Orientador: Cristiane Duque / Coorientador: AiméeMaria Guiotti / Banca: Marcelle Danelon / Banca: Aline Rogéria Freire de Castilho / Resumo: Embora o tratamento endodôntico convencional reduza significativamente a microbiota presente no interior dos canais radiculares, a permanência de microrganismos devido à complexidade anatômica do sistema de canais radiculares e a resistência destes ao tratamento químico-mecânico pode ocasionar infecções persistentes ou secundárias. Muitos estudos têm explorado o uso de fitoquímicos, buscando obter novos compostos que apresentem propriedades farmacológicas. A curcumina, pigmento amarelo isolado dos rizomas da Curcuma longa (Zingiberaceae), e o cinamaldeido, substância volátil responsável pelo odor e sabor das cascas dos caules de plantas do gênero Cinnamomum (Lauraceae) são possíveis substâncias promissoras. O objetivo do estudo foi avaliar o efeito citotóxico e ação antimicrobiana/antibiofilme de compostos híbridos de curcumina e cinamaldeído sobre microrganismos de interesse endodôntico. Foram realizados ensaios para determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (CBM) do cinamaldeído, da curcumina e dos 23 híbridos sobre Enterococcus faecalis, Streptococcus mutans, Lactobacillus casei, Actinomyces israelii e Fusobacterium nucleatum. Os melhores compostos foram avaliados em ensaios de biofilme simples (cada cepa bacteriana isoladamente) e dual-espécies (E. faecalis + L. casei, E. faecalis + S. mutans, E. faecalis + A. israelii, E. faecalis + F. nucleatum) em placas de poliestireno objetivando-se determinar o efeito sobre o metabolismo ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Although conventional endodontic treatment significantly reduces the microbiota present inside the root canals, the permanence of microorganisms due to the anatomical complexity of the root canal system and their resistance to chemical-mechanical treatment can lead to persistent or secondary infections. Many studies have explored the use of phytochemicals, seeking to obtain new compounds that present pharmacological properties. Curcumin, a yellow pigment isolated from Curcuma longa rhizomes (Zingiberaceae), and cinnamaldehyde, the volatile substance responsible for the odor and taste of plant stems of the genus Cinnamomum (Lauraceae) are possible promising substances. The objective of the study was to evaluate the cytotoxic effect and antimicrobial action / antibiofilm of hybrid compounds of curcumin and cinnamaldehyde on microorganisms of endodontic interest. The minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bacterial concentration (MBM) of cinnamaldehyde, curcumin and 23 hybrids on Enterococcus faecalis, Streptococcus mutans, Lactobacillus casei, Actinomyces israelii and Fusobacterium nucleatum were determined. The best compounds were evaluated on single biofilms (single bacterial strain) and dual-species biofilms (E. faecalis + L. casei, E. faecalis + S. mutans, E. faecalis + A. israelii, E. faecalis + F. nucleatum) in polystyrene plates to determine the effect on bacterial metabolism using the XTT assay and its viability by counting Colony Forming Units (CFUs) after ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Ary Fernandes Júnior / Resumo: A busca por novos fármacos é uma constante, especialmente para aqueles obtidos a partir de produtos naturais, que apresentem melhor eficácia e vários efeitos terapêuticos. A própolis e o veneno (apitoxina) da abelha Apis mellifera, além da melitina, uma fração da apitoxina, possuem ação antimicrobiana reportada na literatura. As ações antibacterianas do extrato hidroalcoólico de própolis (EHP), de apitoxinas obtidas das abelhas Apis mellifera submetidas a floras apícolas diferentes (Api 1 - flora apícola silvestre, Api 2 - flora apícola de eucalipto, Api 3 - flora apícola de laranjeira, Api 4 - flora apícola silvestre associada com alimentação artificial) e de melitina foram testadas sobre isolados clínicos de Staphylococcus aureus resistentes à meticilina (MRSA) utilizando metodologia da microdiluição (Resazurin Microtiter Assay Plate – REMA) para obtenção dos respectivos valores de concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM). Ensaios também foram realizados para verificação de sinergismo entre o EHP, as diferentes apitoxinas e a melitina em combinação com a oxacilina sobre uma linhagem de MRSA ATCC e um isolado clínico de MRSA utilizando metodologia da curva de sobrevivência (time kill curve). Foram realizados ensaios inéditos objetivando verificar também se a Api 1 e melitina inibem a produção de enterotoxinas sobre cepas ATCC de S. aureus SEA, SEB, SEC, SED e se inibem a produção de biofilme sobre a cepa ATCC de S. aureus. A microscopia el... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Orientador: Vera Lúcia Mores Rall / Abstract: Salmonella spp. é uma bactéria entérica, responsável por graves doenças de origem alimentar e um dos principais agentes envolvidos em surtos no mundo todo. A contaminação ocorre, principalmente pelo consumo de carne de frango e ovos, uma vez que esses animais podem ser portadores de vários sorovares patogênicos para o homem. O objetivo do estudo foi avaliar o potencial patogênico de 40 cepas de Salmonella spp., isoladas de esteiras de um abatedouro de aves, por testes fenotípicos de adesão, invasão e produção de biofilme e análise genotípica da presença de vários genes relacionados com fatores de virulência, além de verificar sua persistência no ambiente e sua susceptibilidade a antimicrobianos por disco-difusão. Foi observada resistência à tetraciclina (17,5%) ampicilina (10%), cefotaxima (7,5%), cotrimoxazol (5%) e cloranfenicol (2,5%). Todas as cepas apresentaram os genes invA, sipB, sipD, ssaR, sifA, sitC, iroN, tolC, flgK, fljB e flgL. Os genes sopB e sipA estavam presentes em 92,5% dos isolados, enquanto sopD e spvB foram observados em 90% e 32,5% das cepas, respectivamente. Todos os isolados aderiram e invadiram células HeLa, com índice de invasão variando de 1,4 a 73,8%. Com relação à produção de biofilme, 31 (77,5%) cepas foram capazes de produzir biofilme em microplacas de poliestireno. Pela técnica de eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE), detectou-se a persistência de clones no ambiente por até 18 semanas, entre as 20 amostradas. Não foi possível o estabelec... (Complete abstract click electronic access below) / Resumo: Salmonella spp. is an enteric bacterium responsible for serious foodborne disease, being one of the main agents involved in outbreaks worldwide. Contamination occurs mainly by poultry and egg consumption once these animals carry some pathogenic serotypes for the human being. Our aim was to evaluate the pathogenic potential of 40 strains of Salmonella spp., isolated from poultry slaughterhouse mats, by adhesion and invasion phenotypic tests, and biofilm production, and genotypic analysis to identify genes related to virulence factors, besides we verified its environment persistence and its antimicrobial susceptibility by disc-diffusion. We observed resistance to tetracycline (17.5%), ampicillin (10%), cefotaxime (7.5%), cotrimoxazole (5%) and chloramphenicol (2.5%). All strains possessed invA, sipB, sipD, ssaR, sifA, sitC, iroN, tolC, flgK, fljB and flgL genes. The genes sopB and sipA was present in 92.5% of the isolates, while sopD and spvB were observed in 90% and 32.5% of the strains, respectively. All strains adhered and invaded HeLa cells, with invasion index varying from 1.4 to 73.8%. Regarding to biofilm production, 31 (77.5%) strains were able to produce biofilm on polystyrene microplates. The Pulsed-field gel electrophoresis technique (PFGE) detected the existence of clones in the environment for up to 18 weeks, among de 20 sampled. It was not possible to establish a correlation between adhesion and invasion rates and the presence/absence of effector protein coding ge... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Orientador: Juliana Campos Junqueira / Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Silvana Soléo Ferreira dos Santos / Banca: Renata de Oliveira Mattos Graner / Banca: Maria José Soares Mendes Gianinni / Resumo: O estudo da atividade inibitória de Lactobacillus pode contribuir na descoberta de novas estratégias terapêuticas nas infecções por Candida. Nesse contexto, o objetivo desse estudo foi isolar e identificar Lactobacillus da cavidade bucal de indivíduos livres de cárie e avaliar seu potencial de inibição de C. albicans por meio de estudos in vitro e in vivo. Primeiramente, foram avaliados os efeitos de 30 isolados clínicos de Lactobacillus sobre o número de células viáveis (UFC) em biofilme de C. albicans e sobre a formação de hifas. Os isolados que obtiveram os maiores efeitos inibitórios sobre C. albicans foram selecionados para os testes de determinação da biomassa total dos biofilmes pela absorbância do cristal violeta, análise da arquitetura dos biofilmes por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e quantificação da expressão de genes de C. albicans (ALS3, HWP1, EFG1 e CPH1) por qPCR. Esses isolados também foram submetidos a estudos in vivo usando os modelos de Galleria mellonella e Caenorhabditis elegans. Para o estudo em G. mellonella, a infecção experimental foi avaliada pela curva de sobrevivência, quantificação da carga fúngica na hemolinfa, densidade hemocitária, quantificação da expressão gênica de peptídeos antifúngicos (Gallerymicina e Galiomicina) e monitoramento da infecção de C. albicans por análise de bioluminescência. No modelo de C. elegans, a infecção foi avaliada por meio dos ensaios de curva de sobrevivência e estudo da filamentação de C. albicans. Os ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The study of the antifungal activity of Lactobacillus may contribute to the discovery of new therapeutic strategies for Candida infections. In this context, the objective of this study was to isolate and identify Lactobacillus from the oral cavity of caries-free subjects and to evaluate its effects through in vitro and in vivo studies. First, the effects of 30 clinical isolates of Lactobacillus on the number of viable cells (CFU) in biofilms of C. albicans and on hyphae formation were evaluated. The isolates that obtained the highest inhibitory effects on C. albicans were selected for biofilm biomass determination by violet crystal absorbance, analysis of biofilm architecture by scanning electron microscopy (SEM) and quantification of the expression of C. albicans (ALS3, HWP1, EFG1 and CPH1) by real time PCR. These isolates were also submitted to in vivo studies using the Galleria mellonella and Caenorhabditis elegans models. For the study in the model of Galleria mellonella, the experimental infection was evaluated by the survival curve, quantification of the fungal load in the hemolymph, hemocitary density, the gene expression of antifungal peptides (Gallerymicin and Galiomicin) and monitoring of C. albicans infection by bioluminescence analysis. In the Caenorhabditis elegans model, the infection was evaluated by the survival curve assays and the study of C. albicans filamentation. The results of in vitro tests demonstrated that L. paracasei 28.4, L. rhamnosus 5.2 and L. fe... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / O estudo de lectinas de algas marinhas aponta para a possibilidade de se isolar substÃncias com caracterÃsticas Ãmpares, que poderiam contribuir para os estudos da aplicaÃÃo de substÃncias com atividades biolÃgicas nas Ãreas das ciÃncias biomÃdicas. O presente estudo constou da purificaÃÃo e caracterizaÃÃo parcial de duas novas lectinas presentes nas algas marinhas verdes Udotea flabellum, aqui denominada de UFL e da Codium isthmocladum, denominada de CiL-3, respectivamente. AlÃm da avaliaÃÃo da toxicidade em naÃplios de Artemia e das atividades antibacterianas de crescimento planctÃnico, formaÃÃo de biofilmes e a agregaÃÃo de bactÃrias Gram-positivas Staphylococcus aureus e S. epidermidis e a Gram-negativa Escherichia coli. O isolamento de lectinas foi obtido por uma combinaÃÃo de diferentes tÃcnicas de purificaÃÃo. UFL mostrou especificidade para eritrÃcitos de coelho tratados com enzimas proteolÃticas, tripsina e papaÃna. Aglutinou eritrÃcitos humanos do sistema ABO e nÃo foi inibida por aÃÃcares simples, apenas pelas glicoproteÃnas mucina de estÃmago de porco (PSM) e tiroglobulina. Exibiu uma Ãnica banda com massa molecular aparente de 60 kda e duas distintas bandas protÃicas com massa molecular de 29 e 20 kDa. TermoestÃvel, os valores mais altos de atividade hemaglutinante foram no pH 6, nÃo dependente de cÃtions divalentes, sem glicolisaÃÃes, atÃxica contra naÃplios de Artemia sp. NÃo foi capaz de inibir o crescimento planctÃnico e diminuir a biomassa do biofilme de S. aureus, no entanto, mostrou uma fraca inibiÃÃo para S. epidermidis, nÃo apresentou reduÃÃo significativa no nÃmero de cÃlulas viÃveis das bactÃrias Gram-positivas e tambÃm nÃo causou aglutinaÃÃo nas bactÃrias. No que diz respeito a lectina isolada de Codium, a atividade hemaglutinante da CiL-3 mostrou ser ativa apenas para eritrÃcitos de coelho tratados com enzimas proteolÃticas, nÃo sendo capaz de aglutinar eritrÃcitos de coelho nativo e humanos do sistema ABO, foi inibida pelo aÃÃcar simples rafinose e a glicoproteÃna mucina, apresentou como uma Ãnica banda de aproximadamente 20 kDa. Relativamente termoestÃvel, a atividade hemaglutinante foi mais elevada em pH 5, nÃo dependÃncia de cÃtions divalentes. Todas as lectinas isoladas de Codium isthmocaldum (CiL-1, CiL-2 e CiL-3) foram capazes de diminuir a biomassa do biofilme de S. aureus, somente a CiL-2 apresentou inibiÃÃo para S. epidermidis e foi capaz de apresentar reduÃÃo no nÃmero de cÃlulas viÃveis. Embora a CiL-3 nÃo tenha apresentado aglutinaÃÃo para as cÃlulas de Escherichia coli, a lectina foi capaz de aglutinar cÃlulas formadora do biofilmes de S. aureus e S. epidermidis. / O estudo de lectinas de algas marinhas aponta para a possibilidade de se isolar substÃncias com caracterÃsticas Ãmpares, que poderiam contribuir para os estudos da aplicaÃÃo de substÃncias com atividades biolÃgicas nas Ãreas das ciÃncias biomÃdicas. O presente estudo constou da purificaÃÃo e caracterizaÃÃo parcial de duas novas lectinas presentes nas algas marinhas verdes Udotea flabellum, aqui denominada de UFL e da Codium isthmocladum, denominada de CiL-3, respectivamente. AlÃm da avaliaÃÃo da toxicidade em naÃplios de Artemia e das atividades antibacterianas de crescimento planctÃnico, formaÃÃo de biofilmes e a agregaÃÃo de bactÃrias Gram-positivas Staphylococcus aureus e S. epidermidis e a Gram-negativa Escherichia coli. O isolamento de lectinas foi obtido por uma combinaÃÃo de diferentes tÃcnicas de purificaÃÃo. UFL mostrou especificidade para eritrÃcitos de coelho tratados com enzimas proteolÃticas, tripsina e papaÃna. Aglutinou eritrÃcitos humanos do sistema ABO e nÃo foi inibida por aÃÃcares simples, apenas pelas glicoproteÃnas mucina de estÃmago de porco (PSM) e tiroglobulina. Exibiu uma Ãnica banda com massa molecular aparente de 60 kda e duas distintas bandas protÃicas com massa molecular de 29 e 20 kDa. TermoestÃvel, os valores mais altos de atividade hemaglutinante foram no pH 6, nÃo dependente de cÃtions divalentes, sem glicolisaÃÃes, atÃxica contra naÃplios de Artemia sp. NÃo foi capaz de inibir o crescimento planctÃnico e diminuir a biomassa do biofilme de S. aureus, no entanto, mostrou uma fraca inibiÃÃo para S. epidermidis, nÃo apresentou reduÃÃo significativa no nÃmero de cÃlulas viÃveis das bactÃrias Gram-positivas e tambÃm nÃo causou aglutinaÃÃo nas bactÃrias. No que diz respeito a lectina isolada de Codium, a atividade hemaglutinante da CiL-3 mostrou ser ativa apenas para eritrÃcitos de coelho tratados com enzimas proteolÃticas, nÃo sendo capaz de aglutinar eritrÃcitos de coelho nativo e humanos do sistema ABO, foi inibida pelo aÃÃcar simples rafinose e a glicoproteÃna mucina, apresentou como uma Ãnica banda de aproximadamente 20 kDa. Relativamente termoestÃvel, a atividade hemaglutinante foi mais elevada em pH 5, nÃo dependÃncia de cÃtions divalentes. Todas as lectinas isoladas de Codium isthmocaldum (CiL-1, CiL-2 e CiL-3) foram capazes de diminuir a biomassa do biofilme de S. aureus, somente a CiL-2 apresentou inibiÃÃo para S. epidermidis e foi capaz de apresentar reduÃÃo no nÃmero de cÃlulas viÃveis. Embora a CiL-3 nÃo tenha apresentado aglutinaÃÃo para as cÃlulas de Escherichia coli, a lectina foi capaz de aglutinar cÃlulas formadora do biofilmes de S. aureus e S. epidermidis.

Orientador: Luana Marotta Reis de Vasconcellos / Resumo: Os cimentos de silicatos de cálcio (CaSiO3) podem ser utilizados em tratamentos de reparo ósseo, tanto para aplicações médicas quanto odontológicas. A fim de atender às necessidades da engenharia de tecidos e aprimorar o leque de opções foram produzidos três cimentos de silicatos de cálcio utilizando α-wollastonita como precursora, juntamente com soluções ativadoras com potencial hidrogeniônico neutro, com três diferentes cátions, Na+, K+ e NH4+. A topografia superficial dos cimentos foi analisada por microscopia eletrônica de varredura com canhão de emissão por campo (MEV-FEG). Estudos in vitro, in vivo, relacionados a capacidade de interação com microrganismos e testes biomecânicos foram realizados para avaliar a influência de diferentes soluções ativadoras de fosfato e carbonato nos cimentos produzidos. Nos testes in vitro foram utilizadas células mesenquimais provenientes de fêmures de ratos. Após períodos pré-determinados foram realizados os testes de viabilidade celular, conteúdo de proteína total (PT), atividade de fosfatase alcalina (ALP) e formação de nódulos de mineralização. Para análise da interação microbiana a formação dos biofilmes monotípicos de S. aureus, P. aeruginosa e C. albicans foi mensurada. Posteriormente, os cimentos obtidos, a base de silicato de cálcio, foram submetidos ao estudo in vivo utilizando 20 ratos Wistars que passaram por procedimento cirúrgico para confecção de um defeito crítico de 3,0 mm nas tíbias direita e esquerda. Após a eutanásia, ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Calcium silicate cements (CaSiO3) can be used in bone repair treatments, both for medical and dental applications. In order to meet the needs of tissue engineering and improve the range of options, three calcium silicate cements were produced using αwollastonite as a precursor, with an activating solution of neutral potential hydrogen ionic, made of three different cations Na+, K+ and NH4 +. A superficial topography of the cements was analyzed by Field Emission Gun Scanning Electron Microscopy (SEMFEG). In vitro, in vivo studies related to the ability to interact with microorganisms and biomechanical tests were carried out to evaluate the influence of different phosphate and carbonate activating solutions in the cements produced. In in vitro tests, mesenchymal cells from rat femurs were used. After predetermined periods, cell viability tests, total protein content (PT), alkaline phosphatase activity (ALP) and formation of mineralization nodules were performed. For the analysis of microbial interaction, the formation of monotypic biofilms from S. aureus, P. aeruginosa and C. albicans was measured. Subsequently, the obtained cements, based on calcium silicate, were subjected to an in vivo study using 20 Wistars rats that underwent a surgical procedure to make a 3.0 mm critical defect in the right and left tibiae. After euthanasia, the pieces were submitted to histological, histomorphometric analysis and biomechanical flexion test of three points. The data obtained were statisti... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

As dificuldades do reprocessamento dos endoscópicos gastrointestinais, o risco de contaminação e os casos de infecções representam desafios amplamente conhecidos na comunidade cientifica. Neste sentido, investigou-se o reprocessamento de endoscópios gastrointestinais subsidiado nos níveis de sujidade, contaminação microbiana e presença de biofilme. Trata-se de um experimento laboratorial realizado em três fases por meio da bioluminescência com adenosina trifosfato (ATP) para avaliação do nível de sujidade; polimerase chain reaction (PCR) para carga bacteriana e cultura microbiana para determinação do nível de contaminação. Ainda, avaliou-se as superfícies internas de canais de endoscópios por microscopia eletrônica de varredura (MEV) quanto à presença de biofilme. A análise estatística dos dados foi subsidiada em medidas de tendência central, testes de Man-Whitney, Wilcoxon e Spearman, p<0,05, por meio do software IBM SPSS Statistics versão 23.0. A avaliação de 99 endoscópios antes e após limpeza manual demonstrou a eficácia do processo na redução de sujidade (p<0,001) e contaminação microbiana (p=0,03), inclusive com baixo percentual da amostra com micro-organismos viáveis. Dos 75 endoscópios avaliados após o reprocessamento evidenciou-se uma redução do nível de sujidade (todos com <50URL, interna e externamente); entretanto a presença de carga bacteriana foi de 3log de bactéria/mL e 10,6% de positividade das culturas. Os micro-organismos isolados dos lavados de endoscópios após o reprocessamento foram Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus hominis, Staphylococcus capitis, Roseomonas gilardii e Micrococcus luteus. Na avaliação dos canais de biópsia de endoscópios provenientes do Brasil observou-se maior contaminação do que os da Austrália (p<0,001). Todos os canais apresentaram biofilme e danos em suas superfícies, entretanto as amostras brasileiras apresentaram particularidades, como, presença de hemácias, neutrófilos e fungos. Assim, observou-se que apesar da baixa carga microbiana nos endoscópios há o risco potencial de infecção cruzada associado ao biofilme, ameaçando a qualidade e segurança do reprocessamento. Adiciona-se a necessidade de avanços tecnológicos e científicos contra o biofilme na prática do reprocessamento de endoscópios / The difficulties on gastrointestinal endoscope reprocessing, contamination risk and outbreaks are a recognized challenge in science. It was investigated gastrointestinal endoscope reprocessing for dirtiness, contamination level and presence of biofilm. Laboratorial experiment performed in three phases using adenosine triphosphate (ATP) bioluminescence for dirtiness evaluation; polymerase chain reaction (PCR) for bacterial load and microbial culture for contamination level evaluation. In addition, it was evaluated biofilm on endoscope channels internal surfaces by scanning electron microscopy (SEM). Statistics analysis was performed by descriptive analysis, ManWhitney, Wilcoxon and Spearman tests, p<0,05, using IBM SPSS Statistics versão 23.0. Before and after cleaning analysis of 99 endoscopes showed it efficacy on reducing dirtiness (p<0,001) and microbial contamination level (p=0,03), including a small percentage of culturable microorganism. From 75 endoscopes tested after reprocessing demonstrated dirtiness level reduction (all samples <50RUL, from internal and external area); but, also, presence of bacterial load of 3 log of bacteria/mL and 10,6% of culture positive. The microorganisms isolated from endoscope flush after reprocessing were Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus hominis, Staphylococcus capitis, Roseomonas gilardii and Micrococcus luteus. Endoscope biopsy channel analysis showed that samples from Brazil had higher contamination level than the ones from Australia (p<0,001). All channels analyzed presented biofilm and damage on their surfaces, however Brazilian samples showed particularities, like, blood cells, neutrophils and fungus. So, ever with low microbial load on endoscopes there is a potential risk of crossinfection associated with biofilm, compromising reprocessing quality and safety. Additionally, there´s the need of scientific and technologic improvement on endoscope reprocessing against biofilm

Orientador: Daniela Cardoso Umbelino Cavallini / Coorientador: Carla Raquel Fontana / Banca: Juliana Cabrini Carmello / Banca: Marlus Chorilli / Resumo: Os microrganismos probióticos associados a produtos alimentícios já são amplamente utilizados para a manutenção da saúde e redução do risco de certas doenças. Nesse contexto, diversos estudos mostram que cepas probióticas específicas têm grande potencial de manutenção e melhora da saúde oral, apresentando atividade anticariogênica, redução da halitose e prevenção de infecções oportunistas, como a candidose, frequentemente presente em indivíduos imunocomprometidos. Essas condições patogênicas apresentadas estão relacionadas à formação e estabelecimento de biofilmes na cavidade oral. As infecções provenientes de biofilmes são duradouras, altamente resistentes à farmacoterapia e de difícil eliminação. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi obter filmes orodispersíveis (ODF) contendo cepa probiótica Enterococcus faecium CRL 183, avaliando sua capacidade de inibir a formação e/ou maturação de biofilme de Candida albicans in vitro. Essa cepa foi selecionada devido as suas características de cultivo, informações disponíveis sobre efeito probiótico, segurança e caráter inovador, pois não há na literatura informações sobre a atividade antifúngica dessa cepa na cavidade oral. A segurança da cepa probiótica foi avaliada através do teste susceptibilidade a antimicrobianos. Para testar a capacidade de inibição de biofilmes de C. albicans in vitro foram formados biofilmes polimicrobianos (C. albicans + E. faecium), em diferentes proporções de fungo: probiótico (1:1; 1:10; 1:... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Probiotic microorganisms associated with food are already widely used to maintain health and reduce risk of certain diseases. In this context, several studies show that certain probiotic strains have great potential for maintenance and improvement of oral health, presenting anticariogenic activity, reduction of halitosis and prevention of opportunistic infections, such as candidiasis, often present in immunocompromised individuals. These pathogenic conditions are related to formation and establishment of biofilms in the oral cavity. Infections caused by biofilms are long-lasting, highly resistant to pharmacotherapy and difficult to eliminate. Thus, the objective of the present study is to obtain orodispersible films (ODF) containing Enterococcus faecium CRL 183, evaluating its capacity of inhibiting the formation and / or maturation of Candida albicans biofilms in vitro. This strain was selected due to its cultivation characteristics, available information on probiotic effect and safety and innovative character, as there is no information on the antifungal activity of this strain in the oral cavity. The safety of the probiotic strain was evaluated by antimicrobial susceptibility test. In order to test the ability to inhibit the formation of C. albicans biofilms in vitro, combined polymicrobial biofilms (C. albicans + E. faecium) with different proportions of opportunistic pathogens: probiotic were formed (1: 1, 1:10, 1: 100), during the formation (24 hours) and maturation (48... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

De acordo com a Food and Agriculture Organization of the United Nations (FAO, 2013), o consumo mundial de carne de frango tem aumentado de maneira significativa nas últimas décadas. Por outro lado, a preocupação dos produtores de alimentos, com a inocuidade de seus produtos também tem aumentado na mesma proporção. Durante as etapas da operação de abate de maneira geral, as contaminações cruzadas são as principais causas de disseminação de microrganismos patogênicos nos produtos obtidos e causadores de gastroenterites no consumidor. Espécies da enterobactéria Salmonella se enquadram como um dos maiores riscos desse tipo de doença devido a sua associação com os inúmeros surtos ocorridos a nível mundial, após o consumo desses produtos. Algumas enterobactérias possuem um gene blaKPC, que codifica a enzima carbapenemase, que confere resistência a antibióticos carbapenêmicos, agravando mais a situação. Alguns fatores de virulência encontrados nesse gênero de bactéria podem ainda estar associados a capacidade de adesão e formação de biofilmes em superfícies inertes, dificultando operações de higienização nas linhas de processamento. Assim sendo, a presente pesquisa objetivou a verificação da capacidade de estirpes de Salmonella spp isoladas de aviário e linha de abate de frangos de um frigorífico no estado do Rio Grande do Sul produzirem biofilmes e apresentarem resistência a antibióticos carbapenêmicos. Na avaliação da produção de biofilme, foi empregada a técnica de microplacas de polietileno e produção de cápsula segundo Stepanovic et al. (2004) e Rodrigues et al. (2006), respectivamente.Foram pesquisados os fatores de virulência de salmonelas, representados pelos genes IpfA, agfA, sefA, invA, hilA, avrA, sopE, sivH,e spvC, utilizando o método de Reação de cadeia de Polimerase (PCR), descrita por Borges et al. (2013). As estirpes foram submetidas ao teste de resistência a antibióticos carbapenêmicos pelo método de disco difusão com carbapenêmicos segundo Clinical and Laboratory Standards Institute-CLSI (2010) e pesquisa do gene de resistência a carbapenêmicos blaKCP, pela técnica de PCR, segundo NAAS et al. (2007). Obteve-se quatro perfis genéticos das estirpes de Salmonella spp.: perfil 1: genes ifpA, agfA, invA e avrA; perfil2: genes ifpA, agfA, sefA, invA e avrA; perfil 3: genes invA e avrA; perfil4: genes ifpA,agfA e invA. Observou-se a resistência das estirpes somente ao antibiótico imipenen. Entre as 36 estirpes de Salmonella spp. isoladas, todas foram consideradas produtoras de biofilme in vitro, sendo que 69% destas, apresentaram-se como fortes produtoras, 25% como moderadas, e apenas 6% como fracas produtoras. O método Agar Vermelho Congo não se mostrou eficiente para teste presuntivo de produção de biofilme para estirpes de Salmonella spp. Não foi evidenciado o gene blaKPC nas estirpes de Salmonella spp. isoladas na presente pesquisa. / According to Food and Agriculture Organization of the United Nations (FAO, 2013), the world consumption of meat of chicken has been higher significantly in the last decades. On the other hand, the concern of the food producers with the safety of their products also has increased in the same proportion. During the steps of the slaughter operation in general, cross contamination are the main causes of pathogenic microorganisms dissemination in the obtained products and the causes of gastroenteritis in the consumer. Species of the Enterobacter Salmonella fall as the highest risks of this kind of disease, due to their association with countless outbreaks which occurred worldwide, after the consumption of these products. Some enterobacter have a blaKPC gene, which codes for the carbapenemase enzyme that confers resistance to carbapenems antibiotics, aggravating the situation. Some virulence factors found in this bacteria genes can also be associated to the ability of adherence and the formation of biofilms in inert surfaces, making it difficult the operations of sanitation in the processing lines. Thus, the present research aimed to verify the capacity of Salmonella spp. strains isolated from aviary and slaughter line of chicken in a fridge of Rio Grande do Sul state to produce biofilms and be resistant to carbapenems antibiotics. In the evaluation of biofilm production, it was used the polyethylene microplates and capsule production technique according to Stepanovic et al. (2004) and Rodrigues et al. (2006), respectively. The virulence factors of salmonella were researched, represented by the genes IpfA, agfA, sefA, invA, hilA, avrA, sopE, sivH, e spvC, using the Polymerase Chain Reaction (PCR) method described by Borges et al. (2013). The lineages were submitted to the carbapenems antibiotic resistence test by the disk diffusion method with carbapenems according to the Clinical and Laboratory Standards Institute-CLSI (2010), and the research of the resistance to carbapenems gene blaKCP, by the strains Salmonella spp.: profile 1: genes ifpA, agfA, invA and avrA.; profile 2: genes ifpA, agfA, sefA, invA and avrA; profile 3: genes invA and avrA; profile 4: genes ifpA, agfA and invA. It was observed the resistance of the strains only to the imipenen antibiotic. Among the other 36 cultures of Salmonella spp. isolated, all were considered to produce biofilm in vitro, of which 69% were strong producers, 25% moderate, and only 6% were low producers. The method Congo Red Agar was not efficient to the presumptive test of biofilm production for the Salmonella spp. strains. It was not evidenced the gene blaKPC in Salmonella spp. strains isolates in this research.

Considerando que a obtenção de uma formulação farmacêutica pode ser melhor planejada se algumas condições biológicas inerentes à cavidade oral forem contempladas e que os sistemas de liberação modificada podem ser ferramentas para o controle de doenças orais, o objetivo do trabalho é obter uma formulação contendo clorexidina, avaliando seu efeito sobre os mesmos. Este trabalho foi dividido em duas etapas, sendo que a primeira envolveu a obtenção da formulação mais adequada aos experimentos biológicos e a segunda avaliou seus efeitos sobre biofilmes patogênicos orais. Assim, formulações com diferentes concentrações de clorexidina foram preparadas e avaliadas visualmente em relação à sua integridade física nas condições de crescimento dos biofilmes, seguido de ensaio de liberação em meio estático utilizando tampão como meio de dissolução (meio de dissolução convencional). A formulação selecionada foi submetida a ensaios de liberação em meio estático contendo os diferentes caldos de cultura bacterianos como meio de dissolução. Na segunda etapa do trabalho, o efeito da formulação selecionada foi avaliado em biofilmes cariogênicos de Streptococcus mutans ou biofilmes periodontopatogênicos de Porphyromonas gingivalis. Biofilmes de S. mutans (n=6) ou P. gingivalis (n=3) foram formados em caldos de cultura sob lâminas de vidro por 6 e 3 dias, respectivamente, sendo expostos a um dos seguintes tratamentos: 1) Formulação contendo 92% de quitosana e 8% de hidroxipropil metilcelulose (CV, como controle do veículo) ou 2) Formulação contendo 82% de quitosana, 8% de hidroxipropil metilcelulose e 10% de clorexidina (CHX, grupo experimental). Um grupo sem exposição à formulação foi incluído como controle negativo (CN). Após o período experimental, a viabilidade bacteriana, o pH dos biofilmes e a quantificação de clorexidina liberada para os caldos de cultura foram determinados. Os dados foram analisados estatisticamente por teste de Tukey-Kramer e Tukey, sendo o nível de significância estabelecido em 5%. Os resultados sugerem que ainda que a liberação de clorexidina da formulação nos caldos de cultura de S. mutans e P. gingivalis tenha sido menor se comparada ao meio de dissolução convencional (p<0,05), o efeito biológico promovido foi observado para ambos os biofilmes. Para o pH dos biofilmes de S. mutans, os grupos CN e CV não apresentaram diferença entre si (p>0,05), mas apresentaram quedas de pH maiores se comparados à CHX (p<0,05). CHX também resultou em menor viabilidade bacteriana dos biofilmes se comparada aos controles (p<0,05), que não apresentaram diferença entre si (p>0,05). Para P. gingivalis também houve mais morte celular nos biofilmes expostos à CHX (p<0,05) mas CV também apresentou perda de viabilidade em comparação à CN (p<0,05). Apesar da liberação de clorexidina da formulação ter sido dificultada pela presença dos microrganismos, os resultados sugerem que o sistema de liberação obtido foi capaz de diminuir a patogenicidade dos biofimes de Streptococcus mutans e de Porphyromonas gingivalis. Assim, o presente estudo sugere a importância de aliar os estudos de diferentes áreas de conhecimento de forma a contribuir no planejamento das formulações, vislumbrando futuros benefícios clínicos para o controle das doenças orais. / Considering that obtaining a pharmaceutical formulation can be better planned if some biological conditions inherent to the oral cavity are contemplated and that the modified release systems may be tools for the control of oral diseases, the aim of the work is to obtain a formulation containing chlorhexidine and evaluate its effect in pathogenic biofilms. This work was divided in two stages, the first involved obtaining the most appropriate formulation for biological experiments and the second evaluate its effect on oral pathogenic biofilms. Thus, formulations with different concentrations of chlorhexidine were prepared and evaluated visually for their physical integrity under the biofilm growth conditions, followed by the static media release assay using buffer as the dissolution medium (conventional dissolution medium). The selected formulation was subjected to static release tests containing the different bacterial culture broths as the dissolution medium. In the second stage of the work, the effect of the selected formulation was evaluated in cariogenic biofilms of Streptococcus mutans or periodontopathogenic biofilms of Porphyromonas gingivalis. Biofilms of S. mutans (n = 6) or P. gingivalis (n = 3) were formed in culture broths under glass slides for 6 and 3 days respectively, being exposed to one of the following treatments: 1) Formulation containing 92 % of chitosan and 8% of hydroxypropyl methylcellulose (CV, vehicle control) or 2) Formulation containing 82% of chitosan, 8% of hydroxypropyl methylcellulose and 10% of chlorhexidine (CHX, experimental group). A group without exposure to the formulation was included as negative control (CN). After the experimental period, bacterial viability, biofilms pH and quantification of chlorhexidine released into the culture broths were determined. Data were statistically analyzed by Tukey-Kramer and Tukey test with a level of significance of 5%. Results suggest that although chlorhexidine release from formulation in the culture broths of S. mutans and P. gingivalis was lower compared to the conventional dissolution medium (p <0.05), the treatment promoted biological effect for both biofilms. Regarding S. mutans biofilms pH, CN and CV groups showed no difference (p> 0.05), but showed higher pH drops when compared to CHX (p <0.05). CHX also resulted in lower bacterial viability of biofilms compared to controls (p <0.05), which did not show any difference (p> 0.05). For P. gingivalis, there was higher cell death in the biofilms exposed to CHX (p <0.05) and CV presented loss of viability compared to CN (p <0.05). Although the release of chlorhexidine from the formulation has been hampered by the presence of microorganisms, results suggest that the release system was able to reduce the pathogenicity of Streptococcus mutans and Porphyromonas gingivalis biofilms. Thus, the present study suggests the importance of combining studies from different areas of knowledge in order to contribute to the design of formulations aiming future clinical benefits for the oral diseases control.