O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito antimicrobiano da irrigação e da medicação endodôntica em dentina infectada por biofilmes orais. Na primeira parte do estudo, avaliaram-se as seguintes soluções irrigadoras: hipoclorito de sódio a 1%, clorexidina a 2%, ácido cítrico a 10% e EDTA a 17%. Na segunda parte, avaliaram-se soluções irrigadoras contendo associações (MTAD, Smear Clear, Qmix, ácido maleico a 7%, iodo-iodeto de potássio a 2% e ácido peracético a 4%), sendo essas soluções comparadas a 2 concentrações de hipoclorito de sódio. Na terceira parte, avaliou-se o efeito de dispositivos sônicos, ultrassônicos e de laser na capacidade de limpeza do hipoclorito de sódio a 6%, com uso de microscópio eletrônico de varredura. Na quarta parte, avaliaram-se os efeitos antimicrobianos de 3 pastas de hidróxido de cálcio contendo 3 radiopacificadores diferentes (óxido de zinco, sulfato de bário e iodofórmio). No último experimento, foram avaliadas as propriedades antimicrobianas da pasta triantibiótica, da clorexidina em gel e da pasta aquosa de hidróxido de cálcio. Os resultados mostraram que todas as soluções de hipoclorito de sódio testadas e o ácido peracético a 4% foram mais efetivas sobre o biofilme em comparação a todos os irrigantes testados. As soluções de hipoclorito de sódio propiciaram significativamente uma melhor limpeza da dentina. O ácido peracético foi também efetivo para dissolver células do biofilme. A ativação do hipoclorito de sódio com o ultrassom e com laser interferiu favoravelmente na limpeza da dentina infectada. A pasta triantibiótica e o hidróxido de cálcio associado ao iodofórmio foram os medicamentos mais efetivos na descontaminação da dentina infectada. Portanto, o protocolo ideal que deve ser adotado para garantir uma descontaminação efetiva da dentina contaminada por biofilmes orais inclui o uso de hipoclorito de sódio ativado por ultrassom ou laser e medicação intracanal de hidróxido de cálcio com iodofórmio. O ácido peracético e a pasta triantibiótica apresentaram resultados promissores. / The aim of this study was to evaluate the antimicrobial effect of endodontic irrigation and medication on biofilm infected dentin. In the first part, we evaluated the following irrigant solutions: 1% sodium hypochlorite, 2% chlorhexidine, 10% citric acid and 17% EDTA. In the second part, irrigant solutions containing combinations of antimicrobials such as \"MTAD,\" \"Smear Clear\", \"Qmix\", 7% maleic acid and 2% iodine-potassium iodide and 4% peracetic acid were evaluated. These solutions were compared to 2 concentrations of sodium hypochlorite. In the third part, we evaluated the effect of sonic, ultrasonic and laser irrigation on the cleaning ability of biofilm infected dentin using 6% sodium hypochlorite under scanning electron microscope. In the fourth part, we evaluated the antimicrobial effects of 3 calcium hydroxide pastes containing 3 different radiopacifiers (zinc oxide, barium sulfate and iodoform). In the last experiment, we evaluated the antimicrobial properties of the triantibiotic paste, 2% chlorhexidine gel and calcium hydroxide paste. The results showed that the sodium hypochlorite and the peracetic acid solutions were more effective to decontaminate the biofilm infected dentin in comparison to all of the tested irrigants. The sodium hypochlorite solutions allowed significantly better cleaning of the dentine. The peracetic acid was also effective to dissolve the biofilm cells. Activation of 6% sodium hypochlorite with ultrasonic and laser increased the cleaning of biofilm infected dentin. The triantibiotic paste and calcium hydroxide associated to iodoform were the most effective intracanal dressings available for the decontamination of the infected dentin. Therefore, the ideal protocol to be adopted in order to ensure an effective decontamination of biofilm infected dentin includes the use of sodium hypochlorite, specially activated by ultrasound or laser; and the use of calcium hydroxide with iodoform intracanal dressing. The peracetic acid and the triantibiotic paste also showed promising results.

Introdução: Biofilme consiste em um conjunto de microrganismos embutidos em uma matriz extracelular. O biofilme tradicional (TBF) se desenvolve em locais com contínua hidratação, e o biofilme buildup (BBF), em produtos para a saúde expostos a repetidos ciclos de sujidade, limpeza, desinfecção e secagem. Objetivo: avaliar o impacto do uso de detergente e fricção para remover biofilme buildup-5 (BBF-5) e biofilme tradicional-5 (TBF-5) de canais endoscópicos gastrointestinais flexíveis, bem como o impacto do glutaraldeído após a limpeza. Métodos: O BBF-5 foi desenvolvido após a exposição da superfície interna dos canais de endoscópicos gastrointestinais ao Artificial Test Soil (ATS) contendo 108UFC/ml de Pseudomonas aeruginosa (PA) e Enterococcus faecalis (EF), limpeza, desinfecção de alto nível (DAN), enxágue e secagem durante cinco dias. O mesmo processo foi utilizado para desenvolver o TBF-5, porém a fase de DAN foi omitida. Limpeza com detergentes com enzimas de pH neutro e detergentes sem enzimas com pH alcalino, escova com cerdas e dispositivo de limpeza pull thru foram comparados à limpeza com água e sem fricção para remover o BBF-5 e o TBF-5. Testes de proteína e carboidrato, contagem de bactérias viáveis e adenosina trifosfato (ATP) foram realizados. Teste de Kruskal-Wallis e análise de post hoc Dunn-Bonferroni foram realizados. Resultados: Não houve diferença estatisticamente significante (p>0,05) entre a quantidade de EF e PA nos canais com TBF-5 e BBF-5. Não houve diferença da eficácia para a remoção de PA em TBF-5 entre o detergente enzimático e a água, em ambas as situações, a limpeza apenas não foi eficaz (p>0,05) na ausência de fricção (flush). Por outro lado, o detergente alcalino, associado a todos os procedimentos de limpeza (ausência e presença de fricção) e DAN, foi eficaz para remoção de PA. Para a remoção de EF em TBF-5, a eficácia da limpeza foi alcançada em todas situações avaliadas (com e sem fricção) com o uso do detergente enzimático; com a água, na presença de fricção (pull thru e escovas de cerdas); e com detergente alcalino, apenas com o método de limpeza com escovas de cerdas (p<0,05). Para a remoção de bactérias em BBF-5, formados em canais de PTFE, não houve diferença da eficácia para a remoção de PA entre o detergente enzimático e o alcalino, em ambas situações, todos os procedimentos avaliados foram eficazes (p<0,05), enquanto que a água foi ineficaz para remoção de PA apenas na ausência de fricção (p>0,05). Para a remoção de EF em BBF-5, o detergente enzimático e a água foram eficazes em todas situações avaliadas; o detergente alcalino, foi eficaz na presença de fricção com o dispositivo pull thru e escovas de cerdas (p<0,05). Testes de ATP, proteína e carboidrato foram incapazes de detectar biofilme. Conclusão: Água potável de torneira, detergente com enzimas e detergente alcalino sem enzimas foram eficazes para a completa remoção de BBF-5 e TBF-5 na presença de fricção (pull thru ou escova com cerdas) durante a limpeza. Na ausência de fricção, detergente enzimático apresentou maior habilidade para remover E. faecalis de TBF-5 e BBF-5, detergente alcalino para remover P. aeruginosa e a água não foi eficaz para a remoção de ambos microrganismos. Glutaraldeído destruiu bactérias remanescente após a maioria das combinações de limpeza avaliadas. / Background: Biofilm is the accumulation of microorganisms enclosed in an extracellular matrix. Traditional biofilm (TBF) develops under continuous hydration whereas buildup biofilm (BBF) develops on medical devices that are exposed to repeated cycles of soiling, cleaning, disinfection and drying. Objetive: to evaluat the impact of detergent and friction on BBF-5 and and TBF-5 removal from PTFE channels as well as the killing efficacy of glutaraldehyde post cleaning. Methods: BBF-5 was developed by repeated rounds over five days of exposure to bacteria, cleaning, high level disinfection (HLD), rinsing and drying of the inner surface of new polytetrafluorethylene (PTFE) channels. Artificial Test Soil (ATS) containing 108CFU/ml of Pseudomonas aeruginosa (PA), and Enterococcus faecalis (EF) was used for the bacterial exposure. The same process was used to develop TBF-5, however the HLD step was omitted. Cleaning with enzymatic and alkaline detergents, bristle brush and pull thru cleaner were compared to a water-flush only to determine BBF-5 and TBF-5 removal. The residual organic and microbial levels were tested using carbohydrate, and protein assays as well viable count, and adenosine triphosphate (ATP) testing. Kruskal-Wallis test and the post hoc Dunn-Bonferroni analysis were performed. Results: There was not a statistically significant difference (p> 0.05) between the amount of EF and PA in the channels with TBF-5 and BBF-5. There was not a difference in efficacy for the removal of PA in TBF- 5 between the enzymatic detergent and water and in both situations, only cleaning was not effective (p>0.05) in the absence of friction (flush). Furthermore, the alkaline detergent, associated with all cleaning procedures (absence and presence of friction) and DAN, was effective for the removal of PA. For removal of EF in TBF-5, cleaning efficacy was achieved in all procedures evaluated (with and without friction) with the use of enzymatic detergent; with water in the presence of friction (pull thru and bristle brushes); and an alkaline detergent, the only method of cleaning brushes with bristles (p<0.05). For the removal of bacteria in BBF-5 formed on PTFE channels, there was not a difference in efficacy for PA removal of the enzymatic and alkalyne detergent and in both situations, all procedures were evaluated effective (p<0.05 ), while water was ineffective for PA removal only in the absence of friction (p>0.05). For EF removal on BEF-5, the enzymatic detergent and water were evaluated effective in all situations; alkaline detergent, was effective in the presence of friction with the pull thru device and bristle brushes (p<0.05). ATP, protein and carbohydrate testing were unable to detect biofilm. Conclusion: Tap water, enzymatic and alkaline detergent were effective for complete BBF-5 and TBF-5 removal in the presence of friction (pull thru or bristle brush) and a flushing pump during the cleaning. Without friction, enzymatic detergent was more effective for EF removal of TBF-5 and BBF-5, alkalyne detergent was more effective for PA removal and water was not effective for both types of bacterial removal. Glutaraldehyde effectively killed the remaining microorganisms after some cleaning combinations were tested.

O uso de compósitos simulando a cor dos tecidos gengivais apresenta-se como uma opção de tratamento restaurador estético com aplicação direta, que pode aumentar a satisfação do paciente por meio de uma solução de baixo custo e pouco invasiva. Este estudo teve como fatores de variação: sistemas restauradores que reproduzem a cor dos tecidos gengivais (Amaris® gingiva (A), NTpremium® Pink (B), Beautifil® II Pink (C) e protocolo de envelhecimento [desafio erosivo (DE) e ciclagem térmica (CT)], avaliados quanto a estabilidade de cor, rugosidade superficial, perda de superfície e quantificação de biofilme. Para os 3 primeiros ensaios, os espécimes foram divididos em 6 grupos (n=10): G1 (A+CT); G2 (A+DE); G3 (B+CT); G4 (B+DE); G5 (C+CT); G6 (C+DE). A ciclagem térmica foi realizada com um total 5.000 ciclos, com banhos de 5ºC e 55ºC e o desafio erosivo consistiu da armazenagem dos espécimes em solução de ácido cítrico 0,3%, com pH 2,5 a 37°C, durante uma semana. Sessenta espécimes de 5mmX5mmX3mm foram montados, fotopolimerizados, polidos e armazenados em estufa a 37º por 24h. Todos os espécimes foram lidos antes e após os protocolos de envelhecimento, utilizando o perfilômetro óptico para avaliação da rugosidade superficial e a perda de superfície, enquanto o espectrofotômetro avaliou a estabilidade de cor dos compósitos, de acordo com os parâmetros do CIELab. Para a quantificação do biofilme foram acrescentadas duas variáveis tempo de leitura (após 3 e 24 horas) e ao protocolo de envelhecimento foi adicionado um grupo controle (sem envelhecimento). Noventa (n=5) espécimes de 4mmX1mm foram montados e padronizados como os espécimes montados para as leitura de rugosidade, perda de superfície e alteração de cor. Para a formação do biofilme foram utilizadas as cepas de Streptococcus mutans UA159, cultivadas em TSB suplementado com 0,5% de sacarose por 3 e 24 horas e mensurados através do método indireto de coloração com safranina e leitura de absorbância para a quantificação do biofilme formado. No que se refere a alteração de cor, detectou-se diferença estatisticamente significante para os fatores sistema restaurador (p=0,00) e para a interação sistema restaurador X protocolo de envelhecimento (p=0,00). A maior variação de cor foi observada no material C quando submetido ao desafio erosivo (16,75±3,25). A ANOVA não detectou diferença estatisticamente significante para nenhum dos fatores em relação a perda de superfície. Na avaliação da rugosidade, detectou-se diferença estatisticamente significante para o fator protocolo de envelhecimento (p=0,00), havendo maior rugosidade para os espécimes submetidos à ciclagem térmica. Na quantificação de biofilme, após 3 e 24 horas, ANOVA detectou diferença estatisticamente significante para o fator protocolo de envelhecimento (p=0,00) e para a interação entre o protocolo de envelhecimento e material restaurador (p=0,00 e p=0,003, respectivamente). Conclui-se que todos os sistemas restauradores apresentaram alteração de cor após os protocolos de envelhecimento testados. A CT foi o protocolo de envelhecimento que mais aumentou a rugosidade em todos os sistemas restauradores, contudo sem perda significante de superfície. A quantificação de biofilme após 3 e 24 horas foi aumentada pelos protocolos de envelhecimento. O desafio erosivo aumentou a deposição de biofilme no sistema restaurador giomer, em 3 e 24 horas. / The use of composites simulating the color of the gingival tissues presents as an option of aesthetic restorative treatment with direct application, which can increase patient satisfaction through a low-cost and non-invasive solution. This study had as factors of variation: restorative systems that reproduce the color of the gingival tissues (Amaris® gingiva (A), NTpremium® Pink (B), Beautifil® II Pink (C) and aging protocols [thermal cycling (TC) and erosive challenge (EC)], evaluated for color stability, surface roughness, surface loss and biofilm quantification. For the first 3 trials, the specimens were divided into 6 groups (n = 10): G1 (A + TC); G2 (A + EC); G3 (B + TC); G4 (B + EC); G5 (C + TC); G6 (C + EC). The thermal cycling was performed with a total of 5.000 cycles, with baths of 5 ° and 55 ° C and the erosive challenge consisted of the storage of the specimens in 0.3% citric acid solution, pH 2.5 at 37°C, for one week. Sixty specimens of 5mmX5mmX3mm were mounted, photopolymerized, polished and stored in destilled water at 37º for 24h. All the specimens were read before and after the aging protocols, using the optical profilometer to evaluate surface roughness and surface loss, while the spectrophotometer evaluated the color stability of the composites, according to CIELab parameters. Two reading time variables (after 3 and 24 hours) were added to the biofilm quantification and a control group (without aging) was added to the aging protocol. Ninety (n=5) specimens of 5mmX1mm were mounted and standardized as the specimens or the first 3 trials, roughness, surface loss and color stability. For the biofilm formation, Streptococcus mutans UA159, cultivated in TSB supplemented with 0.5% of sucrose for 3 and 24 hours and measured by the indirect method of safranin staining and absorbance reading were used. Regarding the color change, a statistically significant difference was detected for the factors restorative system (p=0.00) and for the interaction restorative system X aging protocol (p=0.00). The highest color variation was observed in material C when submitted to erosive challenge (16.75 ± 3.25). ANOVA did not detect a statistically significant difference for any factors in relation to surface loss. In the evaluation of roughness, a statistically significant difference was detected for the aging protocol factor (p=0.00), with a higher roughness for the specimens submitted to thermal cycling. In the biofilm quantification, after 3 and 24 hours, ANOVA detected a statistically significant difference for the aging protocol factor (p=0.00) and for the interaction between the two factors, aging protocols and restorative systems (p=0.00 and p=0.003, respectively). It was concluded that all restorative systems presented color changes after the aging protocols tested. CT was the aging protocol that increased the most roughness in all restorative systems, nevertheless without significant loss of surface. Biofilm deposition after 3 and 24 hours varies considerably depending on the restorative system and aging protocol. The erosive challenge increased biofilm deposition in the restorative system giomer in 3 and 24 hours.

O perfil de liberação e o efeito de um sistema de liberação prolongada contendo metronidazol, antimicrobiano prescrevido para o tratamento da periodontite, foram avaliados na presença de biofilmes supra e subgengivais, representados respectivamente pelas bactérias Streptococcus mutans e Porphyromonas gingivalis. Os biofilmes foram crescidos e expostos ao sistema de liberação prolongada contendo metronidazol (MDZ) ou ao controle de veículo da formulação (CV), composto de monoglicerídeos e monoesterato de sorbitano. Biofilmes não tratados foram utilizados como controle negativo (CN). Os biofilmes e os meios de cultura de S. mutans foram coletados após a primeira exposição aos tratamentos nos tempos 24, 48, 72 e 96 horas enquanto para biofilmes de P. gingivalis os tempos foram 24, 48 e 72 horas. Após coleta, os biofilmes foram analisados em relação à quantificação de fármaco e viabilidade bacteriana (biofilmes de S. mutans: n=3; biofilmes de P. gingivalis: n=6). Biofilmes de S. mutans também foram avaliados em relação à acidogenicidade. Nos biofilmes supragengivais, a quantificação de MDZ nas primeiras 24 horas foi de 7% em relação à concentração inicial de fármaco na formulação, permanecendo em torno de 1% para os demais tempos. O teor de MDZ liberado da formulação reduziu a viabilidade bacteriana no tempo 24 horas e diminuiu a acidogenicidade dos biofilmes por 48 horas em relação aos grupos CV e NC (p<0,05). Já para os biofilmes subgengivais, 19% de MDZ foram liberados da formulação nas primeiras 24 horas e 5% do fármaco foram quantificados nas análises dos demais tempos. O antimicrobiano liberado reduziu a viabilidade bacteriana em todos os tempos em relação à CV e NC (p<0,05), não sendo diferente estatisticamente entre si (p>0,05). O grupo CV apresentou menor viabilidade bacteriana se comparado ao grupo CN (p<0,05), mas maior viabilidade em comparação ao grupo MDZ em todos os tempos (p<0,05). De uma forma geral, o sistema de liberação prolongada proposto neste estudo foi capaz de inviabilizar a proliferação de biofilmes de P. gingivalis e de desestabilizar biofilmes de S. mutans. Além disso, os microambientes originados pelos biofilmes interferiram na cinética de liberação do metronidazol, diminuindo sua disponibilidade biológica. Assim, considerando a continuidade do biofilme sub e supragengival, torna-se interessante aprofundar os estudos sobre formulações que possam inibir biofilmes subgengivais ao mesmo tempo em que desestabilizam biofilmes supragengivais, evitando a rápida recolonização dos nichos periodontais tratados. Em acréscimo, a possibilidade de estudar parâmetros operacionais de desenvolvimento da formulação farmacêutica utilizando-se modelos de biofilmes patogênicos pode ser considerada em futuros estudos / The drug release profile and the effect of a controlled release system containing metronidazole, an antibiotic prescribed for the treatment of periodontitis, were evaluated in the presence of supra and subgingival biofilms, represented respectively by the bacteria - Streptococcus mutans and Porphyromonas gingivalis. The biofilms were grown and exposed to the controlled release system containing metronidazole (MDZ) as well as vehicle control (VC) of the formulation containing monoglycerides and sorbitan monostearate. Untreated biofilms were used as negative control (NC). The biofilms and culture media of S. mutans were collected after the first exposure to the treatments at times 24, 48, 72 and 96 hours while for P. gingivalis biofilms, the times were 24, 48 and 72 hours. After collection, biofilms were analyzed for drug quantification and bacterial viability (S. mutans biofilms: n=3; P. gingivalis biofilms: n=6). Biofilms of S. mutans were also evaluated for acidogenicity. In the supragingival biofilms, the MDZ quantification in the first 24 hours was 7% in relation to the initial concentration of drug in the formulation, remaining around 1% for the remaining times. The amount of MDZ released from the formulation reduced the bacterial viability in the 24 hour and decreased the acidogenicity of the biofilms by 48 hours in relation to the VC and NC groups (p <0.05). As for subgingival biofilms, 19% of MDZ was released from the formulation in the first 24 hours and 5% of the drug was quantified in the other analyses. The MDZ released reduced bacterial viability in relation to VC and NC (p <0.05), and was not statistically different at all sampling times studied (p> 0.05). The VC group presented lower number of viable bacteria than NC (p <0.05), however, it was higher when compared to the MDZ-treated group at all sampling times studied (p <0.05). In general, the controlled release system proposed in this study was able to prevent the proliferation of P. gingivalis biofilms and to destabilize S. mutans biofilms. In addition, microenvironments caused by biofilms interfered with the release kinetics of metronidazole, reducing its bioavailability. Thus, considering the continuity of the sub and supragingival biofilms, it is imperative to deepen the studies on formulations that can inhibit the formation of subgingival biofilms while destabilizing supragingival biofilms, thereby avoiding the rapid recolonization of the treated periodontal niches. In addition, the possibility of studying operational parameters for the development of pharmaceutical formulations using models of pathogenic biofilms can be considered in future studies

Hipersensibilidade dentária (HD) é definida como uma dor decorrente de dentina exposta em resposta a fatores intra-bucais. Porém, o papel do biofilme supragengival (BS) no processo de desencadeamento e/ou aumento da HD não é totalmente esclarecido. Este estudo é um ensaio clínico de braço único cujo objetivo foi o de avaliar se, após 4 dias sem medidas mecânicas de controle do BS, a auto-percepção da hipersensibilidade dentinária é influenciada pela presença daquele. Para isto, 74 participantes (28,1±7,3 anos, 48 mulheres), com saúde gengival e ≥ 5 dentes hígidos por quadrante, foram incluídos se apresentassem recessão (REC) e/ou queixa de HD. No dia 0, avaliou-se REC, escala Schiff (ES), Escala Visual Analógica, sensibilidade tátil por meio da sonda Jay (JAY) e Índice de Sangramento Gengival (ISG). Após, realizou-se profilaxia, para remoção de cálculo e/ou BS e os participantes foram orientados a abster-se do controle mecânico do BS por 4 dias e a realizar 2 bochechos/dia (manhã e noite, 1 minuto) com solução de creme dental fluoretado (1g/9ml). No dia 4, após exame usando o Índice de Placa Visível (IPV), índice de Quigley-Hein (QH), EVA e ISG, foi realizada nova profilaxia. Regressão logística por meio de Equações de Estimação Generalizadas foi conduzida, sendo o dente a unidade de análise. Uma média de 6,00±4,08 dentes/paciente apresentou recessão e/ou queixa de HD. Na totalidade dos dentes (n=444), o acúmulo do BS não determinou aumento na queixa de HD. Quando analisados dentes com Schiff≥1 no dia 0 (n=128), a presença de BS associou-se ao aumento na EVA (OR=4,233; p=0,006) independente da presença ou extensão da REC. Conclui-se que o acúmulo do BS aumenta a auto-percepção de HD. / Dental hypersensitivity (HD) is defined as a pain arising from exposed dentin in response to intra-buccal factors. However, the role of the supragingival biofilm (BS) in the process of triggering and / or increasing HD is not fully understood. This study is a single-arm clinical trial whose objective was to evaluate whether, after 4 days without mechanical measures of BS control, the self-perception of dentin hypersensitivity is influenced by the presence of that. Seventy-four participants (28.1 ± 7.3 years, 48 women) with gingival health and ≥ 5 healthy teeth per quadrant were included if they presented recession (REC) and / or HD complaint. At day 0, REC, Schiff scale (ES), Visual Analog Scale tactile sensitivity by means of the Jay (JAY) probe and Gingival Bleeding Index (GBI) were performed. After that, prophylaxis was performed, for calculation and / or BS removal, and participants were instructed to abstain from BS mechanical control for 4 days and to perform 2 mouthwashes / day (morning and night, 1 minute) with a fluoride toothpaste slurry (1g / 9ml). On day 4, after examination using the Visible Plaque Index (IPV), Quigley-Hein Index (QH), EVA and GBI, a new prophylaxis was performed. Logistic regression using Generalized Estimation Equations was conducted, with the tooth being the unit of analysis. An average of 6.00 ± 4.08 teeth/patient presented recession and / or complaint of HD. In all teeth (n = 444), the accumulation of BS did not increase HD complaint. When teeth with Schiff≥1 on day 0 were (n = 128), the presence of BS was associated with an increase in VAS (OR = 4,233; p = 0.006) regardless of the presence or extent of REC. It is concluded that the accumulation of BS increases the self-perception of HD

Orientador: Maria de Lourdes Ribeiro de Souza da Cunha / Banca: Elisa Yoko Hirooka / Banca: Tereza Cristina Moreira de Oliveira / Banca: Carlos Magno Castelo Branco Fortaleza / Resumo: Os estafilococos coagulase-negativos (ECN) são integrantes da microbiota normal da pele humana e os microrganismos mais frequentemente isolados de materiais clínicos. No ambiente hospitalar são a maior causa de bacteremias, na maioria dos casos em pacientes mantidos em unidades de tratamento intensivo. A patogenia das infecções causadas por estas bactérias é complexa e multifatorial, sendo vários os fatores de virulência envolvidos nas infecções. O biofilme é o principal fator de virulência dos ECN, conferindo proteção contra o sistema imune do hospedeiro e a ação dos antimicrobianos. As toxinas estafilocócicas denominadas superantígenos são classificadas antigenicamente em toxina 1 da síndrome do choque tóxico (TSST-1) e em enterotoxinas. Desencadeiam uma série de efeitos tóxicos, pois funcionam como potentes toxinas gastrointestinais e estimulam de forma inespecífica a proliferação de células T. Os sistemas regulatórios estafilocócicos, tais como o sistema agr, podem afetar a produção das toxinas e do biofilme agindo como indutores ou repressores de genes específicos para a produção de fatores de virulência. Além dos fatores de virulência, o aumento da resistência antimicrobiana nos últimos anos tem fundamental significância nas infecções hospitalares. As amostras resistentes à oxacilina deixam poucas alternativas para o tratamento das infecções causadas por estes patógenos. Uma das drogas de escolha tem sido a vancomicina, porém já são relatados casos de susceptibilidade reduzida e de resistência a esta. Assim, este estudo objetivou caracterizar as espécies de ECN provenientes de hemoculturas de pacientes do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu quanto à detecção e expressão dos fatores de virulência, ao sistema agr envolvido na regulação da virulência e à susceptibilidade aos antimicrobianos / Abstract: Coagulase-negative staphylococci (CNS) are normal resident microbes of human skin, often isolated from clinical specimens. They are the major cause of bacteremia in inpatients, especially intensive care patients. Pathogenesis of infection caused by these organisms is complex and multifactorial, with several virulence factors involved in infection processes. Biofilm is key for CNS virulence, since it provides protection against the host's immune system and the action of antimicrobial agents. Staphylococcal toxins known as superantigens are antigenically classified as toxic shock syndrome toxin 1 (TSST-1) and enterotoxins. They trigger a chain of toxic effects by acting as potent gastrointestinal toxins and nonspecifically stimulating T cell proliferation. Staphylococcal regulatory systems, such as agr, may affect toxin and biofilm production through induction or repression of genes coding for virulence factor production specifically. In addition to virulence factors, increasing resistance rates to antimicrobial agents is also highly significant in nosocomial infections. Oxacillin-resistant strains leave few treatment alternatives for infection caused by these pathogens. Vancomycin has shown to be one drug of choice, although decreased susceptibility, as well as resistance, to vancomycin have been reported lately. Therefore, the aim of this study has been to categorize CNS species in blood culture specimens from inpatients at the UNESP Hospital das Clínicas in Botucatu, Brazil, as per detection and expression of virulence factors, agr system involved in virulence regulation, and susceptibility to antimicrobial agents / Doutor

Orientador: Douglas Roberto Monteiro / Coorientador: Alberto Carlos Botazzo Delbem / Banca: Farli Aparecida Carrilho Boer / Banca: Debora de Barros Barbosa / Resumo: O tirosol é uma molécula de quorum-sensing (QS) que participa do controle da morfogênese em Candida albicans. Contudo, seu efeito como agente antimicrobiano sobre biofilmes de Streptococcus mutans permanece desconhecido. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do tirosol em diferentes concentrações sobre a produção de ácido e formação de biofilmes por S. mutans ATCC 25175, bem como quantificar biofilmes pré-formados desta espécie desenvolvidos sobre espécimes de hidroxiapatita (HA) e tratados com tirosol. A concentração inibitória mínima (CIM) de tirosol sobre células no estado planctônico foi determinada de acordo com o método da microdiluição. Na sequência, biofilmes de S. mutans foram formados durante 48 horas sobre espécimes de HA na presença de diferentes concentrações de tirosol (11,25, 22,5, 50, 100 e 200 mmol l-1), usando saliva artificial como meio de cultura. Após, a produção de ácido foi avaliada através da mensuração do pH do meio, enquanto a formação de biofilmes foi determinada através da quantificação da biomassa total (BT), atividade metabólica (AM) e número de unidades formadoras de colônias (UFCs). Ainda, biofilmes pré-formados (24 horas) de S. mutans foram tratados com tirosol a 100 e 200 mmol l-1 por 1 minuto, duas vezes ao dia, durante três dias, totalizando biofilmes de 96 horas. Em seguida, a atividade antimicrobiana foi avaliada por meio da quantificação da BT, AM, número de UFCs e composição da matriz extracelular (proteínas e carboidratos). Gluconato de clorexidina (490 μmol l-1) foi usado como controle positivo. Os dados foram analisados por ANOVA a um critério, seguido pelos testes de Tukey e Holm-Sidak (α = 0,05). Microscopia eletrônica de varredura (MEV) foi utilizada na análise da estrutura dos biofilmes. A CIM de tirosol foi 90 mmol l-1. Tirosol em concentrações... / Abstract: Tyrosol is a quorum-sensing molecule (QS) that participates in the control of Candida albicans morphogenesis. However, its effect as an antimicrobial agent on Streptococcus mutans biofilms remains unknown. Thus, the aim of this study was to evaluate the effect of tyrosol at different concentrations on the acid production and biofilm formation by S. mutans ATCC 25175, as well as to quantify pre-formed biofilms of this species developed on hydroxyapatite (HA) specimens and treated with tyrosol. Minimum inhibitory concentration (MIC) of tyrosol against planktonic cells was determined in accordance with the microdilution method. Subsequently, S. mutans biofilms were formed during 48 hours on HA specimens in the presence of different concentrations of tyrosol (11.25, 22.5, 50, 100 and 200 mmol l-1), using artificial saliva as culture medium. Next, the acid production was assessed by pH determination of the medium, while the biofilm formation was determined through quantification of total biomass (TB), metabolic activity (MA) and number of colony-forming units (CFUs). Further, S. mutans pre-formed biofilms (24 h) were treated with tyrosol at 100 and 200 mmol l-1 twice a day for 1 min, during 3 days, totaling 96-h biofilms. Then, the antimicrobial activity was evaluated through quantification of TB, MA, number of CFUs and composition of biofilms' extracellular matrix (proteins and carbohydrates). Chlorhexidine gluconate (490 μmol l-1) was used as positive control. Data were analyzed by one-way ANOVA, followed by Tukey's and Holm-Sidak's tests (α = 0.05). Scanning electron microscopy (SEM) observations were performed in order to analyze biofilms' structure. MIC of tyrosol was 90 mmol l-1. Tyrosol at sub-inhibitory concentrations (11.25 and 22.5 mmol l-1) was not able to significantly reduce acid production by S. mutans biofilms. However, biofilms... / Mestre

Orientador: Carla Raquel Fontana Mendonça / Coorientador: Ana Marisa Fusco Almeida / Banca: Madalena Palomari Spolidorio / Banca: Juliana Cabrini Carmello / Banca: Eliane Trovatti / Banca: Cristiane Costa Quishida / Resumo: A necessidade de superar a resistência dos micro-organismos frente aos fármacos disponíveis, a fim de se chegar ao sucesso terapêutico leva a uma constante exploração de novas abordagens para este fim. Os sistemas de efluxo multidrogas tem sido um profundo obstáculo para uma terapêutica bem-sucedida utilizando-se antimicrobianos existentes hoje no mercado. A descoberta de bloqueadores desses sistemas complementa estudos envolvendo terapias nãoconvencionais, como a Terapia Fotodinâmica Antimicrobiana (Antimicrobial Photodynamic Therapy - aPDT). Este estudo teve como objetivo avaliar a aPDT mediada pelo azul de metileno (AM) associada com inibidores de bomba de efluxo em diferentes espécies microbianas. Para isso, foram utilizados como inibidor o verapamil, em biofilmes de Escherichia coli e Staphylococcus aureus, e verapamil e farnesol para Candida albicans. A determinação da combinação ideal de Inibidor/AM foi feita através do cruzamento de diferentes concentrações dos compostos, de tal forma que todas as combinações possíveis fossem avaliadas, nas concentrações previamente determinadas através da concentração inibitória mínima. O metabolismo celular para todas as condições experimentais foi avaliado por meio do ensaio de redução do XTT. As combinações onde foram verificadas a redução de 80% no metabolismo foram plaqueadas e a contagem de células (UFC/ml) determinada. Os resultados obtidos permitiram observar que para E. coli, foram necessárias uma dose maior de luz (44 J/cm2... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Conventional antimicrobials are mostly ineffective due to emerging antimicrobial resistance acquired by pathogenic micro-organisms. The need to overcome this resistance to reach therapeutic success has led to exploration of new approaches. Multidrug efflux systems have been a profound obstacle to achieve success in some specific cases with the available antibiotics today. The discovery of efflux pump inhibitors systems can act as an adjuvant to alternative therapies such as Antimicrobial Photodynamic Therapy (aPDT). This study aimed to evaluate the association of aPDT mediated by methylene blue (MB), with efflux pump inhibitors in different microbial species. Verapamil was used as an inhibitor in biofilm of Escherichia coli and Staphylococcus aureus, and verapamil and farnesol were expected to block the pumps for Candida albicans. The determination of the optimal combination of Inhibitor/MB was carried out by crossing different concentrations of the compounds. Cell metabolism for all experimental conditions was assessed by XTT reduction assay. The combinations where 80% of metabolism reduction was observed, cells were plated and colony count units (cfu/ml) determined. The E. coliresults showed requirement of higher light dose (44 J/cm2 ) and a lower concentration of verapamil (215 μg/mL) to achieve reduction of 3.4 log10 (CFU/mL). Compared to S. aureus, a lower dose of light (22 J/cm2 ) was needed, and a higher concentration of verapamil (312 μg/mL), was necessary to obtain reduction of 3.65 log10 (CFU/ml). For C. albicans, verapamil presented lower reduction of biofilm viable cells compared to farnesol. Setting the same light dose (44 J/cm2 ), the combination verapamil/MB: 215/400 showed reduction of 2,82 log10 (CFU/mL) and farnesol/MB: 22/200 determined reduction of 3.82 log10 (CFU/mL). Briefly, aPDT mediated MB, associated with an efflux pump... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Alberto Carlos Botazzo Delbem / Coorientador: Juliano Pelim Pessan / Coorientador: Douglas Roberto Monteiro / Banca: Robson Frederico Cunha / Banca: Denise Pedrini Ostini / Banca: Marília Afonso Rabelo Buzalaf / Resumo: O presente estudo teve como objetivo verificar o efeito do hexametafosfato de sódio (HMP), associado ou não ao fluoreto (F), sobre a composição orgânica, inorgânica e no pH do biofilme mistos de S. mutans e C. albicans formados in vitro. Para todos os estudos, os biofilmes foram formados em poços de placas de microtitulação, colocando uma suspensão (1x107 células/mL C. albicans + 1x108 células/mL S. mutans) em saliva artificial suplementada com sacarose (0,4%), a qual tinha metade de seu conteúdo renovada a cada 24 horas. Os biofilmes foram tratados três vezes (72, 78 e 96 horas de formação), por um minuto, com soluções contendo HMP (0.25, 0.5 ou 1%) com ou sem 500 ppm F, além de soluções contendo 500 e 1100 ppm F. A saliva artificial foi utilizada como controle negativo. Para o estudo microbiológico, após o terceiro tratamento foram realizados os testes de quantificação de células cultiváveis (CFU), biomassa total (teste colorimétrico de cristal violeta - CV), atividade metabólica (redução de XTT) e quantificação dos componentes da matriz extracelular (proteína, carboidrato e ácidos nucleicos). Todos os ensaios foram realizados em triplicata, em três ocasiões diferentes. Os resultados foram submetidos à análise de variância a um critério, seguida pelo teste Fisher LSD (p <0.05). O HMP apresentou efeito redutor principalmente na biomassa, metabolismo e nos componentes da matriz extracelular do biofilme. Biofilmes formados por 96 h formam expostos a três diferentes concentraçõ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of the present study was to verify the effect of sodium hexametaphosphate (HMP), associated or not to fluoride (F), on the inorganic, organic composition and pH of the mixed biofilm of S. mutans and C. albicans, formed in vitro. For all studies, the biofilms were formed in wells of microtiter plates by placing a suspension (1 x 107 cells/mL C. albicans + 1x108 cells/mL S. mutans) in artificial saliva supplemented with sucrose (0,4%), which had half of its content renewed every 24 hours. Biofilms were treated three times (72, 78 and 96 hours of formation), for one minute, with solutions containing HMP (0.25, 0.5 or 1%) with or without 500 ppm F, as well as solutions containing 500 and 1100 ppm F. Artificial saliva was used as a negative control. For the microbiological study, the following tests were performed: quantification of cultivable cells (UFC), total biomass (colorimetric crystal violet test - CV), metabolic activity (XTT reduction) and quantification of matrix components (protein, carbohydrate and nucleic acid). All assays were performed in triplicate on three different occasions. The results were submitted to one-way analysis of variance, followed by the Fisher LSD's test (p <0.05). HMP showed a reducing effect mainly on the biomass, metabolism and components of the extracellular matrix of the biofilm. Biofilms formed for 96 h were exposed to three different concentrations of sucrose (10, 20 or 30%) for 1, 3 or 5 min. The pH was measured before exposure to su... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Ana Lucia Machado / Banca: Francisco Assis de Mollo Jr / Banca: Luiz Antonio Borelli Barros / Banca: Rogério Margonar / Banca: Raphael Freitas de Souza / Resumo:Os materiais odontológicos atuam como substrato para a adesão dos microrganismos e, consequentemente, desenvolvimento do biofilme. Tendo em vista que as características de superfície dos materiais podem interferir na adesão inicial, alterações dessas características podem prevenir ou diminuir a adesão de bactérias e fungos, evitando assim, o desenvolvimento da doença. Outro aspecto a ser considerado é que, na cavidade oral, as superfícies são recobertas pela saliva, formando um fino filme denominado película adquirida. Para simular as condições bucais, os estudos in vitro têm utilizado o condicionamento prévio em saliva humana antes da formação do biofilme. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da deposição de filmes polimerizados a plasma a partir do composto organometálico hexametildisiloxano (HMDSO), nas características de superfície de materiais odontológicos (titânio, zircônia e resina acrílica), bem como na formação de biofilmes sobre esses materiais, com e sem armazenamento em saliva humana. Para isso, o HMDSO foi utilizado no processo PECVD (Plasma Enhanced Chemical Vapor Deposition) para a deposição de filmes nas superfícies dos corpos de prova, de maneira que resulte na formação de filmes com características hidrofóbicas ou hidrofílicas. Corpos de prova de cada um dos materiais foram mantidos sem deposição de filmes (grupos controles). A caracterização dos filmes obtidos foi realizada através de espectroscopia no infravermelho (FTIR), microscopia eletrônica de varredura (MEV), medida de ângulos de contato e energia de superfície, espectroscopia de fotoelétrons de raios-X (XPS) e perfilometria. Para avaliação da 13 formação de biofilmes, metade dos corpos de prova (10 × 2 mm) dos grupos experimentais e controles foram armazenados em saliva humana previamente preparada e, posteriormente, incubados com 1 × 107 ...(Resumo completo clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Dental materials act as substrates for the adhesion of microorganisms, and consequently, for biofilm development. Given that the surface characteristics of materials may interfere in the initial adhesion, changes in these characteristics may inhibit or reduce the adhesion of bacteria and fungi, thus preventing the development of diseases. Another aspect to consider is that, in the oral cavity, surfaces are covered with saliva, forming a thin film referred to as acquired salivary pellicle. In order to simulate oral conditions, in vitro studies have used preconditioning in human saliva before biofilm formation. Thus, the aim of this study was to evaluate the effect of plasma polymerized films on the surface characteristics of dental materials (acrylic resin, titanium and zirconia), as well as on the biofilm formation on these materials, with and without preconditioning in human saliva. For this purpose, the monomer hexamethyldisiloxane HMDSO was used as precursor in the PECVD (Plasma Enhanced Chemical Vapor Deposition) process. Deposition parameters were varied to produce a range of films with hydrophobic or hydrophilic characteristics. Specimens of each material without film deposition were used as controls. Characterization of the films was performed by Fourier Transformed infrared spectroscopy (FTIR), scanning electron microscopy (SEM), contact angle measurements and surface free energy, X-ray photoelectron spectroscopy (XPS), and profilometry. To evaluate biofilm formation, half of the test specimens (10 × 2 mm) of the experimental and control groups were stored in previously prepared 16 human saliva and afterwards incubated with 1 × 107 cells/mL of both Candida albicans (for acrylic resin) and Porphyromonas gingivalis (for titanium and zirconia). Samples without preconditioning in saliva were also incubated in the respective microorganisms... (Complete abstract electronic access below) / Doutor