O coronavírus bovino (BCoV) é classificado no Grupo 2 do gênero Coronavirus da ordem Nidovirales, família Coronaviridae, causando disenteria (disenteria de inverno) em bovinos adultos, diarréia em bezerros neonatos e processos respiratórios em bovinos adultos e jovens. No presente estudo, 21 amostras fecais de vacas leiteiras colhidas durante um surto de disenteria em uma propriedade de Paranapanema no Estado de São Paulo positivas para BCoV foram submetidas a reações de PCR para amplificação parcial dos genes codificadores das proteínas S (448pb) e HE (441pb) do BCoV. Destas amostras, 14 foram positivas para cada PCR (não simultaneamente), sendo os fragmentos amplificados submetidos a seqüenciamento de DNA para reconstrução genealógica por máxima parcimônia através de algoritmo heurístico em conjunto com seqüências homólogas recuperadas do GenBank. Considerando-se o gene S, a identidade de nucleotídeos entre as 14 amostras aqui estudadas foi de 100%, tendo as mesmas segregado em um grupo exclusivo; além disso, demais amostras brasileiras incluídas no estudo segregam em outros dois grupos. Em relação ao gene HE, as 14 amostras estudadas apresentaram identidade de nucleotídeos de 100%, mas a árvore genealógica apresentou topologia pouco resolvida, tendo estas amostras, segregado em grupo politômico com as seqüências homólogas incluídas. Comparações entre os diversos grupos nas árvores do gene S em termos de aminoácidos revelaram marcadores grupo-específicos, com substituições exclusivas para as amostras de BCoV aqui estudadas. Com base nestes resultados, conclui-se que, durante o transcorrer do surto de disenteria de inverno, uma única linhagem de BCoV estava presente, baseado no seqüenciamento parcial dos genes S e HE e que há pelo menos três genótipos de BCoV presentes no Brasil em relação ao gene S e ao menos um em relação ao gene HE, considerando-se as regiões gênicas e as seqüências incluídas no presente estudo. / Bovine coronavirus (BCoV) is classified in group 2 of the genus Coronavirus, family Coronaviridae, order Nidovirales, and causes winter dysentery in adult bovine, neonatal calf diarrhea, and respiratory disorders in both adult and young bovine. In this investigation, 21 fecal samples from dairy cows collected during an outbreak of dysentery in a farm located at Paranapanema, São Paulo State, all positive to BCoV, were submitted to PCRs to partial amplification of genes S (448bp) and HE (441bp ) of BCoV. Fourteen out of these samples were positive for each PCR (not simultaneously) and the amplicons were submitted to DNA sequencing for genealogic reconstruction with maximum parsimony and heuristic algorithm with homologous sequences retrieved from the GenBank. Regarding S gene, the nucleotide identity among the 14 strains was 100% and these segregated in an exclusive cluster; furthermore, the other Brazilian strains included in the analysis segregated in other two clusters. Taking into account the HE gene, the 14 strains analyzed presented a nucleotide identity of 100%, but the genealogic tree showed a low-resolved topology, having these samples segregated in a polytomic cluster with the homologous sequences included. Amino acid comparisons among the different clusters in the trees of gene S revealed cluster-specific markers, with exclusive substitutions for the BCoV strains studied herein. Based on these results, one can conclude that, during the winter dysentery outbreak, a single BCoV lineage was involved based on partial S and HE genes sequences and that there are at least three genotypes of BCoV in Brazil regarding S gene and at least one regarding HE gene, taking into account the gene regions and the sequences included in this investigation.

Os processos inflamatórios na glândula mamária são especialmente freqüentes e importantes em bovinos leiteiros, sendo responsáveis por grandes prejuízos à pecuária leiteira. A mastite infecciosa é a mais importante doença sob o ponto de vista econômico e de saúde pública. A contagem de unidades formadoras de colônias por mililitro (UFC/mL) de leite proveniente diretamente de uma glândula mamária permitiria avaliar o comportamento de cada um dos agentes etiológicos da mastite infecciosa. A comparação desta informação com a contagem de células somáticas (CCS/mL) na amostra de leite permitiria uma avaliação mais acurada do processo infeccioso e inflamatório na glândula mamária. O presente trabalho teve como objetivos: avaliar o \"status\" microbiológico de amostras de leite de vacas em lactação que apresentaram mastite e comparar a quantidade de UFC/mL de colônias dos diferentes microrganismos com as respectivas CCS/mL, levando em consideração a diferenciação de células polimorfonucleares (PMN/mL) e mononucleares (MN/mL) nas amostras. Quinhentas e seis amostras de 15 propriedades de exploração leiteira do Estado de São Paulo, Brasil, foram submetidas aos testes de Tamis e California Mastitis Test (CMT), e realizados os exames microbiológicos, contagem de UFC/mL e CCS/mL. Destas, 112 não apresentaram crescimento de microrganismos, e das amostras com crescimento foram isolados: 94 Corynebacterium spp., 104 Staphylococcus spp., 73 Streptococcus spp., 36 Prototheca zopfii, 08 Candida spp., 02 Nocardia spp. e 77 associações entre os microrganismos. Houve correlação entre o número de UFC/mL com a CCS/mL, assim como entre PMN/mL e entre MN/mL. Concluiu-se que existe um aumento da CCS/mL, PMN/mL e MN/mL no leite quando há um aumento das contagens de UFC/mL. As quantidades de UFC/mL no leite com isolamento de Streptococcus spp. foram maiores estatisticamente (P < 0,05) que as quantidades de UFC/mL com isolamento de Corynebacterium spp. e Staphylococcus spp. Concluiu-se também que, em havendo necessidade de tratamento de mastite clínica e subclínica no rebanho devido às altas contagens de UFC/mL, deve-se tratar inicialmente os quartos nos quais foram isolados Streptococcus spp. e deixar para uma segunda etapa ou para o processo de secagem o tratamento das mastites associadas à Staphylococcus coagulase-positivo, Staphylococcus coagulase-negativo e Corynebacterium spp. nessa mesma ordem. / Mastitis is a complex pathologic condition which may have different etiology and consequences. Mastitis usually starts with the penetration of microorganisms through the teat canal towards mammary parenchyma and secretory cells, and an inflammatory response occurs due to the products of the microbial growth. The aim of this work was to evaluate the microbial status of milk samples collected from lactating cows with mastitis and comparing the colonies forming units (CFU)/mL and the somatic cell counts (SCC)/mL, taking into consideration the differentiation of polymorphonuclear (PMN/mL) and mononuclear (MN/mL) cells. From primiparous and pluriparous dairy cows, 506 milk samples were collected from 15 dairy farms located in the State of São Paulo, Southeastern Brazil. Samples were submitted to strip cup test and California Mastitis Test (CMT) and evaluated for CFU and SCC procedures. For microbial examinations, 112 (22.13%) samples were found negative and from the other 394, the following microorganisms were isolated: 94 (18.58%) Corynebacterium spp., 104 (20.55%) Staphylococcus spp., 73 (14.42%) Streptococcus spp., 36 (7.11%) Prototheca zopfii, 8 (1.60%) Candida spp., 2 (0.39%) Nocardia spp., and 77 (15.21%) associations among distinct microorganisms. Significant correlations were found between the CFU/mL and SCC/mL, and also with the PMN and MN cell countings. With the increased CFU/mL countings, it was observed the increase in SCC, PMN, and MN countings. The CFU/mL counts in samples with Streptococcus spp were statistically higher (P < 0.05) than the ones positive for Staphylococcus spp. and Corynebacterium spp. In case of treatments of mastitis, target must be primarily oriented to treat the mammarial glands showing clinical or subclinical mastitis with Streptococcus spp. showing high CFU/mL, and at the second stage, in case of treatment or drying the cows, therapy must be directed against coagulase-positive Staphylococcus, coagulase-negative Staphylococcus and Corynebacterium spp.

As dosagens de estradiol e progesterona são utilizadas em grande número de pesquisas em reprodução animal. Vários métodos e anticorpos para quantificação vêm sendo desenvolvidos, porém cada metodologia analítica possui vantagens e limitações. O radioimunoensaio é o mais utilizado, mas tem como principal desvantagem o envolvimento de material radioativo. A preocupação neste setor aliada às exigências das legislações em questões ambientais, têm aumentado a necessidade do desenvolvimento de novas técnicas sem a utilização de material radioativo. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a técnica xMAP-Multiplex&reg; para dosagem de estradiol e progesterona em vacas, ovelhas e búfalas. Foram utilizados cinco animais de cada espécies. O ciclo estral dos animais foi sincronizado com a utilização de prostaglandina e amostras sanguíneas foram coletadas durante o ciclo estral. As concentrações séricas de progesterona e estradiol dos animais do estudo foram obtidas pelo MILLIPLEX&reg; MAP Multi Species Steroid kit (STTHMAG-21K; Millipore, Billerica, MA). Nas condições em que este experimento foi realizado, os resultados mostraram que esta técnina é viável para a avaliação do perfil progesterônico destas espécies, mas não para avaliar o perfil estrogênico. / Quantification of estradiol and progesterone are used in a big number of animal´s reproduction´s researches. Several methods and antibodies to quantify them have been developed, but each analytical methodology has advantages and limitations. Radioimmunoassay is the most widely used method, but it has as major disavantage the use of radioactive material. The concerns at this area added to the requirements of legislations about environmental topics have increased the need to development techniques without the use of radioactive material. The aim of this research was to evaluate the xMAP-Multiplex&reg; technique to quantify progesterone and estradiol in ovines, bovines and bubalins. Five animals of each species were used. The estrous cycle of the animals was synchronized by prostaglandin and blood samples were collected during the estrous cycle. The seric concentrations of progesterone and estradiol were obtained by MILLIPLEX&reg; MAP Multi Species Steroid kit (STTHMAG-21K; Millipore, Billerica, MA). Under the conditios of this experiment the results showed that this technique is practicable to evaluate progesterone´s profile in those animals, but not to evaluate their estradiol´s profile.

Quatro experimentos foram realizados para avaliar as concentrações plasmáticas de progesterona ([P4]) e as taxas de fertilidade na inseminação artificial em tempo fixo (IATF) após o uso de diferentes dispositivos de liberação lenta de progesterona (DP). No primeiro experimento foram utilizadas 4 novilhas ovariectomizadas. Esses animais receberam 5 diferentes tipos de DP, nos quais se variou a superfície de contato (50cm&sup2; ou 100 cm&sup2; e a dose de progesterona (0,5g; 1,0g e 2,0g) Os dispositivos foram inseridos aos pares durante 7 dias e se estabeleceu um intervalo entre tratamentos de pelo menos 30 dias. Com os dados de [P4] 24 horas e sete dias após a inserção do DP obtiveram-se as seguintes equações de regressão, respectivamente: [P4]24h = 0,238 + 0,0343(área) + 0,513(dose); (R&sup2;=0,94) e [P4] 7d = 0,331+ 0,0056(área) + 0,329(dose); (R&sup2;=0,71). No segundo experimento foram comparados dois dos dispositivos testados no primeiro estudo: P50-1,0 (50 cm2 área; 1,0g dose P4) e P50-1,5 (50 cm&sup2; área; 1,5g dose P4) com dois dispositivos comerciais: CIDR (120 cm&sup2; área; 1,9g P4 dose) e DIB (120 cm&sup2; área; 1,0g P4 dose). Os dispositivos foram inseridos em 15 novilhas Nelore pré-puberes para avaliação das [P4] obtendo-se, após 24 horas de inserção, para CIDR, DIB, P50-1,5 e P50-1,0, respectivamente: 7,7&plusmn;2,8&ordf; ; 4,5&plusmn;0,75b; 5,9&plusmn;2,5b e 2,1&plusmn;0,5c ng/ml e após 8 dias, respectivamente: 3,3&plusmn;0,7&ordf; ; 2,6&plusmn;2,0&ordf;; 3,0&plusmn;2,4&ordf; e 1,1&plusmn;0,27bng/ml. As regressões obtidas no primeiro experimento não foram eficientes para estimar as [P4] obtidas no estudo 2. Nos experimentos 3 e 4 comparou-se a eficiência dos dispositivos DIB e P50-1,5 em 431 vacas de corte zebuínas e cruzadas, com bezerros ao pé e multíparas, após uso em um programa de IATF no qual os dispositivos permaneciam nos animais durante 8 dias; quando da colocação desses dispositivos, eram aplicados 2mg de benzoato de estradiol (BE) e, na retirada, 400UI de eCG. Uma última dose de BE foi administrada 24 horas após a retirada dos DP, e a IATF foi realizada 54 horas após a retirada dos DP. Não foram encontradas diferenças nas taxas de concepção da IATF entre dispositivos. As taxas de concepção variaram entre 30 e 51,6% nos lotes tratados. O tratamento diminuiu o intervalo tratamento-parto de 365 para 317 dias, comparado à monta natural. / Four studies have been made to evaluate the plasmatic progesterone concentration ([P4]) of different intravaginal low delivery progesterone devices (PD) and the fertility rates after their use in timed artificial insemination (TAI). In the first study there were used 4 ovariectomized heifers. These animals received 5 kinds of prototypes PD on which varied the contact surface (50 or 100 cm&sup2;) and the progesterone doses (0,5; 1,0 or 2g). These PD were inserted in the vaginas in pairs and the interval between treatments was higher than 30 days. With the data of [P4] there were found the fallowing regressive equations for the days 1 and 7 after the insertion , respectively: [P4]24h = 0,238 + 0,0343(surface) + 0,513(dose); (R&sup2;=0,94) and [P4]7d = 0,331+ 0,0056(surface) + 0,329(dose); (R&sup2;=0,71). In the second study there were compared 2 prototypes PD based on the first study: P50-1,0 (50 cm&sup2; surface; 1,0g dose P4) and P50-1,5 (50 cm&sup2; surface; 1,5g dose P4) with two commercial PD: CIDR (120 cm&sup2; surface; 1,9g P4 dose) and DIB (120 cm&sup2; surface; 1,0g P4 dose). These PD were inserted in 15 prepuberal Nelore heifers to evaluate the [P4] The [P4] (in ng/ml) found after 24 hours were for CIDR, DIB, P50-1,5 e P50-1,0, respectively: 7.7&plusmn;2.8&ordf; ; 4.5&plusmn;0.75b; 5.9&plusmn;2.5b e 2.1&plusmn;0.5c ng/ml and after 8 days, respectively: 3.3&plusmn;0.7&ordf; ; 2.6&plusmn;2.0&ordf;; 3.0&plusmn;2.4&ordf; e 1.1&plusmn;0.27b ng/ml. The regressive equations found in the first study were not efficient to estimate the [P4] for the prototypes PDs. In the studies 3 and 4 there were compared the PD DIB and P50-1.5 for TAI in 431 Nelore and cross-breed lactating postpartum beef cows. The TAI protocol was: PD insertion per 8 days, administration of 2 mg estradiol benzoate (EB) in the insertion day - 400 UI of eCG in the PD removal - 1mg EB 24 hours after PD removal- TAI 54 hours after the PD removal. There were no differences in TAI conception rates between PD. The TAI conception rates ranged from 30 to 51.6% in the treated herds. The treatment has decreased the treatment-partum interval from 365 to 317 days on animals submitted to natural mating.

Em bovinos , as flutuações nas concentrações de estradiol (E2) e progesterona ( P4) que ocorrem em torno do estro modulam a expressão gênica do endométrio, a composição histotrofo, o desenvolvimento do concepto e assim afetam o resultado da prenhez. Durante o ciclo estral, ações endócrinas bem orquestradas afetam o endométrio bovino (BAUERSACHS et al., 2005). No presente trabalho, a hipótese sustentada é que alterações endócrinas associadas ao crescimento e ovulação de folículos de diferentes tamanhos modulam a distribuição espacial das transcrições no trato reprodutivo de vacas da raça Nelore. O crescimento folicular de vacas Nelore multíparas e não lactantes foi farmacologicamente manipulado a fim de gerar grupos com folículos pré-ovulatórios e subsequente corpo lúteo (ou seja, diferentes ambientes endócrinos periovulatórios) grande (FG CLG; n = 6) ou pequeno (FP CLP, n = 6). Os animais foram abatidos, sete dias após a indução da ovulação e fragmentos das regiões anterior, média e posterior de ambos os cornos uterinos e da vagina foram coletados para a avaliação de expressão gênica por PCR quantitativo. A expressão gênica foi normalizada utilizando os genes referência ciclofilina A e beta actina, como indicado pelo software GeNorm. Os dados foram analisados utilizando-se o procedimento PROC MIXED do SAS (versão 9.2; Instituto SAS) em dois modelos independentes. O primeiro modelo incluiu os efeitos de grupo (FG CLG e FP CLP), lado do corno uterino (ipsolateral ou contralateral ao ovário contendo o CL) e sua interação, o segundo modelo incluiu os efeitos de grupo, região (anterior, médio e posterior) do corno ipsolateral e suas interações. Vacas do grupo FP CLP apresentou maiores folículos pré-ovulatórios e concentrações de E2 durante proestro e maiores CL e níveis de P4 no diestro inicial, quando comparados com os do grupo FP CLP. Animais do grupo FP CLP apresentaram uma maior abundância de transcritos que codificam o receptor de E2 (ESR2; 130%), a aldo-ceto redutase família 1, membro C4 (AKR1C4; 232%), a lipoproteína lipase (LPL; 116%), o carreador de soluto família 2, membro 1 (SLC2A1; 24%) e inibidor da peptidase da serina, subtipo A, membro 14 (SERPINA14; 75%). Por outro lado, a expressão de genes que codificam o receptor de P4 e receptor de oxitocina foi regulada positivamente no tecido endometrial do grupo FP CLP (36 % e 966 %, respectivamente). Além disso, a abundância da transcrição desse genes foi maior no corno contralateral ao CL. Além disso, a região anterior do corno uterino ipsolateral apresentou aumentada expressão de PGR, ESR2, LPL, SLC2A1 e SERPINA14 em comparação com a região posterior. Com exceção da OXTR que apresentou interação grupo e lado, não houve interações grupo por lado ou região. Não houve efeito de grupo sobre a expressão de qualquer um dos genes na vagina. Em conclusão, o presente estudo mostrou que o padrão de expressão de genes específicos em resposta variou quanto a grupo e entre as regiões do trato reprodutivo de fêmeas bovinas. No entanto, os distintos ambientes endócrino periovulatórios não afetaram a distribuição regional de transcritos. / In cattle, fluctuations of progesterone (P4) and estradiol (E2) concentrations that occur around estrus modulate endometrial gene expression, histotroph composition, conceptus development and, thereby affect pregnancy outcome. During the estrous cycle, well-orchestrated endocrine actions affect the bovine endometrium (BAUERSACHS et al., 2005). In the present work, we hypothesized that endocrine changes associated with growth and ovulation of follicles of different sizes modulate the spatial distribution of transcripts in the reproductive tract of Nellore cows. The follicular growth of multiparous non-lactating Nelore cows was pharmacologically manipulated in order to generate groups with large (LF LCL; n=6) or small (SF SCL; n=6) preovulatory follicles and subsequent corpus luteum (i.e., different periovulatory endocrine milieus). Cows were slaughtered seven days after the induction of ovulation and fragments from the anterior, middle and posterior regions from both uterine horns and the vagina were collected. Gene expression assessment was performed by quantitative PCR. Gene expression was normalized using cyclophilin A and actin, beta as reference genes, as indicated by the GeNorm software. Data were analysed using the PROC MIXED procedure of SAS (Version 9.2; SAS Institute) in two independent models. The first model included the effects of group (LF LCL and SF SCL), side of the uterine horn (ipsilateral or contralateral to the ovary containing the CL) and interaction and the second model included the effects of group, region of the ipsilateral horn (anterior, middle and posterior) and interaction. Cows in the LF LCL group presented larger preovulatory follicles and E2 concentrations during proestrus and larger CL and P4 levels during early diestrus when compared to animals from SF SCL group. Animals in the LF LCL group had a greater abundance of transcripts coding the estrogen receptor (ESR2; 130%), aldo-keto reductase family 1, member C4 (AKR1C4; 232%), lipoprotein lipase (LPL; 116%), solute carrier family 2, member 1 (SLC2A1; 24%) and serpin peptidase inhibitor, clade A member 14 (SERPINA14; 75%). Conversely, the expression of genes coding the progesterone receptor and oxytocin receptor was upregulated in the SFSCL endometrial tissue (36% and 966% respectively). Furthermore, transcript abundance of the later genes was observed in the contralateral horn. In addition, the anterior region of the ipsilateral horn showed increased expression of PGR, ESR2, LPL, SLC2A1 and SERPINA14 compared to the posterior region. Except for a group by side interaction for the expression of OXTR, there were no group by region or group by side interactions. There was no effect of group on the expression of any of the genes in the vagina. In conclusion, our study showed that the expression pattern of specific genes varied in response to group and among regions of the female reproductive tract. However, distinct endocrine periovulatory milieus did no affect regional distribution of transcripts.

Submitted by Helena Bejio (helena.bejio@unioeste.br) on 2018-04-03T12:53:17Z No. of bitstreams: 2 DISSERTACAO-EVERLINE-INES-ECKSTEIN(1).pdf: 1013602 bytes, checksum: d451570871be22b421b1424daa661f9c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-03T12:53:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTACAO-EVERLINE-INES-ECKSTEIN(1).pdf: 1013602 bytes, checksum: d451570871be22b421b1424daa661f9c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-03-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The objective of this study was to evaluate protein sources in the diet of ruminants in substitution of soybean meal, such as: dry distillery grains with solubles, high energy cotton meal and protected livestock urea, in relation to intake and apparent digestibility dry matter and nutrients, milk production, microbial synthesis, blood parameters, ruminal parameters and partial economic viability of the diets. Four Holstein cows were used at 145 ± 25 days of lactation and four Jersey steers with a ruminal cannula, distributed in the experimental design in the Latin square (4x4) with four treatments and four experimental periods with 21 days each. The treatments used were the substitution of soybean meal by dried distillery grains with solubles (DDGS) of corn or high energy cotton meal (HECM) or protected urea (Ur) in the concentrate + soybean meal to meet the animal requirement. There was a difference in the intake of ethereal extract (EE), neutral detergent fiber (NDF), acid detergent fiber (ADF) by the nutrients present in each food, as well as EE digestibility. Corrected milk production showed a difference between treatments, depending on the amount of EE of the food. For the blood parameters, it was different for the values of cholesterol and urea. Ruminal pH had no difference among diets. However, there was only effect for the variable in time, presenting quadratic effect. The behavior of the ammoniacal nitrogen showed interaction with the evaluation times after the feed, only for 2 hours after the feed, obtaining a quadratic effect for the treatment with urea, which was higher than the others, due to the occurrence of better synchronization concentration of the concentrate. Regarding the partial economic viability, the break-even point was obtained in the treatment with DDGS. The different protein sources used, dried distillers grains with solubles, high-energy cottonseed meal and protected livestock urea can substitute soybean meal for ruminant feed. / Objetivou-se avaliar fontes proteicas na dieta de ruminantes em substituição ao farelo de soja, tais como: os grãos secos de destilaria com solúveis de milho, o farelo de algodão de alta energia e a ureia pecuária protegida, com relação à ingestão e digestibilidade aparente da matéria seca e dos nutrientes, produção de leite, síntese microbiana, parâmetros sanguíneos, parâmetros ruminais e viabilidade econômica parcial das dietas. Foram utilizadas quatro vacas da raça Holandês, aos 145 ± 25 dias de lactação e quatro bois da raça Jersey, providos de cânula ruminal, distribuídos no delineamento experimental em quadrado latino (4x4) com quatro tratamentos e quatro períodos experimentais com 21 dias cada. Os tratamentos utilizados foram a substituição do farelo de soja pelos grãos secos de destilaria com solúveis (DDGS) de milho ou farelo de algodão de alta energia (FAAE) ou ureia pecuária protegida (Ur) no concentrado + farelo de soja para suprir a exigência animal. Verificou-se diferença para a ingestão de extrato etéreo (EE), fibra em detergente neutro (FDN), fibra em detergente ácido (FDA) pelos nutrientes presentes em cada alimento, assim como na digestibilidade do EE. A produção de leite corrigida apresenta diferença entre os tratamentos, em função da quantidade de EE dos alimentos. Para os parâmetros sanguíneos, obteve diferença para os valores de colesterol e ureia. O pH ruminal não apresentou diferença entre as dietas. Contudo, houve efeito apenas para a variável no tempo, apresentando efeito quadrático. O comportamento do nitrogênio amoniacal apresentou interação com os tempos de avaliação após o fornecimento da ração, apenas para as 2 horas após a alimentação, obtendo efeito quadrático para o tratamento com ureia, que se mostrou mais elevada que as demais, pela ocorrência de melhor sincronismo microbiano do concentrado. Para viabilidade econômica parcial, o ponto de equilíbrio foi obtido no tratamento com DDGS. As diferentes fontes proteicas utilizadas, os grãos secos de destilaria com solúveis, o farelo de algodão de alta energia e a ureia pecuária protegida podem substituir o farelo de soja na alimentação de ruminantes.

O mecanismo pelo qual a sinalização da leptina no hipotálamo permite o início da puberdade ainda não foi esclarecido. Um possível mecanismo para a ação molecular da leptina no eixo reprodutivo é constituído por uma alteração na sinalização do NPY. Objetivou-se neste estudo foi verificar se novilhas precoces Bos taurus indicus possuem a expressão modificada de genes hipotalâmicos relacionadas à sinalização da leptina. Dentre uma população de 500 novilhas entre 20 e 25 meses de idade, 100 novilhas foram selecionadas com base nas características da raça (Nelore), mês de nascimento e peso corpóreo (290 kg). Estas 100 novilhas foram classificadas de acordo com a presença ou não de um corpo lúteo (CL) notável. Dez novilhas sem um CL e dez novilhas com CL notável receberam uma injeção de prostaglandina, e de acordo com a observação visual de cio e palpação retal, 6 novilhas precoces e 6 novilhas não precoces foram selecionadas para o experimento. Estas 12 novilhas foram abatidas e amostras de tecido do hipotálamo foram coletadas e congeladas em nitrogênio liquido. A expressão de SOCS-3, NPY, NPY-Y1 e NPY-Y4 no hipotálamo foi quantificada por PCR em tempo real usando uma proteína ribossomal RP-L19 como um gene de referência. A expressão hipotalâmica de SOCS-3 ou NPY não foi diferente entre os grupos de novilhas (P > 0,50). Acreditava-se que as novilhas ciclando poderiam ser resistentes à leptina devido a um aumento na expressão do SOCS-3 no hipotálamo. Houve uma tendência (P = 0,10) de redução na expressão dos receptores do NPY, NPY-Y1 e NPY-Y4 em novilhas que atingiram a puberdade precocemente. A expressão do NPY-Y1 foi 8.3 vezes menor e a expressão do NPY-Y4 foi 14.3 vezes menor em novilhas precoces. Quando analisados em conjunto, houve uma redução de 11 vezes na expressão dos receptores de NPY em novilhas precoces, e este efeito foi estatisticamente significante (P = 0,03). Estes resultados sugerem que, a menor expressão dos receptores de NPY pelo hipotálamo de novilhas precoces pode torná-lo menos sensível à inibição do NPY, e permitir a obtenção da puberdade com maior peso vivo e níveis menores de leptina circulante. Em conclusão, não houve uma correlação entre a expressão do gene NPY e SOCS-3 e a precocidade sexual das novilhas Nelore, porém houve uma tendência significativa de redução da expressão dos receptores de NPY-Y1 e NPY-Y4 no hipotálamo das novilhas precoces. / The molecular mechanism by which leptin signaling in the hypothalamus might permit the initiation of puberty has not been elucidated. One possible mechanism for leptin molecular action on the reproductive axis is affecting NPY signaling. It was our objective to test whether early-maturing Bos indicus heifers have altered expression of hypothalamic genes related to leptin signaling. Among a population of 500 heifers between 20 and 25 months of age, 100 heifers were selected base on breed attributes (Nelore), month of birth, and body weight (290 kg). These 100 heifers were scored as prepubertal or pubertal according to the presence or not of a noticeable corpus luteum (CL). Ten heifers without a CL and ten heifers with noticeable CL received a prostaglandin injection, and according to visual observation of heat and rectal palpation, 6 prepubertal and 6 pubertal heifers were selected for the experiment. These 12 heifers were slaughtered and samples of hypothalamus were collected and frozen in liquid nitrogen. Expression of SOCS-3, NPY, NPY-Y1 and NPY-Y4 at the hypothalamus was quantified by real-time PCR using the ribosomal protein RP-L19 as a reference gene. Hypothalamic expression of SOCS-3 or NPY was not different between groups of heifers (P > 0, 50). It was thought that late-maturing heifers could be resistant to leptin due to an increased expression of SOCS-3 at the hypothalamus. However, there was a tendency for NPY-Y1 and NPY-Y4 expression to be reduced in heifers that reached puberty earlier (P = 0,10). Expression of NPY-Y1 was 8.3-folds lower and NPY-Y4 expression was 14.3-folds lower in early-maturing heifers. When analyzed together, there was an 11-fold reduction in NPY receptors expression in early-maturing heifers, and this effect was statistically significant (P = 0,03). These results suggest that, because of the lower expression of NPY receptors, the hypothalamus of early-maturing heifers could be less sensitive to NPY inhibition, and therefore reach puberty with lower levels of circulating leptin. In conclusion, there was no effect between the expression of NPY and SOCS-3 and sexual precocity of Nelore heifers, but there was a significant tendency of reduction in NPY-Y1 e NPY-Y4 receptors expression in the hypothalamus of sexually precocious heifers.

O comportamento materno é essencial para a sobrevivência e desenvolvimento do filhote mamífero. Durante a prenhez, as fêmeas recebem estímulos sensoriais e hormonais capazes de modificar e preparar o cérebro da mãe para o início dos padrões de comportamento materno (por exemplo, aumentando o número neurônios produtores de oxitocina no hipotálamo). Estudos têm identificado o hipotálamo como o principal responsável por estas mudanças, porém outras áreas do cérebro também estão envolvidas no processo do comportamento materno. Peg3, um gene marcado paternalmente expresso, é conhecido por controlar o comportamento materno em camundongos. Fêmeas nocautes para o gene Peg3 falham em aumentar a ingestão de alimentos, na ejeção de leite e em algumas atividades maternais, como placentofagia e construção do ninho. Este estudo teve como objetivo determinar os padrões de metilação da região diferencialmente metilada de Peg3 (Peg3DMR) de animais da raça Nelore de bovinos em diversas áreas do cérebro. Amostras foram coletadas das seguintes áreas: córtex frontal, occipital, temporal e parietal, hipocampo e hipotálamo, num total de 8 animais (4 machos e 4 fêmeas). O padrão de metilação destas amostras foi analisado pelo protocolo COBRA (do inglês, Combined Bisulfite-Restriction Analysis), que combina a modificação do DNA por bissulfito de sódio, amplificação por PCR e digestão por enzima de restrição. Foram encontrados diferentes padrões de metilação entre as amostras, ocorrendo uma predominância de hipometilação entre as amostras do sexo masculino, e padrões mais variados nas amostras do sexo feminino. As variações nos padrões de metilação ocorreram de maneira mais marcante entre as amostras de uma mesma região cerebral de diferentes animais, do que entre as amostras de várias regiões de um mesmo animal. Os resultados indicam que pode haver uma variação no status de imprinting em nível populacional, porém estudos com um número maior de amostras são necessários para a verificação da significância estatística destas variações. / The maternal behavior is essential to survival and development of mammalian offspring. Throughout pregnancy, females receive sensory and hormonal stimuli which promote modifications and prepare the mothers brain to the onset of maternal behavior patterns (for example, by increasing numbers of neurons producing oxytocin in the hypothalamus). Studies have identified the hypothalamus as the main responsible for these changes, but other areas of the brain are also involved in the maternal behavior process. Peg3, an imprinted paternally expressed gene, is known to control maternal behavior in mice. Peg3 knockout females failed in increasing food intake, milk ejection and some maternal activities as placentofagia and nest building. This study aimed to determine the methylation patterns of the differently methylated region of Peg3 (DMR-Peg3) of animals from Nellore cattle breed in several areas of the brain. Samples were collected from the following areas of cattle brain: the frontal, occipital, temporal and parietal cortices, hippocampus and hypothalamus, in a total of 8 animals (4 males and 4 females). The methylation pattern of these samples was analyzed by the protocol COBRA (Combined Bisulfite-Restriction Analysis), which combines DNA modification by sodium bisulfite, PCR amplification and digestion by restriction enzymes. It was found different methylation patterns among the samples. There was a predominance of hypomethylation among male samples, while different patterns were found among the female samples. Variation in the methylation patterns was more markedly observed among samples of the same cerebral region among different animals, then among samples of several regions within an animal. The results suggest that there may be a variation in the imprinting status at a population level, but further assays, with an increased number of samples are needed to verify the statistical significance of this variation.

O objeto de estudo desse trabalho é a identificação de metodologias relacionadas aos testes de preços para a determinação de mercado relevante. A aplicação empírica foi feita ao mercado de compra de bovinos no Brasil, especificamente de boi gordo e vaca gorda. Utilizou-se o método simultâneo apresentado por Haldrup, Mollgaard e Nielsen (2005), bem como o método seqüencial para a identificação das relações de co-integração. No método simultâneo delineia-se conjuntamente o mercado de produto e geográfico, enquanto que no método seqüencial define-se primeiro o mercado de produto e somente depois o mercado geográfico. A partir dos resultados obtidos, constatou-se, que boi gordo e vaca gorda não estavam, simultaneamente, no mesmo mercado de produto e geográfico, para as praças analisadas. Tratando-se do método seqüencial, quanto ao mercado na sua dimensão produto, verificou-se que boi gordo e vaca gorda não estão no mesmo mercado, com exceção da praça de Coxim. Em relação ao mercado relevante geográfico, que foi testado a integração entre as praças num raio de 300 km, pôde-se concluir pela integração entre as praças do Estado de São Paulo bem como a integração entre as praças do Estado de Goiás, salientando que os resultados encontrados para as praças do Estado de São Paulo mostram que algumas praças não são integradas. Houve também integrações entre praças de Estados diferentes. Observou-se a convergência de resultados da metodologia aplicada com estudo qualitativo citado no Relatório do Processo Administrativo referente ao Auto nº. 08012.002493/2005-16, o que indica a validade do método empregado. / The aim of this study is to identify price-related methodologies to determine relevant market. Empirical application was carried out on the Brazilian fed cattle, especially on fed calf and steer. The simultaneous method presented by Haldrup, Mollgaard and Nielsen (2005) was utilized, as well as the sequential method to identify co-integration relations. Geographic and product markets are concomitantly delineated in the simultaneous method, whereas the market product is delineated first and, then, the geographical market is delineated in the sequential method. Results show that the fed calf and steer are not in the same market, except in the Coxim region. Regarding the relevant geographic market, in which region integration was tested in a range of 300 km, integration among regions in São Paulo state as well as in Goiás state was verified. Results highlight that some regions in São Paulo state are not integrated. There was also integration among regions in other states. It was observed convergence of results of the applied methodology with those reported in the qualitative study cited in the Administrative Process Report nº. 08012.002493/2005-16, which validates the method used.

A tolerância materno-fetal envolve, além do sistema imune, muitas peculiaridades quanto ao tipo de placenta e placentação. A placenta em bovinos é considerada não invasiva, e como conseqüência de uma implantação superficial, sem invasão endometrial, se estabelece uma barreira placentária complexa que se interpõe entre a circulação materna e fetal. Aliado a isso, a placenta um órgão que se encontra em constante diferenciação e proliferação celular além da alta atividade metabólica, fontes constantes de estresse e desafio para o sistema imune. Atuando nesse contexto, destacamos as proteínas de choque térmico (heat shock proteins HSP), proteínas que são expressadas em condições fisiológicas mas, em situações de estresse, sua expressão aumenta. Na placenta bovina já se constatou a expressão das HSP 60 e 70; contudo notou-se uma maior peculiaridade na expressão da HSP 60, que é maior no primeiro trimestre da gestação. Observando-se o perfil da presença e expressão dessa proteína na placenta bovina e, tendo em vista a característica desse órgão em apresentar populações leucocitárias funcionalmente distintas das do sangue periférico, levantou-se a hipótese da influência desta proteína sobre as células placentárias, particularmente sobre os leucócitos no processo de tolerância materno fetal. Desta forma, esse trabalho analisou a participação da HSP 60 em mecanismos imunes junto à alguns leucócitos placentários por meio de ensaio de proliferação pela técnica de CFSE, ensaio de fagocitose e ensaios bioquímicos como peroxidação lipídica; ciclo celular e potencial de membrana mitocondrial de células placentárias em cultivo. Nossos resultados mostraram que a HSP 60 não influencia a proliferação de linfócitos e outras células placentárias nas diversas condições testadas. Em contrapartida a HSP 60 aumenta a fagocitose e apoptose no terceiro terço gestacional, bem como a produção de radicais oxidados poliinsaturados e o potencial de membrana mitocondrial. Tendo em vista esses resultados, podemos observar que a HSP 60 nas células da placenta bovina possivelmente esteja modulando a cinética da ativação de mecanismos de sinalização de morte celular programada entre as células da placenta e o sistema imunológico. Esta hipótese assegura que, no concepto a termo, as variações hormonais e o sistema imune possam estar regulando o processo para o nascimento do feto. / The maternal-fetal tolerance involves, besides the immune system, many peculiarities regarding the type of placenta and placentation. The bovine placenta is considered not invasive and, as consequence of a superficial implantation without endometrial invasion, it establishes itself as complex barrier that interposes between the maternal and fetal circulation. In addition to that, placenta is an organ that undergoes continuous differentiation and cellular proliferation besides the high metabolic activity that represents a constant source of stress and challenge for the immune system. As an important component in this context, we highlight the heat shock proteins - HSP, that are usually expressed in physiological conditions but, in situations of stress, their expression increases. In the bovine placenta the expression of HSP 60 and 70 has already been verified; however HSP 60 showed a peculiar expression behavior, with higher staining in the first trimester of pregnancy. Considering the presence and expression profiles of HSP 60 in the bovine placenta allied to the particularity of presenting functional distinct leucocytes populations, a hypothesis was raised regarding the influence of this protein on the placental cells, particularly on the leucocytes in the process of fetal-maternal tolerance. Therefore, this work analyzed the role of HSP 60 in immune mechanisms related to some placental leucocytes by several approaches like proliferation assay by CFSE technique, phagocytosis assay and biochemical assays as lipoperoxidation; cell cycle phases and mitochondrial membrane potential of placental cells in culture. Our results showed that HSP 60 does not influence the proliferation of lymphocytes or any other placental cells in various conditions tested. On the other hand, HSP 60 increases phagocytosis and apoptosis in the third trimester, as well as the production of polyunsaturated oxide radicals and the mitochondrial membrane potential. In view of these results, we may infer that HSP 60 may be modulating the kinetics of activation mechanisms for signaling programmed cellular death between placental and immune cells. This hypothesis assures that, on the termed conceptus, the hormonal variation and the immune tolerance may be responsible for regulating the parturition process.