FIRMINO, Nairley Cardoso Sá. Potencial biotecnológico de extratos, frações e diterpenos isolados de Croton blanchetianus Baill. sobre biofilmes orais. 2016. 121 f. Tese (Doutorado em Biotecnologia)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-02-09T16:59:44Z No. of bitstreams: 1 2016_tese_ncsfirmino.pdf: 3167746 bytes, checksum: 2689c7a8068016536b3ed880552b1a29 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-02-09T17:00:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_tese_ncsfirmino.pdf: 3167746 bytes, checksum: 2689c7a8068016536b3ed880552b1a29 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-09T17:00:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_tese_ncsfirmino.pdf: 3167746 bytes, checksum: 2689c7a8068016536b3ed880552b1a29 (MD5) Previous issue date: 2016 / The mouth has a very diversified microbioma, with favorable conditions for the development of oral biofilms. The presence of these biofilms, associated with other factors such as diet and/or inadequate hygiene, can trigger a carious process. The mechanical removal is the most used in the treatment, however, the use of antimicrobials in hygiene products can help in the prevention of caries. Some microorganisms present resistance to traditional antimicrobials, so the search for new antimicrobial agents is necessary. In the brazilian flora can be found medicinal plants, species of the genus Croton demonstrate proven biological activities, in some cases, diterpenes are responsible for the therapeutic action. In this sense, the objective of this work was to evaluate the antimicrobial and antibiofilm potential of extracts, acid and neutral fractions and diterpenes isolated from three specimens of C. blanchetianus against dental caries-related oral strepococci. The extraction of extracts, acid and neutral fractions and isolation of diterpenes occurred in parallel to the antimicrobial action tests. The solutions with the substances were submitted to serial dilutions and the concentrations obtained ranged from 125 to 1.8 μg/mL. The antimicrobial action was verified by minimum inhibitory concentration (MIC) and minimal bactericidal concentration (MBC) tests using S. parasanguinis ATCC903 and S. mutans ATCC700610/UA159 oral streptococci. For the determination of the antibiofilm action the biomass quantification and cell viability were performed in two different situations: in the inhibition of the formation of biofilms and in the action on pre-formed biofilms of S. parasanguinis and S. mutans, with two diterpenes, in the same concentrations previously mentioned. Electromicrographs were obtained by scanning electron microscopy (SEM), in order to visualize S. mutans biofilms after contact with the diterpenes. From the extraction and isolation process were obtained nine hexane extracts, thirty three acid fractions and fifty four neutral fractions, three diterpenes: 3,4-seco-bieren-3-oic acid (ICB1) unprecedented in the literature, methyl 12-hydroxy-3,4- seco-cleistanta-8,11,13,15(4)-penten-3-oate (ICB4) and ent-3,4-seco-atisan-4(18),16-dien- 3-oic acid (ICB8). The hexane extracts of the roots had the lowest values of MIC and MBC, 15.6 and 62.5 μg/mL. Acid fractions presented MIC and MBC of 7.8 μg/mL on S. mutans and 15.6 μg/mL on S. parasanguinis. The lowest value of MIC and MBC among diterpenes was ICB4, 7.8 μg/mL on S. parasanguinis. The inhibition of biofilm formation of S. parasanguinis, by ICB4, occurred up to the concentration of 3.9 μg/mL, with biomass reduction of up to 94% and the decrease in cell viability was 5.42 Log CFU/mL. ICB8 inhibited S. mutans biomass up to 99.9% and cell viability decreased about 3.92 Log CFU/mL. The action on preformed biofilms was also observed in both diterpenes: ICB4 reduced biofilm biomass by up to 75% and ICB8 reduced biomass by up to 95.8%. Electron micrographs showed structural changes in cell morphology. The study points out that the substances ICB4 and ICB8 have antibiofilm action with the potential to be transformed into anticary products. / A boca possui um microbioma bastante diversificado, com condições favoráveis ao desenvolvimento de biofilmes orais. A presença destes biofilmes, associada a outos fatores como dieta e/ou higinenização inadequada, podem desencadear um processo carioso. A remoção mecânica é a mais utilizada no tratamento, entretanto, o uso de antimicrobianos em produtos de higienização pode auxiliar na prevenção da cárie. Alguns micro-organismos apresentam resistência a antimicrobianos tradicionais, por isso, a busca por novos agentes antimicrobianos faz-se necessária. Na flora brasileira podem ser encontradas plantas medicinais, espécies do gênero Croton demonstram atividades biológicas comprovadas, em alguns casos, diterpenos são responsáveis pela ação terapêutica. Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial antimicrobiano e antibiofilme de extratos, frações ácidas e neutras e diterpenos isolados de três espécimes de C. blanchetianus contra estrepococos orais relacionadas com a cárie dentária. A obtenção de extratos, frações ácidas e neutras e isolamento dos diterpenos ocorreu paralelamente aos testes de ação antimicrobiana. As soluções com as substâncias, foram submetidas à diluições seriadas e as concentrações obtidas, variaram de 125 a 1,8 μg/mL. A ação antimicrobiana foi verificadas através dos testes de concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM), utilizando os estreptococos orais S. parasanguinis ATCC903 e S. mutans ATCC700610/UA159. Para a determinação da ação antibiofilme foram realizadas a quantificação da biomassa e viabilidade celular, em duas situações distintas: na inibição da formação dos biofilmes e na ação sobre biofilmes pré- formados de S. parasanguinis e S. mutans, com dois diterpenos, nas mesmas concentrações citadas anteriormente. Eletromicrografias foram obtidas através de microscopia eletrônica de varredura (MEV), com a finalidade de visualizar os biofilmes de S. mutans após contato com os diterpenos. Do processo de extração e isolamento foram obtidos nove extratos hexânicos, trinta e três frações ácidas e cinquenta e quatro frações neutras, três diterpenos: ácido 3,4-seco-bieren-3-óico (ICB1) inédito na literatura, 12- hidroxi-3,4-seco-cleistanta-8,11,13,15,4(18)-pentaen-3-oato de metila (ICB4) e ácido ent- 3,4-seco-atisan-4(18),16-dien-3-óico (ICB8). Os extratos hexânicos das raízes apresentaram os menores valores de CIM e CBM, 15,6 e 62,5 μg/mL. As frações ácidas apresentaram CIM e CBM de 7,8 μg/mL sobre S. mutans e 15,6 μg/mL sobre S. parasanguinis. O menor valor de CIM e CBM, dentre os diterpenos, foi do ICB4, 7,8 μg/mL sobre S. parasanguinis. A inibição da formação de biofilme de S. parasanguinis, por ICB4, ocorreu até a concentração de 3,9 μg/mL, com redução da biomassa de até 94% e a diminuição da viabilidade celular foi de 5,42 Log UFC/mL. ICB8 inibiu a biomassa de S. mutans até 99,9% e a viabilidade celular diminuiu cerca de 3,92 Log UFC/mL. A ação sobre biofilmes pré-formados também foi observada em ambos os diterpenos: ICB4 reduziu até 75% a biomassa dos biofilmes e ICB8 reduziu a biomassa até 95,8%. As eletromicrografias mostraram alterações estruturais na morfologia das células. O estudo aponta que as substâncias ICB4 e ICB8 tem ação antibiofilme com potencial para serem transformados em produtos com ação anticárie.

DODOU, H. V. Atividade antimicrobiana da violaceína sobre Staphylococcus epidermidis. 2017. 95 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-04-06T16:04:54Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_hvdodou.pdf: 1913254 bytes, checksum: c2a123515261efe9f3fff2287481db0d (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-04-06T16:05:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_dis_hvdodou.pdf: 1913254 bytes, checksum: c2a123515261efe9f3fff2287481db0d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-06T16:05:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_dis_hvdodou.pdf: 1913254 bytes, checksum: c2a123515261efe9f3fff2287481db0d (MD5) Previous issue date: 2017-02-15 / Staphylococcus epidermidis is part of the human’s natural microbiota, but has pathogenic potential when it comes to infections related to medical devices. The emergence of strains resistant to several antimicrobials has created challenges in the choice of therapy. Given this scenario, it is very important to investigate new substances with antimicrobial potential. Violacein is a metabolite produced by bacteria of different species, especially Chromobacterium violaceum, which has potential antimicrobial activity on Gram-positive microorganisms. The aim of the study was to evaluate the antimicrobial activity of violacein on strains of S. epidermidis forming and non-forming biofilm, as well as to evaluate its ability to act synergistically with antimicrobial drugs already marketed. VIO demonstrated excellent antimicrobial action on S. epidermidis ATCC 12228 and ATCC 35984, presenting bacteriostatic action (MIC = 10 μg / mL and 20 μg / mL for S. epidermidis ATCC 12228 and 35984, respectively) and bactericidal action (MBC = 20μg / mL for both strains). In addition, the bactericidal action was observed with short exposure times (2-3 hours). Violacein was also capable of synergistically modulating the action of several antimicrobial agents, like amikacin, gentamicin, ciprofloxacin, cefepime, ceftazidime, vancomycin, meropenem, ceftriaxone, cephalothin e oxacilin, on S. epidermidis, reducing MIC values for these microorganisms by up to 16 times. VIO was able to inhibit the formation of microbial biofilms at the same concentration that inhibited growth in planktonic cells and eradicated already-formed biofilm at 8-fold higher concentration (MBEC = 160 μg / mL). Its action on biofilm already formed was potentiated when associated with antimicrobial drugs already marketed, being able to completely eradicate the biofilm when associated with ciprofloxacin, in concentrations equivalent to ½ MBEC. These results show that VIO is a promising substance for the development of a new antimicrobial drug with action on this pathogen, including its biofilm, or even to be associated with already commercialized antibiotics. / Staphylococcus epidermidis faz parte da microbiota natural do homem, mas apresenta potencial patogênico quando se trata de infecções relacionadas a dispositivos médicos. O surgimento de cepas resistente a diversos antimicrobianos vem criando desafios na escolha da terapêutica. Diante desse cenário, tornam-se muito importantes estudos que investiguem novas substâncias com potencial antimicrobiano. A violaceína (VIO) é um metabólito produzido por bactérias de diferentes espécies, com destaque para Chromobacterium violaceum, que apresenta potencial atividade antimicrobiana sobre microrganismos Gram-positivo. O estudo visou avaliar a atividade antimicrobiana da VIO sobre cepas de S. epidermidis formadoras e não formadoras de biofilme, assim como avaliar sua capacidade de agir sinergicamente com fármacos antimicrobianos já comercializados. A VIO demonstrou excelente ação antimicrobiana sobre S. epidermidis ATCC 12228 e ATCC 35984, apresentando, em baixas concentrações, ação bacteriostática (CIM = 10µg/mL e 20µg/mL para S. epidermidis ATCC 12228 e 35984, respectivamente) e bactericida (CLM = 20µg/mL para ambas as cepas). Além disso, a ação bactericida foi observada com curtos tempos de exposição (2-3horas). A VIO também foi capaz de modular sinergicamente a ação de diversos antimicrobianos, como amicacina, gentamicina, ciprofloxacino, cefepime, ceftazidima, vancomicina, meropenem, ceftriaxona, cefalotina e oxacilina sobre S. epidermidis, reduzindo os valores de CIM em até 16 vezes. A VIO foi capaz de inibir a formação de biofilme microbiano na mesma concentração que inibiu o crescimento em células planctônicas (CIMB=20µg/mL) e erradicou biofilme já formado em concentração 8 vezes maior (CMEB=160µg/mL). Sua ação sobre biofilme já formado foi potencializada quando associada aos fármacos cefepime, ciprofloxacino, vancomicina e meropenem, sendo capaz de erradicar completamente o biofilme na associação com ciprofloxacino, em concentrações equivalents a ½ CMEB. Estes resultados mostram que a VIO é uma substância promissora para o desenvolvimento de um novo fármaco antimicrobiano com ação sobre este patógeno, inclusive sobre seu biofilme, ou mesmo para ser associada a antibióticos já comercializados.

VASCONCELOS, Mayron Alves de. Atividade de lectinas e metabólitos bioativos de plantas sobre biofilmes microbianos de interesse clínico. 2013. 266 f. Tese (Doutorado em bioquímica)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2013. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-07-20T18:29:58Z No. of bitstreams: 1 2013_tese_mavasconcelos.pdf: 20354882 bytes, checksum: e8e25d0677ed66829d472e6d09975c97 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-07-26T20:02:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_tese_mavasconcelos.pdf: 20354882 bytes, checksum: e8e25d0677ed66829d472e6d09975c97 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-26T20:02:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_tese_mavasconcelos.pdf: 20354882 bytes, checksum: e8e25d0677ed66829d472e6d09975c97 (MD5) Previous issue date: 2013 / Biofilms are microbial communities that are irreversibly attached to a surface and are embedded in a polymeric matrix produced by them. Biofilms are commonly related to nosocomial infections that showing an enhanced resistance to antimicrobial agents compared to planktonic cells, thus hindering their treatments and limiting therapeutic options. In this context, the search for new molecules with antimicrobial and antibiofilm action has become an active area of research. The plants are sources of a variety of molecules with antimicrobial properties, among them we can mention the lectins and secondary metabolites. Several studies have reported the antimicrobial and antibiofilm action of these molecules classes as an alternative to antibiotics. Thus, the aim of this study was to evaluate the antimicrobial and antibiofilm of various lectins isolated from leguminous and algae, as well as two secondary metabolites isolated from plants , derriotusone A (isolated from Lonchocarpus obtusus) and casbane diterpene (isolated from Croton nepetaefolius). The results showed that some lectins tested were able to inhibit the planktonic growth and/or the biofilm formation of certain microorganisms. The lectin isolated from Vaitarea macrocarpa (VML) showed to be the most promising lectin, showing strong action on the planktonic growth and biofilm formation of Staphylococcus aures and Staphylococcus epidermidis. The derriobstusone A showed potential antibacterial and antibiofilm activite on S. aureus, whereas Escherichia coli showed lower sensitivity to the compound. In addition, derriotusone showed a potential antioxidant activity. Regarding to casbane diterpene, in general the compound was able to inhibit planktonic growth, formation of biofilms and disrupt the preformed biofilms of the S.aures, S. epidermidis, Candida albicans and Candida glabrata, and also showed to be effective against biofilms formed by the association between these bacteria and yeasts. In conclusion, the results showed that some lectins, as the secondary metabolites used in this study, may be considered as potential antimicrobial and antibiofilm agents, thus suggesting the use of these molecules in the treatment of infections associated with different microorganisms. / Biofilmes são comunidades microbianas que encontram-se irreversivelmente associadas a uma superfície e estão inseridas em uma matriz polimérica produzida por elas mesmas. Os biofilmes estão comumente relacionados a infecções nosocomiais que apresentam maior resistência a agentes antimicrobianos quando comparadas com células planctônicas, dificultando assim seus tratamentos e limitando as opções terapêuticas. Nesse sentido a busca por novas moléculas com ação antimicrobiana e antibiofilme tornou-se uma área ativa na pesquisa científica. Os vegetais são fontes de uma variedade de moléculas com propriedades antimicrobianas, dentre estas podemos citar as lectinas e os metabólitos secundários. Diversos estudos têm relatado a ação antimicrobiana e antibiofilme dessas classes de moléculas como forma alternativa ao uso de antibióticos. Assim, o objetivo desse trabalho foi avaliar a ação antimicrobiana e antibiofilme de diversas lectinas isoladas de leguminosas e algas, bem como de dois metabólitos secundários isolados de plantas, derriotusona A (isolado de Lonchocarpus obtusus) e diterpeno casbano (isolado de Croton nepetaefolius). Os resultados demonstraram que algumas das lectinas testadas foram capazes de inibir o crescimento planctônico e/ou a formação de biofilme de determinados micro-organismos. A lectina isolada de Vaitarea macrocarpa (VML) mostrou ser a lectina mais promissora, mostrando forte ação sobre o crescimento planctônico e formação de biofilmes de Staphylococcus aures e Staphylococcus epidermidis. Derriobstusona A mostrou uma potencial ação antibacteriana e antibiofilme sobre S. aureus, enquanto que, Escherichia coli apresentou menor sensibilidade ao composto. Em adição, derriotusona A demonstrou uma potencial ação antioxidante. Em relação ao diterpeno casbano, em geral o composto foi capaz de inibir o crescimento planctônico, formação de biofilmes e causar danos nos biofilmes pré-formados de S.aures, S. epidermidis, Candida albicans e Candida glabrata, e mostrou ainda ser efetivo contra biofilmes formados pela associação entre estas bactérias e leveduras. Em conclusão, os resultados mostraram que algumas lectinas, assim como os metabólitos secundários utilizados nesse estudo, podem ser consideradas potenciais agentes antimicrobianas e antibiofilmes, sugerindo assim o uso dessas moléculas no tratamento de infecções associadas a diferentes micro-organismos.

MOREIRA, C. A. Estudo de sensibilidade do biofilme de Burkholderia pseudomallei a antibióticos de uso clínico e farnesol. 2013. 115 f. Tese (Doutorado em Microbiologia Médica) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-10-03T15:38:15Z No. of bitstreams: 1 2013_tese_camoreira.pdf: 2691368 bytes, checksum: 33ff8ee13ee8b744ebce1f67d391647c (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-10-03T15:38:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_tese_camoreira.pdf: 2691368 bytes, checksum: 33ff8ee13ee8b744ebce1f67d391647c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-03T15:38:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_tese_camoreira.pdf: 2691368 bytes, checksum: 33ff8ee13ee8b744ebce1f67d391647c (MD5) Previous issue date: 2013-09-27 / The melioidosis is an emerging infectious disease, especially in northeastern Brazil, with serious international implications, as well as a public health problem. Caused by the bacillus Burkholderia pseudomallei, this infection appears from tables asymptomatic to severe and often fatal frames. The high mortality rate of the disease (20-50%) make it a priority for global health agencies. In Brazil, cases of melioidosis were first reported in 2003 in Tejuçuoca municipality in Ceará. Since then, new cases of melioidosis were diagnosed in six other municipalities in Ceará. B. pseudomallei is intrinsically resistant to many antibiotics and recent studies have described cases of antimicrobial resistance used in the treatment of melioidosis. The investigation of the biofilm forming capacity of B. pseudomallei seems to be essential, since the biofilm allows the development of microcolonies within a protected environment, which relates to the environmental protection, adhesion, colonization, immune evasion and bonding the environmental cell. Therefore, the development of therapeutic alternatives antibiofilm, including new drugs is needed. Indeed, this study aimed to characterize the strains of B. pseudomallei of LAPERE collection as the biofilm production capacity and sensitivity in planktonic growth and biofilm. Selected drugs were ceftazidime (CAZ), doxycycline (DOX), imipenem (IPM), amoxicillin / clavulanate (AMC) and trimethoprim / sulfamethoxazole (SXT); and farnesol (FNS). All strains were classified as biofilm producers, being divided into: hard (5 strains), moderate (3 strains), and low (1 strain). Mean values ​​of minimum inhibitory concentration (MIC), minimum inhibitory concentration of biofilm (MBIC) and concentration minimum biofilm eradication in (MBEC) for these strains were determined for AMC (MIC 10.2 / 5.1 mg / L, 21 MBIC 3 / 10.6 mg / L and MBEC 27.6 / 13.8 mg / L) to CAZ (MIC 5.6 mg / L, MBIC 120.4 mg / L and MBEC 419.6 mg / L) to doxorubicin (MIC 0.28 mg / L, MBIC 1.3 mg / L and MBEC 3.8 mg / L) to IPM (MIC 0.597 mg / L, MBIC ≥ 256 mg / L and MBEC> 256 mg / G) to SXT (MIC 1.25 / 23.75 mg / L, MBIC ≤ 0.5 / 9.5 mg / L and MBEC <0.72 / 13.72 mg / L), and NSF (MIC and MBIC equal to 150 uM / L). The data obtained show especially for the inhibitory potential of three antibiotics studied - AMC, DOX and SXT and farnesol against strains of B. pseudomallei associated with biofilm. However, further studies are needed to investigate the mechanisms of action of these drugs on the biofilm, as well as the design of in vivo experiments to confirm the significance of these findings clinically. Moreover, the growth of these strains melanin formation conditions and biofilm showed that this combination makes them more resistant strains to the action of imipenem and farnesol. / A melioidose é uma doença infeciosa emergente, notadamente no nordeste do Brasil, com sérias implicações internacionais, assim como um problema de saúde pública. Causada pelo bacilo Burkholderia pseudomallei, esta infecção se apresenta desde quadros assintomáticos a quadros graves e frequentemente fatais. As altas taxas de mortalidade da doença (20 a 50%) a tornam uma prioridade para orgãos globais de saúde. No Brasil, casos de melioidose foram relatados pela primeira vez em 2003, no município de Tejuçuoca no Ceará. Desde então, novos casos de melioidose foram diagnosticados em outros seis municípios cearenses. B. pseudomallei é intrinsecamente resistente a muitos antibióticos e estudos recentes já descrevem casos resistência aos antimicrobianos utilizados no tratamento da melioidose. A investigação da capacidade de formação de biofilme por B. pseudomallei parece ser fundamental, já que o biofilme permite o desenvolvimento de microcolônias dentro de um ambiente protegido, o qual se relaciona com a proteção ambiental, adesão, colonização, evasão do sistema imune e ligação a células ambientais. Portanto, o desenvolvimento de alternativas terapêuticas antibiofilme, incluindo novas drogas, é necessário. Com efeito, este estudo teve como objetivo caracterizar as cepas de B. pseudomallei da coleção do LAPERE quanto à capacidade de produção de biofilme e sensibilidade em crescimento planctônico e em biofilme. As drogas selecionadas foram: ceftazidima (CAZ), doxiciclina (DOX), imipenem (IPM), amoxicilina/clavulanato (AMC) e sulfametoxazol/trimetoprim (SXT); e farnesol (FNS). Todas as cepas foram classificadas como produtoras de biofilme, sendo divididas em: forte (5 cepas), moderada (3 cepas), e fraca (1 cepa). Valores médios de concentração inibitória mínima (MIC), concentração inibitória mínima em biofilme (MBIC) e concentração de erradicação mínima em biofilme (MBEC) para estas cepas foram determinados para AMC (MIC 10,2/5,1 mg/L, MBIC 21,3/10,6 mg/L e MBEC 27,6/13,8 mg/L), para CAZ (MIC 5,6 mg/L, MBIC 120,4 mg/L e MBEC 419,6 mg/L), para DOX (MIC 0,28 mg/L, MBIC 1,3 mg/L e MBEC 3,8 mg/L), para IPM (MIC 0,597 mg/L, MBIC ≥ 256 mg/L e MBEC > 256 mg/L), para SXT (MIC 1,25/23,75 mg/L, MBIC ≤ 0,5/9,5 mg/L e MBEC < 0,72/13,72 mg/L), e para FNS (MIC e MBIC iguais a 150 µM/L). Os dados obtidos apontam especialmente para o potencial inibitório de três dos antibióticos estudados - AMC, DOX e SXT, e farnesol contra cepas de B. pseudomallei associadas a biofilme. Todavia, são necessários novos estudos para investigar os mecanismos de ação dessas drogas sobre o biofilme, bem como o delineamento de experimentos in vivo para confirmar a significância desses achados clinicamente. Ademais, o crescimento dessas cepas em condições de formação de melanina e biofilme evidenciou que esta associação torna as cepas mais resistentes à ação de imipenem e farnesol.

SERPA, R. Biofilmes de Trichosporon asahii e Trichosporon inkin: aspectos morfofisiológicos, sensibilidade a antifúngicos e inibição mediada por ritonavir. 2016. 118 f. Tese (Doutorado em Microbiologia Médica) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-10-27T13:21:57Z No. of bitstreams: 1 2016_tese_rserpa.pdf: 3087326 bytes, checksum: 35f76a6918f208a69d52ecd06bf86142 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-10-27T13:30:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_tese_rserpa.pdf: 3087326 bytes, checksum: 35f76a6918f208a69d52ecd06bf86142 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-27T13:30:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_tese_rserpa.pdf: 3087326 bytes, checksum: 35f76a6918f208a69d52ecd06bf86142 (MD5) Previous issue date: 2016-07-27 / In recent years, several studies have considered Trichosporon genus as emerging opportunistic pathogens in immunocompromised patients. Although the dynamics are not well understood, it is known that events associated with biofilm formation on these fungi play an important role in the infectious process. Thus, the present study analyzed morphophysiological aspects of biofilms produced by Trichosporon spp., as well as the role of a protease inhibitor on T. asahii and T. inkin cells and biofilms. In the first part of the study, we investigated the biofilm formation of T. inkin (n=7) in RPMI broth, CLED broth and Sabouraud broth at pH 5.5 and pH 7.0, with initial inoculum of 1x104, 1x105 and 1x106 cells/ml, incubated at 28°C and 35°C in static or shaking at 80 rpm. Biofilms were evaluated for their biomass and metabolic viability, viable cell counts, quantification of nucleic acids and proteinase activity. It was also investigated the sensitivity of the biofilm front of amphotericin B, caspofungin, fluconazole, itraconazole and voriconazole. To evaluate the inhibitory activity of ritonavir on the structure and functioning of T. asahii and T. inkin biofilms, biofilms were formed in the presence of ritonavir and evaluated for cell adhesion, structural development and proteinase activity. Additionally, ritonavir was assessed on mature biofilms, matrix composition and structural changes. Planktonic cells of T. asahii and T. inkin (n=2 each) were also investigated for sensitivity to ritonavir alone and in combination with antifungals. Finally, planktonic cells were pre-exposed to ritonavir and evaluated for biofilm formation capacity, susceptibility to antifungal agents, and changes in their surface hydrophobicity. Maximum biofilms growth in RPMI pH 7.0 for inoculation of 1x106 cells/ml and incubation at 35°C under stirring. Biofilms produced under these conditions are formed by dynamic communities associated with an extracellular matrix, and show increased viability and biomass over time, reaching stability after 48 hours of cultivation. During the development of biofilms occurs release of viable cells and nucleic acids into the surrounding environment. T. inkin biofilms produce more proteases and tolerate higher concentrations of antifungals that planktonic cells related. Due to the presence of proteases in the development of T. inkin biofilm, it was hypothesized that these enzymes could be considered important targets in controlling biofilms. The results showed that ritonavir decreased cell adhesion and formation of mature biofilms, and reduce protease activity and change the structure of biofilms. Ritonavir did not affect the viability of mature biofilms, but changed the composition of the extracellular matrix of biofilms, which showed different protein spectra compared to the control group. Ritonavir was able to inhibit planktonic growth of T. asahii and T. inkin approximately 50%. However, there was no synergism between ritonavir and tested antifungals. In planktonic cells, pre-exposure to ritonavir significantly reduced values of minimum inhibitory concentration of Amphotericin B in T. asahii and T. inkin, although not change the response to azoles. Preincubation with ritonavir reduced cell adhesion, but not the formation of mature biofilms, in addition to changing the hydrophobicity of the cell surface. The article detailed characteristics of T. inkin biofilms and showed the potential use of a protease inhibitor in controlling these biofilms. / Nos últimos anos, diversos estudos têm considerado os fungos do gênero Trichosporon como patógenos oportunistas emergentes em pacientes imunocomprometidos. Embora a dinâmica não seja bem compreendida, sabe-se que eventos associados à formação de biofilme nestes fungos têm papel importante no processo infeccioso. Desta forma, o presente estudo analisou aspectos morfofisiológicos dos biofilmes produzidos por T. inkin, bem como o papel de um inibidor de proteases sobre as células e biofilmes de T. asahii e T. inkin. Na primeira parte da pesquisa, foi investigada a formação de biofilmes de T. inkin (n=7) nos meios RPMI, Caldo CLED e Caldo Sabouraud, em pH 5,5 e pH 7,0, com inóculos iniciais de 1x104, 1x105 e 1x106 células/mL, incubados a 28°C e 35°C, de forma estática ou agitação a 80 rpm, por 48h. Os biofilmes formados foram avaliados quanto à biomassa e atividade metabólica, contagem de células viáveis, quantificação de ácidos nucléicos e atividade proteásica. Investigou-se ainda a sensibilidade dos biofilmes frente à anfotericina B, caspofungina, fluconazol, itraconazol e voriconazol. Para avaliação da atividade inibitória do ritonavir sobre a estrutura e o funcionamento dos biofilmes de T. asahii e T. inkin, biofilmes foram formados na presença de ritonavir e avaliados quanto à adesão celular, desenvolvimento estrutural e atividade proteásica. Adicionalmente, o ritonavir foi avaliado sobre biofilmes maduros, composição de matriz e alterações estruturais. Células planctônicas de T. asahii e T. inkin (n=2 cada) também foram investigadas quanto à sensibilidade ao ritonavir isolado e em combinação com antifúngicos. Por fim, células planctônicas foram pré-expostas ao ritonavir e avaliadas quanto à capacidade de formação de biofilmes, sensibilidade a antifúngicos e alteração na hidrofobicidade de suas superfícies. A produção de biofilmes foi máxima em RPMI pH 7,0, em inóculo de 1x106 células/mL, e incubação a 35°C, sob agitação. Os biofilmes produzidos nessas condições são formados por comunidades dinâmicas, associadas a uma matriz extracelular, e mostram aumento da atividade metabólica e biomassa ao longo do tempo, atingindo estabilidade após 48 h de cultivo. Durante o desenvolvimento dos biofilmes, ocorre liberação de células viáveis e ácidos nucléicos para o ambiente circundante. Os biofilmes de T. inkin produzem mais proteases e toleram maiores concentrações de antifúngicos que as células planctônicas relacionadas. Dada à presença de proteases durante o desenvolvimento do biofilme de T. inkin, foi hipotetizado que essas enzimas poderiam ser consideradas alvos importantes no controle dos biofilmes. Os resultados mostraram que o ritonavir diminuiu a adesão celular e formação de biofilmes maduros, além de reduzir a atividade proteásica e alterar a estrutura dos biofilmes. O ritonavir não interferiu na atividade metabólica de biofilmes maduros, mas alterou a composição da matriz extracelular dos biofilmes, as quais apresentaram diferentes espectros protéicos em comparação com o grupo controle. O ritonavir inibiu o crescimento planctônico de T. asahii e T. inkin a 100 μg/mL. Entretanto, não foi observado sinergismo entre o ritonavir e os antifúngicos testados. Em células planctônicas, a pré-exposição ao ritonavir reduziu significativamente os valores de concentração inibitória mínima da anfotericina B em T. asahii e T. inkin, embora não tenha alterado a resposta aos azólicos. A pré-incubação com ritonavir reduziu a adesão das células, mas não a formação de biofilmes maduros, além de alterar a hidrofobicidade da superfície celular. O presente artigo detalhou características dos biofilmes de T. inkin e mostrou o potencial do uso de um inibidor de proteases no controle dos biofilmes de T. asahii e T. inkin.

REIS, A. C. M. Fatores de virulência e produção de biofilme de Bacteroides fragilis isolados da microbiota intestinal de cães. 2013. 87 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by Carolinda Oliveira (ppgmm@ufc.br) on 2017-07-27T12:53:54Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_acmreis.pdf: 83159321 bytes, checksum: 8a4f3a15527a5e48751e49ec6d7dbc42 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-07-27T15:17:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_acmreis.pdf: 83159321 bytes, checksum: 8a4f3a15527a5e48751e49ec6d7dbc42 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-27T15:17:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_acmreis.pdf: 83159321 bytes, checksum: 8a4f3a15527a5e48751e49ec6d7dbc42 (MD5) Previous issue date: 2013-01-08 / Bacteroides fragilis is part of the fecal microbiota of animals, yet it is the most pathogenic species of the genus Bacteroides. The transformation these microrganisms commensals in pathogens agents is mainly due to its virulence factors. This microorganism has been isolated from several infections in dogs. Considering the pathogenic potential of B. fragilis and its importance in veterinary medicine, this study was designed to evaluate the virulence factors and biofilm formation of Bacteroides fragilis isolated from fecal samples from dogs. The samples used in this study were collected at the Veterinary Clinic of the State University of Ceará and processed at the Laboratory of Bacteriology of the Federal University of Ceará. Were phenotypically analyzed the virulence factors (production of hemolysins and hemagglutinins, hydrophobicity, the presence of the enzyme β-lactamase and capsule) and biofilm production of 13 strains of B. fragilis. To determine the pattern of sensitivity to clindamycin, metronidazole, chloramphenicol and penicillin was used in agar dilution technique. In vitro assays for detection of biofilms were performed by the methods Congo Red agar and Accession in microplates. All strains of B. fragilis showed capsule and produced no haemolysis. Regarding the production of hemagglutinin, 38% of the strains showed hemagglutination when used canine blood and 15% in human blood (A+). Of the strains studied, 7% had a cell surface hydrophobic. In total, 61% of the strains showed β-lactamase test positive. As regards the production of biofilm was observed by the method of strokes that 12 (92.3%) of the biofilm producers were isolated by the method and Adhesion microplates, it was found that eight (61.5%) strains were able to produce biofilm. All isolates were susceptible to metronidazole and resistant to penicillin and chloramphenicol. The rate of clindamycin resistance was 69.2%. This study showed that species B. fragilis isolated from normal canine microflora showed major virulence factors for pathogenicity, they possess the ability to form biofilms and show a high rate of resistance to clindamycin. / Bacteroides fragilis faz parte da microbiota fecal de animais, contudo é a espécie mais patogênica do gênero Bacteroides. A sua transformação de um microrganismo comensal para agente patogênico deve-se principalmente aos seus fatores de virulência. Este micro-organismo tem sido isolado de diversas infecções em cães. Considerando o potencial patogênico de B. fragilis e sua importância na medicina veterinária, o presente trabalho foi elaborado com o objetivo de avaliar os fatores de virulência e formação de biofilme de Bacteroides fragilis isolados de amostras fecais de cães. As amostras utilizadas neste estudo foram coletadas na Clinica Veterinária da Universidade Estadual do Ceará (UECE) e processadas no Laboratório de Bacteriologia da Universidade Federal do Ceará (UFC). Foram analisadas fenotipicamente os fatores de virulência (produção de hemolisinas e hemaglutininas, hidrofobicidade, presença da enzima - lactamase e cápsula) e produção de biofilme de 13 cepas da espécie B. fragilis. Para determinação do perfil de sensibilidade a clindamicina, metronidazol, cloranfenicol e penicilina foi utilizada a técnica de diluição em Agar. Os ensaios in vitro para detecção de biofilme foram realizados pelos métodos Agar Vermelho Congo (AVC) e Adesão em microplacas. Todas as cepas de B. fragilis apresentaram cápsula e não produziram hemólise. Com relação à produção de hemaglutininas, 38% das cepas são capazes de aglutinar sangue canino e 15% em sangue humano (A+). Das cepas estudadas, 7% apresentaram uma superfície celular hidrofóbica. No total, 61% das cepas produziram teste da - lactamase positivo. Quanto a produção de biofilme, foi observado pelo método do AVC que 12 (92,3%) dos isolados eram produtores de biofilme e por meio do método de Adesão em Microplacas, verificou-se que 8 (61,5%) cepas foram capazes de produzir biofilme. Todos os isolados foram sensíveis ao metronidazol e cloranfenicol e resistentes à penicilina. A taxa de resistência à clindamicina foi de 69,2%. Esse estudo mostrou que espécies de B. fragilis isolados da microbiota normal de cães apresentaram fatores de virulência importantes para sua patogenicidade, possuem a capacidade de formar biofilme e demonstram uma alta taxa de resistência a clindamicina.

A presença de bactérias patogênicas com capacidade de formar biofilme nos dispositivos de uso médico constitui um dos principais problemas na saúde pública. O biofilme confere proteção contra os mecanismos de defesa do hospedeiro e ação dos antimicrobianos, aumentando a virulência e resistência dos micro-organismos. A erradicação deste tipo de biofilmes é uma das principais estratégias no tratamento de doenças infecciosas associadas a bactérias patogênicas. A erradicação pode ser feita com o uso de biomoléculas produto do metabolismo secundário de diferentes micro-organismos. O objetivo deste estudo foi procurar novas moléculas com o potencial de erradicar biofilmes patogênicos associados a implantes médicos a partir de bactérias associadas ao género Drosera usando como bactérias alvo os patógenos Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus epidermidis. Para isto, foram crescidos 193 isolados bacterianos associados à planta Drosera que cresce na região litoral de Nova Tramandaí (RS) no sul do Brasil. Do total de isolados bacterianos foram usados os 36 que apresentaram atividade proteolítica para a produção de sobrenadantes bioativos. Os sobrenadantes bioativos foram usados para testes de erradicação de biofilme usando placas de 96 poços e a técnica de Cristal Violeta nas duas bactérias alvo. Nove isolados bacterianos associados à Drosera apresentaram atividade de erradicação de biofilme por acima de 40%, três deles para P. aeruginosa e seis para S. epidermidis. Destes isolados foi escolhido o isolado com melhor atividade de erradicação para P. aeruginosa e foram realizados testes para determinação da concentração mínima de erradicação de biofilme, antiformação de biofilme, viabilidade celular e microscopia eletrônica de varredura junto com a identificação da bactéria por médio de genes 16S, bem como o fracionamento bioguiado do sobrenadante. Adicionalmente, o sobrenadante bioativo foi testado in vitro em um modelo de dispositivo médico (cateter). A bactéria Gram-positiva que apresentou maior atividade de erradicação em seu sobrenadante possui 99% de similaridade com o Bacillus pumilus. Esta atividade de erradicação de biofilme de P. aeruginosa, pode ser atribuída à presença de uma molécula o composto de aproximadamente 34 kDa. Esta biomolécula o composto pode constituir uma alternativa complementária ao uso dos antibióticos convencionais. A perspectiva de purificar e caracterizar esta biomolécula ou composto para P. aeruginosa permitirá estudar seu mecanismo de ação e o uso no tratamento deste biofilme patogénico na clínica. / The presence of pathogenic bacteria with the ability to form biofilm on medical devices is one of the major problems in public health. The biofilm protects against the host defense mechanisms and the action of antibiotics, increasing the virulence and resistance of microorganisms. The elimination of this type of biofilms is a main strategy in the treatment of infectious diseases associated with pathogenic bacteria. This elimination can be done by using biomolecules from the secondary metabolism product of different micro-organisms. The objective of this study was to look for new molecules with the potential to eradicate pathogenic biofilms associated with medical implants from bacteria associated with gender Drosera using bacteria as targets Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus epidermidis pathogens. For this, were grown 193 bacterial isolates associated with Drosera plant that grows in the coastal region of New Tramandaí (RS) in southern Brazil. Of total bacterial isolates were used which had 36 proteolytic activity for the production of bioactive supernatants. The bioactive supernatants were used for biofilm eradication tests using 96- well plates and Crystal Violet technique in both target bacteria. Then the supernatant with the best eradication activity to P. aeruginosa was chosen to determine the minimum concentration to eradicate biofilm, biofilm inhibition, cell viability and scanning electron microscopy together with the identification of the bacteria by means of 16S and bioguided the fractionation of the supernatant. Additionally, the bioactive supernatant was tested in an in vitro model using the clinical device. Nine bacterial isolates associated with Drosera showed biofilm eradication activity by over 40%, three for P. aeruginosa and six for S. epidermidis. The Gram-positive bacterium with 99% similarity to the Bacillus pumilus showed the best biofilm eradication activity to P. aeruginosa capacity allocated to the presence of a molecule composed of approximately 34 kDa. These biomolecules can be an alternative to complement the use of conventional antibiotics or the direct use of antibiotic activity is presented as the case of bioactive found for P. aeruginosa supernatant. The prospect of purify and characterize this biomolecule or compound to P. aeruginosa will allow us to study this mechanism of action and the use in the treatment of this pathogenic biofilm in the clinic.

Camila Alencar Moreira. Atividade in vitro de agentes antimicrobianos contra biofilmes de Staphylococcus ssp. de otite canina. 2011. 103 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-06-17T14:04:10Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_camoreira.pdf: 3719314 bytes, checksum: d72587f50967ba4b42036432a799459a (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-06-18T15:37:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_camoreira.pdf: 3719314 bytes, checksum: d72587f50967ba4b42036432a799459a (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-18T15:37:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_camoreira.pdf: 3719314 bytes, checksum: d72587f50967ba4b42036432a799459a (MD5) Previous issue date: 2011 / Historically, bacteria have been seen as isolated organisms; however, it is now clear that the vast majority of bacteria exist in complex communities known as biofilms. Bacteria in biofilms are adhered to various surfaces, both abiotic and biotic (teeth, bones, mucosa), often forming a highly dynamic ecosystem, which is structured and organized. An example of infection, which can involve the formation of biofilm is otitis - defined as an acute or chronic inflammation of the ear, which may extend from the external ear canal to the inner ear. Described as the most common disease of the external ear canal in dogs, it has a multifactorial etiology, including fungi and bacteria, especially of the genus Staphylococcus. Bacteria of this genus are commensal to skin and mucous membranes, but can act as opportunistic pathogens in favorable conditions and are often associated with a wide variety of infections in humans and animals with many reports of refractoriness to usual treatments. In biofilm, bacteria can be ten to a hundred times more resistant to antibiotics when compared to the same bacteria in planktonic growth. The struggle to fight infections involving bacterial biofilms is a major challenge of microbiology today, which, in turn, leads to the search for new therapeutic options. Thus, this study aimed to evaluate the in vitro inhibitory effect of six substances – three classic antimicrobial agents ciprofloxacin, chloramphenicol, gentamicin; and three non-classic antimicrobial agents thymol, carvacrol, hydrogen peroxide (H2O2) - against staphylococcal strains from canine otitis in planktonic growth and in biofilm. We analyzed 54 clinical strains isolated from purulent secretion of canine otitis, divided into five species: S. intermedius, S. simulans, S. haemolyticus, S.epidermidis and S. lugdunensis. The 16 strains classified as biofilm producers (11 S. intermedius and five S. simulans), according to result obtained by the Congo red agar test and confirmed by scanning electron microscopy (SEM), were used in broth microdilution assay for determination of minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum biofilm inhibitory concentration (MBIC). With regards to the biofilm-producing strains, the following results were observed: the values for ciprofloxacin were 0,12 ≤MIC≤0,5 mcg/mL (mean 0,28 mcg/mL) and 0,5≤MBIC≤8 mcg/mL (mean 1,79 mcg/mL); for chloramphenicol 2≤MIC≤16 mcg/mL (mean 7,41 mcg/mL) and 8≤MBIC≤32 mcg/mL (mean 20,71 mcg/mL); for gentamicin 0,5≤MIC≤4 mcg/mL (mean 2,09 mcg/mL) and 4≤MBIC≤64 mcg/mL (mean 24,24 mcg/mL); for thymol 32≤MIC≤512 mcg/mL (mean 137,41 mcg/mL) and 256≤MBIC≤2048 mcg/mL (mean 768 mcg/mL); carvacrol 32≤MIC≤512 mcg/mL (mean 128 mcg/mL) and 256≤MBIC≤4096 mcg/mL (mean 993,88 mcg/mL); and for H2O2 for 32≤MIC≤128 mcg/mL (mean 99,76 ppm) and 128≤MBIC≤4096 ppm (mean 1874,82 ppm). The presented data indicates the therapeutic potential of the six antibiotics studied in the treatment of staphylococcal infections associated with biofilm, which warrants further studies to investigate the mechanisms of action of these drugs on biofilms and the design of in vivo experiments to confirm the significance of these findings. / Historicamente, as bactérias foram vistas como organismos que vivem isolados, no entanto, é claro, agora, que a grande maioria de bactérias existe em comunidades complexas, conhecidas como biofilmes. As bactérias em biofilmes se encontram aderidas a superfícies diversas, tanto abióticas como bióticas (dente, osso, mucosa), compondo um ecossistema altamente estruturado, dinâmico e organizado. Um exemplo de infecção que pode envolver a presença formação de biofilme é a otite - definida como inflamação aguda ou crônica da orelha, podendo se estender desde o epitélio do conduto auditivo externo até a orelha interna. Descrita como a doença mais comum do canal auditivo externo em cães, possui uma etiologia multifatorial, que inclui fungos e bactérias, principalmente do gênero Staphylococcus. Bactérias desse gênero são comensais de pele e mucosas, mas podem atuar como patógenos oportunistas em condições propícias e são frequentemente associadas a uma ampla variedade de infecções em seres humanos e animais com vários relatos de refratariedade aos tratamentos usuais. Em um biofilme, as bactérias podem ser dezenas de vezes mais resistentes aos antibióticos, quando comparadas às mesmas bactérias em crescimento planctônico. O combate a infecções envolvendo bactérias em biofilme é um grande desafio da microbiologia mundial, que leva à busca de novas opções terapêuticas. Com efeito, este estudo teve como objetivo avaliar o efeito inibitório in vitro de seis substâncias – três agentes antimicrobianos clássicos, ciprofloxacina, cloranfenicol, gentamicina; e três agentes antimicrobianos não-clássicos timol, carvacrol, peróxido de hidrogênio (H2O2) – contra cepas estafilocócicas de otite canina em crescimento planctônico e em biofilme. Foram avaliadas 54 cepas clínicas isoladas de secreção purulenta de cães com otite, divididas entre cinco espécies: S. intermedius, S. simulans, S. haemolyticus, S. epidermidis e S. lugdunensis. As 16 cepas classificadas como produtoras de biofilme (11 de S. intermedius e cinco de S. simulans), segundo resultado obtido pelo teste do ágar vermelho Congo e confirmação por microscopia eletrônica de varredura (MEV), foram usadas em ensaios de microdiluição em caldo para determinação de concentração inibitória mínima (CIM) e concentração inibitória mínima em biofilme (CIMB). Com relação às cepas produtoras de biofilme, foram observados os seguintes resultados: os valores para ciprofloxacina foram 0,12 ≤CIM≤0,5 mcg/mL (média 0,28 mcg/mL) e 0,5≤CIMB≤8 mcg/mL (média 1,79 mcg/mL); para cloranfenicol 2≤CIM≤16 mcg/mL (média 7,41 mcg/mL) e 8≤CIMB≤32 mcg/mL (média 20,71 mcg/mL); para gentamicina 0,5≤CIM≤4 mcg/mL (média 2,09 mcg/mL) e 4≤CIMB≤64 mcg/mL (média 24,24 mcg/mL); para timol 32≤CIM≤512 mcg/mL (média 137,41 mcg/mL) e 256≤CIMB≤2048 mcg/mL (média 768 mcg/mL); carvacrol 32≤CIM≤512 mcg/mL (média 128 mcg/mL) e 256≤CIMB≤4096 mcg/mL (média 993,88 mcg/mL); e para H2O2 32≤CIM≤128 ppm (média 99,76 ppm) e 128≤CIMB≤4096 ppm (média 1874,82 ppm). Os dados obtidos apontam para o potencial terapêutico dos seis antibióticos estudados no tratamento de infecções estafilocócicas associadas a biofilme, sendo necessários novos estudos para investigar os mecanismos de ação dessas drogas sobre o biofilme, bem como o delineamento de experimentos in vivo para confirmar a significância desses achados.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Odontologia, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-10-06T04:07:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334504.pdf: 1162044 bytes, checksum: 4992911f579030913c0cf59f75c92755 (MD5) Previous issue date: 2015 / No tratamento com próteses sobre implantes, muitas vezes é preciso substituir o parafuso do pilar ou o pilar protético, gerando alterações no conjunto implante-pilar protético. O objetivo deste estudo in vitro foi avaliar a perda de torque de pilares e os aspectos morfológicos de desgate das superfícies de conexão de dois sistemas de implantes diferentes após o contato com biofilmes. Métodos de estudo: Foram utilizados vinte conjuntos de implantes e pilares protéticos, divididos em quatro grupos: Grupo A = Cone Morse sem contato com biofilme, Grupo B = Cone Morse em contato com biofilme, Grupo C = Hexágono externo sem contato com biofilme, Grupo D = Hexágono externo em contato com biofilme. Os pilares foram aparafusados aos implantes conforme torque indicado pelo fabricante com o uso de um torquímetro digital. Os conjuntos do grupo B e D foram colocadas em placas de 24 poços, contendo 2 ml de meio BHI com suspensões de microrganismos e incubados durante 72 horas a 37 °C em condições microaerofílicas (5% CO2). Após a avaliação do torque de remoção do pilar (contra-torque), as superfícies dos implantes foram avaliadas por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e rugosimetria por perfilometria óptica. Os resultados foram analisados estatisticamente a um nível de significância de p <0,05, utilizando o software SPSS 17.0 for Windows (Chicago, IL, EUA). Resultados: Na avaliação do contra-torque, os valores médios de torque de remoção diminuiram para os implantes Hexágono Externo e aumentaram para os implantes cone Morse. No entanto, os valores foram menores quando ambos os sistemas estiveram em contato com biofilme. Foram identificadas por MEV áreas de desgastes nas superfícies de conexão dos implantes com e sem contato com biofilme. Foram registrados os maiores valores médios de rugosidade nas superfícies sem contato com biofilme. Conclusões: A presença do biofilme diminui os valores de contra-torque, assim como, diminuiu a quantidade de áreas de desgaste da superfície de conexão do implante hexágono externo e cone Morse. Esses resultados sugerem um efeito lubrificante do biofilme, o que diminui a fricção entre as superfícies em conexão.<br> / Abstract : In the treatment with prosthetic implants is often necessary to replace the screw or replace the prosthetic component, generating changes in implant-abutment joint. The aim of this in vitro study was to evaluate the torque loss of abutments and the wear morphological aspects of implant connection surfaces in two different implant-abutment joints after contact with biofilms. Methods of study: Twenty joint implants and abutments, divided into four groups were used. Group A = Morse taper no contact with biofilm, Group B = Morse taper after contact with biofilms, Group C = External Hex no contact with biofilm, Group D = External Hex after contact with biofilms. The abutments were firstly connected to the implants and torqued according to the manufacturer´s recommendation, using a handheld torque meter. The assemblies of groups B and D were placed into 24 well-plates containing 2 ml of BHI medium with microorganisms suspensions and incubated for 72h at 37oC under microaerophilic conditions (5% CO2). After detorque evaluation, the abutments were removed. Then, implants were scanning electron microscopy and roughness analyses. The results were statistically analyzed using a significance level of p < 0.05 by using the SPSS 17.0 software for Windows (Chicago, IL, USA). Results: In the evaluation of detorque, the decreased detorque values for the external hex implants and increased for the implants Morse taper. However, the values were lower when both systems were in contact with biofilm. Were identified by SEM areas of wear connecting surfaces of the implants. We recorded the highest average roughness values on the surfaces no contact with biofilm. Conclusions: The presence of biofilm reduces detorque values as well as decreased wear areas of the connecting surface of the implant external hexagon and Morse taper. These results suggest a lubricating effect of the biofilm, which reduces friction between the surfaces in connection.

As Candida spp. têm grande habilidade para colonizar e formar biofilmes em dispositivos médicos e biomateriais, provocando infecções nos hospedeiros humanos. O Polietileno de Alta Densidade (PEAD), Polihidroxibutirato (PHB) e o Ácido Polilático (PLA) apresentam propriedades interessantes para aplicações em dispositivos médicos. Os sais imidazólicos (SI) apresentam propriedades avançadas, inclusive antifúngicas, podendo ser utilizados como aditivos nestes polímeros. Neste estudo, foram preparados filmes poliméricos com diferentes teores dos SI cloreto de 1-n-hexadecil-3-metilimidazólico (C16MImCl) e metanossulfonato de 1-n-hexadecil-3- metilimidazólico (C16MImMeS), através dos processos de mistura no estado fundido (PEAD e PHB) e de Solvent Casting (PLA). Para avaliar se esses biomateriais apresentavam atividade antibiofilme foram realizados ensaios Antibiofilme, testados frente a isolados de Candida spp. Para determinar a porcentagem de impedimento da formação do biofilme foram realizados ensaios de Menor Concentração Antibiofilme, frente a isolados de Candida tropicalis. Análises de Microscopia Eletrônica de Varredura foram realizadas para verificar se ocorre o impedimento da formação do biofilme nos biomateriais. Foram avaliadas a citotoxicidade dos SI, a adesão celular e a biocompatibilidade celular de células-tronco mesenquimais humanas (CTMh) nos filmes de PEAD, PHB e PLA. Foram realizados ensaios histopatológicos dos biomateriais em pele de orelha de suínos para verificar se ocorre lesões microscópicas. Os filmes de PEAD, PHB e PLA foram caracterizados para avaliar a morfologia, a presença dos SI na superfície e as propriedades físicoquímicas dos mesmos. Os filmes de PEAD, PHB e PLA com diferentes teores dos SI C16MImCl e C16MImMeS apresentaram atividade antibiofilme frente a isolados de Candida tropicalis, C. parapsilosis e C. albicans. Com o ensaio MCA foi possível verificar que com o aumento do teor dos SI (C16MImCl e C16MImMeS) no PLA e PHB ocorre em geral um aumento na porcentagem de impedimento da formação do biofilme, sendo que isso em geral não ocorre com o PEAD. As micrografias de MEV mostraram o efetivo impedimento da formação do biofilme. Em geral os SI não apresentaram citotoxicidade em baixas concentrações. Os biomateriais mostraram uma boa adesão celular e são biocompatíveis com CTMh. Na avaliação histopatológica de pele da orelha suína com os biomateriais não foram observadas lesões microscópicas agudas. Em combinação com as boas propriedades morfológicas, físico-químicas e mecânicas, estes biomateriais são promissores para serem utilizados na confecção de dispositivos médicos. / Candida spp. have great ability to colonize and form biofilms on medical devices and biomaterials, causing infections in human hosts. High-density polyethylene (HDPE), Polyhydroxybutyrate (PHB) and Polylactic acid (PLA) exhibit interesting properties for applications in medical devices. Imidazolium salts (IS) have advanced properties, including antifungal, which could be explored as additives in these polymers. In this study, polymer films with different IS (1-n-hexadecyl-3- methylimidazolium chloride (C16MImCl) and 1-n-hexadecyl-3-methylimidazolium methanesulfonate (C16MImMeS)) contents were prepared, using either the melt blending (HDPE and PHB) or the solvent casting process (PLA). The antibiofilm assay with Candida spp. isolates was performed to assess the antibiofilm activity of these biomaterials. Inhibition percentages of biofilm formation of Candida tropicalis isolates were determined by the minor antibiofilm concentration (MAC) assay. Scanning electron microscopy was applied to verify the inhibition of biofilm formation on these biomaterials. The cytotoxicity of IS and the cell adhesion and biocompatibility of human mesenchymal stem cells (hMSC) of the HDPE, PHB and PLA films was studied. Histopathologic assays were performed with these biomaterials on ear pigskin to verify the occurrence of microscopic lesions. The HDPE, PHB and PLA films were characterized to understand their surface morphology, the presence of IS on the surface and the physicochemical properties thereof. The polymer films with different concentrations of the IS C16MImCl and C16MImMeS presented antibiofilm activity against isolates of Candida tropicalis, C. parapsilosis and C. albicans. The MAC assay enabled to determine that an increasing IS (C16MImCl and C16MImMeS) content in the PLA and PHB biomaterials promoted, in general, an increase in the inhibition percentage of biofilm formation, which was not observed for the HDPE films. The SEM micrographs showed the effective prevention of biofilm formation on the IS containing biomaterials. Lower concentrations of the IS showed no cytotoxicity. The biomaterials presented good cell adhesion percentages and biocompatibility with hMSC. Furthermore, no acute microscopic lesions were identified in the histopathological evaluation after contact between the biomaterials and ear pigskin. In combination with the good morphological, physicochemical and mechanical properties, these biomaterials can be considered as promising for use in the manufacturing of medical devices.