a11ca3c4c2058df1d9e382287df9e6b5 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A característica inerente às células-tronco embrionárias de se manterem estáveis durante longos períodos de cultivo possibilita que um grande número de células indiferenciadas sejam utilizadas em procedimentos terapêuticos ou realização de pesquisas. Aproximadamente 97 doenças genéticas equinas têm alta homologia com defeitos genéticos de humanos. O estudo de CTE de animais ungulados é útil no estudo de biofarmacos, engenharia genética e elucidação da embriogênese. Trabalhos sobre o isolamento, cultivo e caracterização do perfil genético de CTE equinas são escassos na literatura. No presente estudo, três diferentes métodos do isolamento da MCI foram testados em blastocistos equinos, avaliando o potencial de derivação de linhagens e a expressão do gene Oct-4: 1) separação mecânica (n=26), 2) imunocirurgia (n=6), 3) aspiração por micromanipulação (n=4). Todas as MCI foram cultivadas nas mesmas condições: monocamada de fibroblastos inativadas, meio DMEM/F12 suplementado com LIF, soro fetal bovino, aminoácidos não essenciais, sódio piruvato, l-glutamina e 2-mercaptoetanol. A eficácia do isolamento da MCI e o estabelecimento de linhagens foram avaliados quanto à adesão, aspectos morfológicos dos agregados celulares e velocidade de crescimento. As linhagens estabelecidas foram caracterizadas pela expressão do gene Oct-4 e Nanog. Nenhuma das MCI isoladas do grupo 3 aderiram à placa, e todas morreram entre 48 e 72 horas de cultivo. No grupo 1, uma MCI apresentou crescimento satisfatório apenas durante o cultivo primário. Colônias foram estabelecidas no grupo 2 e, após a segunda passagem, as células foram avaliadas e congeladas. Utilizou-se a RT-PCR para a detecção da expressão dos genes Oct-4 e Nanog em amostras de CTE, anel coriônico e fibroblastos fetais equinos. Todas as amostras expressaram o gene Oct-4, mostrando que o gene é expresso... / The ability of Embryonic Stem cells to be maintained during extended culture periods would support the existence of large pools of undifferentiated stem cells for therapeutic and research applications. Approximately 97 equine genetic diseases have high homology to human genetic defects. ES cell lines from domestic ungulates would also be useful for disease resistance, for biopharming, and in genetic engineering. Studies of the isolation of equine embryonic stem cells and their genetic expression are quite limited. In the present study three different experimental approaches were used for ICM isolation from day 8 blastocysts and further ES cell line derivation and OCT-4 and Nanog expression: 1. Mechanical Process (26), 2. Immunosurgery (6) and 3. Aspiration of the ICM (4). All the ICM were maintained at the same conditions: under inactivated murine fibroblast feeder support in medium supplemented with Leukemia Inhibitor Factor, Fetal Calf Serum, Non essential amino acids, Sodium Pyruvate, L-Glutamine and 2-Mercaptoethanol changed every 24 hours. The colonies were evaluated by attachment, size and shape, type of cells and rate of growth. In addition, established ES cell colonies were characterized by OCT-4 expression. Only ICM outgrowths and colonies containing circular, small, and high ratio nucleo:cytoplasm cells were considered and passaged. None ICM from group 3 attached and all died after 48 to 72 hours after isolation. In group 1, one ICM had successful development but died after the first passage. Colonies were established from group 2. And after proliferation for 2 passages the cells were analyzed and frozen. RT-PCR was performed to evaluate the OCT-4 expression from ES cells, fetal fibroblast and day 32-34 chorionic girdle samples. All samples were positive for OCT-4 expression, showing that the OCT-4 is expressed in both ICM cells and the trophectoderm derived cells... (Complete abstract click electronic access below)