Orientador: Cristiane Duque / Coorientador: Eloi Dezan Júnior / Banca: Rogério de Castilho Jacinto / Banca: Denise Madalena Palomari Spolidorio / Resumo: Na busca por fontes alternativas de antimicrobianos, diversos autores tem explorado o uso de plantas medicinais para o tratamento de várias doenças. A atividade antimicrobiana de várias espécies de plantas como, Cordia verbenacea DC, Mikania laevigata Schultz Bip. Ex Baker e Psidium cattleianum, popularmente chamadas de erva-baleeira, guaco e de araçá, respectivamente, tem sido relatada contra diversos microrganismos orais. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito antimicrobiano dos extratos hidroetanólico bruto e as suas respectivas frações aquosa, butanol, hexano e acetato de etila de Cordia verbenacea (CV) e Mikania laevigata (ML) e extratos aquoso e hidroetanólico de Psidium cattleianum (PC) contra Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa, Actinomyces israelii e Candida albicans, sob condições planctônicas e de biofilme. Os microrganismos foram analisados em condições planctônicas por meio de ensaios para a determinação da concentração inibitória mínima (CIM) e concentração letal mínima (CLM), pelo método de microdiluição em caldo. Posteriormente, foram selecionados somente os extratos capazes de eliminar completamente cada microrganismo (CLM 100%), para a análise da atividade antimicrobiana em ensaios de biofilme. Os resultados mostraram que os valores de CIM e CLM variaram de 250 à 4000μg/ml. O biofilme formado por E. faecalis foi eliminado frente à ação dos extratos aquoso e hidroetanólico de PC e à fração acetato de etila de ML. A mesma fração de ML e o extrato hidroetanólico de PC também foram capazes de eliminar biofilme de P. aeruginosa. O mesmo ocorreu com as frações hexânicas de CV e ML e o extrato hidroetanólico de ML frente ao biofilme de A. israelii. Nenhum extrato/fração foi capaz de eliminar biofilme de C. albicans. Este estudo demonstrou o potencial antimicrobiano de extratos ou frações de Cordia verbenacea, Mikania laevigata... / Abstract: Seeking for alternative sources of the antimicrobials, several authors have explored the use of herbal medicines for the treatment of diseases. The antimicrobial activity of various species of plants, such as Cordia verbenacea DC, Mikania laevigata Schultz Bip. Ex Baker and Psidium cattleianum, known as erva-baleeira, guaco and araçá, respectively, has been reported against several oral microorganisms. The present study aimed to evaluate the antimicrobial effect of Cordia verbenacea (CV) and Mikania laevigata (ML) hydroethanolic crude extracts and their fractions aqueous, butanol, hexane and ethyl acetate and aqueous and hydroethanolic extracts of Psidium cattleianum (PC) against Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa, Actinomyces israelii and Candida albicans, under planktonic and biofilm conditions. The microorganisms in planktonic conditions were analyzed by determination of minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum lethal concentration (MLC) assays using the microdilution broth method. Posteriorly, only the extracts that were able to totally eliminate each microorganism (MLC 100%) were selected for the antimicrobial activity analysis in the biofilm assay. The results showed that the MIC and MLC values ranged between 250 and 4000μg/ml. E. faecalis biofilm was eliminated by PC aqueous and hydroethanolic extracts and the ML ethyl acetate fraction. The same ML fraction and PC hydroethanolic extract were also able to eliminate the P. aeruginosa biofilm. The same occurred with the CV and ML hexane fractions and ML hydroethanolic extract against the A. israelii biofilm. None of the extracts/fractions were able to eliminate the C. albicans biofilm. This study confirmed the antimicrobial activity potential of Cordia verbenacea, Mikania laevigata and Psidium cattleianum, suggesting their use for endodontic purposes due to their effectiveness against pathogens associated with persistent or se... / Mestre

Resumo: O desenvolvimento de novos materiais é uma área de pesquisas que ganha cada vez mais importância nos meios acadêmicos e industriais. Essa área de pesquisa é vital para a adequação dos materiais existentes às necessidades de aplicação, pois estas estão em constante mudança. O desenvolvimento de biofilmes exige a disponibilidade de um composto - normalmente um hidrocolóide - que possua a propriedade de formar uma matriz filmogênica. O colágeno de origem bovina possui tal propriedade e, por ser abundante no Brasil, é uma matéria-prima interessante para a produção de biofilmes. Por outro lado, para melhorar as características mecânicas e de barreira à umidade dos filmes finais, além do hidrocolóide principal, em geral são adicionadas outras substâncias à matriz filmogênica. O objetivo desse trabalho foi caracterizar física e quimicamente as fibras e pó de colágeno, obtidos a partir de pele bovina, como matérias-primas potencialmente formadoras de filme, bem como avaliar a influência das proporções de fibra e pó de colágeno usadas nas propriedades dos filmes. Nesse sentido, para as matérias-primas, foram realizadas as seguintes análises: composição centesimal, solubilidade em água, isotermas de sorção de água, aminograma, granulometria, calorimetria diferencial de varredura, espectroscopia de infravermelho e reologia da solução filmogênica. A fibra e o pó de colágeno apresentam, praticamente, o mesmo teor de proteína em sua composição e a diferença entre eles, além do formato, aparece na solubilidade em água, que se supõe ser, em parte, devida à diferença de tamanho entre as partículas. Na caracterização dos filmes, realizaram-se testes de tração, solubilidade e permeabilidade ao vapor de água, determinação de cor e opacidade e microscopia. / Abstract: The development of new materials is a research area that has received increasing importance in the academic and industrial. This research area is vital for adaptation of existent materials to application needs, since they are in constant change. The biofilms development demands the availability of a material - usually a hydrocolloid - that possesses the property of forming a filmogenic matrix. The collagen of bovine origin possesses such property and, for being abundant in Brazil, it is an interesting raw material for edible and biodegradable films production. On the other hand, in order to improve the mechanical and water vapor barrier characteristics of the final films, in addition to the main hydrocolloid, other substances are generally added to the film forming solution. The objective of this work was to determine the physical and chemical characteristic of collagen fibers and powder, obtained from bovine skin, as potentially film forming raw materials. The following analyses were accomplished: centesimal composition, solubility in water, water sorption isotherms, aminogram, size distribution, differential scanning calorimetric, FTIR and rheology of the filmogenic solution. The collagen fiber and powder present practically the same protein content and in addition to particles shape the main difference between them, appears in the solubility in water that is supposed to be, partly, due to the size difference between fiber and powder particles. The characterization was accomplished by traction tests and the measurement of solubility and water vapor permeability, color and opacity as well as by microscopy. The objective was evaluating the influence of collagen fiber and powder proportions on the films. In this case, fibers could act as reinforcement composite to the film forming matrix, with the peculiarity of being a system where the polymer and the composite ...(Complete abstract click eletronic access below) / Orientador: Vânia Regina Nicoletti Telis / Coorientador: Paulo José do Amaral / Banca: Fábio Yamashita / Banca: José Francisco Lopes Filho / Mestre

Orientador: Marlus Chorilli / Coorientador: Carla Raquel Fontana / Banca: Herida Regina Nunes Salgado / Banca: Cristiane Duque / Resumo: As doenças periodontais acometem grande parte da população, sendo uma das causas de perdas dentárias em humanos. As suas manifestações clínicas podem ser divididas genericamente em gengivite e periodontite, dependendo da existência ou não de envolvimento do tecido de sustentação dos dentes. Sabe-se que sua etiologia envolve, dentre outros fatores, o acúmulo de biofilme dental supra- e subgengival. Dessa maneira, estudos buscam avaliar o potencial antimicrobiano de substâncias que possuam ação contra biofilme dental multiespécie. Recentemente, um crescente interesse tem sido observado no estudo de peptídeos, como o KSL-W, que demonstram ação antimicrobiana contra micro-organismos presentes no biofilme dental. Sistemas nanoestruturados de liberação de fármacos, como os sistemas líquido-cristalinos (SLC), têm sido muito utilizados pelo fato de aumentarem a estabilidade e a eficácia de fármacos, além de modularem sua ação, o que os torna aptos a serem usados como carreadores de peptídeos. A potencialização destes sistemas de liberação pode, possivelmente, ser conseguida com a presença de substâncias mucoadesivas, essenciais para a permanência prolongada da formulação no local de ação. Portanto, o objetivo deste trabalho foi desenvolver e caracterizar sistemas nanoestruturados mucoadesivos, como os SLC, para incorporação do peptídeo sintético KSL-W, e posteriormente, avaliar a ação in vitro em biofilme multiespécie salivar. Para isso, foram desenvolvidos sistemas líquidocristalinos constituídos por álcool cetílico propoxilado e etoxilado - Procetyl® AWS (tensoativo, T), ácido oleico (fase oleosa, FO) e dispersão de poloxamer 407 nas concentrações de 0,5%, 0,75% e 1% (fase aquosa, FA), obtendo-se os diagramas S1, S2 e S3, respectivamente. Selecionou-se 4 pontos de cada um dos diagramas mantendo-se a concentração do T em 50% e variando-se as proporções de FA e FO, a saber F27 - 50% T, 10% FO... / Abstract: Periodontal diseases affect a large part of the population, being one of the causes of tooth loss in humans. Their chronic manifestations can be divided briefly in gingivitis and periodontitis, depending on the existence or not of teeth support tissue involvement. It is known that its etiology involves, among other factors, the accumulation of dental biofilm supra- and subgingival. Thus, studies seek to assess the antimicrobial potential of substances that have action against multispecies biofilms. Recently, a growing interest it has been observed in the study of peptides that demonstrate antimicrobial action against microorganisms present in the dental biofilm, as the KSL-W peptide. Nanostructured systems of drug release, as the liquidcrystalline systems (LCS), have long been used because of increasing stability and the efficacy of drugs, beyond modulate their action, that make them suitable to be used like peptide carrier. The potentialization of delivery system can, possibly, be achieved with the presence of mucoadesivas substances, essential for the prolonged stay of the formulation in the action place. Thereby, it is intended to develop and characterize nanostructured systems mucoadesivos, as the LCS, for incorporation of the synthetic peptide KSL-W, and later, evaluate the in vitro antimicrobial action in multispecie biofilms grown on the surface dental root. For that, developed liquid-crystalline systems constituted by cetyl alcohol ethoxylate and propoxilado - Procetyl® AWS (surfactant, S), oleic acid (oily phase, OP) and dispersion of poloxamer 407 at concentrations of 0.5%, 0.75% e 1% (the aqueous phase, AP), obtaining the diagrams S1, S2 e S3. It was selected 4 points of each diagram keeping the concentration of surfactant in 50% and varying the proportions of the AP and OP, F27 - 50% S, 10% OP and 40% AP; F28 - 50% S, 20% OP and 30% AP; F29 - 50% S, 30% OP and 20% AP; F30 - 50% S, 40% OP and 10% AP. Posteriorly, the ... / Mestre

Orientador : Rosemeire Cristina Linhari Rodrigues Pietro / Coorientador: Ana Cláudia Pavarina / Banca: Edwil Aparecida de Lucca Gattas / Banca: Hérida Regina Nunes Salgado / Banca: Silvio Silverio da Silva / Banca: Carlos Henrique Gomes Martins / Resumo: O surgimento de biofilmes de Candida albicans como uma forma de resistência microbiana em superfícies sólidas é um problema de saúde pública crescente, uma vez que as opções terapêuticas eficientes para a redução e eliminação deste são escassas, sobretudo devido à sua alta resistência a antifúngicos. As enzimas produzidas por micro-organismos despertam um grande interesse por representarem uma opção biotecnológica aos enxaguatórios e antifúngicos disponíveis no mercado. O objetivo deste estudo foi produzir, determinar a atividade, fracionar três diferentes enzimas fúngicas (protease, amilase e lipase) e estabelecer a efetividade destas na redução de biofilme de C. albicans, além de avaliar os possíveis mecanismos de ação destas enzimas sobre o biofilme. A produção enzimática foi realizada por diferentes linhagens fúngicas a partir de fermentação submersa em biorreator, acompanhada de estudo dos parâmetros bioquímicos de cada enzima. A avaliação da efetividade frente ao biofilme de C. albicans foi realizada por diferentes métodos: redução de biofilme de C. albicans em microplaca de 96 orifícios por XTT; redução do número de unidades formadoras de colônia de biofilme por contagem em ágar Sabouraud dextrose com cloranfenicol (SDA); redução de biofilme em corpos de prova de resina acrílica por XTT e redução do número de unidades formadoras de colônia dos corpos de prova por contagem em ágar SDA. Ainda, foi analisada também a influência destas enzimas sobre fatores de virulência, ergosterol de parede e sobre o desenvolvimento e arquitetura do biofilme com a análise por microscopia eletrônica de varredura. As três enzimas foram eficientes nos ensaios de redução de biofilme, sobretudo frente a biofilmes maduros, de 48 horas, reduzindo cerca de 80-90% deste tanto em microplacas como em corpos de prova. Nos ensaios em microplacas, a amilase foi mais ativa dentre as três, em contato de 30 ... / Abstract: The emergence of Candida albicans biofilms as a form of microbial resistance on solid surfaces is a increasing public health problem, since the effective therapeutic options for the few reduction and elimination, mainly due to its high resistance to antifungals. The enzymes produced by microorganisms attract great interest because they represent an option to biotechnology and antifungal mouthwashes available in the market. The aim of this study was to produce, determine the activity, fractionate three different microbial enzymes (protease, amylase and lipase), and to evaluate the effectiveness in reducing biofilm of C. albicans besides the possible mechanisms of action of these enzymes on the biofilm. For enzyme production were used fungal strains submitted the liquid fermentation in bioreactor, accompanied by study of biochemical parameters of each enzyme. The assessment of effectiveness against biofilms of C. albicans was performed by different methods: Evaluation of the ability to reduce biofilm of C. albicans in microplate 96 wells by XTT; Evaluation of the reduction in the number of colony forming units of biofilm by counting in Sabouraud dextrose agar with chloramphenicol; Evaluation of biofilm reduction capacity of C. albicans in specimens of acrylic resin by XTT and reduction capacity of the number of colony forming units per count Sabouraud dextrose agar with chloramphenicol. In addition, it is also analyzed the influence of these enzymes on virulence factors and the development of biofilm architecture and by analysis in scanning electron microscopy. The three enzymes were effective in reducing assays well microplate as specimens, especially against mature biofilms, 48 hours. The assays in microplates, amylase was the most active enzyme of the three, in contact of 30 minutes, while the protease was more effective in contact of 60 minutes and the lipase was less active in both periods analyzed. However, in specimens, the enzymes ... / Doutor

Orientadora: Cristiane Duque / Banca: Ana Claudia Okamoto / Banca: Vivien Thiemy Sakai / Resumo: Terapias biológicas tem buscado novas substâncias/protocolos que promovam a eliminação microbiana e induzam ou estimulem a regeneração pulpa r e o desenvolvimento completo radicular d e dente s permanente s jove ns com processos patológicos pulpares. Os objetivos do estudo foram avaliar a a tividade antimicrobiana /antibiofilme de algumas combinações de antibióticos sobre microrganismos de interesse endodôntico e analisar o efeito da combinação de antibióticos com melhor ação antimicrobiana associada à sinvastatina na expressão de marcadores o dontoblásticos em células da polpa dental humana (CPDH) . A atividade antimicrobiana dos seguintes antibióticos : Metronidazol (ME), C iprofloxacina (CI), Minociclina (MI), Doxicilina (DO) e F osfomicina (FO), isolados ou em combinação dupla (ME+CI, ME+MI, ME+DO, ME+FO, CI+MI, CI+DO, CI+FO, DO+FO, MI+FO) ou tripla (ME+CI+MI, ME+CI+FO, ME+MI+FO, ME+CI+DO, ME+DO+FO, CI+DO+FO, CI+MI+FO) foram testados contra Streptococcus mutans, Enterococcus faecalis, Actinomyces israelii e Candida albicans em condições planctônicas. Biofilmes mono - espécie de E. faecalis e biofilmes em dual - espécies de E. faecalis and C. albicans fora m prepara dos em bloc os de dentina para testar a atividade anti biofilme das combinações de antibióticos com os melhores result ados microbiológicos. O efeito antibiofilme das combinações antibióticas sobre biofilme de E. faecalis dentro dos túbulos dentinários foi também avaliada por microscopia confocal. Culturas de CPDH foram expostas à combinação antibiótica com melhor resultad o microbiol ógico e sinvastatina e determinada a viabilidade celular, atividade da f osfatase alcalina (ALP), deposição de nódulos de mineralização e expressão de DSPP (sialofosfoproteína dentinária), importante marcador odontoblástico... / Abstract: Biological therapies have searching for substances/protocols, which promote microbial elimination and induce or sti mulate pulp regeneration and completion of apical root development in young perm anent teeth wi th pulp pa thological processes . The objective s of this study were to evaluate the anti microbial /anti - biofilm activity of some antibiotics combinations on endodontic microorgan isms and the effect of the combina tion of anti biotics with the best anti microbial action associated with simvastatin on expression of odontoblast markers by human dental pulp cells (HDPC) . The antimicrobial activity of the following antibiotics : Metronidazole ( ME ), Ciprofloxacin ( CI), Minocycline (MI), Doxycycline (DO) and Fosfomycin ( FO), either alone or in double (ME+CI, ME+MI, ME+DO, ME+FO, CI+MI, CI+DO, CI+FO, DO+FO, MI+FO) or triple combinations (ME+CI+MI, ME+CI+FO, ME+MI+FO, ME+CI+DO, ME+DO+FO, CI+DO+FO, CI+MI+FO ) were tested against Streptococcus mutans, Enterococcus faecalis, Actinomyces israelii and Candida albicans in planktonic conditions . Mono - species biofilm of E. faecalis and dual - species biofilms of E. faecalis and C. albicans were prepared in dentin blocks to test the anti - biofilm activity of antibiotic combi nations with the best microbiolo gical results . Antibiofilm effect of antibiotic combination on E. faecalis biofilm inside dentin tubules was also evaluated by confocal microscopy . Culture s of HDPC were exposed to the antibiotic combination with the best antimicrobial effect and simvastatin and determined cell viability, alkaline phosphatase activity, deposition of mineralization nodules and expression of Dspp (dentin sialophosphoprotein), important odontoblast markers of dentin mineralization. Data were analyzed statistically, considering p<0.05 . All antibiotic combina tions reduced statistically the growth of bacteria... / Mestre

Orientador: Eduardo Bagagli / Banca: Sandra Maraes Gimenes Bosco / Banca: Virgínia Bodelão Richini Pereira / Resumo: As peritonites são sérias e frequentes complicações em pacientes submetidos à terapia de reposição renal, principalmente na diálise peritoneal ambulatorial contínua (CAPD, "continuous ambulatory peritoneal dialysis"). As infecções fúngicas, embora menos frequentes que as bacterianas, estão associadas a uma maior taxa de morbidade e mortalidade, e normalmente tornam impossíveis a CAPD, devido à necessidade de remoção do cateter. Este trabalho visou caracterizar e identificar as peritonites fúngicas com o uso de métodos morfofisiológicos e moleculares, além de avaliar seus perfis de sensibilidade e produção de biofilme in vitro em pacientes submetidos à CAPD do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu. Foram avaliados trinta isolados de leveduras obtidos de episódios distintos de peritonites, que foram identificados por métodos morfofisiológicos (CHROMagar e auxanograma) e moleculares, tais como o sequenciamento de rDNA, perfil de restrição do gene SADH e padrão do intron do grupo I. Foram também realizados o perfil de sensibilidade antifúngica para as drogas anfotericina B, fluconazol, voriconazol e caspofungina pela técnica de microdiluição em caldo, seguindo o protocolo do CLSI M27-A3 e a produção de biofilme utilizando-se discos de silicone em reação com XTT (sal de tetrazol). Dos 30 isolados de leveduras, observou-se que as espécies de Candida parapsilosis foram as predominantes (n=10), seguida de Candida albicans (n=7), Candida tropicalis (n=6), Candida orthopsilosis (n=5), Candida guilliermondii (n=1) e Kodamaea ohmeri (n=1). Dentre os isolados de C. albicans, caracterizados pelo perfil de intron do grupo I, observou-se predomínio de genótipos do grupo A (n=5) e também a ocorrência de genótipos do grupo B (n=2). Todos os isolados foram sensíveis ao voriconazol e caspofungina, amostras de C.orthopsilosis (n=5), K.ohmeri (n=1), C.guilliermondii (n=1) e C. albicans (n=1) ... / Abstract: Not available / Mestre

Orientador: Carlos Eduardo Vergani / Resumo: Há diversas possibilidades para o controle microbiano, dentre elas, o uso de microcristais associados à prata (Ag), e a inativação fotodinâmica antimicrobiana (do inglês, aPDI). Devido à capacidade de fotoexcitação no comprimento de onda de luz azul, fosfato de prata (Ag3PO4) foi submetido à exposição a luz em 455nm. Este trabalho teve como objetivo sintetizar, caracterizar e verificar a capacidade fotocatalítica e antimicrobiana dos microcristais de Ag3PO4, utilizando culturas de C. albicans em suspensão e biofilme, na presença e ausência de luz. Os microcristais foram sintetizados pelo método da co-precipitação, e foram determinados o "gap" de energia e o espectro de absorção do material através de análise de espectro de UVVIS. Para caracterizar Ag3PO4, realizou-se a difração de raios-X (DRX), microscopia eletrônica de varredura por emissão de campo (MEV-EC) e atividade fotocatalítica (degradação de rodamina) após 4 exposições à luz. Para os ensaios microbiológicos (UFC/mL), determinou-se a concentração fungicida mínima (CFM) em suspensão e biofilme, na ausência e presença de luz (55,8 J/cm²). Para análise dos resultados, aplicou-se o teste de análise de variância de dois fatores, com teste posterior de Tukey. Os resultados demonstraram que o espectro de absorção abrange a faixa azul do comprimento de onda, apesar do maior sinal estar localizado na região de luz UV. Nos espectros de DRX observou-se a produção de prata cúbica e hexagonal no decorrer das exposições, juntament... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: There are several possibilities for microbial control, among them the use of microcrystals associated with silver (Ag), and antimicrobial photodynamic inactivation (aPDI). Due to the ability of photoexcitation in the blue light wavelength, silver phosphate (Ag3PO4) was subjected to light exposure at 455nm. Thus, the aim was to synthesize, characterize and verify the photocatalytic and antimicrobial capacity of Ag3PO4 microcrystals using cultures of C. albicans in planktonic and biofilm form, in the presence and absence of light. Microcrystals were synthesized by the coprecipitation method, the energy band gap and the absorption spectrum of the material were determined by UV-VIS spectrum analysis. To characterize Ag3PO4, Xray diffraction (XRD), field emission scanning electron microscopy (FE-SEM) and photocatalytic activity (rhodamine degradation) were performed after 4 exposures to light. For the microbiological tests (CFU/mL), the minimum fungicidal concentration (MFC) in planktonic and biofilm was determined, in the absence and presence of light (55.8 J/cm²). To analyze the results, a two-way analysis of variance (ANOVA) was applied, followed by Tukey post-test. The results showed the absorption spectrum covers the blue wavelength range, although the largest peak is located in the UV light region. The XRD spectra produced cubic and hexagonal silver during the exposures, with an increase of amorphous material. The microcrystal size was observed (0.12 μm) by FE-SEM images, wi... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Guilherme de Siqueira Ferreira Anzaloni Saavedra / Coorientadora: Anelyse Arata / Banca: Dolores Ribeiro Ricci Lazar / Banca: João Paulo Barros Machado / Banca: Renata Marques de Melo Marinho / Banca: Estevão Tomomitsu Kimpara / Resumo: Neste estudo avaliou-se por caracterização mecânica e microestrutural, a degradação em meio bucal e in vitro da cerâmica Y-TZP sinterizada por energia de micro-ondas em comparação ao método convencional. Foram confeccionados noventa e seis discos por CAD-CAM (ISO 6872), sinterizados de modo convencional (C) 1530°C/120 minutos e por energia de micro-ondas (M) 1450°C/15 minutos. E submetidos à degradação hidrotérmica em reator pressurizado (E) (1,5h/150°C/3 bar) e à degradação in situ (B) (240 horas em meio bucal), formando-se 8 grupos (n = 12): M, C, ME, CE, MB, CB, MEB e CEB. Foram realizadas análises de contração volumétrica, difração de raios-X (DRX), rugosidade superficial (Ra e Rz), ângulo de contato, microscopia eletrônica de varredura (MEV), quantificação do biofilme por UFC/mL e análise de resistência mecânica por flexão biaxial. Os resultados obtidos foram analisados estatisticamente por t-Student, Anova dois e três fatores, e teste de Tukey (5%). Por DRX observou-se transformação de fase tetragonal para monoclínica (t-m) nos grupos envelhecidos, exceto para o grupo MB. Não foram observadas diferenças significantes na contração volumétrica (p=0,274), na rugosidade Ra (p=0,137) e Rz (p=0,187), assim como nos valores de ângulo de contato entre os métodos de sinterização (p=0,669). Por MEV observou-se a presença de formação de biofilme inicial e na contagem de Unidades Formadoras de Colônias (UFC/mL) foi maior quando os espécimes foram previamente envelhecidos in vitro (... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In this study ir was evaluated the effect of in situ low temperature degradation of yttrium oxide stabilized tetragonal zirconia polycrystal (Y-TZP) ceramics sintered by microwave energy in comparison to the conventional method. Ninety-six discs milled by CAD/CAM (ISO 6872) were divided in: conventionally sintered (C) at 1530 ° C / 120 minutes and microwave energy (M) 1450°C / 15 minutes. Specimens were submitted to hydrothermal degradation in a pressurized reactor (E) (1.5h / 150°C / 3 bar) and in situ degradation (B) (240 hours in the buccal medium), forming eight groups (n=12): M, C, ME, CE, MB, CB, MEB and CEB. Specimens were evaluated through analysis of volumetric contraction, X-ray diffraction (XRD), surface roughness (Ra and Rz), contact angle, scanning electron microscopy (SEM), biofilm quantification by CFU / mL and biaxial flexural strength. Results were statistically analyzed through t-Student, two, three-way Anova and Tukey tests (5%). By XRD, tetragonal to monoclinic phase transformation (t-m) was observed in the aged groups, except for the MB group. No significant differences were observed in the volumetric contraction (p = 0.274), Ra roughness (p = 0.137) and Rz (p = 0.187), as well as contact angle values between sintering methods (p = 0.669). SEM images showed that the initial biofilm formation was observed after 8 hours in situ, an increase of CFU / mL occurred when the specimens were previously aged in vitro (p = 0.001). Regarding biaxial flexural strength... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

En este trabajo de tesis doctoral y bajo la hipótesis de la utilización por parte la bacteria de Bordetella pertussis del desarrollo en biofilm como un posible mecanismo de persistencia en el hospedador se evaluó la capacidad de formación de biofilm por parte de aislados clínicos de Bordetella pertussis obtenidos de pacientes infectados y tratados en el Hospital Sor María Ludovica de la ciudad de La Plata. Todos los aislados clínicos estudiados, incluyendo cepas aisladas entre los años 2001 y 2007 presentaron mayor capacidad de formación de biofilm en superficies abióticas cuando se las comparó con la cepa de referencia Bordetella pertussis Tohama I, cepa adaptada al laboratorio y utilizada en la producción de vacunas contra la enfermedad. De los ocho aislados clínicos estudiados se seleccionó uno, debido a una exacerbada producción de biofilm (produjo 5 veces más biomasa en las mismas condiciones de cultivo cuando se la comparó con la cepa de referencia) y se realizó un estudio de proteómica comparativa para establecer un posible fenotipo adaptado a la condición de cultivo en estudio. Los experimentos se llevaron a cabo en colaboración con el grupo de la Dra. Monika Elingh Schulz de la Universidad de Veterinaria de Viena, Austria y se utilizó la tecnología 2D-DIGE para evaluar la expresión diferencial de proteínas de la fracción soluble entre ambas cepas en condiciones de cultivo líquido y biofilm. Un análisis de componente principal indicó que las diferencias más significativas entre los fenotipos expresados es consecuencia de la diferencia de cepas y posteriormente consecuencia de la condición de cultivo. Se identificaron 32 proteínas diferencialmente expresadas (mayor de 3 veces de diferencia) entre ambas cepas, las cuales fueron asignadas a las categorías: metabolismo y obtención de energía, síntesis de aminoácidos y proteínas, transporte y virulencia (Bcrh2, OmpQ, Vag8 y BrkA). Todos los factores de virulencia identificados corresponden a proteínas reguladas por el sistema de dos componentes BVGAS. Sabiendo que dicho sistema regula la expresión de importantes adhesinas en Bordetella pertussis y que su inactividad provoca la incapacidad de formación de biofilm es que se decidió estudiar a través de la técnica de PCR en tiempo real la expresión del ARN mensajero de un conjunto mayor de factores de virulencia regulados por este sistema incluyendo adhesinas tales como FHA, PRN, Fim, BipA y la proteína de secreción del sistema tipo III Bsp22 que ha sido reportada en la bibliografía como participante junto a Fim en la producción de filamentos que brindarían estructura a la matriz extracelular del biofilm de B. pertussis. Los resultados obtenidos indicaron un aumento en la expresión de ARN mensajero para la totalidad de los genes estudiados indicando que posiblemente el aumento en la expresión de adhesinas reguladas por el sistema BvgAS, sumado a la expresión de enzimas involucradas en la producción de energía que podrían explicar la alta velocidad de duplicación de la cepa clínica Bp2723 le conferirían la capacidad de formar un biofilm más robusto comparado con la cepa de referencia en las condiciones de cultivo estudiadas.

El objetivo principal de esta investigación fue estudiar el desarrollo de la biopelícula depositada sobre las salivaderas dentales de tres materiales diferentes (acero inoxidable, cerámica y opalina), de equipos odontológicos correspondientes a dos zonas diferentes del casco urbano de la ciudad de La Plata (Z1 y Z2). Para ello se realizaron 38 cortes de salivaderas dentales de los tres materiales, de cada zona En primer lugar se realizó el análisis de la microbiota planctónica y sésil del agua que circula por los ductos internos con salida a las salivaderas dentales. Luego se analizó la saliva de 50 pacientes sin enfermedad periodontal asistidos en ambas zonas. Posteriormente se analizó la composición química de los sustratos por medio de reactivos químicos y EDAX. Luego se observó la rugosidad de los cortes de los bordes internos y externos de las salivaderas dentales a través de un rugosímetro y de Microscopio de Fuerza Atómica. Se realizó el recuento de las Unidades Formadoras de Colonias por centímetro cúbico (UFC/cm3) presentes en el biofilm adherido a los cortes de los tres tipos de materiales a partir de siembras de medios de cultivo específicos, incubados a 37ºC y temperatura ambiente, durante 48 horas y una semana, según corresponda. Los valores de las UFC/ml del agua de ingreso y de egreso hacia las salivaderas dentales mostraron que la contaminación supera ampliamente y se ve incrementada al atravesar el equipo odontológico, considerando los indicados por el Código Alimentario Argentino. El agua libre de hongos en el ingreso, demostró la presencia de dichos microorganismos en el agua de salida hacia las salivaderas, siendo P<0,05. Con respecto a las UFC/ml correspondientes a la biopelícula de las cañerías metálicas internas de las unidades dentales, se observaron tanto hongos como bacterias sésiles con un importante incremento, con la adición de hongos ambientales. El estudio de la saliva de los 50 pacientes arrojó un promedio de 6,58x103 de estreptococos en Z1 y de 6,8 x 10 3 en Z2. Del análisis de la composición química se reporta que la cerámica fue similar a la de la opalina, mientras que el acero inoxidable no correspondía al tipo quirúrgico. Los resultados de la rugosidad arrojaron los siguientes datos en orden creciente: acero inoxidable <opalina <cerámica, tanto en los bordes como en las paredes internas. El análisis de los valores de las UFC/cm3 de las bacterias sésiles obtenidas de ambas regiones (Z1 y Z2) para las 24 y 48 horas de exposición muestra que el número se incrementó con el tiempo. Mientras que las UFC/cm3 de hongos fue muy significativa en lo que respecta a los tres materiales: acero inoxidable < opalina < cerámica, siendo para cada material el valor medio de UFC/cm3 de hongos sésiles a 24 < 48 horas. No hubo diferencia significativa en relación a las zonas Z1 y Z2. De acuerdo con los resultados obtenidos en el presente trabajo los resultados revelaron que la cerámica y la opalina presentaron mayor adherencia microbiana que el acero inoxidable., sin embargo se observó una diferencia estadísticamente significativa de P<0,001 al examinar el factor tiempo. Se concluye que de los tres materiales analizados el más indicado para la confección de salivaderas dentales es el acero inoxidable indicado por las Normas IRAM.