Orientador: Carlos Eduardo Vergani / Banca: Carolina Patricia Aires / Banca: Cecília Pedroso Turssi / Banca: Marcelo Ornaghi Orlandi / Banca: Juliane Tanomaru / Resumo: O processo de esterilização deve preservar as propriedades do esmalte utilizado nas pesquisas in vitro e in situ. O objetivo deste estudo foi avaliar a influência dos métodos de esterilização Irradiação por micro-ondas - IM, Irradiação gamma - IG, Óxido de etileno - OE e Autoclave - AU sobre as propriedades do esmalte. O estudo foi realizado em duas fases. Na fase 1, 50 espécimes de esmalte bovino foram divididos em cinco grupos (n=10): IM, IG, OE, AU e controle (não esterilizado). Foram realizadas avaliações quanto à morfologia (Microscopia Eletrônica de Varredura - MEV superficial e em secção transversal), composição química (Energia Dispersiva de raios-X - EDS e Espectroscopia Fotoeletrônica por raios-X - XPS) e estrutura (Raman e Ressonância Magnética Nuclear - RMN). Na fase 2, 360 espécimes de esmalte bovino foram divididos em quatro grupos (n=90): IM, IG, OE e AU. Biofilmes monoespécie (Actinomyces naeslundii e Streptococcus sanguis) e biofilmes mistos foram formados e avaliados, para cada grupo experimental, quanto ao número de unidades formadoras de colônias por mililitro (UFC/mL; n=10), atividade metabólica (redução do 2 metoxi 4 nitro 5 sulfofenil 5 fenilalanina carbonil 2H tetrazolium hidróxido - XTT; n=10) e biomassa total (cristal violeta; n=10). A análise estatística dos dados foi realizada para as avaliações Raman, XPS, UFC/mL, XTT e cristal violeta com ɑ=0,05. Os resultados indicaram que o método IG não promoveu alterações sobre a morfologia, composição química e estrutura do esmalte. Os grupos IM e EO promoveram pequenas alterações na morfologia superficial, composição química e estrutura. O grupo AU resultou em severas alterações na morfologia superficial e em secção transversal, com pequena 9 influência sobre a composição química e estrutura do esmalte. Os biofilmes de S. sanguis não apresentaram diferenças...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract:The sterilization process should preserve the enamel properties of specimens used for in vitro and in situ studies. The aim of this study was to evaluate the influence of sterilization methods Microwaving - MI, Gamma irradiation - GI, Ethylene oxide - EO and Steam autoclave SA on the enamel properties. This study was conducted into 2 phases. For phase 1, 50 specimens of bovine enamel were assigned into 5 groups (n=10): MI, GI, EO, SA and control (no sterilization), evaluated regarding morphology (Scanning Electron Microscopy - SEM superficial and cross-section), chemical composition (X-ray energy dispersive spectroscopy - EDS and X-ray photoelectron spectroscopy - XPS) and structure (Raman and Nuclear Magnetic Resonance - RMN). For phase 2, 360 bovine enamel specimens were assigned into 4 groups (n=90): MI, GI, EO and SA. For each group, biofilms were grown as monospécies (Actinomyces naeslundii and Streptococcus sanguis) and multispecies, evaluated regarding counting forming units (CFU/mL), metabolic activity (reduction of 2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)carbonyl]-2H-tetrazolium hydroxide - XTT) and biomass (violet crystal assay). Statistical evaluation was performed for data from XPS, Raman, CFU/mL, XTT assay and violet crystal assay. The results indicated that GI group produced no alterations on the morphology, chemical composition and structure of the enamel. MI and EO groups promoted slightly alterations on morphology, chemical composition and structure. The SA group caused severe morphological changes on surface and in depth and small alterations on chemical composition and structure. There were no differences among groups for S. sanguis biofilms. A. naeslundii biofilms showed higher values of CFU/mL and biomass for SA group and higher metabolic activity in GI group. It can be concluded that enamel properties could be influenced ...(Complete abstract electronic access below) / Doutor

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Co-orientador: Mariella Vieira Pereira Leão / Banca: Juliana Campos Junqueira / Banca: Aguinaldo Silva Garcez Segundo / Resumo: A alta incidência de candidoses causadas por Candida albicans e a capacidade de adaptação desta espécie, assim como resistência aos antifúngicos impulsionam o desenvolvimento de pesquisas com terapias alternativas para controle dessa infecção. O objetivo desse trabalho foi avaliar a influência de Lactobacillus rhamnosus e produtos do seu metabolismo contra C. albicans, avaliando-se a patogenicidade e a expressão de genes que regulam a formação do biofilme de C. albicans, in vitro e in vivo em modelo invertebrado de Galleria mellonella. Foram utilizadas cepas de C. albicans ATCC 18804 e L. rhamnosus ATCC 9595 (provenientes do Laboratório de Microbiologia do Instituto de Ciências e Tecnologia de São José dos Campos / UNESP). Para o estudo foram preparadas duas suspensões de L. rhamnosus, uma contendo a porção celular e a outra com o sobrenadante da cultura, livre de células. O estudo da patogenicidade in vitro de C. albicans foi avaliado pelos testes de formação de biofilme e quantificação de UFC/mL de C. albicans, análise da atividade metabólica pelo método do XTT e filamentação de C. albicans. A análise da curva de sobrevivência de Galleria mellonella foi utilizada para a avaliação in vivo da influência de L. rhamnosus na infecção causada por C. albicans. Os genes, BCR1, EFG1, CPH1, HWP1, ALS1 e ALS3 de C. albicans foram quantificados pela RT-PCR após a interação em modelo de biofilme. No estudo in vitro L. rhamnosus foi capaz de inibir a formação do biofilme, filamentação e reduzir a atividade metabólica de C. albicans. Esses efeitos também foram observados quando utilizado a suspensão do sobrenadante da cultura de L. rhamnosus, apontando possível produção de substâncias com efeito inibitório. Os resultados obtidos in vivo apontam que L. rhamnosus e seu sobrenadante protegeram G. mellonella da infecção por C. albicans, porém a suspensão do sobrenadante apresentou melhores resultados, visto.... / Abstract: The high incidence of candidiasis caused by Candida albicans and the adaptability of this species, as well as resistance to antifungal drive the development of research on alternative therapies to control this infection. The aim of this study was to evaluate the influence of Lactobacillus rhamnosus and products of their metabolism against C. albicans, evaluating the pathogenicity and the expression of genes that regulate the formation of C. albicans biofilms in vitro and in vivo in invertebrate model Galleria mellonella. Strains of C. albicans ATCC 18804 and L. rhamnosus ATCC 9595 were used (from the Microbiology Laboratory of the Institute of Science and Technology of São José dos Campos / UNESP). For the study were prepared from L. rhamnosus two suspensions, one containing the serving cell and the other with the culture supernatant free cells. The study of in vitro pathogenicity of C. albicans was assessed by biofilm formation testing and quantitation of CFU / ml of C. albicans, analysis of metabolic activity by XTT method and C. albicans filamentation. The analysis of the Galleria mellonella survival curve was used to evaluate in vivo the influence of L. rhamnosus in infection caused by C. albicans. Genes, BCR1, EFG1, CPH1, HWP1, ALS1 and ALS3 of C. albicans were quantified by RT-PCR after interacting in biofilm model. In vitro evaluation L. rhamnosus was able to inhibit biofilm formation, filamentation and reduce the metabolic activity of C. albicans. These effects were also observed when using the suspension culture supernatant of L. rhamnosus, indicating the possible of production substances with inhibiting effect. The results obtained in vivo indicate that L. rhamnosus and its supernatant protected G. mellonella of C. albicans infection, but the suspension of the supernatant showed better results, as it increased the survival caterpillar G. mellonella. The results of gene expression have shown that .... / Mestre

Orientador: Juliana Campos Junqueira / Co-orientador: Antônio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Simone Furgeri Godinho Vilela / Resumo: A maioria das bactérias probióticas utilizadas em produtos comerciais são do gênero Lactobacillus. Entretanto, os efeitos das cepas probióticas de Lactobacillus na saúde bucal precisam ser mais investigados. Assim, o objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos de cepas probióticas de Lactobacillus, sobre Streptococcus mutans. Foram testadas cepas de Lactobacillus acidophilus ATCC 4356, Lactobacillus rhamnosus ATCC 1465, Lactobacillus rhamnosus ATCC 7469 sobre o crescimento planctônico e biofilmes de Streptococcus mutans (UA159). Para estudo da atividade antibacteriana de Lactobacillus sobre o crescimento planctônico de S. mutans, suspensões padronizadas desses micro-organismos foram cultivadas em conjunto em caldo BHI por 24 h a 37 oC em 5% de CO2. Para estudo dos efeitos de Lactobacillus sobre biofilmes, suspensões padronizadas de cada cepa de Lactobacillus foram adicionadas aos biofilmes de S. mutans formados em fundo de placas de 96 poços. Os biofilmes foram incubados em Caldo BHI com 15% de sacarose a 37 oC por 48 h, e a seguir foram desagregados por homogeneização ultrassônica. Após a execução dos testes em crescimento planctônico e em biofilmes, foram realizadas diluições seriadas e semeaduras em meios de cultura seletivo para S. mutans (ágar Mitis Salivarius Bacitracina Sacarose) e para Lactobacillus (ágar Rogosa). A seguir, as unidades formadoras de colônias (UFC/mL) foram contadas e submetidas ao teste t de Student, considerando-se nível de significância de 5%. Os resultados demonstraram que as 3 cepas probioticas de Lactobacillus reduziram o crescimento planctônico de S. mutans, entretanto não foram observadas diferenças estatisticamente significantes entre os grupos Controle (S. mutans) e interação (S. mutans e cepa de Lactobacillus). Em relação aos biofilmes, apenas a cepa de Lactobacillus rhamnosus 1465 apresentou redução significativa no biofilme de s. mutans.... / Abstract: Most probiotic bacteria used in commercial products belong to the genus Lactobacillus. However, the effects of Lactobacillus probiotic strains in the oral health need to be further investigated. The objective of this study is to evaluate the effects of probiotic Lactobacillus strains, on Streptococcus mutans. Lactobacillus strains acidophilus ATCC 4356, Lactobacillus rhamnosus ATCC 1465, Lactobacillus rhamnosus ATCC 7469 were tested on planktonic and biofilm growth of Streptococcus mutans (UA159). In order to study the antimicrobial activity of Lactobacillus on planktonic growth of S. mutans, standardized suspensions of these microorganisms were grown together in BHI for 24 hours at 37 °C in 5% CO2. In order to study the antimicrobial activity on biofilm growth, standardized suspensions of each strain of Lactobacillus were added to the S. mutans biofilm formed on the bottom of 96 well plates. Biofilms were incubated in BHI broth with 15% sucrose at 37 °C for 48 h and then were separated by ultrasonic homogenization. After the tests with planktonic and biofilm growth, serial dilutions and sowing in selective culture media were performed for S. mutans (Mitis Salivarius Bacitracin Sucrose agar) and Lactobacillus (Rogosa agar). Subsequently, colony forming units (CFU / mL) were counted and submitted to the Student t test, considering a level of 5% significance. The results show that the 3 Lactobacillus probiotic strains reduced the planktonic growth of S. mutans, however, no significant statistical differences were observed between the control (S. mutans) and interaction groups (S. mutans and Lactobacillus strain). Regarding biofilm growth, only the strain of Lactobacillus rhamnosus 1465 showed a significant reduction of S. mutans biofilm (p < 0.0001). It was concluded that the probiotic strains tested do not stimulate the growth nor biofilm formation of S. mutans. Moreover, the Lactobacillus rhamnosus 1465 strain has shown the potential .... / Mestre

Orientador: Marcia Carneiro Varela / Banca: Claudio Antônio Talge Carvalho / Banca: Caio Casar Randi Ferraz / Resumo: O objetivo desse estudo foi avaliar a ação de medicações intracanal sobre biofilme microbiano localizado em áreas de reabsorção externa de dentes humanos extraídos. Para isto, 90 raízes de dentes humanos extraídos apresentando reabsorção apical externa foram submetidas à instrumentação padronizada. Em seguida foram divididas aleatoriamente em 6 grupos (n=15). As raízes foram expostas a cepa de E. faecalis (ATCC 29212) por 10 dias para induzir a formação de biofilme microbiano nas áreas de reabsorção externa apical. Após a formação do biofilme, foram inseridas medicações intracanal de acordo com os grupos. Grupo (HC): hidróxido de cálcio com solução fisiológica; Grupo (HC-CHX): hidróxido de cálcio com Clorexidina gel 2%; Grupo (HC-GEN) hidróxido de cálcio com extrato glicólico de gengibre 20%; Grupo (CHX): clorexidina gel 2%; Grupo (GEN): extrato glicólico de gengibre; Grupo controle (CC): solução salina fisiológica. Cada grupo permaneceu com medicação no interior dos canais radiculares por um período de 15 (quinze) dias. Ao final desse período as raízes foram avaliadas através do cálculo de unidades formadoras de colônias por superfície do espécime (UFC/ml) e através de análise em Microscópio Eletrônico de Varredura (MEV). Os resultados foram analisados pelos testes estatísticos de ANOVA e Tukey. Verificouse que nenhuma medicação intracanal eliminou completamente o biofilme, mas houve redução dos microrganismos pela contagem de UFC/mL no grupo CHX, seguido pelo grupo HC. Os demais grupos apresentaram resultados semelhantes ao grupo controle. As imagens por MEV confirmaram a permanência do biofilme nas áreas de reabsorção apical. Conclui-se que as medicações intracanal não foram capazes de eliminar completamente o biofilme apical de E. faecalis in vitro(AU) / Abstract: The aim of this study is to evaluate the effects of intracanal medication on microbial biofilm located in apical external root resorptions of extracted human teeth. 90 roots of extracted human teeth with apical external root surface were submitted to standardized instrumentation. The roots will be randomly divided into 6 groups of 15 roots each (n=15).The roots were exposed to E.faecalis strains (ATCC 29212) for 10 days to induce microbial biofilm formation in resorptions of apical external root surface. After biofilm formation, intracanal medications were inserted in each group. Group (HC): calcium hydroxide with sterile saline solution; Group (HC-CHX): calcium hydroxide with Chlorhexidine gel 2%; Group (HCGEN): calcium hydroxide with glycolic extract of ginger 20%; Group (CHX): chlorhexidine gel 2%; Group (GEN): extract of ginger 20%; Control group (CC): sterile saline solution. Each group remained with medication in the root canal for fifteen (15) days. After this period the roots were evaluated by calculating the colony-forming units per surface of the specimen (CFU / ml) and by analysis of Scanning Electron Microscope. The results will be analyzed using statistical tests of ANOVA and Tukey. It was found that no dressing completely eliminated biofilm, but it was a decrease in microorganisms number according to CFU / mL in the CHX group, followed by HC group. The other groups showed similar results to the control group. The SEM images confirmed the permanence of biofilm in areas of apical resorption. It is concluded that the dressing is not able to completely eliminate the biofilm apical E. faecalis in vitro(AU) / Mestre

Orientador: Sérgio Eduardo de Paiva Gonçalves / Co-orientador: Alessandra Nara de Souza Rastelli / Banca: Maria Filomena Rocha Lima Huhtala / Banca: Ricardo Scarparo Navarro / Banca: Luciane Hiramatsu Azevedo / Banca: Eduardo Bresciani / Resumo: O trabalho in vitro avaliou a eficácia da inativação fotodinâmica (PDI) da eritrosina (E) e hematoporfirina IX (H), com 10 µM, utilizando LED azul, dose de 75 J/cm2 em células planctônicas e biofilme de S. mutans (UA 159). Suspensões padrões contendo 107 células/mL foram preparadas e submetidas a diferentes condições experimentais: a) hematoporfirina IX e LED (H+L+); b) eritrosina e LED (E+L+); c) apenas LED (F-L+); d) tratamento somente com hematoporfirina IX (H+L-); e) somente com eritrosina (E+L-); e f) grupo controle, sem tratamento com fotossensibilizador (F) e sem a utilização de LED (F-L-). As cepas foram semeadas em ágar MSBS para contagem de unidades formadoras de colônias (UFC/mL). Na segunda parte do trabalho foi realizado a PDI em biofilme de S. mutans sobre bráquetes metálicos e cerâmicos, com H a 10 µM e LED azul. Os resultados foram submetidos à análise de variância e teste de Tukey (p<0,05) e demonstraram que a E sob efeito do LED (E+L+) não foi eficaz na PDI de células planctônicas, nos parâmetros usados (p=0,3644). No entanto, a H promoveu redução de 6,78 log10 (p<0,0001), no grupo de tratamento (H+L+). A PDI com a associação da H e LED foi efetiva na redução de 100% de culturas planctônicas de S. mutans, porém o mesmo não foi observado na associação com a E, na dosimetria utilizada no experimento. A PDI no biofilme de S. mutans sobre bráquetes metálicos, com a H e LED não foi eficaz nos parâmetros utilizados (p=0,1023), no entanto, ocorreu diminuição significativa de 53% sobre bráquetes cerâmicos (p=0,004). A H IX modificada é promissora como agente fotossensibilizador a ser empregado na técnica de PDI em associação ao LED azul, sendo necessários outros ensaios, em novas concentrações e/ou dosimetrias para se conseguir a inativação bacteriana / Abstract: The in vitro study evaluated the efficacy of photodynamic inactivation (PDI) with erythrosine (E) and hematoporphyrin (H) 10 µM, using a blue light-emitting diode (LED), a fluence of 75 J/cm2, on planktonic cultures and biofilm of S. mutans (UA 159). Suspensions containing 107 cells/mL were prepared and were tested under different experimental conditions: a) hematoporphyrin IX and LED (H+L+); b) erythrosine and LED irradiation (E+L+); c) only LED (P-L+); d) only hematoporphyrin IX (H+L-); e) only erythrosine (E+L-); and f) control group, no LED irradiation or photosensitizer (P) treatment (P-L-). After treatment, the strains were seeded onto MSBS agar in order to determine the number of colony-forming units (CFU/mL). The second part of this work consisted of the PDI of S. mutans biofilm on metal and ceramic brackets with the H 10 μM and blue LED. The results were submitted to analysis of variance and the Tukey test (p<0.05) and showed that E under the effect of LED proved to be ineffective in the PDI of planktonic cultures with the parameters used (p=0.3644). H, however, caused a reduction of 6.78 log10 (p<0.0001) in the treatment group (H+L+). PDI with H and LED exerted antimicrobial effect of 100% of the S. mutans strain studied, whereas the same was not observed in the association with E in the dosimetry used in this work. PDI on S. mutans biofilm on metal brackets, with H and LED was not effective with the parameters used (p=0.1023), however on ceramic brackets caused a significant reduction of 53% (p=0,004). Modified H IX is a promising photosensitizer to be used in the PDI technique in combination with blue LED. Therefore, new tests with new concentrations and/or dosimetry are needed to achieve bacterial inactivation / Doutor

Orientador: Luiz Francisco Zafalon / Banca: Alice Maria Melville Paiva Della Libera / Banca: Luiz Augusto do Amaral / Banca: Andréia Cristina Nakashima Vaz / Banca: Karina Paes Bürguer / Resumo: A mastite em ovelhas de dupla aptidão é reconhecida por afetar a qualidade do leite. Staphylococcus coagulase-negativos (SCN) são os principais micro-organismos responsáveis pela doença, e o tratamento ao final da lactação, pode contribuir para a cura e prevenção de casos subclínicos na lactação consecutiva. Entretanto, fatores de virulência e mecanismos de resistência apresentados por SCN podem reduzir as taxas de cura. Os objetivos deste trabalho foram identificar no leite de ovelhas tratadas e não tratadas à secagem com antimicrobianos, as espécies de SCN antes e após o tratamento e identificar nesses micro-organismos a presença dos genes mecA, icaA, icaC, icaD, bap, bhp, sea, seb, sec, sed e tsst-1, determinar o perfil clonal das principais espécies identificadas e relacionar os casos de cura após o tratamento com a presença/ausência dos respectivos genes. Sessenta ovelhas foram divididas em três grupos experimentais: G1, controle, metades mamárias que não receberam antimicrobiano; G2, metades mamárias em que foram administrados 10 mL de cloxacilina-benzatina 100 mg via intramamária / estrutura convencional; G3, metades mamárias em que foram administrados 86 mL de cloxacilina-benzatina 50 mg via intramamária / estrutura nanoencapsulada. As amostras de leite foram coletadas à secagem e aos 15 e 30 dias pós-parto da lactação seguinte. As análises para identificação das espécies de SCN foram realizadas por meio de testes bioquímicos e Internal Transcribe Spacer (ITS-PCR), e a pesquisa dos genes responsáveis pelos fatores de virulência e pela resistência à oxacilina foram realizados por meio da técnica de reação em cadeia de polimerase (PCR). Dentre as espécies identificadas S. warneri prevaleceram nos três grupos experimentais. Nenhuma amostra foi positiva para o gene mecA. O único gene relacionado com a produção de enterotoxinas encontrado foi... / Abstract: Mastitis in dual-purpose sheep is recognized to affect their milk quality. Coagulase-negative Staphylococcus (CNS) is the main microorganism responsible for this disease and treatment at the end of lactation may contribute towards curing it and preventing subclinical cases during the consecutive lactation. However, virulence factors and resistance mechanisms presented by CNS may reduce the cure rates. The aims of this study were to identify CNS species in sheep's milk with and without treatment with antimicrobials at the time of drying off and, in these microorganisms, to identify presence of the genes mecA, icaA, icaC, icaD, bap, bhp, sea, seb, sec, sed and tsst-1, determine clonal profile of the main species identified and correlate the cases of cure after treatment with the presence or absence of the respective genes. Sixty sheep were divided into three experimental groups: G1 (control), mammary glands that did not receive antimicrobials; G2, mammary glands to which 10 mL of cloxacillin-benzathine (100 mg) was administered via the intramammary route in a conventional structure; and G3, mammary glands to which 86 mL of cloxacillin-benzathine (50 mg) was administered via the intramammary route in a nanoencapsulated structure. Milk samples were collected at the time of drying off and 15 and 30 days after lambing in the next lactation. The analyses to identify the CNS species were performed by means of biochemical tests and internal transcribe spacer polymerase chain reaction (ITS-PCR), and the genes responsible for the virulence factors and resistance to oxacillin were investigated by means of the PCR technique. Among the species identified, Staphylococcus warneri was most prevalent in the three experimental groups. None of the samples were positive for the gene mecA. The only gene relating to production of enterotoxins that was found was sec. Among the genes relating to biofilm production ... / Doutor

Orientador: Maria de Lourdes Ribeiro de Souza da Cunha / Banca: Elizabeth Pizzollito / Banca: Carlos Magno Castelo Branco Fortaleza / Resumo: Staphylococcus epidermidis e Staphylococcus haemolyticus são considerados patógenos oportunistas, cujas infecções estão principalmente associadas à produção de biofilme. As enterotoxinas, superantígenos relacionados a intoxicações alimentares, e as hemolisinas, moléculas capazes de causar lise de membranas celulares, parecem estar associadas à patogênese das infecções estafilocócicas, apesar de ainda ser questionado se elas constituem fatores de virulência importantes nesses organismos. O uso indiscriminado de antimicrobianos vem selecionando cepas resistentes à oxacilina com menor suscetibilidade à vancomicina. A resistência à oxacilina é codificada pelo gene mecA, contido em um elemento genético móvel, denominado SCCmec. Novos antimicrobianos, como a linezolida, tigeciclina, daptomicina e quinupristina/dalfopristina vêm sendo empregados no tratamento de infecções por estafilococos multirresistentes. Este estudo objetivou caracterizar S. epidermidis e S. haemolyticus isolados de hemoculturas quanto à presença de genes de hemolisinas, enterotoxinas, suscetibilidade aos antimicrobianos e perfil clonal. Cento e sessenta e nove isolados foram pesquisados quanto à presença do gene mecA por PCR em tempo real, estando presente em 100% dos S. haemolyticus e 92,9% dos S. epidermidis, cujos tipos de SCCmec mais frequentes, determinados por PCR Multiplex, foram, respectivamente, I e III. Os MICs (Concentração Inibitória Mínima) de linezolida, tigeciclina, daptomicina, quinupristina/dalfopristina e vancomicina foram obtidos por Etest® e revelaram 4,7% de isolados resistentes à tigeciclina, 1,2% resistentes ou com resistência intermediária à quinupristina/dalfopristina, sendo o MIC máximo de vancomicina igual a 3 μg/ml. A microdiluição em caldo para vancomicina mostrou MICs de 0,25 a 2 μg/ml, concordando em 88,2% com os resultados obtidos com Etest®. A tipagem por PFGE... / Abstract: Staphylococcus epidermidis and Staphylococcus haemolyticus are opportunistic pathogens that cause infections which are mainly related to the formation of a biofilm. Enterotoxins, superantigens related to food poisoning and hemolysins, molecules able to lyse mammalian cells, seem to be involved in the pathogenesis of staphylococcal infections, although the question remains whether they represent important virulence factors in these organisms. The indiscriminate use of antimicrobial drugs has selected strains that are resistant to oxacillin, in addition to isolates with reduced vancomycin susceptibility. Oxacillin resistance is encoded by the mecA gene which is carried on a mobile genetic element, SCCmec. New antimicrobial drugs such as linezolid, tigecycline, daptomycin and quinupristin/dalfopristin are being used for the treatment of infections caused by multidrug-resistant staphylococci. The objective of this study was to characterize S. epidermidis and S. haemolyticus strains isolated from blood cultures regarding the presence of hemolysin and enterotoxin genes, antimicrobial susceptibility, and clonal profile. Investigation of the mecA gene by real-time PCR in 169 isolates revealed the presence of the gene in 100% of S. haemolyticus isolates and 92.9% of S. epidermidis. The most frequent SCCmec types determined by multiplex PCR were types I and III, respectively. The minimum inhibitory concentrations (MICs) of linezolid, tigecycline, daptomycin, quinupristin/dalfopristin and vancomycin determined by the Etest® showed that 4.7% of the isolates were resistant to tigecycline and 1.2% were resistant or intermediate resistant to quinupristin/dalfopristin. The maximum MIC for vancomycin was 3 μg/ml. Broth microdilution revealed vancomycin MICs of 0.25 to 2 μg/ml, showing 88.2% agreement with the Etest results. Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) typing revealed the presence of S. epidermidis ... / Mestre

Orientador: Eunice Teresinha Giampaolo / Banca: Ana Cláudia Pavarina / Banca: Cláudia Helena Lovato da Silva / Resumo: O objetivo deste estudo foi investigar a eficácia da escovação com diferentes agentes de limpeza para reduzir a viabilidade de um biofilme multiespécies em resinas acrílicas. Amostras de Lucitone 550 (L) e Tokuyama Rebase Fast II (T) (10 mm x 2 mm) foram preparadas, esterilizadas e inoculadas com uma suspensão de 107 células/mL de Candida albicans e Candida glabrata e de 108 células/mL de Streptococcus mutans. As amostras foram incubadas por 48 h a 37 °C para a formação do biofilme. Em seguida, foram divididas (n = 12) e submetidas à escovação ou imersão durante 10 s nas soluções: água destilada (A); ácido peracético 0,2% (Ac), digluconato de clorexidina 1% (Chx), solução água/dentifrício 1:1 (D), hipoclorito de sódio a 1% (NaOCl) e perborato de sódio (Pb). Os microrganismos viáveis foram avaliados por ensaio de XTT e contagem de colônias (ufc /mL). Os dados foram verificados por ANOVA e teste de Tukey com nível de significância de 5%. Neste estudo, a eficácia da remoção do biofilme foi aumentada pela escovação combinada com agentes químicos de limpeza, por outro lado, a imersão por 10 s em AC e NaOCl mostrou-se tão eficaz quanto a escovação em L e T. Este resultado é bastante interessante, pois a imersão nestes agentes de limpeza por um curto período poderia ser uma alternativa viável para a desinfecção de próteses de pacientes com dificuldades motoras para executar a escovação. / Abstract: The aim of this study was to investigate the efficacy of brushing with different cleaning agents in reducing the viability of multispecies biofilm in acrylic resins. Lucitone 550 (L) and Tokuyama Rebase Fast II (T) specimens (10 mm x 2 mm) were prepared, sterilized and inoculated with a Candida albicans and Candida glabrata suspension of 107 cells/mL and a suspension of 108 cells/mL of Streptococcus mutans. Specimens were incubated for 48 h at 37°C for the biofilm formation. Then, they were divided (n=12) and subjected to brushing or immersion for 10 s in the solutions: distilled water (W), 0.2% peracetic acid (Ac), 1% chlorhexidine digluconate (Chx), 1:1 water/dentifrice solution (D), 1% sodium hypochlorite (NaOCl) and sodium perborate (Pb). Viable microorganisms was evaluated by XTT assay and colony counts (cfu/mL). Data were performed by ANOVA and Tukey test with 5% significance level. In this study, the efficacy of biofilm removal was increased by brushing combined with chemical cleaning agents, on the other hand, immersion for 10 sec in NaOCl and AC has shown to be as effective as brushing for L and T. This result is quite interesting, inasmuch as immersion in these cleaning agents for a short period could be a viable alternative for prostheses disinfection of patients with motor disabilities to perform the brushing. / Mestre

Os óleos essenciais são metabólitos secundários extraídos de plantas e apresentam diversas propriedades para fins medicinais. O objetivo deste trabalho foi caracterizar o óleo essencial de folhas secas de E. staigeriana, verificar sua atividade antimicrobiana e antibiofilme frente a bactérias gram-positivas e gram-negativas e avaliar a expressão dos genes de virulência e resistência em Listeria monocytogenes e Enterococcus faecalis resistente a vancomicina (VRE) na ausência e presença de concentração sub-inibitória do óleo essencial, por PCR quantitativo em tempo real (qPCR). A caracterização do óleo foi realizada por cromatografia gasosa acoplada a massa (GC-MS) verificou-se a presença de 21 compostos, sendo os constituintes majoritários o geranial (28,67 %), neral (19,68 %) e limoneno (17,29 %). A ação antimicrobiana foi avaliada e observou-se que o óleo apresentou atividade frente a bactérias gram-positivas, com diâmetros de halos de inibição de 0 a >45 mm. A concentração inibitória mínima (CIM) foi determinada para bactérias gram-positivas, sensíveis e resistentes a agentes antimicrobianos como VRE, e variou de 0,19 a 6,25 %. Ação antibiofilme do óleo foi avaliada tanto na formação, quanto sob um biofilme pré-estabelecido. O óleo essencial apresentou capacidade de inibir a formação do biofilme de todas as cepas testadas, mas pouca ou nenhuma capacidade de remoção do biofilme pré-formado. Na análise de expressão gênica por qPCR para L. monocytogenes, verificou-se que três dos genes de estresse celular (sufS, sod e degU) apresentaram uma diferença significativa na presença do óleo. Para a cepa de E. faecalis VRE, nenhum gene selecionado apresentou alteração na expressão gênica. Como conclusão, este estudo demonstrou que o óleo essencial de folhas secas de E. staigeriana possui atividade antimicrobiana do frente a bactérias gram-positivas e sem atividade em gram-negativas. / Essential oils are secondary metabolites extracted from plants and they have been showing several medicinal properties. The aim of this study was to characterize the essential oil extracted from dry leaf of E. staigeriana, as well as to verify the antimicrobial and anti-biofilm activities against gram-positive and gram-negative bacteria, and to evaluate the expression of virulence and resistance genes in Listeria monocytogenes and Enterococcus faecalis vancomycin resistant (VRE) in the absence and presence of sub-inhibitory concentration of the essential oil by quantitative real time PCR (qPCR). The oil characterization was performed by CG-MS and it was verified the presence of 21 compounds, being the geranial (28.67 %), neral (19.68 %) and limonene (17.29 %) the major compounds. The antimicrobial activity was evaluated and it was observed that the essential oil has effect against gram-positive, with inhibition zone diameter ranges from 0 to 45 mm. The minimum inhibitory concentration (MIC) was determined, to sensible and resistant gram-positive bacteria to antimicrobial agents, such as VRE, and varied between 0.19 to 6.25 %. The anti-biofilm action of the oil was verified on formation, and under a pre-established biofilm. The essential oil showed capacity to inhibit the biofilm formation for all tested strains, but few or no ability to remove the pre-established biofilm. In the analysis of gene expression by qPCR for L. monocytogenes, three cell stress genes (sufS, sod and degU) with significant difference in the presence of the oil. For E. faecalis VRE strain no one of the selected genes showed alteration in the gene expression. In conclusion, this study demonstrates the potential of essential oil from dry leaf of E. staigeriana for future use in the control of gram-positive bacteria.

As Candida spp. têm grande habilidade para colonizar e formar biofilmes em dispositivos médicos e biomateriais, provocando infecções nos hospedeiros humanos. O Polietileno de Alta Densidade (PEAD), Polihidroxibutirato (PHB) e o Ácido Polilático (PLA) apresentam propriedades interessantes para aplicações em dispositivos médicos. Os sais imidazólicos (SI) apresentam propriedades avançadas, inclusive antifúngicas, podendo ser utilizados como aditivos nestes polímeros. Neste estudo, foram preparados filmes poliméricos com diferentes teores dos SI cloreto de 1-n-hexadecil-3-metilimidazólico (C16MImCl) e metanossulfonato de 1-n-hexadecil-3- metilimidazólico (C16MImMeS), através dos processos de mistura no estado fundido (PEAD e PHB) e de Solvent Casting (PLA). Para avaliar se esses biomateriais apresentavam atividade antibiofilme foram realizados ensaios Antibiofilme, testados frente a isolados de Candida spp. Para determinar a porcentagem de impedimento da formação do biofilme foram realizados ensaios de Menor Concentração Antibiofilme, frente a isolados de Candida tropicalis. Análises de Microscopia Eletrônica de Varredura foram realizadas para verificar se ocorre o impedimento da formação do biofilme nos biomateriais. Foram avaliadas a citotoxicidade dos SI, a adesão celular e a biocompatibilidade celular de células-tronco mesenquimais humanas (CTMh) nos filmes de PEAD, PHB e PLA. Foram realizados ensaios histopatológicos dos biomateriais em pele de orelha de suínos para verificar se ocorre lesões microscópicas. Os filmes de PEAD, PHB e PLA foram caracterizados para avaliar a morfologia, a presença dos SI na superfície e as propriedades físicoquímicas dos mesmos. Os filmes de PEAD, PHB e PLA com diferentes teores dos SI C16MImCl e C16MImMeS apresentaram atividade antibiofilme frente a isolados de Candida tropicalis, C. parapsilosis e C. albicans. Com o ensaio MCA foi possível verificar que com o aumento do teor dos SI (C16MImCl e C16MImMeS) no PLA e PHB ocorre em geral um aumento na porcentagem de impedimento da formação do biofilme, sendo que isso em geral não ocorre com o PEAD. As micrografias de MEV mostraram o efetivo impedimento da formação do biofilme. Em geral os SI não apresentaram citotoxicidade em baixas concentrações. Os biomateriais mostraram uma boa adesão celular e são biocompatíveis com CTMh. Na avaliação histopatológica de pele da orelha suína com os biomateriais não foram observadas lesões microscópicas agudas. Em combinação com as boas propriedades morfológicas, físico-químicas e mecânicas, estes biomateriais são promissores para serem utilizados na confecção de dispositivos médicos. / Candida spp. have great ability to colonize and form biofilms on medical devices and biomaterials, causing infections in human hosts. High-density polyethylene (HDPE), Polyhydroxybutyrate (PHB) and Polylactic acid (PLA) exhibit interesting properties for applications in medical devices. Imidazolium salts (IS) have advanced properties, including antifungal, which could be explored as additives in these polymers. In this study, polymer films with different IS (1-n-hexadecyl-3- methylimidazolium chloride (C16MImCl) and 1-n-hexadecyl-3-methylimidazolium methanesulfonate (C16MImMeS)) contents were prepared, using either the melt blending (HDPE and PHB) or the solvent casting process (PLA). The antibiofilm assay with Candida spp. isolates was performed to assess the antibiofilm activity of these biomaterials. Inhibition percentages of biofilm formation of Candida tropicalis isolates were determined by the minor antibiofilm concentration (MAC) assay. Scanning electron microscopy was applied to verify the inhibition of biofilm formation on these biomaterials. The cytotoxicity of IS and the cell adhesion and biocompatibility of human mesenchymal stem cells (hMSC) of the HDPE, PHB and PLA films was studied. Histopathologic assays were performed with these biomaterials on ear pigskin to verify the occurrence of microscopic lesions. The HDPE, PHB and PLA films were characterized to understand their surface morphology, the presence of IS on the surface and the physicochemical properties thereof. The polymer films with different concentrations of the IS C16MImCl and C16MImMeS presented antibiofilm activity against isolates of Candida tropicalis, C. parapsilosis and C. albicans. The MAC assay enabled to determine that an increasing IS (C16MImCl and C16MImMeS) content in the PLA and PHB biomaterials promoted, in general, an increase in the inhibition percentage of biofilm formation, which was not observed for the HDPE films. The SEM micrographs showed the effective prevention of biofilm formation on the IS containing biomaterials. Lower concentrations of the IS showed no cytotoxicity. The biomaterials presented good cell adhesion percentages and biocompatibility with hMSC. Furthermore, no acute microscopic lesions were identified in the histopathological evaluation after contact between the biomaterials and ear pigskin. In combination with the good morphological, physicochemical and mechanical properties, these biomaterials can be considered as promising for use in the manufacturing of medical devices.