O processo fermentativo para a obtenção de etanol constitui um sistema complexo. Durante a fermentação se desenvolvem infecções em forma crônica e os surtos de infecção aguda aparecem em condições que; por causa da dinâmica não-linear do processo que envolve uma rede de reações metabólicas dos microrganismos, a alta dependência às condições de contorno e pelas interações sinérgicas e antagônicas envolvidas neste ecossistema; ainda representam um tema relevante de pesquisa em aberto. O presente trabalho propõe contribuir na tarefa de interpretar tais efeitos por intermédio de um modelo que inclua a interferência das bactérias. É proposto um cenário em escala laboratorial e controlado com a linhagem isolada de Saccharomyces cerevisiae PE-2 em co-cultura com bactérias de metabolismo heterofermentativo e homofermentativo. A interferência é explicada por intermédio de um modelo com efeito fixo baseado em um modelo não estruturado proposto por Lee (1983), e modificado a partir dos estudos de Andrietta (2003). São conduzidos ensaios de quatro tratamentos: uma fermentação controle e outras contaminadas com cada um dos diferentes tipos de bactérias e também em conjunto, a fim de fornecer dados experimentais para ajuste do modelo em discussão. Em seguida, são realizadas estimativas dos parâmetros que compõem as equações diferenciais da cinética da fermentação, utilizando um algoritmo genético baseado em evolução diferencial Storn e Price (1997). Completa-se a avaliação dos parâmetros por intermédio da análise de sensibilidade paramétrica dos mesmos. De posse desses resultados, é utilizado o modelo do tratamento controle como base, e são inseridos vetores de variáveis categóricas, correspondentes a efeitos fixos. Tais variáveis permitem modelar a interferência da contaminação no modelo matemático proposto. A estatística descritiva, a análise utilizando inferência bayesiana e a interpretação bioquímica dos resultados complementam as inferências obtidas a respeito do modelo. A análise de sensibilidade e correlação dos parâmetros, mostrou que os modelos para a cinética da fermentação, estudados e bem conhecidos não são adequados para modelar o processo, pela alta correlação dos seus parâmetros. O tratamento controle teve um rendimento de 46,97% na produção de etanol, o tratamento com bactéria heterofermentativa teve uma redução de 2.35% e com a mistura de ambas a redução foi de 1,58%. Uma das principais contribuições deste estudo relacionasse à produção de glicerol, o resultado mostra que no há impacto significativo na presença de bactérias homofermentativas e sim uma clara tendência a inibir a sua produção. Apresentam-se também indícios de sinergia entre as bactérias e de consumo de manitol pela bactéria homofermentativa. / The fermentation process for obtaining ethanol is a complex system. During fermentation develop chronic infections and outbreaks of acute infection in conditions that appear, because of the nonlinear dynamics of the process that involves a network of metabolic reactions of microorganisms, the high dependence on boundary conditions and the synergistic interactions and antagonistic involved in this ecosystem, still represent a relevant topic of research open. This paper proposes to contribute in the interpreting such effects through a model that includes the interference of bacteria. We propose a scenario in laboratory scale and controlled with the strain isolated from Saccharomyces cerevisiae PE-2 in co-culture with bacteria and homofermentativo heterofermentative metabolism. The interference is explained by means of a template with fixed effect based on a non structured proposed by Lee (1983) and modified from studies Andrietta (2003). Tests are conducted four treatments: a control fermentation and other contaminated with each of the different bacteria and also in conjunction in order to provide experimental data to fit the model under discussion. Are then carried estimates of the parameters that make up the differential equations of the kinetics of the fermentation, using a genetic algorithm based on differential evolution Storm and Price (1997). To complete the parameters evaluated through analysis of the same parameter sensitivity. With these results, the model is used as the basis of the control treatment, and are inserted vectors of categorical variables, corresponding to fixed effects. These variables allow modeling the interference of contamination in the mathematical model. Descriptive statistics and Bayesian inference analysis and interpretation of biochemical results obtained complement inferences about the model. Sensitivity analysis and correlation of parameters for the models showed that the kinetics of the fermentation, well studied and known are not suitable for modeling the process, the high correlation between the parameters. The control had a yield of 46.97% in ethanol, treatment with heterofermentative bacteria was reduced by 2.35% and a mixture of both reduction was 1.58%. A major contribution of this study is related to the glycerol, the result shows that no significant impact on the presence of homofermentative bacteria but a clear tendency to inhibit their production. It also presents evidence of synergy between bacteria and consumption of mannitol by homofermentative bacteria.

O processo fermentativo para a obtenção de etanol constitui um sistema complexo. Durante a fermentação se desenvolvem infecções em forma crônica e os surtos de infecção aguda aparecem em condições que; por causa da dinâmica não-linear do processo que envolve uma rede de reações metabólicas dos microrganismos, a alta dependência às condições de contorno e pelas interações sinérgicas e antagônicas envolvidas neste ecossistema; ainda representam um tema relevante de pesquisa em aberto. O presente trabalho propõe contribuir na tarefa de interpretar tais efeitos por intermédio de um modelo que inclua a interferência das bactérias. É proposto um cenário em escala laboratorial e controlado com a linhagem isolada de Saccharomyces cerevisiae PE-2 em co-cultura com bactérias de metabolismo heterofermentativo e homofermentativo. A interferência é explicada por intermédio de um modelo com efeito fixo baseado em um modelo não estruturado proposto por Lee (1983), e modificado a partir dos estudos de Andrietta (2003). São conduzidos ensaios de quatro tratamentos: uma fermentação controle e outras contaminadas com cada um dos diferentes tipos de bactérias e também em conjunto, a fim de fornecer dados experimentais para ajuste do modelo em discussão. Em seguida, são realizadas estimativas dos parâmetros que compõem as equações diferenciais da cinética da fermentação, utilizando um algoritmo genético baseado em evolução diferencial Storn e Price (1997). Completa-se a avaliação dos parâmetros por intermédio da análise de sensibilidade paramétrica dos mesmos. De posse desses resultados, é utilizado o modelo do tratamento controle como base, e são inseridos vetores de variáveis categóricas, correspondentes a efeitos fixos. Tais variáveis permitem modelar a interferência da contaminação no modelo matemático proposto. A estatística descritiva, a análise utilizando inferência bayesiana e a interpretação bioquímica dos resultados complementam as inferências obtidas a respeito do modelo. A análise de sensibilidade e correlação dos parâmetros, mostrou que os modelos para a cinética da fermentação, estudados e bem conhecidos não são adequados para modelar o processo, pela alta correlação dos seus parâmetros. O tratamento controle teve um rendimento de 46,97% na produção de etanol, o tratamento com bactéria heterofermentativa teve uma redução de 2.35% e com a mistura de ambas a redução foi de 1,58%. Uma das principais contribuições deste estudo relacionasse à produção de glicerol, o resultado mostra que no há impacto significativo na presença de bactérias homofermentativas e sim uma clara tendência a inibir a sua produção. Apresentam-se também indícios de sinergia entre as bactérias e de consumo de manitol pela bactéria homofermentativa. / The fermentation process for obtaining ethanol is a complex system. During fermentation develop chronic infections and outbreaks of acute infection in conditions that appear, because of the nonlinear dynamics of the process that involves a network of metabolic reactions of microorganisms, the high dependence on boundary conditions and the synergistic interactions and antagonistic involved in this ecosystem, still represent a relevant topic of research open. This paper proposes to contribute in the interpreting such effects through a model that includes the interference of bacteria. We propose a scenario in laboratory scale and controlled with the strain isolated from Saccharomyces cerevisiae PE-2 in co-culture with bacteria and homofermentativo heterofermentative metabolism. The interference is explained by means of a template with fixed effect based on a non structured proposed by Lee (1983) and modified from studies Andrietta (2003). Tests are conducted four treatments: a control fermentation and other contaminated with each of the different bacteria and also in conjunction in order to provide experimental data to fit the model under discussion. Are then carried estimates of the parameters that make up the differential equations of the kinetics of the fermentation, using a genetic algorithm based on differential evolution Storm and Price (1997). To complete the parameters evaluated through analysis of the same parameter sensitivity. With these results, the model is used as the basis of the control treatment, and are inserted vectors of categorical variables, corresponding to fixed effects. These variables allow modeling the interference of contamination in the mathematical model. Descriptive statistics and Bayesian inference analysis and interpretation of biochemical results obtained complement inferences about the model. Sensitivity analysis and correlation of parameters for the models showed that the kinetics of the fermentation, well studied and known are not suitable for modeling the process, the high correlation between the parameters. The control had a yield of 46.97% in ethanol, treatment with heterofermentative bacteria was reduced by 2.35% and a mixture of both reduction was 1.58%. A major contribution of this study is related to the glycerol, the result shows that no significant impact on the presence of homofermentative bacteria but a clear tendency to inhibit their production. It also presents evidence of synergy between bacteria and consumption of mannitol by homofermentative bacteria.

Wolbachia é um gênero de bactérias endossimbiontes que são verticalmente transmitidas pelas fêmeas aos seus descendentes, embora transmissão entre táxons distintos também ocorra com certa freqüência. Entre os efeitos que essa bactéria causa nos sistemas de reprodutivos de seus hospedeiros destaca-se a incompatibilidade citoplasmática (IC). Wolbachia foi descrita em numerosas espécies de artrópodos, especialmente os insetos. Dentre os insetos, essa bactéria foi descrita em diversos gêneros das moscas-das-frutas da familia Tephritidae, tendo sido demonstrada a IC em Rhagoletis cerasi e Ceratitis capitata. Recentemente, essas bactérias foram identificadas nas moscas-das-frutas do gênero Anastrepha. No presente trabalho, procurou-se demonstrar se a Wolbachia estaria relacionada a IC entre Anastrepha sp.1 aff. fraterculus e Anastrepha obliqua. A amplificação e o seqüenciamento do gene wsp revelou que as populações das duas espécies, mantidas no laboratório, estavam infectadas por Wolbachia. A presença da bactéria foi, também, demonstrada citologicamente em embriões corados pelo DAPI, tendo-se, além disso, observado que elas se distribuem nos embriões em gradiente decrescente do pólo posterior para o anterior. Para testar a hipótese de que a bactéria é a causa da IC, foram estabelecidas populações das duas espécies onde a Wolbachia (e possivelmente outras bactérias não identificadas) foram eliminadas por tratamento térmico (30oC) aplicado às pupas. As taxas de eclosão de larvas nas progênies de cruzamentos entre indivíduos curados, foram menores que a eclosão nos cruzamentos entre indivíduos infectados, mas o tratamento não alterou a proporção sexual dos adultos. Cruzamentos intra-específicos entre indivíduos infectados e curados, produziu assimetria nas progênies dos cruzamentos recíprocos, ou seja, quando os fêmeas eram curadas e os machos infectados a taxa de eclosão foi significativamente menor que nos cruzamentos recíprocos demonstrando, assim, a existência de IC unidirecional nos cruzamentos dessas duas espécies de Anastrepha. Nesses cruzamentos, a proporção sexual das progênies adultas não divergiu significativamente do 1:1 esperado. Nas progênies híbridas de cruzamentos interespecíficos entre indivíduos infectados, observou-se um decréscimo significativo nas taxas de eclosão e alteração na proporção sexual entre os adultos, de acordo com a regra de Haldane. Quando as fêmeas eram de A. sp.1, as progênies eram constituídas apenas por fêmeas e quando eram de A. obliqua, machos também foram produzidos, mas em frequências menores que o esperado. Resultados similares foram obtidos quando indivíduos curados foram cruzados entre si. Cruzamentos interespecíficos de indivíduos infectados cruzados com indivíduos curados, produziram progênies com taxas de eclosão muito reduzidas e menores quando as fêmeas eram de A. sp.1 (infectadas ou curadas), do que nos cruzamentos onde as fêmeas eram de A. obliqua (infectadas ou não). Nestes últimos, quando a fêmea era infectada e os machos curados, a taxa de eclosão foi maior que no cruzamento recíproco, demonstrando a presença de IC entre as duas espécies. A proporção sexual também foi alterada nesses cruzamentos, segundo a regra de Haldane. Os resultados do presente trabalho demonstram, pela primeira vez, que a incompatibilidade citoplasmática mediada pela Wolbachia, ocorre nas duas espécies de Anastrepha e sugerem que deve existir uma interação entre a bactéria e os genomas das espécies hospedeiras. / The endosymbiont bacteria Wolbachia are vertically transmitted by the females to its progenies, although horizontal transmission between distinct taxa is also known. One of the most relevant effects caused by these bacteria in the reproductive behavior of its hosts is the cytoplasmic incompatibility (CI). Wolbachia was described in several groups of arthropods, in the insects including several genera of the tefritid fruit flies. Wolbachia-induced CI was reported in Rhagoletis cerasi and Ceratitis capitata. Recently, occurrence of these bacteria was described in several species of genus Anastrepha. Search for possible Wolbachia-induced CI in crosses of Anastrepha obliqua and A. sp.1 aff. fraterculus was the aim of the present study. Amplification and sequencing of the gene wsp of Wolbachia revealed that laboratory colonies of both species were infected with this bacteria. Cytological analysis of embryos stained with DAPI showed a multitude of bacteria distributed in decreasing gradients from the posterior to the anterior pole of the embryos. The hypothesis that there is CI between the two host species was tested using infected and cured individuals. The bacteria were removed by treating the pupae at the temperature of 30o C. Rate of egg hatch in progenies recovered from crosses of cured flies were lower than egg hatch in crosses of the infected strains, but no sex-ratio deviation from the expected 1:1 was observed. Intra-specific crosses between infected and cured individuals resulted in asymmetries in the progenies of reciprocal crosses. The egg hatch in crosses of cured obliqua females to infected sp.1 males was lower than in the reciprocal crosses, clearly indicating the presence of Wolbachia-induced CI in Anastrepha. In these crosses, sex-ratio among the adults does not deviate from the 1:1 ratio. In the hybrid progenies of inter-specific crosses, it was observed a decrease in the egg hatch rate, and deviation from 1:1 in the adult sex-ratio according to the Haldanes rule. From crosses of sp.1 females to obliqua males, only females were recovered while in crosses of obliqua females to sp.1 males, males were also produced but in lower frequencies than expected. Similar results were obtained when cured individuals were crossed. Very low egg hatch rates were observed in inter-specific crosses of infected to cured individuals, when sp.1 females (infected or cured) were used. In crosses of obliqua females (infected or cured), higher egg hatch rate was observed. Egg hatch was larger in crosses of infected female to cured males than in the reciprocal crosses, indicating a Wolbachia-induced IC between the two species of Anastrepha. The sex-ratios were also according to the Haldanes rule. This is the first report of Wolbachia-induced CI in Anastrepha. The existence of a possible interaction between the bacteria and the genomes of the host species is also suggested.

Amostras, de oito espécies de moscas-das-frutas do gênero Anastrepha e de seis espécies de vespas (Braconidae) parasitóides à elas associadas, coletadas em diferentes localidades do Brasil, foram estudadas para uma detecção e caracterização das linhagens da bactéria endossimbionte Wolbachia. A detecção e identificação de Wolbachia foram feitas pela amplificação e seqüenciamento de um fragmento do gene wsp (Wolbachia “surface protein"). As seqüências obtidas foram comparadas com seqüências depositadas no GenBank mostrando que todos os fragmentos amplificados e seqüenciados eram realmente provenientes de Wolbachia. Das espécies de Anastrepha, infecção pela Wolbachia foi encontrada em A. amita, A. obliqua, A. macrura, A. montei, A. picklei, A. sp.1 aff. fraterculus e A. sp.2 aff. fraterculus, exceto na amostra de A. serpentina. Dentre as seis espécies e braconídeos estudados, apenas as duas amostras de Asobara Anastrephae e uma amostra de Opius bellus, não apresentaram infecção. Já as oito amostras de Doryctobracon areolatus, duas de D. brasiliensis, uma de D. fluminensis, três de Opius bellus e cinco de Utetes Anastrephae apresentaram-se infectadas por essas bactérias. Foram identificadas 21 linhagens distintas de Wolbachia, sendo oito mais divegentes e as demais apresentando pequenas variações. Duas amostras de A. obliquaestavam infectadas com mais de uma linhagem de Wolbachia, enquanto que as demais espécies de Anastrepha abrigavam apenas uma linhagem da bactéria. Entre os braconídeos, quatro amostras populacionais de U. Anastrephae e uma de D. brasiliensis apresentaram múltipla infecção, enquanto que as demais espécies exibiram apenas uma única linhagem de Wolbachia associada. Foram detectadas linhagens distintas da bactéria entre diferentes amostras de uma mesma espécie, assim como, uma mesma linhagem bacteriana está presente em populações de mais de uma espécie do himenóptero. U. Anastrephae foi detectada parasitando quatro diferente espécies de Anastrepha, tendo sido observado que a mesma linhagem de Wolbachia que infectava as moscas-das-frutas também infectava o parasitóide. Além disso, a análise filogenética indicou que as bactérias Wolbachia que infectam os braconídeos aqui estudados exibem uma alta similaridade com linhagens presentes em insetos não relacionados taxonomicamente mas que, em alguns casos, habitam regiões neotropicais. O conjunto de resultados sugere que eventos de transferência horizontal das bactérias entre esses insetos possam ter ocorrido. / Detection and characterization of infection by the bacteria Wolbachia were done in samples of eight species of the fruit fly Anastrepha and six species of their parasitoid wasps (Braconidae), collected in several localities in Brazil. The presence and identification of the Wolbachia strains were performed by amplificaton and sequencing of a fragment of the Wolbachia wsp gene. Comparisions of the sequences with the data on the GenBank confirmed that the amplified fragment were from Wolbachia. The endosymbiont was found in Anastrepha amita, A. obliqua, A. macrura, A. montei, A. picklei, A. sp.1 aff. fraterculus e A. sp.2 aff. fraterculus, but not in the sample of A. serpentina. Among the six species of braconids only samples of Asobara Anastrephae and one sample of Opius bellus were not infected. The eight samples of Doryctobracon areolatus, two of D. brasiliensis, one of D. fluminensis, three of Opius bellus and five of Utetes Anastrephae were infected by these bacteria. Twenty one distinct strains of Wolbachia were detected, eight of which having a higher level of distinctiveness than the others, which showed slight variation. Two out of the four samples of Anastrepha obliqua were infected by more than one strain of Wolbachia, while a single strain of bacteria was found in the other Anastrepha species. Among the braconids, four samples of U. Anastrephae and one sample of D. brasiliensis showed multiple infection, and single strains of Wolbachia were found in the other species of parasitoids. It was found that a same strain of Wolbachia may be present in different host species, either fruit fly or the parasitoids, as well as, that the same host species may present different strains of bacteria. The braconid U. Anastrephae was found parasiting four different species of Anastrepha, and in every case and samples, the same Wolbachia strain was found in both, the fruit fly and its parasitoid. Moreover, a phylogenetic analysis indicated that the Wolbachia strains infecting the fruit flies and the parasitoid wasps here studied showed a high similarity to strains present in other phylogentic non-related insects, some of which inhabiting neotropic regions. The data suggest that horizontal transfer of Wolbachia might have occurred in these two groups of insects.

Os objetivos desta pesquisa foram verificar a proporção entre Streptococcus salivarius subsp. thermophilus e Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus em iogurte natural, comercial e os efeitos do armazenamento (dentro do prazo de validade) sobre a proporção das bactérias lácticas componentes do produto, o pH, a acidez e a presença de microrganismos psicrófilos. As amostras de iogurte foram adquiridas por trinta dias consecutivos, num total de 30 amostras, de um mesmo lote, e submetidas às análises de pH, acidez titulável e contagem, em meio TPPY - Eriocromo-ágar, de Lactobacillus sp. e Streptococcus sp. (em UFC/mL). Os resultados mostraram que, durante o armazenamento, ocorreram variações nas características físico-químicas do iogurte, como pH que variou de 4,36, inicialmente, para 4,18, e acidez titulável que variou de 0,73% (em ácido láctico) para 1,17%. Streptococcus salivarius subsp. thermophilus e Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus foram encontrados na proporção de 2:1, respectivamente, diminuindo para 1:1 devido, provavelmente, às variações de pH e acidez titulável durante o armazenamento, por trinta dias, que corresponde ao prazo de validade. / The objectives of this research were to verify the proportion of Streptococcus salivarius subsp. thermophilus to Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus in commercial natural yogurt and evaluate the effect of the period of storage in some characteristics of the product, such as proportion of lactic bacteria, pH, acidity and presence of psychrophiles microorganisms. Yogurts from the same lot were analysed during a period of 30 consecutive days, within the best before date. One sample a day was analysed for pH, acidity and bacterial count (c.f.u./ml) of Streptococcus sp. and Lactobacillus sp. in broth TPPY-Eriochrome-agar. Results indicated that significant changes on physical-chemical characteristics of the yogurt occured during the storage of the product. The pH decreased from 4.36 to 4.18 and the acidity increased from 0.73% (lactic acid) to 1.17% during the period of storage. The proportion of Streptococcus salivarius subsp. thermophilus to Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus during the period of storage varied from 2:1 to 1:1, respectively, probably because of the variations of pH and acidity during these 30 days.

O gene Slc11a1 regula a resistência contra S. entérica, L. donovani e M. tuberculosis. Sublinhagens de camundongos AIRmax e AIRmin homozigotas para os alelos R e S do gene Slc11a1 (AIRmax,RR, AIRmaxSS, AIRminRR e AIRminSS) foram utilizadas para avaliar o efeito destes alelos na ativação de macrófagos peritoneais (M<font face=\"Symbol\">F), induzida pelo tioglicolato (TIO) ou infecção por M. bovis BCG.O TIO induz baixa ativação celular, a estimulação com LPS aumentou a ativação nos macrófagos dos animais AIRmaxRR e AIRmaxSS. Assim, na inflamação com TIO, a ativação do M<font face=\"Symbol\">F foi dependente do fundo genético selecionado nos animais AIRmax, independente do alelo do gene Slc11a1. Na infecção com BCG, a sublinhagem AIRmaxRR foi a única capaz de controlar a proliferação da bactéria, secretando altos níveis de IL-1<font face=\"Symbol\">b, IL-12, TNF<font face=\"Symbol\">a e IL-6 que ativam o macrófago. Por outro lado, os AIRminSS susceptíveis à infecção produziram maiores concentrações de NO, H2O2 e IL-10, mostrando o fundo genético para alta ou baixa resposta inflamatória, e os alelos do gene Slc11a1 interferem na resistência à infecção. / The Slc11a1 gene regulates resistance against S. enterica, L. donovani and M. tuberculosis. AIRmax and AIRmin mouse sublines, homozygous for Slc11a1 R and S alleles (AIRmaxRR, AIRmaxSS, AIRminRR and AIRminSS) were used in this work to evaluate the effect of this gene in peritoneal macrophage (M<font face=\"Symbol\">F) activation induced by thioglycollate (TIO) or M. bovis BCG infection. TIO induced weak cellular activation, LPS stimulation increased AIRmaxRR and AIRmaxSS macrophages activation. These results indicate that inflammation and M<font face=\"Symbol\">F activation induced by TIO were dependent on the genetic background for acute inflammatory response, while Slc11a1 alleles have little effect on this phenotype. In BCG infection only AIRmaxRR mice were capable of controlling bacterial proliferation, which was accompanied with high levels of IL-1<font face=\"Symbol\">b, IL-12, TNF and IL-6 produced by activated macrophages. On the other hand, susceptible AIRminSS mice produced higher amounts of NO, H2O2 and IL-10 suggesting that both inflammatory background and Slc11a1 alleles interfere on resistance to BCG infection.

O surgimento de resistência bacteriana aos tratamentos convencionais tem proporcionado o desenvolvimento de novas modalidades terapêuticas para o tratamento e/ou controle da cárie dentária. Nesse contexto, a utilização da terapia fotodinâmica (TFD) é sugerida como alternativa para a inativação de microrganismos patogênicos envolvidos na gênese da cárie. O objetivo do presente estudo foi avaliar in vitro o efeito antimicrobiano da terapia fotodinâmica (TFD) sobre três culturas de S. mutans: uma cepa padrão de S. mutans (ATCC 25175) e dois isolados clínicos (43513 e 47513) oriundos da saliva de crianças. O corante (C) azul de orto-toluidina (TBO) foi utilizado associado à iluminação com LEDs (L) no comprimento de onda vermelho. Estas suspensões foram transferidas para placas de 96 orifícios, tratadas com quatro concentrações de TBO (0,25; 2,5; 25 e 250 µg/mL) e expostas a quatro dosimetrias (12; 24; 36 e 48 J/cm2) constituindo o grupo C+L+ (TFD). Suspensões adicionais foram tratadas somente com as quatro concentrações de TBO (C+L-) ou apenas com as quatro dosimetrias (C-L+). Amostras não submetidas ao tratamento com a fonte de luz nem ao corante, constituíram a condição C-L- (controle positivo). Alíquotas de 100 µL de cada orifício foram transferidas para tubos de ensaio para se verificar a presença ou ausência de crescimento microbiológico. Adicionalmente, alíquotas de 25 µL do grupo correspondente a TFD (C+L+) foram semeadas em placas de Petri, as quais foram incubadas a 370C por 48 horas para posterior visualização de halos de inibição e/ou crescimento microbiológico correspondente a efetividade ou ineficiência da TFD, respectivamente. Com o intuito de confirmar os achados, essas mesmas amostras foram submetidas à análise pela microscopia confocal a laser. Os resultados demonstraram que a TFD, em determinadas condições experimentais, foi efetiva no controle do crescimento microbiológico das espécies de S. mutans usadas neste estudo. A concentração mínima de TBO necessária para a inativação in vitro das três culturas de S. mutans foi de 2,5 µg/mL associada à dosimetria mínima de 24 J/cm2 da fonte de luz LED utilizada no estudo. / The increase of bacterias resistance to conventional treatment resulted in the development of new therapeutic modalities for dental caries treatment and/or prevention. In this field, the use of photodynamic therapy (PDT) is suggested as an alternative for inactivation of patogenic microrganisms involved in the etiology of tooth decay. The aim of this study was to evaluate in vitro the antimicrobian effect of the photodynamic therapy (PDT) on bacteria suspensions of S. mutans (ATCC 25175) and two suspensions (43513 and 47513) from infants saliva. Toluidine blue O (TBO) (D) and a red light-emmiting diodes (LEDs) (L) were used in association. Samples were inserted into 96 well-plate and treated with four TBO concentrations (0.25; 2.5; 25 e 250 µg/mL) and exposed to four dosimetries (12; 24; 36 e 48 J/cm2) defining the D+L+ group (PDT). Additional samples were treated only with TBO (D+L-) or only with red LEDs (D-L+). The treatment without dye and none red LED constituted the D-L- condition (positive control). Aliquots from D+L+ (TFD group) were inserted in Petri dishes, which were incubated at 370C for 48 hours. Posterior analysis of microbiologic growth, corresponding to PDT effectivity, was conducted. These samples were also submitted to laser confocal microscopy analysis for microbiologic data confirmation. The results showed PDT effectiveness for S. mutans inactivation in particular conditions. It was demonstrated that PDT was efficient to kill S. mutans species in the presence of the TBO at 2.5 µg/mL (minimum concentration) associated to 24 J/cm2 dosimetry.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-12-19T14:57:57Z No. of bitstreams: 1 Maria Camila de Barros Silva Leite.pdf: 1678658 bytes, checksum: 85d69f0445fbb49333bcab450c6eab50 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-19T14:57:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maria Camila de Barros Silva Leite.pdf: 1678658 bytes, checksum: 85d69f0445fbb49333bcab450c6eab50 (MD5) Previous issue date: 2012-10-26 / Brazil is the largest sugarcane producer in the world, with the Pernambuco State presenting a production of nearly 18.4 million tons. However, productivity growth and expansion of this culture has been hampered due to salinity in some soils, especially when subjected to dispose of vinasse, a byproduct of ethanol production. Excess salts cause toxic effects and a lower capacity for water absorption by plants. Like plants, the symbiotic bacteria present variation in salinity tolerance and could be affected in their characteristics of plant growth promotion. This situation can be corrected with the use of bacterial isolates tolerant to salinity. Thus, the objective of this study was to isolate and identify bacterial isolates sugarcane, and salt-tolerant plant growth promoters, which may contribute to the better development of this species, both already producing regions, as in regions of Pernambuco that have saline soils, and until then, there are cultivated with sugarcane. Therefore, root endophytic and rhizosphere were isolated in culture medium supplemented with 0 and 5% NaCl, plant sugarcane, collected in different soils, two under vinasse use and another without vinasse use. After isolation, were evaluated population density and characteristics of plant growth promotion, the tests consisted in checking the potential for biological nitrogen fixation (BNF), production of indole acetic acid (IAA), inorganic phosphate solubilization and production quorum sensing molecule. Furthermore, the diversity cultivable was assessed by means of restriction analysis of amplified ribosomal DNA (ARDRA) with two restriction enzymes. And uncultivable diversity was analyzed using the total DNA of rhizosphere soil and plant tissue (root) using the technique of DGGE of nifH. After the selection of bacterial isolates promoters plant growth, salinity tolerance tests were also performed. As a result, it was possible to isolate 102 bacterial isolates from rhizosphere and endophytic root, sugarcane, with various morphologies. Regarding population density, it was observed that there was no statistical difference between treatments. As for the potential for nitrogen fixation, production of IAA, phosphate solubilization and production of quorum sensing molecule, 72.5; 100; 75.5 and 49% of the isolates were positive, respectively. Both in the ARDRA technique as in DGGE of nifH, the dendrogram showed high genetic variability among isolates and among samples of plant tissue and rhizosphere, respectively. Moreover, it was observed that the salinity directly affects both bacterial growth, as characteristics of plant growth promotion. Therefore, this study contributed to the study of bacteria system/plant/soil, particularly regarding halotolerant bacteria associated with plant sugarcane, selecting isolates that may contribute to the better development of this important crop in different regions Pernambuco State. / O Brasil é o maior produtor de cana-de-açúcar do mundo, com o Estado de Pernambuco apresentando uma produção de quase 18,4 milhões de toneladas. Porém, o aumento da produtividade e da expansão desta cultura vem sendo dificultado devido à salinidade em alguns solos, especialmente quando submetidos ao descarte de vinhaça, subproduto da produção de álcool. O excesso de sais provoca efeitos tóxicos e uma menor capacidade de absorção de água pelas plantas. Assim como as plantas, as bactérias simbióticas apresentam variação na tolerância à salinidade, podendo ser afetadas nas suas características de promoção de crescimento vegetal. Esta situação pode ser corrigida com a utilização de isolados bacterianos tolerantes à salinidade. Deste modo, o objetivo do presente trabalho foi isolar e identificar isolados bacterianos de cana-de-açúcar, tolerantes à salinidade e promotores de crescimento vegetal, que possam contribuir para o melhor desenvolvimento desta espécie, tanto em regiões já produtoras, como em regiões do Estado de Pernambuco que possuem solos salinos e que, até então, não são cultivados com a cana-de-açúcar. Para tanto, bactérias endofíticas de raiz e rizosfera foram isoladas, em meio de cultura acrescido de 0 e 5% de NaCl, de plantas de cana-de-açúcar, coletadas em diferentes solos, dois sob uso de vinhaça e outro não. Após o isolamento, foram avaliadas a densidade populacional e características de promoção de crescimento vegetal, os testes realizados constituíram em verificar o potencial para a fixação biológica de nitrogênio (FBN), produção de ácido indol acético (AIA), solubilização de fosfato inorgânico e produção da molécula quorum sensing. Além disso, a diversidade cultivável foi avaliada pela técnica da Análise da Restrição do DNA Ribossomal Amplificado (ARDRA), com duas enzimas de restrição. E a diversidade não cultivável foi analisada utilizando o DNA total do solo rizosférico e do tecido vegetal (raiz) através da técnica do DGGE do gene NifH. Após a seleção de isolados bacterianos promotores de crescimento vegetal, testes de tolerância à salinidade também foram realizados. Como resultado, foi possível isolar 102 isolados bacterianos de rizosfera e endofíticos de raiz, de cana-de-açúcar, com morfologias diversas. Com relação à densidade populacional, foi observado que não houve diferença estatística entre os tratamentos. Quanto ao potencial para fixação de nitrogênio, produção de AIA, solubilização de fosfato e produção da molécula quorum sensing, 72,5; 100; 75,5 e 49% dos isolados foram positivos, respectivamente. Tanto na técnica da ARDRA como no DGGE do gene nifH, o dendrograma indicou alta variabilidade genética entre os isolados e entre as amostras de rizosfera e tecido vegetal, respectivamente. Além disso, foi possível observar que a salinidade afeta diretamente tanto o crescimento bacteriano, como características de promoção de crescimento vegetal. Portanto, o presente trabalho contribuiu para o estudo do sistema bactéria/planta/solo, em particular quanto às bactérias halotolerantes associadas a plantas de cana-de-açúcar, selecionando isolados que possam vir a contribuir para o melhor desenvolvimento desta importante cultura em diferentes regiões do Estado de Pernambuco.

Submitted by Roberta Alves Merguizo Chinellato null (robmerguizo@yahoo.com.br) on 2017-02-13T20:05:29Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO ROBERTA CORREÇÃO.pdf: 2087375 bytes, checksum: 1e6e52c04ff2049723f222505199bc2f (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-02-15T18:25:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 chinellato_ram_me_svic.pdf: 2087375 bytes, checksum: 1e6e52c04ff2049723f222505199bc2f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-15T18:25:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 chinellato_ram_me_svic.pdf: 2087375 bytes, checksum: 1e6e52c04ff2049723f222505199bc2f (MD5) Previous issue date: 2017-01-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Com o processo de expansão industrial, as regiões costeiras e estuarinas passaram a perceber a instalação de várias indústrias, devido à proximidade aos mercados consumidores e produtores, além da facilidade de escoamento de sua produção. Essas indústrias consomem uma grande quantidade de água, que é devolvida ao ambiente juntamente com uma série de substâncias tóxicas dissolvidas, incluindo hidrocarbonetos aromáticos, de biodegradabilidade intermediária e tendência à bioacumulação. Regiões estuarinas apresentam maior dificuldade de biorremediação, devido ao fato dos contaminantes ficarem aderidos ao sedimento. Além do descarte costeiro habitual, acidentes tendem a lançar uma quantidade maior e descontrolada de poluentes. A biorremediação é o processo de tratamento que utiliza os microrganismos encontrados tanto no ambiente terrestre como aquáticos contaminados para degradar substâncias toxicamente perigosas transformando-as em substâncias menos ou não tóxicas. As atividades para conter o incêndio no Terminal Químico Aratu S.A. (Ultracargo) lançou grande quantidade de hidrocarbonetos e líquido gerador de filme aquoso (AFFF) no estuário de Santos, modificando o perfil de contaminantes da região. As bactérias heterotróficas de ambientes marinhos apresentam grande potencial de biorremediação. O objetivo do presente trabalho foi avaliar, in vitro, a sucessão de espécies de bactérias heterotróficas em sedimentos do Estuário de Santos, afetados por hidrocarbonetos e AFFF e isolar espécies bacterianas com possível potencial uso em processos de biorremediação. Foram analisadas as densidades de bactérias heterotróficas e identificadas aquelas de maior relevância, por características morfológicas e identificação molecular. Após análise das amostras locais e Microcosmo, destacaram-se as bactérias do gênero Bacillus. A sucessão sugeriu três espécies como potenciais biorremediadoras, sendo elas Bacillus pumilus, Bacillus subtilis e Staphylococcus sp. / With the industrial expansion, coastal and estuarine regions began to perceive installation of several industries, due to the proximity to the consumer markets and producers, besides the ease of transportation of their production. These industries consume a large amount of water, which is returned to the environment with a series of dissolved toxic substances, which includes aromatic hydrocarbons, which are slightly biodegradable and have the tendency to bioaccumulate. Estuarine regions present higher difficulty of bioremediation, since the contaminants are adhered to the sediment. In addition to the usual coastal discard, accidents tend to release a larger and uncontrolled amount of pollutants. Bioremediation is the treatment process that uses microorganisms found in both the terrestrial and aquatic environments to degrade toxic substances by transforming them into less toxic or non-toxic substances. The fire at the Terminal Químico Aratu S.A. (Ultracargo) launched a large amount of hydrocarbons and aqueous film-forming foam (AFFF) in the Santos estuary, modifying the profile of contaminants in the region. The heterotrophic bacteria of marine environments present great bioremediation potential. The objective of the present work was to evaluate in vitro the succession of heterotrophic bacteria species in Santos Estuary sediments affected by hydrocarbons and AFFF and to isolate bacterial species with potential use in bioremediation processes. The densities of heterotrophic bacteria were analyzed and the most relevant ones were identified, by morphological characteristics and molecular identification, where the Bacillus genus deserved attention. The succession suggested three species as potential bioremediators, being Bacillus pumilus, Bacillus subtilis and Staphylococcus sp.

O objetivo do presente estudo foi avaliar a ação do ácido indol-3-acético (AIA) combinado com a peroxidase de raiz forte (HRP), formando um sistema gerador de espécies reativas de oxigênio, sobre a viabilidade de Staphylococcus aureus. Para tal, avaliou-se a viabilidade do S. aureus através da contagem das unidades formadoras de colônias após crescimento em ágar manitol, potencial e integridade de membrana por citometria de fluxo e integridade do DNA através de eletroforese em gel de poliacrilamida. Para realização dos ensaios foram utilizadas cepas de S. aureus recuperadas de casos de mastites clínicas. As cepas foram cultivadas em meio BHI (brain-heart-infusion) a 37ºC \"overnight\". Nos ensaios, o microrganismo foi incubado na ausência (controle) e presença de AIA (1 mmol/L)/HRP (1 &micro;mol/L) em diferentes tempos (0, 1,5, 3 e 6 horas) a 37ºC. Foram realizados também ensaios contendo o microrganismo incubado na presença de AIA ou de HRP. O sistema AIA/HRP inibiu em 96%, 98%, 99% a formação de colônias do microrganismo para os tempos de 1,5, 3 e 6 horas, respectivamente, em relação ao controle em cada tempo. Ocorreu uma redução na polarização da membrana do microrganismo em 38, 69 e 99% nos tempos 1,5, 3 e 6 horas, respectivamente e uma diminuição significativa do número de microrganismos com membrana integra de 17 e 22% quando estes foram incubados por 3 e 6 horas, respectivamente em relação ao controle nos respectivos tempos. A adição das enzimas antioxidantes catalase ou superóxido dismutase ao meio de incubação não alterou o efeito deletério promovido pelo sistema AIA/HRP avaliado pelas unidades formadoras de colônias, despolarização e integridade de membrana. O sistema AIA/HRP não induziu a fragmentação do DNA do S. aureus após 3 e 6 horas de incubação. No presente estudo, foi possível verificar que a oxidação do AIA pela HRP produz uma resposta citotóxica potente capaz de promover a inibição do crescimento de S. aureus em ágar manitol, provocar a despolarização e a perda da integridade da membrana do microrganismo, sugerindo a possibilidade da utilização do sistema AIA/HRP como uma possível terapia alternativa contra bactérias. / The objective of this study was to evaluate the action of the indole-3-acetic acid (IAA) in combination with horseradish peroxidase (HRP), forming a system generator of reactive oxygen species, on the viability of Staphylococcus aureus. To this end, was evaluated the of viability of S. aureus through the counting of the colony forming units after growth in mannitol agar, membrane potential and membrane integrity by flow cytometry and integrity of the DNA through the polyacrylamide gel electrophoresis. For the tests were used strains of S. aureus recovered from cases of clinical mastitis. The strains were grown in BHI medium (brain-heart-infusion) at 37°C overnight. In the tests, the microorganism was incubated in the absence (control) and presence of IAA (1 mmol/L)/HRP (1 &micro;mol/L) at different times (0, 1.5, 3 and 6 hours) at 37°C. There were also conducted tests containing the microorganism incubated in the presence of IAA or HRP. The system IAA/HRP inhibited at 96%, 98%, 99% colony formation of microorganism to the times of 1.5, 3 and 6 hours, respectively, in relation to the control in every time. There was a decrease in polarization of the membrane of the microorganism on 38, 69 and 99% at times 1.5, 3 and 6 hours, respectively, and a significant decrease in the number of microorganisms with membrane integrity, 17 and 22% when they were incubated for 3 and 6 hours, respectively, in relation to the control in their time. The addition of the antioxidant enzymes catalase and superoxide dismutase in incubation medium did not alter the deleterious effect promoted by the system IAA/HRP assessed by colony forming units, membrane potential and membrane integrity. The system IAA/HRP did not induce the DNA fragmentation of S. aureus after 3 and 6 hours of incubation. In the present study, it was possible to verify that the oxidation of the IAA by HRP produces a potent cytotoxic response capable of promoting the inhibition of growth of S. aureus in mannitol agar, causing depolarization and the loss of integrity of the membrane of the microorganism, suggesting the possibility of using the system IAA/HRP as a possible alternative therapy against bacteria.