Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar, in vivo, a resposta biológica imediata e tardia de soluções aquosa e hidroalcoólica preparadas com extrato vegetal de Araçá (Psidium cattleianum) associadas a microrganismos inativados. O controle utilizado foi soro fisiológico associado aos microrganismos inativados. Foi utilizado 0,1mL de uma suspensão contendo Porphyromonas gingivalis ATCC 33277, Prevotella intermedia ATCC 25611, Fusobacterium nucleatum ATCC 25586, Enterococcus faecalis ATCC 29212, Peptostreptococcus micros ATCC 33270 e Porphyromonas endodontalis ATCC 35406 inativados por calor, a qual foi misturada a 1mL de soro fisiológico ou solução aquosa ou hidroalcoólica de araçá. Para a análise edemogênica (resposta imediata), foram utilizados 18 ratos machos (Rattus norvegicus). Sob anestesia geral, os animais receberam injeção intravenosa de azul de Evans a 1%. Após 30 minutos, foi injetado 0,1mL da mistura de uma das soluções ou soro (associados aos microrganismos inativados), na região subcutânea dorsal. Os animais foram sacrificados após 3 e 6 horas e as peças obtidas colocadas em formamida por 72 horas. A leitura da análise edemogênica foi realizada em espectrofotômetro com comprimento de onda de 630ηm. Para a análise microscópica (resposta tardia), tubos de polietileno contendo as soluções ou soro fisiológico acrescidos da solução de microrganismos inativados foram implantados na região dorsal de 30 ratos machos, que foram mortos após 7 e 30 dias. Não foi observada diferença significante (p>0,05) na quantidade de edema dos diferentes grupos nos tempos pós-operatórios. Os resultados obtidos pela leitura das lâminas em microscópio óptico apontaram reparo no período de 30 dias significativamente superior ao de 7 dias... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of the present study was to evaluate, in vivo, the immediate and late biological reactions of hydro alcoholic and watery solutions prepared with vegetable extract of Araça (Psidium cattleianum), associated to inactivated microorganisms. For the control group, physiological serum, associated to inactivated microorganisms, was used. For performing the investigation it was used 0.1mL of a suspension containing Porphyromonas gingivalis ATCC 33277, Prevotella intermedia ATCC 25611, Fusobacterium nucleatum ATCC 25586, Enterococcus faecalis ATCC 29212, Peptostreptococcus micros ATCC 33270 and Porphyromonas endodontalis ATCC 35406, inactivated by heat, which was mixed to 1mL of physiological serum or watery solution or hydro alcoholic extract of Araça. For the edemogenic analysis (immediate reaction), 18 male mice (Rattus norvegicus) were used. The animals, under general anesthesia, received Evans blue intra shot at 1%. Thirty (30) minutes later, 0,1mL of one of the extracts or the serum - associated to the inactivated microorganisms - was injected on the animal dorsal under skin region. The animals were sacrificed after 3 and 6 hours and the materials obtained were placed into formamide for 72 hours. The edemogenic analysis reading was made by spectrophotometer with 630ηm wavelength. For the morphological analysis (late reaction), 30 mice received implant of polyethylene duct with the extracts or the serum, added by the solution of inactivated microorganisms on the dorsal region, and after 7 and 30 days they were sacrificed. No significant difference (p>0,05) in the edema amount of the different groups was observed postoperatively. Results obtained from the reading of species, in optical microscopy, showed a repair in the 30-day-period, which was significantly superior when compared to the 7-day-period (p<0,0001)... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Eloi Dezan Júnior / Coorientador: Elerson Gaetti Jardim Júnior / Banca: Ana Cláudia Okamoto / Banca: Leda Maria Pescinini Salzedas / Banca: Maria Aparecida de Andrade Moreira Machado / Banca: Fábio Luiz Camargo Villela / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:01:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3603_1.pdf: 4918547 bytes, checksum: c4bc078c5e3f7886bb1a011db720e51c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Faculdade de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / Embora os episódios de contaminação bacteriana possam causar prejuízos econômicos de milhares de reais às destilarias de álcool combustível no país, até o momento não há ainda um catálogo completo de informações sobre todas as possíveis espécies bacterianas envolvidas na contaminação industrial, e poucos são os dados encontrados na literatura científica sobre contaminantes bacterianos do processo de fermentação alcoólica. O presente trabalho teve como objetivo principal estabelecer o padrão populacional de bactérias lácticas envolvidas em episódios de contaminação bacteriana do processo industrial de produção de álcool combustível no Nordeste do Brasil. Para isso foram coletas amostras de mosto fermento durante as safras 2005-2006, 2006-2007 e 2007-2008, em destilarias nos Estados da Paraíba e de Pernambuco. A identificação dos isolados foi realizada através da técnica ARDRA e pela análise do sequenciamento de DNA dos genes pheS e 16S. Em termos gerais, os resultados mostraram que os principais contaminantes bacterianos do processo são os lactobacilos. A análise da dinâmica da população bacteriana nestas destilarias, principalmente a safra 2007/2008, sugere que algumas bactérias surgem no processo, contudo não conseguem se manter, como por exemplo, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus ferintoshensis e Lactobacillus brevis. Outras, contudo, surgem e se mantém, ainda que modificando a sua freqüência, como Lactobacillus vini e Lactobacillus fermentum. A detecção da presença da bactéria L. vini em alta proporção no processo representa um dado muito relevante, já que este é o primeiro trabalho que relata essa bactéria em processos fermentativos para produção de álcool combustível no Brasil. Alguns autores sugerem que o Lactobacillus vini em associação com a levedura Dekkera bruxellensis pode constituir um bom consórcio para produção de álcool combustível. A comparação da identificação bacteriana deste trabalho com os dados de dinâmica das diferentes espécies de leveduras mostraram uma tendência a essa associação também nas destilarias locais. Além da identificação, os isolados bacterianos de L. fermentum e L. vini foram tipados pelo REP-PCR com o primer (GTG)5. Os resultados mostraram que, além da diversidade de espécies bacterianas detectadas, existe uma diversidade de linhagens dessas duas principais espécies no processo. A espécie L. fermentum tem sido apontada como principal contaminante em processo de fermentação alcoólica industrial, sendo algumas linhagens capazes de causar floculação em leveduras, podendo causar danos ao processo fermentativo. Trabalhos futuros visam correlacionar os diferentes perfis intra-específicos dessas espécies com algum dano do processo, visando assim traçar uma melhor estratégia de controle microbiano

Orientador: Luciane Dias de Oliveira / Banca: Luis Felipe das Chagas e Silva de Carvalho / Banca: Jônatas Rafael de Oliveira / Resumo: As plantas medicinais e os fitoterápicos têm sido utilizados como coadjuvantes e alternativos no combate a diversas doenças com crescente frequência, no entanto, na Odontologia seu uso ainda é bastante limitado. Com isso, o objetivo deste estudo é avaliar a ação antimicrobiana dos extratos aquoso e glicólico de própolis verde sobre micro-organismos anaeróbios de interesse odontológico, bem como sua citotoxicidade, a fim de introduzir e incentivar o uso efetivo e sistemático desse fitoterápico em produtos como dentifrícios e enxaguatórios bucais no combate a cáries e doenças periodontais. Os extratos comerciais aquoso e glicólico de própolis foram obtidos das empresas Apis Flora e Mapric, respectivamente. Para avaliação da atividade antimicrobiana foram utilizadas cepas-padrão (ATCC) de Fusobacterium nucleatum, Parvimonas micra, Porphyromonas endodontalis Porphyromonas gingivalis e Prevotella intermedia em cultura planctônica, verificando a concentração inibitória mínima e concentração microbicida mínima (CIM e CMM), segundo Clinical and Laboratory Standards Institute. Para biofilmes monotípicos, suspensões padronizadas (107 céls/mL) foram adicionadas em poços de microplacas e após 48 h em anaerobiose foram tratados com 3 concentrações do extrato de própolis (n=12) por 5 min. Foi incluído um controle positivo (solução fisiológica) e um controle negativo (clorexidina). O biofilme foi mensurado pelos testes MTT e Cristal Violeta. Para análise de citotoxicidade, queratinócitos hu... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Medicinal plants and herbal medicines have been used as adjuvants and alternatives in fighting various diseases with increasing frequency. However, in dentistry its use is still quite limited. Therefore, the objective of this study is to evaluate the antimicrobial action of the aqueous and glycolic extracts of green propolis on anaerobic microorganisms of dental interest, in order to introduce and encourage the effective and systematic use of this herbal medicine in products such as dentifrices and mouthwashes in the fight against tooth decay and periodontal diseases. Aqueous and glycolic commercial extracts of propolis were obtained from Apis Flora and Mapric companies, respectively.To evaluate the antimicrobial activity, standard strains (ATCC) of Fusobacterium nucleatum, Parvimonas micra, Porphyromonas endodontalis, Porphyromonas gingivalis, and Prevotella intermedia in planktonic culture was used, verifying the minimum inhibitory concentration and minimum microbicide concentration (MIC and CMM), according to Clinical and Laboratory Standards Institute. For monotypic biofilms, standardized suspensions (107 cells / mL) was added to microplate wells and after 48 h in anaerobiosis was treated with 3 concentrations of propolis extracts (n = 12) for 5 min. A positive control (saline solution) and a negative control (chlorhexidine) was included. The biofilm was measured by the MTT and Violet Crystal tests. For cytotoxicity analysis, human keratinocytes (HaCaT) were cultured and ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Luciane Dias de Oliveira / Banca: Silvana Soléo Ferreira dos Santos / Banca: Graziella Nuernberg Back-Brito / Banca: Luana Marotta Reis de Vasconcellos / Banca: Jônatas Rafael de Oliveira / Resumo: A resistência microbiana aos antibióticos disponíveis é preocupação constante, devido à dificuldade no tratamento de infecções causadas por cepas resistentes, em decorrência do uso indiscriminado de antimicrobianos. Assim, a busca por terapias antimicrobianas alternativas tem sido crescente e necessária, sendo a fitoterapia umas das opções de escolha. O objetivo do presente estudo foi analisar a atividade antibacteriana de extratos glicólicos de Achyrocline satureioides (macela), Cynara scolymus (alcachofra), Hamamelis virginiana (hamamelis) e Persea americana (abacateiro), pelos períodos de 5 min e 24 h de exposição sobre bactérias anaeróbias Fusobacterium nucleatum subsp. nucleatum, Parvimonas micra, Porphyromonas endodontalis e Porphyromonas gingivalis, em culturas planctônica e biofilmes. As bactérias armazenadas a -80ºC foram ativadas em caldo Brucella enriquecido (hemina 1%, menadiona 1% e sangue de carneiro desfibrinado 5%) e incubadas em câmara de anaerobiose por 48 h a 37ºC por sete dias. A partir de culturas puras, o teste de microdiluição em caldo foi conduzido em microplacas por meio de suspensões bacterianas padronizadas em solução fisiológica estéril (NaCl 0,9%) e diluições dos extratos em caldo, sendo as placas incubadas por 48 h a 37ºC em anaerobiose. Alíquotas de cada poço foram semeadas em ágar Brucella enriquecido. Após incubação, a Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (CBM) foram determinadas. As concentrações efetivas de ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Microbial resistance to antibiotics available is constant concern, due to the difficulty in treating infections caused by resistant strains as a result of the indiscriminate use of antimicrobials. Thus, the search for antimicrobial alternative therapies has been growing and necessary, being one option the herbal medicine. The objective of the present study was to analyze the antibacterial activity to Achyrocline satureioides glycolic extracts (macela), Cynara scolymus (artichoke), Hamamelis virginiana (Witch-Hazel) and Persea americana (avocado), for periods of 5 min and 24 h from exhibition on anaerobic bacteria Fusobacterium nucleatum subsp. nucleatum, Parvimonas micra, Porphyromonas gingivalis and Porphyromonas endodontalis in planktonic communities and biofilms. Bacteria stored at -80°C have been activated in Brucella broth enriched (hemin 1%, menadione 1% and defibrinated sheep blood 5%) and incubated in anaerobiose chamber for 48 h at 37° C for seven days. From pure cultures, the microdiluição test in broth was conducted in microplates through standardized bacterial suspensions in sterile saline solution (NaCl 0.9%) and dilution of the extracts in broth, being incubated plates for 48 h at 37° C in anaerobiosis. Aliquots of each well were sown in Brucella agar enriched. After incubation, the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) were determined. Effective concentrations of each extract were applied on the biofilms of each spe... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar a microbiota bucal de mães, e pares de crianças, atendidas no programa educativo-preventivo da Bebê Clínica da Faculdade de Odontologia de Araçatuba-UNESP, nas faixas etárias de 6, 12, 18 e 24 meses, relacionando-a com a dieta, higiene bucal, presença ou não de dentes, prevalência de cárie e condição gengival. Após exame clínico e levantamento da dieta alimentar das crianças, foi realizada coleta dos espécimes de saliva, biofilme nas faixas etárias determinadas, que foram transferidos para frascos contendo meio de transporte VMGA III, submetidos a diluições seriadas em VMGA I, seguido de inoculação em meios de cultura adequados e incubação em diferentes condições redox e períodos de tempo. Além disso, a identificação dos isolados foi também realizada através de amplificação do DNA por PCR, após armazenamento dos espécimes em água ultra pura, e os níveis salivares de estreptococos do grupo mutans foram avaliados por real-time PCR. Nas faixas etárias avaliadas, não se observou correlação entre prevalência de patógenos orais e tipo de hábitos de dieta e higiene oral, sendo esta relacionada ao número de dentes irrompidos, principalmente com relação à prevalência de cocos cariogênicos e suas populações. Os microrganismos mais freqüentemente detectados aos 6 meses, pertenciam ao gênero Actinomyces, Campylobacter rectus, e à espécie Fusobacterium nucleatum. De maneira geral, aos 6 meses, a colonização da cavidade bucal dos bebês, por esses microrganismos, era transitória, por vezes não sendo observados em coletas subseqüentes. Aos 12 meses, observou-se uma elevação na prevalência de Actinomyces sp., Fusobacterium nucleatum e Streptococcus sobrinus. Nesta faixa etária, a presença de Eikenella corrodens foi... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The purpose of this study was to evaluate oral microorganisms of 50 infants and their mothers, in the ages of 6, 12, 18 and 24 months, integrants of Baby-Clinic's preventive program (Dental School of Aracatuba- UNESP). This factor was related to diet, oral hygiene habits, presence of teeth, prevalence of caries and periodontal conditions. After clinical exam, saliva and oral biofilm were collected and stored for culture and PCR process. Salivary levels of Streptococcus mutans were measured by Real time PCR. In the ages of the infants examined, after statistical analysis, it could be observed that no correlation was found between presence of oral pathogens and diet and hygiene habits, otherwise, this correlation could be seen with increase of erupted teeth. Most frequent microorganisms found in oral flora of infants at six months were Actinomyces, Campylobacter rectus and Fusobacterium nucleatum. Microorganisms observed at one period, could not be found in the other, suggesting that it was not a resident flora. At 12 months, data revealed increase in prevalence of Actinomyces sp., Fusobacterium nucleatum e S. sobrinus. In this age, the presence of Eikenella corrodens was significant. At 18 months, significant increase in the population of Actinomyces sp., Eikenella corrodens, Fusobacterium nucleatum, Streptococcus mutans e S. sobrinus was found. At 24 months, oral microflora was similar to the anterior but Streptococcus mutans and S. sobrinus, had an increase of population. Positive correlation between microorganisms found in mouth of mother and children in all periods was observed. For this reason, educative and preventive measures, which aim control of oral biofilm, must be priority, and made associated with attendance of the infants, as mothers are main transmissive ways to their children. Besides, the control of oral biofilm, as eruption... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Robson Frederico Cunha / Coorientador: Elerson Gaetti Jardim Júnior / Banca: Sandra Maria Herondina Coelho Ávila de Aguiar / Banca: Renato Moreira Arcieri / Banca: Leila Maria Cesário Pereira Pinto / Banca: Edo Hirata / Doutor

O 2,3-butanodiol (2,3-BDO) é um composto com potencial de uso em diferentes segmentos industriais, podendo ser obtido por síntese química tradicional ou via processos fermentativos a partir de diferentes fontes de carbono. Entre suas aplicações potenciais, destaca-se a utilização como precursor na indústria de polímeros, matéria-prima na produção de solventes, agente anticongelante, combustível líquido ou aditivo de combustíveis. A síntese de 2,3-BDO pela fermentação do glicerol subproduto da indústria de biodiesel por bactérias anaeróbias facultativas é particularmente atrativa, considerando-se a grande disponibilidade desta matéria-prima e a possibilidade de integração de processos e produtos no conceito de biorrefinaria. Entretanto, o uso do glicerol subproduto para este fim, deve ser ainda cuidadosamente avaliado, considerando a significativa quantidade de impurezas nele contidas. Neste trabalho, avaliou-se a utilização do glicerol subproduto em meio mineral, para o crescimento celular e produção de estereoisômeros de 2,3-BDO e acetoína por Klebsiella oxytoca ATCC 8724 e Enterobacter aerogenes ATCC 13048. Os resultados foram comparados com os alcançados om o uso de glicerol puro e glicose, em ensaios em regime descontínuo alimentado com concentração inicial de substrato (S0) de 80 g/L, em meio mineral padrão (PC), frequência dos agitadores de 700 rpm e fluxo específico de ar de 0,50 volumes de ar por volume de meio por minuto (vvm). Na sequência, foram realizados ensaios fermentativos com E. aerogenes com glicerol subproduto e diferentes meios de cultivo relatados na literatura, com S0 = 40 g/L, variação da frequência dos agitadores (650 a 750 rpm) e do fluxo específico de ar (0,50 a 0,87 vvm). Para a otimização do meio de cultivo, realizou-se um planejamento experimental do tipo Box-Behnken Design-3k, com a avaliação de três variáveis independentes - (NH4)2SO4, (NH4)2HPO4 e MgSO4.7H2O -, em três níveis. A avaliação cinética do cultivo de E. aerogenes no meio definido foi realizada em regime descontínuo em comparação ao uso do meio mineral padrão (PC). As metodologias analíticas utilizadas no decorrer da pesquisa foram validadas. Como resultados, nos cultivos com E. aerogenes em regime descontínuo alimentado, empregando-se glicerol puro e subproduto como substratos, rendimentos (ρ) da ordem de 82 e 84%, respectivamente, foram atingidos, sendo superiores ao obtido com glicose (71%). Nos ensaios conduzidos com diferentes formulações de meios de cultivos, a produção de biomassa foi favorecida na primeira etapa da fermentação com o uso do meio MD4, sendo cerca de 38% superior em relação ao meio mineral padrão (PC). Nos ensaios de otimização, E. aerogenes foi capaz de adaptar-se frente às diferentes concentrações dos sais presentes no meio contendo glicerol subproduto. Visando maximizar os resultados em termos de produção específica em relação à biomassa (YP/X), fator de conversão de substrato em produtos (YP/S) e concentração final de produtos (Pf), a partir dos resultados da otimização, sugere-se a utilização de um meio de cultivo definido contendo (g/L): glicerol, 80; (NH4)2SO4, 7,71; (NH4)2HPO4, 3,15; MgSO4.7H2O, 0,6; KOH, 0,45. Considerando o conjunto de características dos métodos cromatográficos e espectrofotométricos utilizados, ambos são adequados para aplicação nesta pesquisa, fornecendo resultados confiáveis das fermentações. De forma geral, os resultados alcançados indicam a aplicabilidade do glicerol subproduto como substrato para a produção fermentativa de 2,3-BDO e acetoína pelas bactérias anaeróbias facultativas Klebsiella oxytoca ATCC 8724 e Enterobacter aerogenes ATCC 13048. Além disso, também foi demonstrado que a produção de 2,3-BDO pode ser conduzida com E. aerogenes a partir de glicerol subproduto, empregando-se meios simplificados em comparação ao padrão descrito na literatura, significando um ganho econômico para esta fermentação. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES / 2,3-butanediol (2,3-BDO) is a compound with potential to be used in different industrial segments, that can be obtained by traditional chemical synthesis or via fermentative processes from different carbon sources. Among its potential applications, it is included the use as chemical building blocks in polymer industries, raw material for the production of solvents, antifreeze agent, liquid fuel or fuel additive. The synthesis of 2,3-BDO by the fermentation of glycerol by-product of the biodiesel industry by facultative anaerobic bacteria is particularly attractive considering the high availability of this substrate and the possibility of integrating processes and products into the concept of biorefinery. However, the use of the by-product glycerol for this purpose is still to be carefully assessed considering the significant amount of impurities it contains. In this work, the use of by-product glycerol in mineral medium for the cell growth and the production of stereoisomers of 2,3-BDO and acetoin by Klebsiella oxytoca ATCC 8724 and Enterobacter aerogenes ATCC 13048 was evaluated. The results were compared with those obtained with the use of pure glycerol and glucose, in fed-batch cultivations with initial substrate concentration (S0) of 80 g.L-1, standard mineral medium (PC), impeller speed of 700 rpm, and air flow rate of 0.50 volumes of air per volume of medium per minute (vvm). In order, cultivations with E. aerogenes with by-product glycerol and different culture media reported in the literature, with S0 = 40 g.L-1, variation of the impeller speed (650 to 750 rpm) and the specific air flow rate (0.50 to 0.87 vvm), were carried out. For the optimization of the culture medium, an experimental Box-Behnken Design -3k was performed, with the evaluation of three independent variables – (NH4)2SO4, (NH4)2HPO4 and MgSO4.7H2O –, at three levels. The kinetic evaluation of the cultivation of E. aerogenes in the defined medium was performed in batch fermentations in comparison to the use of the standard mineral medium (PC). The analytical methodologies used during the research were validated. As results, in fed-batch cultivations with E. aerogenes, using pure glycerol and by-product as substrates, yields (ρ) of the order of 82 and 84%, respectively, were reached, higher than that obtained with glucose (71%). In the trials conducted with different formulations of culture media, biomass production was favored in the first fermentation stage using the MD4 medium, about 38% higher than the standard mineral medium (PC). In the optimization experiments, E. aerogenes was able to adapt to the different concentrations of the salts present in the medium containing by-product glycerol. In order to maximize the results in terms of specific production factorin relation to biomass (YP/X), product from substrate conversion factor (YP/S) and final product concentration (Pf), from the optimization results, it is suggested the use of a defined medium containing (g.L-1): glycerol, 80; (NH4)2SO4, 7.71; (NH4)2HPO4, 3.15; MgSO4.7H2O, 0.6, KOH, 0.45. Considering the set of characteristics of the chromatographic and spectrophotometric methods used, both are suitable for application in this research, providing reliable results of the fermentations. In general, the results indicate the applicability of by-product glycerol as a substrate for the fermentative production of 2,3-BDO and acetoin by the facultative anaerobic bacteria Klebsiella oxytoca ATCC 8724 and Enterobacter aerogenes ATCC 13048. In addition, it has also been demonstrated that the production of 2,3-BDO can be conducted by E. aerogenes from by-product glycerol, using simplified media in comparison to the standard one described in the literature, which would positively reflect in the costs for this fermentation.

Orientador: Luciane Dias de Oliveira / Banca: Jônatas Rafael de Oliveira / Banca: Luana Marotta Reis de Vasconcellos / Resumo: Stryphnodendron barbatiman (Vell.) Mart (barbatimão) tem sido utilizado popularmente como anti-inflamatório e antimicrobiano. Este estudo se propôs a realizar a análise fitoquímica do extrato de S. barbatiman (Vell.) Mart. (barbatimão) e verificar in vitro algumas de suas atividades biológicas, como: antimicrobiana, sobre culturas planctônicas e biofilmes de Fusobacterium nucleatum, Porphyromonas endodontalis, Porphyromonas gingivalis, e Parvimonas micra; citotoxicidade e genotoxicidade em macrófagos murinos (RAW 264.7), fibroblastos murinos (L929) e queratinócitos humanos (HACAT); e ação anti-inflamatória sobre RAW 264.7 estimuladas por lipopolissacarídeo (LPS) de Escherichia coli. A atividade antimicrobiana sobre culturas planctônicas foi avaliada pelo método de microdiluição em caldo. Após, as concentrações efetivas foram avaliadas sobre biofilmes monomicrobianos. A análise de citotoxicidade foi verificada pelo teste de redução do brometo de 3(4,5-dimetiltiazol-2-yl)2,5-difeniltetrazólio (MTT) e a de genotoxicidade pelo teste de micronúcleos. A atividade anti-inflamatória foi analisada quantificando os níveis de citocinas pró-inflamatórias (TNF-α, IL-1β, IL-6 e IL-17) e anti-inflamatória (IL-10), por enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Os dados foram analisados por ANOVA e Teste de Tukey, ou Kruskal-Wallis e teste de Dunns, com nível de significância de 5% (P≤0,05). O extrato foi eficaz sobre os biofilmes, redução entre 54 e 100%. O extrato não foi citotóxico para R... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Anti-inflammatory and antimicrobial are popular uses of Stryphnodendron adstringens (Mart.) Coville (barbatimão). This study proposed to perform the phytochemical analysis of S. barbatiman (Vell.) Mart. (barbatimão) extract and to verify in vitro some of its biological activities as antimicrobial on planktonic cultures and biofilms of Fusobacterium nucleatum, Porphyromonas endodontalis, Porphyromonas gingivalis, and Parvimonas micra; cytotoxicity and genotoxicity on human keratinocytes (HACAT), murine macrophages (RAW 264.7) and fibroblasts (L929), and anti-inflammatory action on RAW 264.7. The antimicrobial activity on planktonic cultures was evaluated by broth microdilution. Afterwards, the effective concentrations were evaluated on mono microbial biofilms. The cytotoxicity analysis was verified by the MTT test and the genotoxicity by the micronucleus test. Anti-inflammatory activity was evaluated in RAW 264.7 stimulated by lipopolysaccharide (LPS) of Escherichia coli and treated with the extract, quantifying the levels of pro-inflammatory cytokines (TNF-α, IL-1β, IL-6 and IL-17) and anti-inflammatory (IL-10), by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The data that presented normal distribution were analyzed by ANOVA and Tukey's test, and those that were not, were analyzed by Kruskal-Wallis and Dunns test, with a significance level of 5% (p≤0.05). Barbatimão extract was effective on biofilms, reduction between 54 and 100%. The extract was not cytotoxic to RAW 264.7 and ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

O nitrogênio é o quinto elemento mais abundante em nosso sistema solar, é essencial para a síntese de ácidos nucleicos e proteínas, os dois polímeros mais importantes da vida. Apesar da importância do nitrogênio e sua abundância na atmosfera, o N2 é praticamente inerte; assim, as formas de nitrogênio inorgânico fixados mais comuns são os íons nitrato e amônio que muitas vezes limitam a produtividade primária nos ecossistemas marinhos e terrestres. Uma biosfera ativa requer a incorporação do nitrogênio em moléculas biológicas por meio da fixação de nitrogênio, um processo no qual os domínios em procarióticos Bacteria e Archaea reduzem gás nitrogênio em amônia. Porém, a maioria dos organismos não pode fixar nitrogênio, mas sim obtê-lo na forma de nitrogênio orgânico a partir do ambiente, ou a partir da redução do nitrato. O amônio é retornado para o ambiente quando os organismos morrem e isto depende da presença do oxigênio nestes locais. Na presença do oxigênio, o amônio é oxidado em nitrato, numa via conhecida como nitrificação. Na ausência de oxigênio, o nitrato é utilizado por muitos microrganismos como um receptor de elétrons, como na redução dissimilatória de nitrato a amônia (DNRA), acoplada à oxidação anaeróbica de carbono orgânico; o nitrato pode ser convertido em gás dinitrogênio pela desnitrificação, ou ainda uma via alternativa pode transformar o nitrogênio fixado em N2, realizada por um grupo de bactérias conhecido como planctomycetes, onde a oxidação do amônio é acoplada a redução de nitrato, no processo chamado anammox. Neste trabalho de tese foi realizada a avaliação do ciclo do nitrogênio, buscando entendimento de três vias de transformação deste elemento. Neste sentido, estas vias foram avaliadas quanto as suas taxas de ocorrência, com uso incubações do sedimento de manguezais e nitrogênio marcado, como também por meio da identificação de genes funcionais envolvidos nestes três processos, por meio de pirosequenciamento. O grupo Planctomycetes ainda pode ser estudado utilizando a hibridização com sonda fluorescente in situ FISH. Os resultados indicam a presença marcante de genes identificados como parte da via desnitrificação, assim como as taxas de incubação observadas para esta via foram muito expressivas quando comparadas com as taxas obtidas para o processo anammox e DNRA. Os resultados obtidos com as análises metagenômicas e com a técnica FISH sustentam os resultados obtidos com as incubações. Pode-se observar que a filogenia sugere a tendência do agrupamento com organismos planctomycetes não descritos como responsáveis pelo processo anammox. Por meio da técnica FISH pode-se confirmar a detecção destas bactérias e visualizar sua menor presença nos manguezais amostrados, quando comparadas às bactérias totais encontradas nestas amostras. / Nitrogen is the fifth most abundant element in our solar system, essential for the synthesis of nucleic acids and proteins, one of the most important polymers of life. Despite the importance of nitrogen and its overwhelming abundance in the atmosphere, N2 is practically inert, so the most commom forms of inorganic nitrogen fixed are nitrate and ammonium ions, which often limit primary productivity in marine and terrestrial ecosystems. An active biosphere requires the incorporation of nitrogen in biological molecules through nitrogen fixation, a process in which domains Archaea and Bacteria reduce nitrogen gas into ammonia. The most organisms can\'t fix nitrogen, but they can get it in inorganic nitrogen form from the environment or from the reduction of nitrate. The ammonia is returned to environment when organisms die and it depends on the presence of oxygen at these sites. In the presence of oxygen, ammonia is oxidized to nitrate, in a way known as nitrification, and in the absence of oxygen, the nitrate being used by many microbes as an electron acceptor, such as dissimilatory nitrate reduction to ammonia (DNRA), coupled to anaerobic oxidation of organic carbon. The nitrate can be converted to dinitrogen gas by denitrification, or an alternative route can turn fixed nitrogen in N2, performed by a bacteria group known as Planctomycetes, where oxidation is coupled to the ammonium nitrate reduction, in a process called anammox. In this work, with mangrove sediments from Bertioga city, State of São Paulo, the evaluation of these three pathways of nitrogen transformation was performed as their rates of occurrence, with incubations with labeled nitrogen, as well as through the identification of functional genes involved in these three cases, by pyrosequencing. The group Planctomycetes can also be studied using the hybridization probe FISH fluorescence in situ. The results show the strong presence of genes identified as part of the denitrification pathway, as well as the rates observed for incubation of this pathway were very significant when compared with the rates obtained for the process anammox and DNRA. The results obtained from the metagenomic analyze and the FISH technique support the results obtained with incubations. It can be observed that the trend suggests the phylogeny of the organisms group with Planctomycetes not described as responsible for anammox process. Through the FISH technique, it was possible to confirm the detection of these bacteria and view its reduced presence in mangrove sampled compared to total bacteria found in these samples.

A periodontite é uma resposta inflamatória desencadeada por um complexo biofilme constituído por diversos microrganisnos, particularmente por bactérias anaeróbias, tais como Porphyromonas spp. e Fusobacterium spp. Essas bactérias produzem vários fatores de virulência capazes de atuar no início e progressão da doença. Cem amostras subgengivais foram analisadas, sendo 50 de cães com periodontite e 50 de cães sadios, obtendo-se 144 isolados bacterianos identificados como pertencentes aos gêneros Porphyromonas e Fusobacterium. A produção de hemolisinas e hemaglutininas, susceptibilidade aos soros humano, canino e equino, e susceptibilidade a dez antibióticos foram avaliadas, assim como a presença dos genes prtC (colagenase), fimA (fímbrias), tetQ e tetM (resistência à tetraciclina). Igualmente, a capacidade quimiotática de neutrófilos e a produção de IL-1<font face=\"Symbol\">&#946, IL-8, TNF-<font face=\"Symbol\">&#945, IL-11 e IL-17, foram avaliadas. <font face=\"Symbol\">&#946-hemólise foi produzida por P. gulae, P. crevioricanis, P. cangingivalis, P. gingivicanis e P. circumdentaria. Dos 144 isolados, 21 P. gulae e 2 F. nucleatum aglutinaram eritrócitos humanos. A maioria dos isolados foi resistente à ação dos soros humano, equino ou canino. Todos os 144 isolados foram sensíveis à amoxicilina, clindamicina, tetraciclina, amoxicilina/clavulanato, cefoxitina e penicilina G. Três P. gulae, 2 P.macacae e 2 P. canifelinum abrigaram o gene tetQ e apenas um F. nucleatum e um P. catoniae foram positivos para a presença do gene tetM. As espécies P. gulae, P. cangingivalis e P. circumdentaria abrigaram o gene prtC. A maioria dos isolados abrigou o gene fimA tipo I e nenhum deles abrigou o gene fimA tipo V. Somente nas P. gulae foi observada a presença de cápsula pela microscopia eletrônica de transmissão. Todos os isolados estimularam quimiotaxia dos neutrófilos. Interleucinas IL-1<font face=\"Symbol\">&#946, IL-8, TNF-<font face=\"Symbol\">&#945 e IL-11 foram detectadas após estímulo com as espécies de Porphyromonas. As espécies de Fusobacterium não estimularam a produção de IL-11 e P. gulae induziu elevada concentração dessa citocina. Nenhum dos isolados estimulou a liberação de IL-17. / Periodontitis is an inflammatory response caused by a complex microbial biofilm, including anaerobic bacteria such as Porphyromonas spp. and Fusobacterium spp. Those species present several virulence factors which act on early step and during the disease evolution. One hundred of subgingival samples were analyzed, obtained from 50 dogs with and 50 without periodontitis. One hundred and forty four bacterial species were isolated belonging to both Porphyromonas and Fusobacterium genus. Hemolysin and hemagglutinin production, susceptibility to human, equine and canine sera, and antimicrobial susceptibility to 10 antibiotics were evaluated. In addition, the presence of gene prtC (collagenase), fimA (fimbriae), tetQ and tetM (tetracycline resistance), as well as neutrophils chemotaxis and IL-1<font face=\"Symbol\">&#946, IL-8, TNF-<font face=\"Symbol\">&#945, IL-11 and IL-17 production were also determined. <font face=\"Symbol\">&#946-hemolysis was produced by P. gulae, P. crevioricanis, P. cangingivalis, P. gingivicanis and P. circumdentaria. Of the 144 isolates, 21 P. gulae and 2 F. nucleatum were able to agglutinate human erythrocytes. Most of the isolates were resistant to the action of human, equine or canine serum. All isolates were susceptible to amoxicillin, clindamycin, tetracycline, amoxicillin/clavulanate, cefoxitin and penicillin G. Three P. gulae, 2 P.macacae and 2 P. canifelinum harbored tetQ, and only one F. nucleatum and one P. catoniae were tetM positive. P. gulae, P. cangingivalis and P. circumdentaria harbored prtC. Most of the isolates harbored fimA I gene and none of them harbored fimA V. Only P. gulae showed capsule through transmission electron microscopy. All isolates induced neutrophils chemotaxis and IL-1<font face=\"Symbol\">&#946, IL-8, TNF-<font face=\"Symbol\">&#945 and IL-11 were produced when neutrophils were stimulated by Porphyromonas spp. Fusobacterium spp. did not stimulate IL-11 production and P. gulae induced high concentration of cytokine. None of the isolates stimulated IL-17.

O nitrogênio é o quinto elemento mais abundante em nosso sistema solar, é essencial para a síntese de ácidos nucleicos e proteínas, os dois polímeros mais importantes da vida. Apesar da importância do nitrogênio e sua abundância na atmosfera, o N2 é praticamente inerte; assim, as formas de nitrogênio inorgânico fixados mais comuns são os íons nitrato e amônio que muitas vezes limitam a produtividade primária nos ecossistemas marinhos e terrestres. Uma biosfera ativa requer a incorporação do nitrogênio em moléculas biológicas por meio da fixação de nitrogênio, um processo no qual os domínios em procarióticos Bacteria e Archaea reduzem gás nitrogênio em amônia. Porém, a maioria dos organismos não pode fixar nitrogênio, mas sim obtê-lo na forma de nitrogênio orgânico a partir do ambiente, ou a partir da redução do nitrato. O amônio é retornado para o ambiente quando os organismos morrem e isto depende da presença do oxigênio nestes locais. Na presença do oxigênio, o amônio é oxidado em nitrato, numa via conhecida como nitrificação. Na ausência de oxigênio, o nitrato é utilizado por muitos microrganismos como um receptor de elétrons, como na redução dissimilatória de nitrato a amônia (DNRA), acoplada à oxidação anaeróbica de carbono orgânico; o nitrato pode ser convertido em gás dinitrogênio pela desnitrificação, ou ainda uma via alternativa pode transformar o nitrogênio fixado em N2, realizada por um grupo de bactérias conhecido como planctomycetes, onde a oxidação do amônio é acoplada a redução de nitrato, no processo chamado anammox. Neste trabalho de tese foi realizada a avaliação do ciclo do nitrogênio, buscando entendimento de três vias de transformação deste elemento. Neste sentido, estas vias foram avaliadas quanto as suas taxas de ocorrência, com uso incubações do sedimento de manguezais e nitrogênio marcado, como também por meio da identificação de genes funcionais envolvidos nestes três processos, por meio de pirosequenciamento. O grupo Planctomycetes ainda pode ser estudado utilizando a hibridização com sonda fluorescente in situ FISH. Os resultados indicam a presença marcante de genes identificados como parte da via desnitrificação, assim como as taxas de incubação observadas para esta via foram muito expressivas quando comparadas com as taxas obtidas para o processo anammox e DNRA. Os resultados obtidos com as análises metagenômicas e com a técnica FISH sustentam os resultados obtidos com as incubações. Pode-se observar que a filogenia sugere a tendência do agrupamento com organismos planctomycetes não descritos como responsáveis pelo processo anammox. Por meio da técnica FISH pode-se confirmar a detecção destas bactérias e visualizar sua menor presença nos manguezais amostrados, quando comparadas às bactérias totais encontradas nestas amostras. / Nitrogen is the fifth most abundant element in our solar system, essential for the synthesis of nucleic acids and proteins, one of the most important polymers of life. Despite the importance of nitrogen and its overwhelming abundance in the atmosphere, N2 is practically inert, so the most commom forms of inorganic nitrogen fixed are nitrate and ammonium ions, which often limit primary productivity in marine and terrestrial ecosystems. An active biosphere requires the incorporation of nitrogen in biological molecules through nitrogen fixation, a process in which domains Archaea and Bacteria reduce nitrogen gas into ammonia. The most organisms can\'t fix nitrogen, but they can get it in inorganic nitrogen form from the environment or from the reduction of nitrate. The ammonia is returned to environment when organisms die and it depends on the presence of oxygen at these sites. In the presence of oxygen, ammonia is oxidized to nitrate, in a way known as nitrification, and in the absence of oxygen, the nitrate being used by many microbes as an electron acceptor, such as dissimilatory nitrate reduction to ammonia (DNRA), coupled to anaerobic oxidation of organic carbon. The nitrate can be converted to dinitrogen gas by denitrification, or an alternative route can turn fixed nitrogen in N2, performed by a bacteria group known as Planctomycetes, where oxidation is coupled to the ammonium nitrate reduction, in a process called anammox. In this work, with mangrove sediments from Bertioga city, State of São Paulo, the evaluation of these three pathways of nitrogen transformation was performed as their rates of occurrence, with incubations with labeled nitrogen, as well as through the identification of functional genes involved in these three cases, by pyrosequencing. The group Planctomycetes can also be studied using the hybridization probe FISH fluorescence in situ. The results show the strong presence of genes identified as part of the denitrification pathway, as well as the rates observed for incubation of this pathway were very significant when compared with the rates obtained for the process anammox and DNRA. The results obtained from the metagenomic analyze and the FISH technique support the results obtained with incubations. It can be observed that the trend suggests the phylogeny of the organisms group with Planctomycetes not described as responsible for anammox process. Through the FISH technique, it was possible to confirm the detection of these bacteria and view its reduced presence in mangrove sampled compared to total bacteria found in these samples.