Amostras, de oito espécies de moscas-das-frutas do gênero Anastrepha e de seis espécies de vespas (Braconidae) parasitóides à elas associadas, coletadas em diferentes localidades do Brasil, foram estudadas para uma detecção e caracterização das linhagens da bactéria endossimbionte Wolbachia. A detecção e identificação de Wolbachia foram feitas pela amplificação e seqüenciamento de um fragmento do gene wsp (Wolbachia “surface protein"). As seqüências obtidas foram comparadas com seqüências depositadas no GenBank mostrando que todos os fragmentos amplificados e seqüenciados eram realmente provenientes de Wolbachia. Das espécies de Anastrepha, infecção pela Wolbachia foi encontrada em A. amita, A. obliqua, A. macrura, A. montei, A. picklei, A. sp.1 aff. fraterculus e A. sp.2 aff. fraterculus, exceto na amostra de A. serpentina. Dentre as seis espécies e braconídeos estudados, apenas as duas amostras de Asobara Anastrephae e uma amostra de Opius bellus, não apresentaram infecção. Já as oito amostras de Doryctobracon areolatus, duas de D. brasiliensis, uma de D. fluminensis, três de Opius bellus e cinco de Utetes Anastrephae apresentaram-se infectadas por essas bactérias. Foram identificadas 21 linhagens distintas de Wolbachia, sendo oito mais divegentes e as demais apresentando pequenas variações. Duas amostras de A. obliquaestavam infectadas com mais de uma linhagem de Wolbachia, enquanto que as demais espécies de Anastrepha abrigavam apenas uma linhagem da bactéria. Entre os braconídeos, quatro amostras populacionais de U. Anastrephae e uma de D. brasiliensis apresentaram múltipla infecção, enquanto que as demais espécies exibiram apenas uma única linhagem de Wolbachia associada. Foram detectadas linhagens distintas da bactéria entre diferentes amostras de uma mesma espécie, assim como, uma mesma linhagem bacteriana está presente em populações de mais de uma espécie do himenóptero. U. Anastrephae foi detectada parasitando quatro diferente espécies de Anastrepha, tendo sido observado que a mesma linhagem de Wolbachia que infectava as moscas-das-frutas também infectava o parasitóide. Além disso, a análise filogenética indicou que as bactérias Wolbachia que infectam os braconídeos aqui estudados exibem uma alta similaridade com linhagens presentes em insetos não relacionados taxonomicamente mas que, em alguns casos, habitam regiões neotropicais. O conjunto de resultados sugere que eventos de transferência horizontal das bactérias entre esses insetos possam ter ocorrido. / Detection and characterization of infection by the bacteria Wolbachia were done in samples of eight species of the fruit fly Anastrepha and six species of their parasitoid wasps (Braconidae), collected in several localities in Brazil. The presence and identification of the Wolbachia strains were performed by amplificaton and sequencing of a fragment of the Wolbachia wsp gene. Comparisions of the sequences with the data on the GenBank confirmed that the amplified fragment were from Wolbachia. The endosymbiont was found in Anastrepha amita, A. obliqua, A. macrura, A. montei, A. picklei, A. sp.1 aff. fraterculus e A. sp.2 aff. fraterculus, but not in the sample of A. serpentina. Among the six species of braconids only samples of Asobara Anastrephae and one sample of Opius bellus were not infected. The eight samples of Doryctobracon areolatus, two of D. brasiliensis, one of D. fluminensis, three of Opius bellus and five of Utetes Anastrephae were infected by these bacteria. Twenty one distinct strains of Wolbachia were detected, eight of which having a higher level of distinctiveness than the others, which showed slight variation. Two out of the four samples of Anastrepha obliqua were infected by more than one strain of Wolbachia, while a single strain of bacteria was found in the other Anastrepha species. Among the braconids, four samples of U. Anastrephae and one sample of D. brasiliensis showed multiple infection, and single strains of Wolbachia were found in the other species of parasitoids. It was found that a same strain of Wolbachia may be present in different host species, either fruit fly or the parasitoids, as well as, that the same host species may present different strains of bacteria. The braconid U. Anastrephae was found parasiting four different species of Anastrepha, and in every case and samples, the same Wolbachia strain was found in both, the fruit fly and its parasitoid. Moreover, a phylogenetic analysis indicated that the Wolbachia strains infecting the fruit flies and the parasitoid wasps here studied showed a high similarity to strains present in other phylogentic non-related insects, some of which inhabiting neotropic regions. The data suggest that horizontal transfer of Wolbachia might have occurred in these two groups of insects.

Amostras, de oito espécies de moscas-das-frutas do gênero Anastrepha e de seis espécies de vespas (Braconidae) parasitóides à elas associadas, coletadas em diferentes localidades do Brasil, foram estudadas para uma detecção e caracterização das linhagens da bactéria endossimbionte Wolbachia. A detecção e identificação de Wolbachia foram feitas pela amplificação e seqüenciamento de um fragmento do gene wsp (Wolbachia “surface protein”). As seqüências obtidas foram comparadas com seqüências depositadas no GenBank mostrando que todos os fragmentos amplificados e seqüenciados eram realmente provenientes de Wolbachia. Das espécies de Anastrepha, infecção pela Wolbachia foi encontrada em A. amita, A. obliqua, A. macrura, A. montei, A. picklei, A. sp.1 aff. fraterculus e A. sp.2 aff. fraterculus, exceto na amostra de A. serpentina. Dentre as seis espécies e braconídeos estudados, apenas as duas amostras de Asobara Anastrephae e uma amostra de Opius bellus, não apresentaram infecção. Já as oito amostras de Doryctobracon areolatus, duas de D. brasiliensis, uma de D. fluminensis, três de Opius bellus e cinco de Utetes Anastrephae apresentaram-se infectadas por essas bactérias. Foram identificadas 21 linhagens distintas de Wolbachia, sendo oito mais divegentes e as demais apresentando pequenas variações. Duas amostras de A. obliquaestavam infectadas com mais de uma linhagem de Wolbachia, enquanto que as demais espécies de Anastrepha abrigavam apenas uma linhagem da bactéria. Entre os braconídeos, quatro amostras populacionais de U. Anastrephae e uma de D. brasiliensis apresentaram múltipla infecção, enquanto que as demais espécies exibiram apenas uma única linhagem de Wolbachia associada. Foram detectadas linhagens distintas da bactéria entre diferentes amostras de uma mesma espécie, assim como, uma mesma linhagem bacteriana está presente em populações de mais de uma espécie do himenóptero. U. Anastrephae foi detectada parasitando quatro diferente espécies de Anastrepha, tendo sido observado que a mesma linhagem de Wolbachia que infectava as moscas-das-frutas também infectava o parasitóide. Além disso, a análise filogenética indicou que as bactérias Wolbachia que infectam os braconídeos aqui estudados exibem uma alta similaridade com linhagens presentes em insetos não relacionados taxonomicamente mas que, em alguns casos, habitam regiões neotropicais. O conjunto de resultados sugere que eventos de transferência horizontal das bactérias entre esses insetos possam ter ocorrido. / Detection and characterization of infection by the bacteria Wolbachia were done in samples of eight species of the fruit fly Anastrepha and six species of their parasitoid wasps (Braconidae), collected in several localities in Brazil. The presence and identification of the Wolbachia strains were performed by amplificaton and sequencing of a fragment of the Wolbachia wsp gene. Comparisions of the sequences with the data on the GenBank confirmed that the amplified fragment were from Wolbachia. The endosymbiont was found in Anastrepha amita, A. obliqua, A. macrura, A. montei, A. picklei, A. sp.1 aff. fraterculus e A. sp.2 aff. fraterculus, but not in the sample of A. serpentina. Among the six species of braconids only samples of Asobara Anastrephae and one sample of Opius bellus were not infected. The eight samples of Doryctobracon areolatus, two of D. brasiliensis, one of D. fluminensis, three of Opius bellus and five of Utetes Anastrephae were infected by these bacteria. Twenty one distinct strains of Wolbachia were detected, eight of which having a higher level of distinctiveness than the others, which showed slight variation. Two out of the four samples of Anastrepha obliqua were infected by more than one strain of Wolbachia, while a single strain of bacteria was found in the other Anastrepha species. Among the braconids, four samples of U. Anastrephae and one sample of D. brasiliensis showed multiple infection, and single strains of Wolbachia were found in the other species of parasitoids. It was found that a same strain of Wolbachia may be present in different host species, either fruit fly or the parasitoids, as well as, that the same host species may present different strains of bacteria. The braconid U. Anastrephae was found parasiting four different species of Anastrepha, and in every case and samples, the same Wolbachia strain was found in both, the fruit fly and its parasitoid. Moreover, a phylogenetic analysis indicated that the Wolbachia strains infecting the fruit flies and the parasitoid wasps here studied showed a high similarity to strains present in other phylogentic non-related insects, some of which inhabiting neotropic regions. The data suggest that horizontal transfer of Wolbachia might have occurred in these two groups of insects.

Haja vista a existência de quatro famílias de M. avium molecularmente distintas circulando na população de suínos do Sul do Brasil, a diferença de virulência constatada entre essas quatro famílias, a influência da virulência nos mecanismos de transmissão, as dúvidas existentes a respeito da existência e da importância da transmissão horizontal de M. avium em suínos e do significado desse conhecimento para o estabelecimento de métodos de controle eficientes, o presente projeto tem por objetivos: 1) Padronizar método de isolamento de micobactérias a partir de fezes suínas; 2) Caracterizar a eliminação de M.avium pelas fezes em suínos experimentalmente infectados pela via oral; 3) Verificar se existe transmissão horizontal entre suínos durante a fase de eliminação ativa, através de experimentos envolvendo infecção oral e exposição de animais contactantes; 4) Estudar, através de modelagem matemática, a dinâmica da infecção por M.avium em uma população suína. Como resultados, para cada um dos itens obteve-se: 1) Houve diferença significativa entre os protocolos de recuperação de micobactérias a partir de fezes de suínos (p< 0,05) e o método ácido com ressuspensão em solução de anfotericina B e semeadura em meio de Lowenstein-Jensen com antibióticos apresentou o maior percentual de recuperação (87%); 2) Foram constados dois períodos de eliminação fecal de MAC em suínos: um inicial, relativo à eliminação residual do inóculo, do 1º ao 4º, e um segundo, com início no 18º e término no 62º dias pós-inoculação, este último é resultado de suposta lesão aberta para a luz do intestino; 3) Cinco, dos sete animais contactantes, infectaram-se com o M.avium, estirpe PIG B e 4) A simulação matemática da doença, considerando a transmissão horizontal como mecanismo principal da ocorrência de condenações em matadouro por linfadenite granulomatosa é inconsistente com o que se observa na população. Portanto, o componente ambiental tem papel preponderante na dinâmica das infecções micobacterianas dos suínos produzidos no Brasil. / Considering four genetic distinct M. avium families within the swine population of the Southern Brazil, the virulence difference detected among them, the virulence influence on the transmission mechanisms, the current doubts concerning M. avium horizontal transmission existence and importance in swine and about its knowledge meaning in order to stablish efficient control programs, the objectives of the present study were: 1) to set in a standard mycobacterial isolation method from swine feces; 2) to characterize M. avium excretion through feces in swine infected orally; 3) to verify the existence of horizontal transmission among swine during the active elimination phase, by experiments involving oral infection and exposure of contacting animals; 4) to study, through mathematical modelling, M. avium infection dynamics in a swine population. These are the attained results for each of the items: 1) there was a significant difference (p<0.05) between the mycobacterial recovery protocols from swine feces and the acid method with suspension in amphotericin solution and inoculation in Lowenstein-Jensen media with antibiotics presented the greatest recovery percentage (87%); 2) two fecal elimination periods of M. avium in swine feces were observed: an initial one, relative to the residual elimination of the inoculum, within days 1 and 4, and a second one, starting at day 18 and ending at day 62 post inoculation - the last one results from a supposed lesion opened to the intestinal lumen. 3) Five out of seven contacting animals were infected with M. avium; 4) The mathematical simulation of the disease, considering the horizontal transmission as the major mechanism of occurrence of condemnation at slaughterhouses due to granulomatous lymphadenitis is not consistent with what is observed in the population. Therefore, the environmental component plays a preponderant role in the mycobacterial infections dynamics of swine raised in Brazil.

Circovírus suíno 2 (PCV2) é responsável pelas doenças associadas ao circovírus suíno (PCVAD do inglês Porcine circovirus associated disease) que engloba várias condições clínicas. Acomete suínos nas principais áreas produtoras do mundo causando grandes prejuízos. A situação acerca do conhecimento acerca da complexa patogenia e os múltiplos fatores de risco permitem compreender apenas em parte o verdadeiro impacto das PCVADs em suínos, sendo este um conhecimento mais amplo e dependente de resultados obtidos com infecções experimentais. Os objetivos do presente trabalho foram: i) verificar a infectividade do isolado brasileiro de PCV2 em animais infectados experimentalmente; ii) verificar a transmissão horizontal do isolado brasileiro de PCV2 em animais infectados experimentalmente; iii) avaliar a patologia do isolado brasileiro nos animais infectados experimentalmente; e iv) avaliar a resposta imune humoral nos animais infectados experimentalmente com o isolado brasileiro. Foram utilizados nove leitões divididos em três grupos com três animais cada: i) G1 animais inoculados por via intra-nasal, com aproximadamente 49 dias de idade; ii) G2 animais não inoculados mantidos na mesma baia que os G1; e iii) GC animais controle. Amostras de soro, suabes (nasal e fecal) e dados de desempenho foram coletados semanalmente. Amostras de tecidos foram coletadas durante a necropsia, aos 42 dias após a inoculação (dpi). Os animais do GC foram acompanhados até 140 dias de idade. A infecção pelo PCV2 foi avaliada através da descrição das manifestações clínicas, alterações anatômicas e histológicas, quantificação do DNA de PCV2 nas amostras de soro, suabes e tecidos e detecção de anticorpo anti-PCV2 no soro. As técnicas utilizadas foram coloração de tecido pela Hematoxilina-Eosina (HE), reação em cadeia pela polimerase quantitativa (PCRq), imunohistoquímica (IHQ) e ELISA ( do inglês enzyme-linked imunossorbente assay). Os resultados demonstraram que o isolado brasileiro induziu infecção subclínica nos animais inoculados (G1), demonstrado através da detecção de baixa carga de DNA viral nos tecido e soros, ausência de sinais clínicos e achados histopatológicos característicos de PCVAD, além da ausência de soroconversão nos três animais inoculados. A transmissão horizontal foi demonstrada, pois em um animal contactante (G2) foi recuperado o DNA de PCV2 em vários tecidos. No entanto, a ausência de soroconversão, não permitiu avaliar a resposta imune humoral nos diferentes grupos (G1 e G2). Fatores como idade dos animais no momento da inoculação (49 dias), via de inoculação, inóculo e ausência de co-agentes podem ter contribuído para o desencadeamento dos resultados observados. / Porcine circovirus 2 (PCV2) is responsible for the porcine circovirus associated diseases (PCVAD) that encompasses several clinical conditions. It affects the main pig producing areas of the world, causing extensive damage. Currently, knowledge about the complex pathogenesis associated with the multiple risk factors provides insight into the true impact of PCVADs, depending on the extensive knowledge based on the experimental infections. The aims of this study were: i) verify the infectivity of the brazilian PCV2 in experimentally infected animals; ii) verify the horizontal transmission of the Brazilian PCV2 in experimentally infected animals; iii) evaluete the patology of Brasilian PCV2 in experimentally infected animals; iv) evaluete the humoral immune response in experimentally infected animals with the Brazilian isolate. Nine piglets were divided into three groups with three animal each: i) G1 inoculated animals by intranasally route, with approximately 49 days of age; ii) G2 non-inoculated animals maintained in the same pen that G1 and iii) GC control animals. Serum samples, swabs (nasal and fecal) and performance data were collected weekly. Tissue samples were collected during necropsy at 42 days post inoculation (dpi). Animals from GC were monitored up to 140 days of age. PCV2 infection was evaluated by clinical, anatomical and histological alteration, quantification of PCV2 DNA in serum samples, swabs and tissues and detection of PCV2 antibodies in serum. The techniques of tissue hematoxylin-eosin staining, polymerase chain reaction quantitative (PCRq), immunohistochemistry (IHC) and ELISA were used. The results showed that the Brazilian PCV2 virus induced subclinical infection in inoculated animals (G1), shown by the low viral DNA load in the tissue and serum, the lack of clinical and pathological signs of PCVAD and absence of seroconversion in the three inoculated animals. The horizontal transmission was demonstrated by the recovery of the viral DNA on one of contacting animals in various tissues. However, the absence of seroconversion, does not allowed the antibody levels evaluation in the different groups (G1 and G2). Factors such as age at the time of inoculation (49 days), route of inoculation, inoculum and absence of co-agents may contribute to the onset of the observed results.

Circovírus suíno 2 (PCV2) é responsável pelas doenças associadas ao circovírus suíno (PCVAD do inglês Porcine circovirus associated disease) que engloba várias condições clínicas. Acomete suínos nas principais áreas produtoras do mundo causando grandes prejuízos. A situação acerca do conhecimento acerca da complexa patogenia e os múltiplos fatores de risco permitem compreender apenas em parte o verdadeiro impacto das PCVADs em suínos, sendo este um conhecimento mais amplo e dependente de resultados obtidos com infecções experimentais. Os objetivos do presente trabalho foram: i) verificar a infectividade do isolado brasileiro de PCV2 em animais infectados experimentalmente; ii) verificar a transmissão horizontal do isolado brasileiro de PCV2 em animais infectados experimentalmente; iii) avaliar a patologia do isolado brasileiro nos animais infectados experimentalmente; e iv) avaliar a resposta imune humoral nos animais infectados experimentalmente com o isolado brasileiro. Foram utilizados nove leitões divididos em três grupos com três animais cada: i) G1 animais inoculados por via intra-nasal, com aproximadamente 49 dias de idade; ii) G2 animais não inoculados mantidos na mesma baia que os G1; e iii) GC animais controle. Amostras de soro, suabes (nasal e fecal) e dados de desempenho foram coletados semanalmente. Amostras de tecidos foram coletadas durante a necropsia, aos 42 dias após a inoculação (dpi). Os animais do GC foram acompanhados até 140 dias de idade. A infecção pelo PCV2 foi avaliada através da descrição das manifestações clínicas, alterações anatômicas e histológicas, quantificação do DNA de PCV2 nas amostras de soro, suabes e tecidos e detecção de anticorpo anti-PCV2 no soro. As técnicas utilizadas foram coloração de tecido pela Hematoxilina-Eosina (HE), reação em cadeia pela polimerase quantitativa (PCRq), imunohistoquímica (IHQ) e ELISA ( do inglês enzyme-linked imunossorbente assay). Os resultados demonstraram que o isolado brasileiro induziu infecção subclínica nos animais inoculados (G1), demonstrado através da detecção de baixa carga de DNA viral nos tecido e soros, ausência de sinais clínicos e achados histopatológicos característicos de PCVAD, além da ausência de soroconversão nos três animais inoculados. A transmissão horizontal foi demonstrada, pois em um animal contactante (G2) foi recuperado o DNA de PCV2 em vários tecidos. No entanto, a ausência de soroconversão, não permitiu avaliar a resposta imune humoral nos diferentes grupos (G1 e G2). Fatores como idade dos animais no momento da inoculação (49 dias), via de inoculação, inóculo e ausência de co-agentes podem ter contribuído para o desencadeamento dos resultados observados. / Porcine circovirus 2 (PCV2) is responsible for the porcine circovirus associated diseases (PCVAD) that encompasses several clinical conditions. It affects the main pig producing areas of the world, causing extensive damage. Currently, knowledge about the complex pathogenesis associated with the multiple risk factors provides insight into the true impact of PCVADs, depending on the extensive knowledge based on the experimental infections. The aims of this study were: i) verify the infectivity of the brazilian PCV2 in experimentally infected animals; ii) verify the horizontal transmission of the Brazilian PCV2 in experimentally infected animals; iii) evaluete the patology of Brasilian PCV2 in experimentally infected animals; iv) evaluete the humoral immune response in experimentally infected animals with the Brazilian isolate. Nine piglets were divided into three groups with three animal each: i) G1 inoculated animals by intranasally route, with approximately 49 days of age; ii) G2 non-inoculated animals maintained in the same pen that G1 and iii) GC control animals. Serum samples, swabs (nasal and fecal) and performance data were collected weekly. Tissue samples were collected during necropsy at 42 days post inoculation (dpi). Animals from GC were monitored up to 140 days of age. PCV2 infection was evaluated by clinical, anatomical and histological alteration, quantification of PCV2 DNA in serum samples, swabs and tissues and detection of PCV2 antibodies in serum. The techniques of tissue hematoxylin-eosin staining, polymerase chain reaction quantitative (PCRq), immunohistochemistry (IHC) and ELISA were used. The results showed that the Brazilian PCV2 virus induced subclinical infection in inoculated animals (G1), shown by the low viral DNA load in the tissue and serum, the lack of clinical and pathological signs of PCVAD and absence of seroconversion in the three inoculated animals. The horizontal transmission was demonstrated by the recovery of the viral DNA on one of contacting animals in various tissues. However, the absence of seroconversion, does not allowed the antibody levels evaluation in the different groups (G1 and G2). Factors such as age at the time of inoculation (49 days), route of inoculation, inoculum and absence of co-agents may contribute to the onset of the observed results.

Haja vista a existência de quatro famílias de M. avium molecularmente distintas circulando na população de suínos do Sul do Brasil, a diferença de virulência constatada entre essas quatro famílias, a influência da virulência nos mecanismos de transmissão, as dúvidas existentes a respeito da existência e da importância da transmissão horizontal de M. avium em suínos e do significado desse conhecimento para o estabelecimento de métodos de controle eficientes, o presente projeto tem por objetivos: 1) Padronizar método de isolamento de micobactérias a partir de fezes suínas; 2) Caracterizar a eliminação de M.avium pelas fezes em suínos experimentalmente infectados pela via oral; 3) Verificar se existe transmissão horizontal entre suínos durante a fase de eliminação ativa, através de experimentos envolvendo infecção oral e exposição de animais contactantes; 4) Estudar, através de modelagem matemática, a dinâmica da infecção por M.avium em uma população suína. Como resultados, para cada um dos itens obteve-se: 1) Houve diferença significativa entre os protocolos de recuperação de micobactérias a partir de fezes de suínos (p< 0,05) e o método ácido com ressuspensão em solução de anfotericina B e semeadura em meio de Lowenstein-Jensen com antibióticos apresentou o maior percentual de recuperação (87%); 2) Foram constados dois períodos de eliminação fecal de MAC em suínos: um inicial, relativo à eliminação residual do inóculo, do 1º ao 4º, e um segundo, com início no 18º e término no 62º dias pós-inoculação, este último é resultado de suposta lesão aberta para a luz do intestino; 3) Cinco, dos sete animais contactantes, infectaram-se com o M.avium, estirpe PIG B e 4) A simulação matemática da doença, considerando a transmissão horizontal como mecanismo principal da ocorrência de condenações em matadouro por linfadenite granulomatosa é inconsistente com o que se observa na população. Portanto, o componente ambiental tem papel preponderante na dinâmica das infecções micobacterianas dos suínos produzidos no Brasil. / Considering four genetic distinct M. avium families within the swine population of the Southern Brazil, the virulence difference detected among them, the virulence influence on the transmission mechanisms, the current doubts concerning M. avium horizontal transmission existence and importance in swine and about its knowledge meaning in order to stablish efficient control programs, the objectives of the present study were: 1) to set in a standard mycobacterial isolation method from swine feces; 2) to characterize M. avium excretion through feces in swine infected orally; 3) to verify the existence of horizontal transmission among swine during the active elimination phase, by experiments involving oral infection and exposure of contacting animals; 4) to study, through mathematical modelling, M. avium infection dynamics in a swine population. These are the attained results for each of the items: 1) there was a significant difference (p<0.05) between the mycobacterial recovery protocols from swine feces and the acid method with suspension in amphotericin solution and inoculation in Lowenstein-Jensen media with antibiotics presented the greatest recovery percentage (87%); 2) two fecal elimination periods of M. avium in swine feces were observed: an initial one, relative to the residual elimination of the inoculum, within days 1 and 4, and a second one, starting at day 18 and ending at day 62 post inoculation - the last one results from a supposed lesion opened to the intestinal lumen. 3) Five out of seven contacting animals were infected with M. avium; 4) The mathematical simulation of the disease, considering the horizontal transmission as the major mechanism of occurrence of condemnation at slaughterhouses due to granulomatous lymphadenitis is not consistent with what is observed in the population. Therefore, the environmental component plays a preponderant role in the mycobacterial infections dynamics of swine raised in Brazil.

A salmonelose é uma das mais importantes causas de toxinfecção alimentar em humanos, provocando sérios problemas à saúde pública, além de ser uma das doenças de maior impacto na produção avícola. Em vista disso, este estudo objetivou avaliar o uso de ácido fórmico no controle de Salmonella Enteritidis (SE). Assim, foram utilizados 360 pintinhos de um dia de idade: 50% das aves foram inoculadas via inglúvio com 3x107 UFC/0,1mL de SE e 50% não (aves contactantes). As aves foram divididas em cinco (05) grupos com seis (06) repetições cada: T1) controle sem o aditivo; T2) ácido fórmico 0,3% na ração; T3) ácido fórmico 0,2% na ração; T4) ácido fórmico diluído em água de beber até que a mesma atingisse um pH 4; T5) ácido fórmico 0,2% protegido na ração. As aves receberam ácido do 1º ao 7º dia e do 35º ao 42º dia. A cada sete dias, amostras de fezes foram colhidas da cama em todos os grupos para se avaliar o isolamento de SE. Aos 42 dias foram colhidas à necropsia amostras de inglúvio, fígado/baço e ceco para o isolamento de SE e sangue para a avaliação sorológica. Nas aves do T1, do T2 e do T5 SE foi isolada do inglúvio, fígado/baço e ceco das aves inoculadas e das contactantes. Houve isolamento de SE no T3 apenas em inglúvio e ceco das aves inoculadas e, no T4, apenas do ceco das contactantes. Em todos os grupos SE foi reisolada do material da cama, embora não em todas as semanas. A avaliação sorológica realizada com teste comercial de ELISA revelou aves sororeagentes no T1 (inoculadas e contactantes), no T2 (inoculadas) e no T3 (contactantes). Nenhuma ave foi sororeagente no T4 e T5. A transmissão horizontal foi evidenciada em todos os grupos estudados. Os dados foram comprovados por ANOVA e teste LCD. Nos grupos T3 e T4 o ácido fórmico foi eficaz em reduzir a presença e a transmissão horizontal de SE. / Salmonellosis is one of the most common and widely distributed foodborne diseases, with tens of millions of human cases occurring worldwide every year. Furthermore, this disease is responsible to significant economic losses to the poultry industry. Endemic infection of broiler chickens with Salmonella. Enteritidis (SE) and consequential human illness has been well documented. For these reasons the aim of this study was to evaluate the use of formic acid to control SE in broilers experimentally infected. Thus 360 day-old chicks were used in the experiment: 50% (180) of birds were inoculated in crop with 3x107CFU/0.1 mL of SE and 50% (180) were used as controls and kept in contact with the infected chicks. For the formic acid treatment the birds were divided into five (05) groups with six (06) replicates as follows: T1) control without additive; T2) 0.3% formic acid in the diet ; T3) 0.2% formic acid in the diet ; T4) formic acid diluted in drinking until it reached pH 4 water; T5) 0.2% formic acid microencapsulated in the food. The birds received the formic acid from the 1st to 7th day and from the 35th to 42nd days. Every seven days faeces samples were collected from the chick\'s litter and SE isolation was attempted. In the 42 day blood samples were collected for serological evaluation by means of Elisa. Additionally samples from the crop, liver/spleen and cecum were collected at necropsy and submitted to culture for SE detection. SE was isolated from crop, liver/spleen and cecum of the inoculated and contacts birds belonging to the T1, T2 and T5. Regarding the T3, SE was isolated in the crop and cecum of the inoculated birds and in the T4 only in the contacts chicks cecum. In all groups SE was isolated from the litter, although not in every week. Serological evaluation revealed serum positive birds in T1 (inoculated and contacts), T2 (inoculated) and T3 (contacts). Antibodies anti-SE were not detected in the serum from the birds of T4 and T5. Horizontal transmission was observed in all groups. The data were confirmed by ANOVA and LCD test. In groups T3 and T4 formic acid was effective in reducing the presence and horizontal transmission of SE.

A salmonelose é uma das mais importantes causas de toxinfecção alimentar em humanos, provocando sérios problemas à saúde pública, além de ser uma das doenças de maior impacto na produção avícola. Em vista disso, este estudo objetivou avaliar o uso de ácido fórmico no controle de Salmonella Enteritidis (SE). Assim, foram utilizados 360 pintinhos de um dia de idade: 50% das aves foram inoculadas via inglúvio com 3x107 UFC/0,1mL de SE e 50% não (aves contactantes). As aves foram divididas em cinco (05) grupos com seis (06) repetições cada: T1) controle sem o aditivo; T2) ácido fórmico 0,3% na ração; T3) ácido fórmico 0,2% na ração; T4) ácido fórmico diluído em água de beber até que a mesma atingisse um pH 4; T5) ácido fórmico 0,2% protegido na ração. As aves receberam ácido do 1º ao 7º dia e do 35º ao 42º dia. A cada sete dias, amostras de fezes foram colhidas da cama em todos os grupos para se avaliar o isolamento de SE. Aos 42 dias foram colhidas à necropsia amostras de inglúvio, fígado/baço e ceco para o isolamento de SE e sangue para a avaliação sorológica. Nas aves do T1, do T2 e do T5 SE foi isolada do inglúvio, fígado/baço e ceco das aves inoculadas e das contactantes. Houve isolamento de SE no T3 apenas em inglúvio e ceco das aves inoculadas e, no T4, apenas do ceco das contactantes. Em todos os grupos SE foi reisolada do material da cama, embora não em todas as semanas. A avaliação sorológica realizada com teste comercial de ELISA revelou aves sororeagentes no T1 (inoculadas e contactantes), no T2 (inoculadas) e no T3 (contactantes). Nenhuma ave foi sororeagente no T4 e T5. A transmissão horizontal foi evidenciada em todos os grupos estudados. Os dados foram comprovados por ANOVA e teste LCD. Nos grupos T3 e T4 o ácido fórmico foi eficaz em reduzir a presença e a transmissão horizontal de SE. / Salmonellosis is one of the most common and widely distributed foodborne diseases, with tens of millions of human cases occurring worldwide every year. Furthermore, this disease is responsible to significant economic losses to the poultry industry. Endemic infection of broiler chickens with Salmonella. Enteritidis (SE) and consequential human illness has been well documented. For these reasons the aim of this study was to evaluate the use of formic acid to control SE in broilers experimentally infected. Thus 360 day-old chicks were used in the experiment: 50% (180) of birds were inoculated in crop with 3x107CFU/0.1 mL of SE and 50% (180) were used as controls and kept in contact with the infected chicks. For the formic acid treatment the birds were divided into five (05) groups with six (06) replicates as follows: T1) control without additive; T2) 0.3% formic acid in the diet ; T3) 0.2% formic acid in the diet ; T4) formic acid diluted in drinking until it reached pH 4 water; T5) 0.2% formic acid microencapsulated in the food. The birds received the formic acid from the 1st to 7th day and from the 35th to 42nd days. Every seven days faeces samples were collected from the chick\'s litter and SE isolation was attempted. In the 42 day blood samples were collected for serological evaluation by means of Elisa. Additionally samples from the crop, liver/spleen and cecum were collected at necropsy and submitted to culture for SE detection. SE was isolated from crop, liver/spleen and cecum of the inoculated and contacts birds belonging to the T1, T2 and T5. Regarding the T3, SE was isolated in the crop and cecum of the inoculated birds and in the T4 only in the contacts chicks cecum. In all groups SE was isolated from the litter, although not in every week. Serological evaluation revealed serum positive birds in T1 (inoculated and contacts), T2 (inoculated) and T3 (contacts). Antibodies anti-SE were not detected in the serum from the birds of T4 and T5. Horizontal transmission was observed in all groups. The data were confirmed by ANOVA and LCD test. In groups T3 and T4 formic acid was effective in reducing the presence and horizontal transmission of SE.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_nilton_azevedo_da_cunha_filho.pdf: 1341797 bytes, checksum: 3a24f48f5e86bbb452bd241d5e458c34 (MD5) Previous issue date: 2013-07-08 / Neospora caninum is causing great economic losses in cattle, due to abortion. It has been shown that the transmission of N. caninum is the primary route of infection in cattle, followed by horizontal transmission. Few studies demonstrate the outcome of this type of transmission in herd raised in pasture cattle. The first experiment aimed to evaluate the occurrence of vertical transmission of N. caninum in beef cattle and verify the relationship between seropositivity and abortion. Blood was collected from mothers in the pre-pregnancy and after, three more times in the gestation period, plus a sampling of calves at birth. The seroprevalence in the arrays found in the screening was 32.2% (29/90). The vertical transmission rate was 75.8% and all dams evaluated completed pregnancy, demonstrating that N. caninum is present on the property studied, with high transmission rates, but no apparent influence on the reproductive performance of dams. The second experiment aimed to demonstrate the importance of horizontal transmission in maintaining N. caninum in the same herd. Were accompanied by serological tests, 61 seronegative mothers during pregnancy thirds and their calves at birth (n = 61) and during the first year of life (n = 24). No seroconversion occurred in any of the dams. In calves, however, that seroconversion occurred, indicative of horizontal infection by N. caninum, 12.5% at the end of 12 months. This indicates that horizontal transmission interference occurred in this herd. The third experiment aimed to detect the presence of DNA of N. caninum in umbilical cord of calves positive of positive dams. Was collected the umbilical cord of 20 calves at birth for laboratory testing by PCR. The DNA of the parasite was confirmed by 1/20 (5.0%) umbilical cords. This is the first report of the detection of DNA from N. caninum in umbilical cord of calves by PCR. / Neospora caninum é causador de grandes perdas econômicas na bovinocultura, devidas ao aborto. Já foi demonstrado que a transmissão vertical de N. caninum é a principal rota de infecção entre bovinos, seguida pela transmissão horizontal. Poucos estudos demonstram qual o resultado desse tipo de transmissão em rebanho criado a campo. O experimento 1 teve o objetivo de avaliar a ocorrência de transmissão vertical de N. caninum em matrizes de criação extensiva de gado de corte e verificar a relação entre soropositividade e aborto. Foi coletado sangue das matrizes no período pré-gestacional e, após, em mais três momentos do período gestacional, além de uma coleta de seus bezerros ao nascer. A soroprevalência nas matrizes, constatada na triagem foi de 32,2% (29/90). O índice de transmissão vertical foi de 75,8% e todas as matrizes avaliadas levaram a gestação a termo, demonstrando que N. caninum está presente na propriedade estudada, com índices elevados de transmissão vertical, porém sem influência aparente no desempenho reprodutivo das matrizes. O experimento 2 objetivou demonstrar a importância da transmissão horizontal na manutenção de N. caninum nesse mesmo rebanho. Foram acompanhadas, através de exames sorológicos, 61 matrizes soronegativas durante os terços gestacionais e seus bezerros ao nascer (n=61) e durante o primeiro ano de vida (n=24). Não ocorreu soroconversão em nenhuma das matrizes. Nos bezerros, no entanto, ocorreu essa soroconversão, indicativa de infecção horizontal por N. caninum, em 12,5%, ao final dos 12 meses. Isso indica a interferência da transmissão horizontal nesse rebanho. O experimento 3 teve o objetivo de detectar a presença do DNA de N. caninum em cordão umbilical de bezerros soropositivos filhos de matrizes soropositivas. Coletou-se o cordão umbilical de 20 bezerros no momento do nascimento para os testes laboratoriais pela técnica de PCR. O DNA do parasito foi confirmado em 1/20 (5,0%) dos cordões umbilicais. Este é o primeiro relato da detecção de DNA de N. caninum em cordão umbilical de bezerros pela técnica de PCR.

A transmissão do VHC vem diminuindo após a implementação de diretrizes de triagem de doadores de sangue e adoção de políticas sociais para reduzir o risco de infecção em UDI, entretanto o VHC ainda constitui um grave problema de saúde pública mundial. Em torno de 10% dos pacientes infectados com VHC não referem exposição a nenhum fator de risco conhecido. Alguns estudos demonstraram a presença de RNA em diferentes secreções, sugerindo a existência de outras rotas de transmissão do VHC. Este estudo teve como objetivo analisar as relações filogenéticas de diferentes regiões genômicas do VHC de cônjuges portadores crônicos e correlacioná-las com seqüências de portadores crônicos não relacionados atendidos no mesmo ambulatório. Foram selecionados 18 pacientes (9 casais) com genótipo concordante entre eles e 42 controles (14 de cada genótipo encontrados nos casais). Foram amplificadas e seqüenciadas as regiões NS3 (~620nt) e NS5B (~360nt). As seqüências foram alinhadas usando o programa Clustal X e Bioedit 6.0.7. A presença do sinal filogenético, nas regiões estudadas, foi analisado através do mapeamento da verossimilhança pelo programa Tree-Puzzle. Os modelos evolucionários foram estimados pelo teste de razão de verossimilhança com o auxílio do programa Modeltest e utilizados para as análises das seqüências NS3, NS3+NS5B (TrN+I+G) e NS5B(TrNef+I+G). Foram empregados os métodos de distância com algoritmo de agrupamento de vizinhos e máxima verossimilhança com o algoritmo de rearranjo dos braços, seccionando a árvore em dois pedaços e ligando em outras partes, para a construção das árvores, pelo programa PAUP*4b10. Foram calculados os valores de bootstrap, com 1000 réplicas, para a verificação da sustentação de ramos nas topologias. Nas análises foram incluídas seqüências referencia do Genbank de diferentes genótipos. Todos os casais tiveram a região NS5B amplificada e seqüenciada, entretanto, não foi possível amplificar e seqüênciar a região NS3 de amostras de 2 casais. Considerando-se as três análises o sinal filogenético foi de 90.5% (NS5B - 199 nt), 92.9% (NS5B - 344 nt), 94.8% (NS3 - 619 nt ) e 96.1% (NS5B + NS3). Como esperado, o melhor sinal filogenético foi obtido com as seqüências das duas regiões concatenadas NS3+NS5B. As análises filogenéticas sugerem fortemente que os vírus dos casais 3, 4, 6, 7, e 8 têm a mesma origem. Na maioria das análises as seqüências dos vírus destes casais formaram um grupo monofilético com valores de bootstrap acima de 70. As seqüências dos outros casais, em algumas situações, apresentaram grupos monofiléticos, contudo os valores de bootstrap não foram significativos. A utilização de seqüências de duas regiões genômicas diferentes suportam a hipótese de que os vírus dos casais 3, 4, 6, 7 e 8 têm a mesma origem. A inclusão de seqüências controle, dos mesmos subtipos encontrados nas amostras dos casais, foram fundamentais para a confirmação dos resultados. Estes resultados indicam fortemente a possibilidade de transmissão entre casais. / HCV transmission has decreased with the adoption of universal blood donors screening and social policies to reduce risk of infection in IVDU, but HCV is still a worldwide health problem. The epidemiological route of infection cannot be identified in a significant proportion of patients. Some studies demonstrated the presence of viral RNA in different secretions, suggesting the existence of other routes for HCV transmission. The aim of this study was to evaluate the phylogenetical relationships among sequences from different HCV genomic regions from sexual partners of chronic infected patients when analyzed among themselves and when analyzed conjointly with sequences from virus found in non related chronic infected patients attended in the same clinic. Eighteen individuals (9 couples with stable relationship without other risk factors for HCV infection) and forty-two control patients (fourteen from each genotype found in the couples) were selected. NS3 (~620 nts) and NS5B (~360 nts) regions were amplified and sequenced. Sequences were aligned using clustal X 1.81 and Bioedit 6.0.7. Phylogenetic signal/noise ratio in the data set was investigated with a likelihood mapping analysis with the program TREE-PUZZLE. Evolutionary models were chosen by Hierarchical Likelihood Ratio Test (hLRTs) using Modeltest 3.06 and used for analyze NS3, NS3+NS5B (TrN+I+G) and NS5B (TrNef+I+G) sequences. Distance and maximum-likelihood (ML) phylogenetical analyses were performed with PAUP*4b10 and the trees were constructed with NJ and heuristic search. Tree bisection and reconnection (TBR) algorithm respectively.Robustness of trees was evaluated by analyzing 1000 bootstrap replicates. Genbank reference sequences from different genotypes were included in data analysis. Sequences from NS5B region were obtained for all samples while it was not possible to get NS3 sequences from only 2 couples. Considering the three analysis, phylogenetical signals were 90.5% (NS5B - 199 nt), 92.9% (NS5B - 344 nt), 94.8% (NS3 - 619 nt ) and 96.1% (NS5B + NS3). As expected, the best phylogenetical signal was obtained with concatened NS3+NS5B sequences. Phylogenetical analysis strongly suggested that virus from couples 3, 4, 6, 7 and 8 had a common origin. In the majority of the analysis, sequences inside these couples clustered in the same monophyletical group with bootstrap values higher than 70. For the other couples, monophyletical groups were observed but these results were not supported by the bootstrap analysis. In conclusion, using sequencing from two different viral genomic regions, we have strongly supported a common source of infection for the two members of five couples. Control sequences from the same subtypes than the couples were crucial to confirm the results. These data strongly support HCV transmission inside couples.